Method Article

Wizualna detekcja kolorymetryczna polimorfizmów wielonukleotydowych na pneumatycznej platformie do manipulacji kropelkami

DOI:

10.3791/54424

⸱

September 27th, 2016

 ,  ,  ,  , 
1Department of Mechanical Engineering, National Taiwan University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ta praca przedstawia prostą i wizualną metodę wykrywania polimorfizmów wielonukleotydowych na pneumatycznej platformie do manipulacji kropelkami. Dzięki proponowanej metodzie cały eksperyment, w tym manipulacja kropelkami i wykrywanie polimorfizmów wielonukleotydowych, może być przeprowadzony w temperaturze około 23 °C bez pomocy zaawansowanych urządzeń.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Prosta i wizualna metoda wykrywania polimorfizmu wielonukleotydowego (MNP) została przeprowadzona na pneumatycznej platformie do manipulacji kroplami na otwartej powierzchni. To podejście do kolorymetrycznego wykrywania DNA opierało się na wzroście sond z nanocząstkami złota za pośrednictwem hybrydyzacji (sondy AuNP). Wielkość wzrostu i konfiguracja AuNP są zdominowane przez liczbę próbek DNA zhybrydyzowanych z sondami. Na podstawie specyficznych właściwości optycznych nanocząstek, zależnych od wielkości i kształtu, można rozróżnić liczbę niedopasowań fragmentu DNA próbki do sond. Testy przeprowadzono za pomocą kropelek zawierających odpowiednio odczynniki i próbki DNA, a następnie przetransportowano i zmieszano na platformie pneumatycznej z kontrolowanym zasysaniem pneumatycznym elastycznej membrany superhydrofobowej na bazie PDMS. Kropelki mogą być dostarczane jednocześnie i precyzyjnie na otwartej powierzchni na proponowanej platformie pneumatycznej, która jest wysoce biokompatybilna, bez skutków ubocznych w postaci próbek DNA wewnątrz kropel. Łącząc dwie zaproponowane metody, polimorfizm wielonukleotydowy można wykryć na pierwszy rzut oka na pneumatycznej platformie do manipulacji kropelkami; Nie jest wymagany żaden dodatkowy instrument. Procedura od zainstalowania kropel na platformie do końcowego wyniku zajmuje mniej niż 5 minut, znacznie mniej niż przy istniejących metodach. Co więcej, to połączone podejście do wykrywania MNP wymaga objętości próbki wynoszącej zaledwie 10 μl w każdej operacji, czyli znacznie mniejszej niż w przypadku systemu makro.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Polimorfizm pojedynczego nukleotydu (SNP), który jest pojedynczą różnicą par zasad w sekwencji DNA, jest jedną z najczęstszych odmian genetycznych. Aktualne badania donoszą, że SNP są związane z ryzykiem choroby, skutecznością leków i skutkami ubocznymi poszczególnych osób poprzez wpływ na funkcję genów. 1,2 Ostatnie badania wykazały również, że mutacje dwu- lub wielopunktowe (polimorfizm wielonukleotydowy) powodują określone choroby i indywidualne różnice w skutkach choroby. 3,4 Wykrycie polimorfizmu nukleotydów jest zatem niezbędne w badaniach przesiewowych w kierunku choroby. W ciągu ostatnich dwóch dekad opracowano proste i skuteczne metody szybkiego wykrywania oligonukleotydów specyficznych dla sekwencji. 1,5 Obecne podejścia do identyfikacji mutacji DNA zazwyczaj obejmują procedury takie jak unieruchomienie sondy, znakowanie fluorescencyjne, elektroforeza żelowa itp.,6,7 ale metody te na ogół wymagają długiego procesu analitycznego, drogiego sprzętu, dobrze wyszkolonych techników i znacznego zużycia próbek i odczynników.

Nanocząstka o dużym stosunku powierzchni do objętości i unikalnych właściwościach fizykochemicznych jest idealnym materiałem jako bardzo czuła i tania platforma do wykrywania specyficznych biomarkerów. Nanocząstki złota (AuNP) są szeroko stosowane do wykrywania DNA ze względu na ich dużą zdolność do modyfikacji za pomocą sond oligonukleotydowych. Opracowano również 8-10 technik detekcji SNP przy użyciu AuNP. 11-13 W niniejszej pracy przyjęliśmy nowatorskie podejście kolorymetryczne do wykrywania polimorfizmu wielonukleotydowego (MNP) poprzez wzrost sond AuNP za pośrednictwem hybrydyzacji DNA. 14 Ta prosta i szybka metoda sondowania opiera się na teorii, że różne długości jednoniciowego DNA (ssDNA) lub dwuniciowego DNA (dsDNA) sprzężonego z AuNP wpływają na rozmiar i kształt wzrostu AuNP (patrz rysunek 1). 15 Ta metoda wykrywania DNA charakteryzuje się niewielkim zużyciem odczynników, krótkim czasem trwania testu (kilka minut) i prostą procedurą bez kontroli termicznej, która może być potencjalnie stosowana w diagnostyce klinicznej i domowych badaniach przesiewowych.

Opracowano kilka systemów mikroprzepływowych do wykrywania sekwencji DNA; 16 Te systemy mikroprzepływowe, wywodzące się z tradycyjnych protokołów doświadczalnych, wymagały mniejszej liczby urządzeń na dużą skalę i uprościły protokoły eksperymentalne w celu poprawy czułości, granicy wykrywalności i swoistości biosensora DNA. Metody wykrywania DNA w układach mikroprzepływowych nadal wymagają jednak przyrządów do późniejszego procesu, takich jak maszyna do PCR (reakcja łańcuchowa polimerazy) do wzmacniania sygnału i czytnik fluorescencji do pojedynczego odczytu w celu identyfikacji heterogenicznego SNP. 17,18 Opracowanie prostej platformy bez późniejszego przetwarzania w celu bezpośredniego odczytu wyników polimorfizmu wielonukleotydowego jest wysoce pożądane. W porównaniu z dobrze stosowanymi, konwencjonalnymi, zamkniętymi systemami mikroprzepływowymi, urządzenia mikroprzepływowe o otwartej powierzchni obiecująco oferują kilka zalet, takich jak wyraźna ścieżka optyczna, łatwy dostęp do próbki, bezpośredni dostęp do środowiska oraz brak łatwo tworzącej się kawitacji lub niedrożności międzyfazowej w kanale. 19 W naszych poprzednich pracach wprowadzono prostą platformę pneumatyczną do manipulowania kroplami na otwartej powierzchni (zob. rys. 2). 20 Na tej platformie kropelki mogą być jednocześnie transportowane i manipulowane bez zakłóceń spowodowanych energią napędową za pomocą siły ssącej, która ma ogromny potencjał w zastosowaniach biologicznych i chemicznych. Ta platforma pneumatyczna została zatem wykorzystana do przeprowadzenia manipulacji próbkami DNA w celu wykrycia MNP w połączeniu z podejściem kolorymetrycznym wykorzystującym koncepcję wzrostu sond AuNP za pośrednictwem hybrydyzacji DNA.

Protokół przedstawiony w tym artykule opisuje proste wizualne wykrywanie polimorfizmów wielonukleotydowych na pneumatycznej platformie do manipulacji kropelkami na otwartej powierzchni. Praca ta potwierdza, że polimorfizm wielonukleotydowy jest wykrywalny gołym okiem; Proponowana platforma pneumatyczna nadaje się do zastosowań biologicznych i chemicznych.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Metoda wykrywania MNP

Uwaga: W tej sekcji opisano procedurę wykrywania MNP w oparciu o wzrost nanocząstek złota za pośrednictwem hybrydyzacji.

  1. Przygotować roztwór DNA sondy (5'-tiol-GAGCTGGTGGCGTAGGAGGCAAG-3') o stężeniu 100 μM.
  2. Przygotuj sondę Cząstki AuNP (sonda AuNP) zmodyfikowane DNA. 21
    Uwaga: Objętość użyta w tym miejscu zależy od zapotrzebowania na cząstki AuNP (sonda AuNP) modyfikowane DNA. Jest to zatem zależne od liczby eksperymentów, które mają zostać przeprowadzone. Zazwyczaj przygotowujemy nadmiar cząstek sondy AuNP jako części zamienne. Głośność używana na tych etapach jest regulowana i elastyczna.
    1. Dodać DNA sondy (100 μM, przygotowane w kroku 1.1) do roztworu nanocząstek złota (13 nm, 17 nM) o stężeniu 1 OD/ml.
    2. Doprowadzić końcowe stężenia dodecylosiarczanu sodu (NaC12H25SO4, SDS) i buforu fosforanowego (PBS) odpowiednio do 0,01% i 0,01 M.
    3. Po 20 minutach doprowadzić stężenie chlorku sodu (NaCl) do 0,05 M roztworem NaCl (2 M) i PBS (0,01 M), utrzymując SDS na poziomie 0,01% i inkubować przez 20 min.
    4. Zwiększać stężenie NaCl w krokach co 0,1 M do końcowego stężenia 1 M w odstępach 20 minut.
    5. Inkubować przez noc, wytrząsając na mieszadle wirowym w temperaturze 23 °C. Prędkość wytrząsania nie ma wpływu na eksperyment, o ile próbki DNA i sondy AuNP ulegną hybrydyzacji.
    6. Odwirować nanocząstki złota o masie 7 000 x g przez 30 sekund i usunąć supernatant.
  3. Cząstki sondy AuNP dodać do wody dejonizowanej (wody DI) o stężeniu 25 nM (roztwór sondy AuNP).
  4. Przygotować docelowe próbki DNA (w pełni komplementarne: 5'-CTTGCCTACGCCACCAGCTC-3'; trzy niedopasowane pary zasad: 5'-CTTGCCTACTTTACCAGCTC-3'; sześć niedopasowanych par zasad: 5'-CTTGCCTTTTTTTCCAGCTC-3') w stężeniach odpowiednio 0,06, 0,11, 0,17, 0,20, 0,30, 0,50 μM.
  5. Dodać roztwór sondy AuNP (6 μl, 25 nM) do próbek DNA (350 μl) za pomocą NaCl (14 μM).
  6. Wstrząsnąć mieszaniną próbek DNA i sond AuNP za pomocą mieszalnika wirowego w temperaturze 23 °C przez 5 minut w celu hybrydyzacji DNA.
  7. W celu wzrostu AuNP dodać NH2OH (6 μl, 400 mM) i HAuCl4 (6 μl, 25,4 mM) do roztworu (mieszaniny próbek DNA i sond AuNP). Wzrost AuNP trwa około 30 sekund. Stała zmiana zabarwienia utrzymuje się przez ponad 1 godz. < / > UWAGA: Kontakt skóry z HAuCl4 może powodować poważne skutki toksyczne. Przed użyciem należy zapoznać się z kartami charakterystyki substancji niebezpiecznych (MSDS). Podczas korzystania z HAuCl4 należy nosić rękawice i używać dygestorium.

2. Produkcja pneumatycznej platformy do manipulacji kroplami

Uwaga: Platforma do manipulacji kropelkami oparta na PDMS składa się z dwóch elementów: membrany PDMS (100 μm) z superhydrofobową powierzchnią i warstwy kanału powietrznego (5 mm). Bez procesu MEMS, do wytworzenia tego urządzenia wykorzystano powszechne procesy obróbki, które obejmują mikroobróbkę sterowaną komputerowo (CNC) w celu wykonania formy, odlewanie i replikację PDMS w celu szybkiego prototypowania komponentów mikroprzepływowych oraz mikroobróbkę laserową w celu wytworzenia powierzchni superhydrofobowej (patrz rysunek 3).

  1. Za pomocą maszyny CNC wyposażonej w wiertło (0.5 mm) można wyprodukować formy wzorcowe na bazie PMMA (patrz rysunek 3) z mikrostrukturą. Stosować prędkość posuwu wiertła 7 mm/s i prędkość obrotową 26 000 obr./min. Użyj dmuchawy powietrza i wody DI, aby usunąć złom PMMA i oczyścić powierzchnię form głównych.
  2. Przygotować mieszaninę bazy PDMS i utwardzacza w stosunku 10:1. Odgazowywać mieszaninę wewnątrz eksykatora przez 30 minut lub do momentu usunięcia wszystkich pęcherzyków powietrza.
  3. Wlej PDMS do formy głównej i piecz PDMS przez 3 godziny w temperaturze 60 °C w piekarniku, aby uzyskać odwrotną mikrostrukturę komór powietrznych (membrana PDMS) i kanałów powietrznych (warstwa PDMS).
  4. Usuń warstwę PDMS z formy głównej (ręcznie). Przebić otwory w warstwie PDMS na wloty zasysające powietrze.
  5. Umieścić membranę PDMS, warstwę PDMS i podłoże szklane w komorze systemu obróbki tlenowo-plazmowej. Po obróbce plazmą tlenową należy połączyć membranę PDMS, warstwę PDMS i szklane podłoże na płycie grzejnej (90 °C) na 10 minut.
  6. Umieść wiór kompozytowy w maszynie do cięcia laserowego (membraną PDMS do góry). Zaimportuj plik .dwg, aby zdefiniować obszar superhydrofobowy (15 mm × 12 mm). Zobacz rysunek 3. Bezpośrednio graweruj membranę PDMS za pomocą lasera CO2, aby utworzyć obszar superhydrofobowy na membranie PDMS (moc 12 W, prędkość skanowania 106,68 mm/s).
  7. Oczyść powierzchnię superhydrofobową wodą DI, aby zmyć zwęglone pozostałości na powierzchni.
  8. Podłączyć wlot powietrza i pompę próżniową przez zawór elektromagnetyczny (patrz rysunek 4). Podłącz zawór elektromagnetyczny do komputera i steruj za pomocą cyfrowego modułu I/O USB.

3. Operacja wykrywania MNP na platformie pneumatycznej

Uwaga: W tej sekcji opisano operację mającą na celu kolorymetryczną i szybką identyfikację MNP na pneumatycznej platformie do manipulacji kroplami (patrz rysunek 5). Wszystkie etapy odbywają się w temperaturze 23 °C (temperatura otoczenia) i wilgotności względnej 85%.

  1. Umieścić kropelkę docelowej próbki DNA (10 μl, 0,5 μM) na obszarze superhydrofobowym pneumatycznej platformy do manipulowania kropelkami.
  2. Umieścić kropelkę sondy AuNP (10 μl, 25 nM) w obszarze superhydrofobowym pneumatycznej platformy do manipulowania kroplami.
  3. Kontroluj zasysanie powietrza, aby spowodować ugięcie membrany PDMS za pomocą zaworu elektromagnetycznego i prostego programu (np. Labview). Zapewnić zasysanie powietrza w każdej komorze powietrznej wzdłuż ścieżki migracji kropelek (zawierających odpowiednio docelowe sondy DNA i AuNP) na membranie PDMS tak, aby kropelki zderzały się ze sobą i łączyły się. Stosować ciśnienie robocze pompy próżniowej -80 kPa (ciśnienie manometryczne).
    1. Alternatywnie można ręcznie kontrolować zasysanie powietrza, o ile kropla jest całkowicie wymieszana. Ręcznie podłącz lub odłącz pompę próżniową i wloty komory powietrznej za pomocą rurek we wczesnych etapach testowania.
  4. Kontroluj zasysanie powietrza, aby toczyć koalescencyjną kroplę do przodu i do tyłu, aby zwiększyć wydajność mieszania przez 3 minuty za pomocą układu sterującego zaworu elektromagnetycznego. Docelowe sondy DNA i AuNP dobrze się mieszają i hybrydyzują w ciągu 3 minut. Stosować częstotliwość sterowania i ciśnienie robocze odpowiednio 5 Hz i -80 kPa (ciśnienie manometryczne).
  5. Umieścić kroplę zawierającą NH2OH (2 μl, 400 mM) i HAuCl4 (2 μl, 25,4 mM) na obszarze superhydrofobowym pneumatycznej platformy do manipulowania kropelkami.
  6. Kontroluj zasysanie powietrza (ciśnienie manometryczne -80 kPa), aby kropelki zderzały się ze sobą i łączyły się. Następnie kontroluj zasysanie powietrza (5 Hz i ciśnienie manometryczne -80 kPa), aby umożliwić koalescencyjnej kropli toczenie się do przodu i do tyłu, aby zwiększyć wydajność mieszania przez 1 minutę.
  7. Zmierz i zapisz kolor połączonej kropli gołym okiem.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

W tej pracy trzy próbki DNA zostały przetestowane przy użyciu prostej i nowatorskiej metody wykrywania za pośrednictwem hybrydyzacji DNA sond AuNP. Sekwencje sondy DNA i próbek DNA trzech rodzajów, w szczególności CDNA (w pełni komplementarne do sondy DNA), TMDNA (niedopasowane DNA z trzema parami zasad) i SixMDNA (niedopasowane DNA z sześcioma parami zasad) są wymienione w kroku 1 protokołu. Niezgodności z sondą badanych tutaj próbek DNA występują zarówno w środkowych segmentach próbek D...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

W tym protokole można zastosować prostą metodę kolorymetryczną do wykrywania MNP w stężeniach w zakresie 0,11-0,50 μM w probówkach mikrowirówek. Co więcej, proponowana metoda wykrywania MNP jest przeprowadzana na pneumatycznej platformie do manipulacji kropelkami, która ma duży potencjał w zakresie badań przesiewowych DNA i innych zastosowań biomedycznych. W praktyce wykrywalny zakres stężenia DNA próbki zależy od skuteczności mieszania platform operacyjnych. Aby zapewnić, że koalescencyjna kropla jest w pełni wymieszana...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy oświadczają, że nie mają konkurencyjnych interesów finansowych.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ministerstwo Nauki i Technologii Tajwanu zapewniło wsparcie finansowe dla tych badań w ramach kontraktów MOST-103-2221-E-002 -097 -MY3.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
PDMSDow CorningSYLGARD 184
Roland DGEGX-400
Universal Laser Systems, Inc.VLS 3.50
System obróbki plazmy tlenowejFemto Science Inc. KoreaCUTE-MPR
elektromagnetycznydomowa
pompa próżniowaULVAC KIKO, Inc.DA-30D
13-nm roztwór AuNPTAN Bead Inc., TajwanNG-13
DNA (z tiolem znakowanym na końcu 5')MDBio, Inc., Tajwan
sól fizjologiczna buforowana fosforanem (PBS)UniRegion  Bio-technologia,. TajwanPBS001-1L
dodecylosiarczan sodu (SDS)J. T. baker4095-04
Roztwór hydroksyloaminy (NH2OH)Sigma-Aldrich467804
Kwas chloroaurowy (HAuCl4)Sigma-AldrichG4022
chlorek sodu (NaCl)
mieszalnikwirowyInstrumenty laboratoryjne Digisystem Inc.Wirówka VM-2000
Hermle Labortechnik GmbH.Z 216 MK
Grawerki stołowe Wycinarka laserowa zawór

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chorley, B. N., et al. Discovery and verification of functional single nucleotide polymorphisms in regulatory genomic regions: current and developing technologies. Mutat. Res. Rev. Mutat. 659 (1), 147-157 (2008).
  2. Hinds, D. A., et al. Whole-genome patterns of common DNA variation in three human populations. Science. 307 (5712), 1072-1079 (2005).
  3. Rosenfeld, J. A., Malhotra, A. K., Lencz, T. Novel multi-nucleotide polymorphisms in the human genome characterized by whole genome and exome sequencing. Nucleic Acids Res. , 408(2010).
  4. Whelan, S., Goldman, N. Estimating the frequency of events that cause multiple-nucleotide changes. Genetics. 167 (4), 2027-2043 (2004).
  5. Saiki, R. K., Walsh, P. S., Levenson, C. H., Erlich, H. A. Genetic analysis of amplified DNA with immobilized sequence-specific oligonucleotide probes. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 86 (16), 6230-6234 (1989).
  6. Kim, S., Misra, A. SNP genotyping: technologies and biomedical applications. Annu. Rev. Biomed. Eng. 9, 289-320 (2007).
  7. Kwok, P. Y., Chen, X. Detection of single nucleotide polymorphisms. Curr. Issues Mol. Biol. 5, 43-60 (2003).
  8. Elghanian, R., Storhoff, J. J., Mucic, R. C., Letsinger, R. L., Mirkin, C. A. Selective colorimetric detection of polynucleotides based on the distance-dependent optical properties of gold nanoparticles. Science. 277 (5329), 1078-1081 (1997).
  9. Lee, J. S., Han, M. S., Mirkin, C. A. Colorimetric Detection of Mercuric Ion (Hg2+) in Aqueous Media using DNA-Functionalized Gold Nanoparticles. Angew. Chem. 119 (22), 4171-4174 (2007).
  10. Storhoff, J. J., et al. Gold nanoparticle-based detection of genomic DNA targets on microarrays using a novel optical detection system. Biosens. Bioelectron. 19 (8), 875-883 (2004).
  11. Bao, Y. P., et al. SNP identification in unamplified human genomic DNA with gold nanoparticle probes. Nucleic Acids Res. 33 (2), 15-15 (2005).
  12. Chen, Y. T., Hsu, C. L., Hou, S. Y. Detection of single-nucleotide polymorphisms using gold nanoparticles and single-strand-specific nucleases. Anal. Biochem. 375 (2), 299-305 (2008).
  13. Li, H., Rothberg, L. Colorimetric detection of DNA sequences based on electrostatic interactions with unmodified gold nanoparticles. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101 (39), 14036-14039 (2004).
  14. Fang, W. F., Chen, W. J., Yang, J. T. Colorimetric determination of DNA concentration and mismatches using hybridization-mediated growth of gold nanoparticle probes. Sensor. Actuat. B Chem. 192, 77-82 (2014).
  15. Wang, Z., Zhang, J., Ekman, J. M., Kenis, P. J., Lu, Y. DNA-mediated control of metal nanoparticle shape: one-pot synthesis and cellular uptake of highly stable and functional gold nanoflowers. Nano Lett. 10 (5), 1886-1891 (2010).
  16. Chen, L., Manz, A., Day, P. J. Total nucleic acid analysis integrated on microfluidic devices. Lab Chip. 7 (11), 1413-1423 (2007).
  17. Lien, K. Y., Liu, C. J., Lin, Y. C., Kuo, P. L., Lee, G. B. Extraction of genomic DNA and detection of single nucleotide polymorphism genotyping utilizing an integrated magnetic bead-based microfluidic platform. Microfluid. Nanofluid. 6 (4), 539-555 (2009).
  18. Ng, J. K. K., Feng, H. H., Liu, W. T. Rapid discrimination of single-nucleotide mismatches using a microfluidic device with monolayered beads. Anal. Chim. Acta. 582 (2), 295-303 (2007).
  19. Xing, S., Harake, R. S., Pan, T. Droplet-driven transports on superhydrophobic-patterned surface microfluidics. Lab Chip. 11 (21), 3642-3648 (2011).
  20. Huang, C. J., Fang, W. F., Ke, M. S., Chou, H. Y. E., Yang, J. T. A biocompatible open-surface droplet manipulation platform for detection of multi-nucleotide polymorphism. Lab Chip. 14 (12), 2057-2062 (2014).
  21. Mirkin, C. A., Letsinger, R. L., Mucic, R. C., Storhoff, J. J. A DNA-based method for rationally assembling nanoparticles into macroscopic materials. Nature. 382 (6592), 607-609 (1996).
  22. Ichimura, K., Oh, S. K., Nakagawa, M. Light-driven motion of liquids on a photo-responsive surface. Science. 288 (5471), 1624-1626 (2000).
  23. Jones, T. B., Gunji, M., Washizu, M., Feldman, M. J. Dielectrophoretic liquid actuation and nanodroplet formation. J. Appl. Phys. 89 (2), 1441-1448 (2001).
  24. Lee, J., Kim, C. J. C. Surface-tension-driven microactuation based on continuous electrowetting. J. Microelectromech. S. 9 (2), 171-180 (2000).
  25. Daniel, S., Chaudhury, M. K., De Gennes, P. G. Vibration-actuated drop motion on surfaces for batch microfluidic processes. Langmuir. 21 (9), 4240-4248 (2005).
  26. Darhuber, A. A., Valentino, J. P., Davis, J. M., Troian, S. M., Wagner, S. Microfluidic actuation by modulation of surface stresses. Appl. Phys. Lett. 82 (4), 657-659 (2003).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Multi nucleotide Polymorphism DetectionPneumatic Droplet ManipulationGold Nanoparticle ProbesColorimetric DNA DetectionDNA Hybridization GrowthPDMS based PlatformOpen Surface DropletsNaked Eye DetectionMicroliter Sample VolumeGenetic Mutation Screening

Related Articles