Tutaj prezentujemy protokół optycznego mapowania aktywności elektrycznej z prawego przedsionka myszy, a zwłaszcza węzła zatokowo-przedsionkowego, w wysokiej rozdzielczości przestrzennej i czasowej.
Artykuł metodologiczny
Tutaj prezentujemy protokół optycznego mapowania aktywności elektrycznej z prawego przedsionka myszy, a zwłaszcza węzła zatokowo-przedsionkowego, w wysokiej rozdzielczości przestrzennej i czasowej.
Dysfunkcje węzła zatokowo-przedsionkowego (SAN) i związane z nimi powikłania stanowią ważne przyczyny zachorowalności u pacjentów z chorobami serca. Opracowanie nowatorskich terapii farmakologicznych w celu wyleczenia tych pacjentów opiera się na dokładnym zrozumieniu zarówno normalnej fizjologii, jak i patofizjologii SAN. Wśród badań nad rozrusznikiem serca, mysi SAN jest szeroko stosowany ze względu na jego możliwość modyfikacji ekspresji różnych genów kodujących kanały jonowe SAN lub białka przenoszące wapń. Pojawiające się dowody z badań elektrofizjologicznych i histologicznych dowiodły również reprezentatywności i podobieństwa struktury i funkcji SAN myszy do większych ssaków, w tym obecności wyspecjalizowanych szlaków przewodzenia z SAN do przedsionka oraz złożonej hierarchii rozruszników serca w SAN. Ostatnio technika mapowania optycznego znacznie ułatwiła eksplorację i badanie pochodzenia wzbudzenia i przewodzenia w obrębie i z mysiego SAN, co z kolei poszerzyło wiedzę na temat SAN i przyniosło korzyści w klinicznym leczeniu chorób związanych z dysfunkcją SAN. W tym manuskrypcie opisaliśmy szczegółowo, jak wykonać mapowanie optyczne myszy SAN z nienaruszonego, perfundowanego Langendorffem serca oraz z izolowanego preparatu przedsionkowego. Protokół ten jest użytecznym narzędziem do lepszego zrozumienia fizjologii i patofizjologii SAN myszy.
Nowatorskie przełomy naukowe, które prowadzą do skoków w zrozumieniu ludzkiej fizjologii, są często poprzedzone postępem technologicznym. Na przykład fluorescencyjne mapowanie optyczne umożliwia badanie wielu parametrów fizjologicznych zarówno w komórkach, jak i tkankach. 1,2 Znacząco poszerzyło to naszą wiedzę na temat tego, w jaki sposób struktura anatomiczna jest powiązana z funkcjami i dysfunkcjami elektrofizjologicznymi. W sercu naturalny rozrusznik serca i układy przewodzenia, takie jak węzeł zatokowo-przedsionkowy (SAN) i połączenie przedsionkowo-komorowe, składają się z miocytów węzłowych, które są izolowane przez otaczające miocyty przedsionkowe. <....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wszystkie eksperymenty przeprowadzono zgodnie z Przewodnikiem National Institutes of Health dotyczącym opieki i wykorzystania zwierząt laboratoryjnych (NIH Pub. No. 80-23). Wszystkie metody i protokoły stosowane w tych badaniach zostały zatwierdzone przez Komitet ds. Protokołu Opieki i Użytkowania Zwierząt Uniwersytetu Wisconsin zgodnie z wytycznymi dotyczącymi opieki i wykorzystania zwierząt laboratoryjnych opublikowanymi przez NIH (publikacja nr 85-23, poprawiona w 1996 r.). Wszystkie zwierzęta wykorzystane w tym badaniu otrzymały humanitarną opiekę zgodnie z Przewodnikiem dotyczącym opieki nad zwierzętami laboratoryjnymi i ich wykorzystywania.
1. Usuwanie serc....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Mapowanie optyczne nienaruszonego węzła SAN z serca perfundowanego metodą Langendorffa
Typowy przykład mapy konturowej aktywacji RA zrekonstruowanej dla spontanicznego rytmu zatokowego przedstawiono na Rysunku 3 dla serca myszy perfundowanego metodą Langendorffa. Wczesny punkt aktywacji znajduje się w obszarze międzyżyłnym w pobliżu SVC, gdzie anatomicznie zlokalizowany jest węzeł SAN.3,16 Dwie mapy konturowe aktywacji RA pozyskane przy c.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
W tym artykule przedstawiono dwa rodzaje mysich preparatów SAN: 1) nienaruszony SAN w całym sercu z perfuzją Langendorffa oraz 2) SAN w izolowanym, otwartym preparacie przedsionkowym. Te dwa rodzaje preparatów służą różnym celom eksperymentalnym. W preparacie całego serca z perfuzją Langendorffa zachowana jest nienaruszona struktura przedsionkowa, co umożliwia badanie złożonych zaburzeń rytmu serca, takich jak migotanie przedsionków, a także interakcji między SAN a przedsionkiem podczas nawentnych tachyarytmii. 6
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Nie zgłasza się konfliktu interesów.
Jesteśmy wspierani przez start-up University of Wisconsin-Madison Medical School (A.V.G.).
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Płaszcz wodny | Kąpiel tkankowa serii Radnoti | 1660 do procedur izolacji dużych narządów lub pojedynczych komórek Kąpiel | |
| wodna / cyrkulator | Wzmacniacz ciśnienia Fisher Scientific | 1016S | |
| AD Instruments | MLT0670 | ||
| Filtry z siatki nylonowej EMD Millipore | Przetwornik ciśnienia Fisher Scientific | NY1102500 | |
| AD Instrumenty | MLT0670 | ||
| Kołki minutienne ze stali nierdzewnej - średnica 0,1 mm | Fine Science Tools | 26002-10 | |
| Pompa perfuzyjna | World Precision Instruments | PERIPRO-4LS | |
| World Precision Instruments | PERIPRO-4HS | ||
| Vannas Nożyczki do Tubingen | World Precision Instruments | 503379 | |
| Kleszcze Dumont | World Precision Instruments | 501201, 500085 | |
| Nożyczki Mayo | World Precision Instruments | 501750 | |
| Kleszcze hemostatyczne Kelly | Światowe instrumenty precyzyjne | 501241 | |
| Kleszcze do tęczówki | World Precision Instruments | 15917 | |
| Iris nożyczki | World Precision Instruments | 501263 | |
| elektrody igłowe EKG 12 mm (29 rozmiarów) (monopolarne) | AD Instruments | MLA1203 | |
| liniowy port wtrysku Luer | Kamera CMOS Ibidi | 10820 | |
| Ultima-L | SciMedia | MiCAM-05 | |
| Żarówka halogenowa | Moritex USA Inc | MHAB-150W | |
| NaCl | Fisher Scientific | S271-1 | |
| CaCl2 (2H2O) | Fisher Scientific | C79-500 | |
| KCl | Fisher Scientific | S217-500 | |
| MgCl2 (6H2O) | Fisher Scientific | M33-500 | |
| NaH2PO4 (H2O) | Fisher Scientific | S369-500 | |
| NaHCO3 | Fisher Scientific | S233-3 | |
| D-Glucose | Fisher Scientific | D16-1 | |
| Blebbistatin | Tocris Bioscience | 1760 | |
| RH237 | ThermoFisher Scientific | S1109 | |
| Dimetylosulfotlenek (DMSO) | Sigma-Aldrich | D2650 |
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE
Poproś o pozwolenie