Przedstawiono protokół badania zachowań godowych nicienia sosnowego, Bursaphelenchus xylophilus. Cechy behawioralne B. xylophilus są opisane w procesie krycia.
Artykuł metodologiczny
* These authors contributed equally
Przedstawiono protokół badania zachowań godowych nicienia sosnowego, Bursaphelenchus xylophilus. Cechy behawioralne B. xylophilus są opisane w procesie krycia.
Metoda obserwacji i ilościowego określania zachowań godowych nicienia sosnowego, Bursaphelenchus xylophilus, została opracowana pod mikroskopem stereoskopowym. Aby poprawić efektywność krycia B. xylophilus i zwiększyć szanse na obserwację krycia, dziewicze dorosłe osobniki wyhodowano i wykorzystano do badań. Jaja uzyskano, trzymając nicienie w wodzie i pozwalając samicom na składanie jaj przez 10 minut. Młodociane osobniki drugiego etapu (J2) synchronizowano przez inkubację jaj przez 24 godziny w temperaturze 25 °C w ciemności, a wczesne J4 uzyskano przez hodowlę J2 z szarą pleśnią, Botrytis cinerea, przez kolejne 52 godziny. W tym momencie większość nicieni J4 można było wyraźnie odróżnić jako samce lub samice na podstawie morfologii narządów płciowych. Samce i samice J4 zebrano i hodowano oddzielnie na dwóch różnych szalkach Petriego przez 24 godziny, aby uzyskać dziewicze dorosłe nicienie. Dziewiczy mężczyzna i dziewicza samica zostali połączeni w pary w kropli wody w studni wklęsłej zjeżdżalni. Zachowanie godowe zostało sfilmowane za pomocą magnetowidu pod mikroskopem stereoskopowym. Cały okres procesu krycia wynosił 82,8 ±3,91 min (średnia ±SE) i można go podzielić na 4 różne fazy: poszukiwanie, kontakt, kopulację i przebywanie. Średni czas trwania wynosił odpowiednio 21,8 ± 2,0, 28,0 ± 1,9, 25,8 ± 0,7 i 7,2 ± 0,5. Opisano jedenaście podzachowań: rejs, zbliżanie się, napotykanie, dotykanie, obręczowanie, lokalizowanie, przyczepianie się, wytrysk, oddzielanie, spokój i wędrowanie. Co ciekawe, wyraźną konkurencję wewnątrzpłciową zaobserwowano, gdy jedna samica była grupowana z 3 samcami lub jeden samiec z 3 samicami. Protokół ten jest przydatny i cenny, nie tylko w badaniu zachowań godowych B. xylophilus, ale także jako punkt odniesienia dla badań etologicznych innych nicieni.
Nicień sosnowy, Bursaphelenchus xylophilus (Steiner i Buhrer) Nickle, jest jednym z najbardziej destrukcyjnych gatunków inwazyjnych, powodującym więdnięcie i ostateczną śmierć sosen. Uważa się, że ten chorobotwórczy nicień pochodzi z USA, ale został przetransportowany do kilku krajów, w tym do Chin, Japonii, Korei Południowej i Portugalii. Ostatnio odnotowano go również w Hiszpanii, zabijając miliony sosen przy ogromnych stratach ekonomicznych i zagrażając produkcji leśnej i stabilności ekologicznej1-5.
Gdy sosna gospodarza zostanie zainfekowana przez nicienie sosnowe, tysiące milionów potomstwa jest szybko rozmnażanych ....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
1. Pozyskiwanie dziewiczych dorosłych nicieni
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Średnia skuteczność kopulacji (R) osobników dorosłych dziewic wynosiła 86,67%, co było znacznie wyższe niż w przypadku losowo wybranych osobników dorosłych: 13,33 ± 4,65% (F = 1301,71, df = 1, P = 0,0001) (Rysunek 2). Wynik ten sugeruje, że łatwiej jest obserwować zachowania kopulacyjne B. xylophilus u osobników dorosłych dziewic niż u losowo wybranych osobników dorosłych.
W .......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Testy behawioralne są podstawowym aspektem ekologii chemicznej, neurobiologii, biologii molekularnej i genetyki. Nicienie, a zwłaszcza C. elegans, są szeroko wykorzystywane do badań w tych obszarach. Zachowania godowe C. elegans były badane wcześniej10-11. Jednak B. xylophilus jest gonochorystyczny i różni się od hermafrodytycznego C. elegans, a jego proces godowy ma różne cechy behawioralne9. Ostatnio odnotowano zachowania godowe Bursaphelenchus okinawaensis<.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Najie Zhu i Liqun Bai w równym stopniu przyczynili się do tej pracy. Prace te były wspierane finansowo przez Specjalny Fundusz Badań Naukowych w Leśnictwie w Dziedzinie Opieki Społecznej (201204501) oraz Narodową Fundację Nauk Przyrodniczych Chin (31170604, 31270688 i 31570638). Dziękujemy dr Holighaus Gerrit i dr Danielle Hickford za ich pomocne sugestie dotyczące pisania w języku angielskim.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| B. xylophilus izolat Nxy61 | Ekstrahowany z Pinus massoniana w rejonie Ningbo w Chinach | ||
| szarej pleśni | Uzyskany z Chińskiej Akademii Leśnictwa | ||
| Lejki Baermanna | Sengong | ||
| Sengong | |||
| pipeta | Sengong | ||
| sterylna dd H2O | Sterylizowana pod wysokim ciśnieniem pary w temperaturze 121 & stopni; C przez 30 min. | ||
| Szalki Petriego | Sengong | ||
| PDA medium | Huankai Bio. | 021050 | |
| inkubator | Sengong | ||
| Przepływ laminarny | Szklana | ||
| Stereoskop | Sengong | ||
| Szkiełka wklęsłe | |||
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE
Poproś o pozwolenie