Manipulacja elektrokortykogramem padaczkowym (ECoG) i snem u szczurów i myszy za pomocą akupunktury

Epilepsja to powszechne zaburzenie neurologiczne, w którym nawracające napady występują przez całe życie pacjenta. Większość nawrotów padaczkowych może być dobrze kontrolowana przez leki przeciwpadaczkowe (AED). Jednak u około 30% pacjentów z padaczką rozwija się padaczka oporna na leczenie¹. Padaczka powoduje zaburzenia snu, które mogą dodatkowo nasilać nawroty. Dowody wskazują, że padaczka może zakłócać sen w nocy lub powodować nadmierną senność w ciągu dnia^2,3. Nasze wcześniejsze badania wskazują ponadto, że padaczka występująca w czasie zeitgeber (ZT) 0, czyli na początku okresu światła w cyklu światło:ciemność, skraca sen; Pośredniczy w tym hormon uwalniający kortykotropinę (CRH), czynnik homeostatyczny. Padaczka w ZT13 (początek okresu ciemności) zwiększa ekspresję innego czynnika homeostatycznego, interleukiny-1 (IL-1), który wydłuża sen. Rytm okołodobowy snu ulega zmianie, gdy padaczka występuje w ZT6, w środku okresu świetlnego^4,5. Z drugiej strony, problemy ze snem dodatkowo nasilają postęp i nawrót padaczki⁶. Na podstawie powyższych dowodów staramy się wskazać optymalną metodę terapeutyczną, która pozwoli jednocześnie kontrolować padaczkę i zapobiegać zaburzeniom snu u pacjentów z padaczką. Wcześniej odkryliśmy, że elektroakupunktura (EA) z częstotliwością stymulacji 10 Hz, w której pewna ilość prądu jest dostarczana do punktu akupunkturowego przez igłę ze stali nierdzewnej, skutecznie tłumi aktywność padaczkową elektrokortykogramu (ECoG) i zaburzenia snu wywołane padaczką⁷. EA z częstotliwością stymulacji 100 Hz dodatkowo pogarsza aktywność epilepsyjną i zakłócenia snu u szczurów^8,9. Ten udany eksperyment zależy od trzech czynników: po pierwsze, wykonalnego modelu zwierzęcego epileptyka; po drugie, metoda rejestracji i analizy snu gryzoni; i po trzecie, dokładne wykonanie akupunktury i dokładność lokalizacji punktów akupunkturowych.

Epilepsja została podzielona na dwa główne typy: padaczkę ogniskową i padaczkę uogólnioną. Interesuje nas ogniskowa padaczka skroniowa (TLE), padaczka uogólniona, stan padaczkowy (SE) oraz nawroty padaczki spontanicznie uogólnionej. W związku z tym stosuje się różne manipulacje, aby stworzyć odpowiednie modele padaczkowe dla naszych eksperymentów. W celu ustalenia ogniskowego TLE podaje się małą dawkę pilokarpiny do lewego centralnego jądra ciała migdałowatego (CeA). Aby zweryfikować ten model, sześć elektrod ECoG jest wszczepionych w płat czołowy (F1 i F2), ciemieniowy (P1 i P2) i potyliczny (O1 i O2) zarówno w lewej, jak i prawej półkuli, a kolejne dwie elektrody referencyjne (R1 i R2) są umieszczane nad móżdżkiem w obu półkulach. Dodatkowa kaniula prowadząca do mikroiniekcji jest chirurgicznie wszczepiana do lewego CeA (AP, 2,8 mm od bregma; ML, 4,2 mm; DV, 7,8 mm względem bregma). Współrzędne zostały zaczerpnięte z atlasu szczurów Paxinos i Watson¹⁰. Jeśli ogniskowe TLE zostanie pomyślnie wywołane, tylko zapis z elektrody na lewej korze ciemieniowej (P1), która znajduje się w pobliżu lewego CeA, powinien uzyskać dominujące ECoG padaczkowe, bez istotnych ECoG padaczkowych zarejestrowanych z innych elektrod ECoG. Dootrzewnowe (IP) wstrzyknięcia pilokarpiny szczurom wywołują padaczkę uogólnioną i SE, ale może to być śmiertelne. Pięć wstrzyknięć IP pentylenotetrazolu (PTZ) w jednodniowym odstępie między każdym wstrzyknięciem skutecznie indukuje spontaniczną uogólnioną padaczkę u myszy, a także zapewnia przeżycie myszy. Dwie przewodowe elektrody ECoG są wszczepiane do kory czołowej i ciemieniowej u myszy w celu odbierania sygnałów ECoG i weryfikacji spontanicznie nawrotu padaczki.

Polisomnografia (PSG) to kompleksowa metoda rejestrowania zmian fizjologicznych, które zachodzą podczas snu, i może obiektywnie klasyfikować sen na różne etapy snu bez szybkich ruchów gałek ocznych (NREM) i szybkich ruchów gałek ocznych (REM). PSG rejestruje parametry funkcji organizmu, w tym fale mózgowe (elektroencefalogram, EEG), ruchy gałek ocznych (elektrookulogram, EOG), tony mięśni szkieletowych (elektromiogram, EMG), rytmy serca (elektrokardiogram, EKG) oraz poziom tlenu we krwi i parametry oddechowe. U szczurów rejestrujemy ECoG, EMG, temperaturę kory mózgowej i aktywność lokomotoryczną, aby sklasyfikować stany czujności na czuwanie, sen NREM i sen REM. Analizę snu u myszy przeprowadza się za pomocą ECoG, EMG i wyników aktywności lokomotorycznej. Szczurom wszczepia się chirurgicznie trzy elektrody śrubowe ECoG w czołowej, ciemieniowej i przeciwległej korze móżdżku za pomocą chirurgii stereotaktycznej. Określenie stanów czujności (czuwanie, sen NREM i sen REM) po akwizycji odbywa się na podstawie parametrów uzyskanych z ECoGs, EMG, temperatury mózgu i aktywności lokomotorycznej. Szczegółowe kryteria kategoryzacji zachowania zwierzęcia zarówno u szczurów, jak i myszy opisano w protokole.

Zarówno szczury, jak i myszy muszą być znieczulone niską dawką zoletilu (25 mg/kg), która stanowi połowę dawki środków znieczulających zwykle podawanych podczas operacji stereotaktycznej, przed wykonaniem manualnej akupunktury lub EA. Taka dawka pozwala zwierzętom obudzić się od 30 do 35 minut po wstrzyknięciu. Na początku okresu ciemności wykonuje się akupunkturę manualną lub EA, ze stałym okresem czasu wynoszącym 30 minut, a każde zwierzę jest kolejno leczone przez dwa do trzech dni. Stymulujące prądy EA są dostarczane do określonego punktu akupunkturowego za pomocą igły ze stali nierdzewnej, która jest wprowadzana do punktu akupunkturowego. Prąd bodźca to ciąg dwufazowych impulsów kwadratowych, w których czas trwania impulsu wynosi 150 ms, a intensywność stymulacji 1 mA. Jeśli do akupunktury manualnej używa się suchej igły, igła wprowadzona do akupunkturów jest drgana 10 razy co 5 minut. Trudną częścią akupunktury manualnej lub EA jest zlokalizowanie punktów akupunkturowych u gryzoni. Lokalizacja punktów akupunkturowych u szczurów lub myszy jest podobna do ich anatomicznej lokalizacji u ludzi. Na przykład obustronne punkty akupunkturowe Fengchi znajdują się w odległości 3 mm od tylnej linii środkowej na szyi, między dwoma uszami, co jest podobne do ich anatomicznego położenia u ludzi¹¹. Co więcej, punkty akupunkturowe o niskiej impedancji na skórze mogą być dodatkowo potwierdzone. Udawana akupunktura lub pozorowana manipulacja EA jest niezbędna do akupunktury lub eksperymentów EA. Akupunktura pozorowana lub pozorowana EA powinna być wykonywana w nieakupunkturowym znajdującym się w pobliżu punktu akupunkturowego, na przykład w pobliżu pachy¹².

Aby skutecznie zbadać wpływ akupunktury lub EA na epilepsję i zaburzenia snu wywołane padaczką, muszą być spełnione następujące czynniki: wykonalny model zwierzęcy epilepsji, dokładna analiza epileptycznych ECoG i nawrotów padaczki, metoda klasyfikacji stanów czujności oraz dokładne działanie akupunktury lub EA u gryzoni.

Wszystkie protokoły eksperymentalne są zatwierdzane przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt (IACUC) Narodowego Uniwersytetu Tajwańskiego.

1. Chirurgia stereotaktyczna do wszczepiania elektrod ECoG, elektrod EMG, termistora mózgu i kaniuli prowadzącej do wstrzykiwań

1. Dla szczurów (250 - 350 g, 6- do 8-tygodniowych szczurów Sprague-Dawley)
   1. Znieczulić szczury przez wstrzyknięcie IP z 50 mg/kg zoletylu. Potwierdź prawidłową głębokość znieczulenia, obserwując brak reakcji po uszczypnięciu w tylną łapę. Nałóż maść na oczy, ogol sierść i wysterylizuj skórę roztworem jodu powidonu i 75% etanolem. Wstrzyknij antybiotyk (penicylinę G), aby zapobiec infekcji.
   2. Przygotuj skalpele, nożyczki, hemostatyki, gazy i maszynę do kauteryzacji do operacji. Sterylizować sprzęt chirurgiczny i gazy w autoklawie i kauteryzacji 75% etanolem.
   3. Umieść pasek na uszy w przewodzie słuchowym i zamontuj szczura do stereotaksji.
   4. Za pomocą skalpela wykonaj około 2-centymetrowe nacięcie w linii środkowej czaszki wzdłuż linii między dwoma uszami, poruszając się doogonowo. Przytnij płaty skóry hemostatami, aby odsłonić czaszkę i usunąć tkankę nad czaszką za pomocą skalpela.
   5. Wywierć osiem otworów (F1, F2, P1, P2, O1, O2, R1 i R2), każdy o średnicy około 0.7 mm, w czaszce za pomocą narzędzia obrotowego. Przykręć osiem elektrod ECoG na płacie czołowym, ciemieniowym i potylicznym oraz móżdżku zarówno w lewej, jak i prawej półkuli. Elektrody te służą do wykrywania padaczki ogniskowej.
      1. Użyj następujących współrzędnych dla elektrod rejestrujących: czołowa (F1 i F2): +2,0 mm przed bregmą i +2,5 mm od linii środkowej, ciemieniowa (P1 i P2): -2,0 mm przed bregmą i +3,0 mm od linii środkowej oraz potyliczna (O1 i O2): -5,5 mm przed bregmą i +3,0 mm od linii środkowej.
      2. Umieść dwie elektrody referencyjne (R1 i R2) nad móżdżkiem (-11,0 mm przed bregmą i +4,0 mm od linii środkowej).
   6. W oddzielnych grupach szczurów wywierć trzy otwory i umieść dwie przykręcane elektrody EEG nad prawym płatem czołowym (F2) i ciemieniowym (P2) kory mózgowej o tych samych współrzędnych, jak opisano w kroku 1.1.5.1. Umieść trzecią elektrodę EEG nad lewym móżdżkiem (R1), która służy do uziemienia zwierzęcia i zmniejszenia artefaktów sygnału. Elektrody te służą do potwierdzania padaczki uogólnionej i analizy etapów czujności.
   7. Oddziel skórę szyi i mięśnie i wprowadź dwie elektrody EMG do mięśnia szyi.
   8. Wywierć kolejny otwór w czaszce i umieść kaniulę prowadzącą do mikroiniekcji w lewym CeA (AP, 2,8 mm od bregma; ML, 4,2 mm; DV, 7,8 mm w stosunku do bregma) u szczurów. Współrzędne zostały zaczerpnięte z atlasu szczurów Paxinos i Watson¹⁰.
   9. Wywierć większy otwór (o średnicy 1,6 mm) w czaszce i umieść skalibrowany termistor 30 kV na powierzchni kory ciemieniowej, który zostanie później zacementowany, aby monitorować temperaturę kory mózgowej u szczurów.
   10. Użyj gazy i kauteryzacji, aby zatrzymać krwawienie, gdy się pojawi.
   11. Poprowadź izolowane przewody od elektrod ECoG i elektrod EMG do cokołu i podłącz termistor do linki. Zacementuj cokół i poprowadź kaniulę do czaszki za pomocą akrylu dentystycznego.
   12. Leczyć nacięcie miejscowo polisporyną (bacytracyny/siarczan polimyksyny B), aby zapobiec infekcji. Podawaj zwierzętom zarówno ibuprofen, jak i penicylinę G w wodzie przez tydzień po zabiegu.
2. Dla myszy (20 - 30 g, myszy C57BL/C w wieku od 6 do 8 tygodni)
   1. Znieczulić myszy przez wstrzyknięcie IP z 50 mg/kg zoletilu i potwierdzić właściwą głębokość znieczulenia, obserwując brak odpowiedzi po uszczypnięciu tylnej łapy. Nałóż maść do oczu. Po zgoleniu sierści wysterylizuj skórę roztworem jodu powidonu i 75% etanolem. Wstrzyknij antybiotyk (penicylinę G), aby zapobiec infekcji.
   2. Umieść pasek douszny w przewodzie słuchowym i zamontuj mysz do stereotaksji.
   3. Za pomocą skalpela wykonaj około 1,5-centymetrowe nacięcie w linii środkowej czaszki wzdłuż linii między dwoma uszami, poruszając się doogonowo. Przytnij płaty skóry hemostatykami, aby odsłonić czaszkę i usuń tkankę nad czaszką za pomocą skalpela.
   4. Zrób dwa otwory w czaszce nożyczkami chirurgicznymi i umieść dwie druciane elektrody ECoG na prawym płacie czołowym (F2: +2,0 mm do bregma i +1,5 do linii środkowej) i lewym płacie ciemieniowym (P1: -3,0 mm do bregmy i -2,5 mm do linii środkowej).
   5. Oddziel skórę szyi i mięśnie i wprowadź dwie elektrody EMG do mięśnia szyi.
   6. Podłącz izolowane przewody z drutowych elektrod ECoG i elektrod EMG do końcówek żeńskich i do złącza 2,54 mm, a następnie przycementuj do czaszki za pomocą akrylu dentystycznego.
   7. Leczyć nacięcie miejscowo polisporyną (bacytracyny/siarczan polimyksyny B), aby zapobiec infekcji. Podawaj zwierzętom zarówno ibuprofen, jak i penicylinę G w wodzie przez tydzień po zabiegu.
3. Pozwolić wszystkim zwierzętom dojść do siebie przez siedem dni przed rozpoczęciem doświadczeń.
4. Szczury lub myszy trzymane w pomieszczeniach trzymanych oddzielnie, w oddzielnych klatkach do nagrywania, w odizolowanym pomieszczeniu, w którym temperatura jest utrzymywana na poziomie 23 ± 1 °C, a rytm światło-ciemność (L:D) jest kontrolowany w cyklu 12:12 godzin (oświetlenie 40 W x 4 lampy). Zapewnij jedzenie i wodę ad libitum.
5. Podłącz ECoG, EMG i termistor za pomocą linki do amplifiers tydzień po operacji, aby rozpocząć nagrania.

2. Ustalenie ogniskowej padaczki TLE, SE i spontanicznie nawracającej padaczki

1. Dla szczurów
   1. Podać 0,5 μl pilokarpiny (2,4 mg/μl) do lewego CeA przez kaniulę prowadzącą iniekcję za pomocą pompy do mikroiniekcji. Szybkość wstrzykiwania powinna być ustawiona na 0,2 μl/min w celu wywołania ogniskowego TLE.
   2. IP wstrzyknąć 300 mg/kg pilokarpiny w celu wywołania padaczki uogólnionej z nawracającym SE.
2. Dla myszy
   1. IP podaje PTZ (0,035 mg/g masy ciała myszy) w określonym punkcie ZT co drugi dzień. Pięć kolejnych wstrzyknięć spowoduje rozwój padaczki uogólnionej spontanicznie i nawracająco.
3. Dla szczurów i myszy
   1. Wzmocnij sygnały ECoG o 5 000 i przefiltruj pasmo analogowe w zakresie od 0,1 do 40 Hz.
   2. Użyj płytki konwertującej A/C, aby przekonwertować analogowe sygnały ECoGs na sygnały cyfrowe z częstotliwością próbkowania 128 Hz.
   3. Korzystaj z oprogramowania do oceny wizualnej i analizuj początek i czas trwania padaczki. Zmierz skalę czasu, aby przedstawić czas trwania.
   4. Zdefiniuj padaczkę ECoG na podstawie pojawienia się skoków padaczkowych o amplitudzie większej niż 2 mV i trwających dłużej niż 30 s¹³.

3. Klasyfikacja stanów czujności

1. Dla szczurów
   1. Określ stany czujności, korzystając z parametrów uzyskanych z ECoG, EMG, temperatury mózgu i lokomocji w ciągu 12-sekundowego epizodu zapisu. Podłącz ECoG, EMG i termistor za pomocą linki do amplifiers tydzień po operacji, aby rozpocząć nagrywanie. Oceń stany za pomocą niestandardowego oprogramowania zgodnie z krokami 3.1.5 - 3.1.7.
   2. Mierz aktywność lokomotoryczną za pomocą detektora ruchu na podczerwień, integruj sygnały co 1 s i przechowuj sygnały.
   3. Zmierz temperaturę kory mózgowej i zapisz sygnały.
   4. Klasyfikuj stany czujności zgodnie z naszymi wcześniej zdefiniowanymi kryteriami¹⁴.
   5. Oceń stan czuwania, korzystając z następujących cech: ECoG o małej amplitudzie z widmami o wysokiej częstotliwości, wyższą mocą delta (0,5 - 4,0 Hz) i niższą mocą theta (6,0 - 9,0 Hz), dominującą aktywnością lokomotoryczną, wysoką aktywnością EMG i stopniowo rosnącą temperaturą kory mózgowej.
   6. Oceń sen NREM, używając następujących cech: ECoG z dominacją fali delta o dużych amplitudach, zmniejszona aktywność EMG, obniżona temperatura kory mózgowej i brak aktywności lokomotorycznej.
   7. Oceń sen REM, korzystając z następujących cech: zmniejszona amplituda ECoG z dominującą częstotliwością theta, nagły wzrost temperatury kory mózgowej, minimalna aktywność EMG i niska aktywność lokomotoryczna z drganiami ciała.
2. Dla myszy
   1. Powtórz klasyfikację stanów czujności u myszy, jak przeprowadzoną u szczurów, z wyjątkiem tego, że termistor nie rejestruje temperatury kory mózgowej.

4. Wykonywanie akupunktury manualnej i EA u szczurów

1. Szczur jest znieczulony do protokołu EA.
2. Zlokalizuj punkt akupunktowy według anatomii i potwierdź niską impedancję skóry w akupunkcie. Światło po wykryciu niskiej impedancji skóry. Uwaga: Punkty akupunkturowe Fengchi znajdują się w odległości 3 mm od tylnej linii środkowej między dwoma uszami, na szyi.
3. Włóż igły ze stali nierdzewnej do punktów akupunkturowych na głębokości 2 mm.
4. Szarp wbite igły 10 razy co 5 minut.
5. Za pomocą funkcjonalnego stymulatora elektrycznego dostarcz ciąg dwufazowych impulsów (każdy o czasie trwania 150 μs) o intensywności 1 mA do punktów akupunkturowych przez igłę.
6. Wykonaj pozorowaną akupunkturę lub pozorowaną EA jako kontrolę.

Istnieją różne modele szczurów i myszy, które zaspokajają potrzeby różnych typów epilepsji. W celu wywołania ogniskowego TLE podaje się 0,5 μl pilokarpiny (2,4 mg/μl) do lewego CeA. Dominujące ECoG padaczkowe są pozyskiwane z elektrody ECoG na płacie ciemieniowym lewej półkuli (ryc. 1A: b), a rzadkie czynności padaczkowe są wychwytywane z pozostałych elektrod ECoG (ryc. 1A: a, c, d, e i f) podczas podawania pilokarpiny. ECG padaczkowe są przede wszystkim rejestrowane bezpośrednio po podaniu pilokarpiny. Wyniki te są przyjmowane z 8. Wyniki te wskazują na pomyślną indukcję ogniskowego TLE u szczurów po bezpośrednim wstrzyknięciu małej dawki pilokarpiny do CeA.

W ciągu 5 minut, wstrzyknięcie IP 300 mg/kg pilokarpiny wywołuje poważne skutki cholinergiczne na zachowanie, takie jak piloerekcja, ślinotok, zaczerwienienie oczu, dreszcze i automatyzmy twarzy. Nasilenie tych objawów behawioralnych stopniowo wzrasta, aż do wystąpienia napadu uogólnionego ECoG (ryc. 1B, niebieska ramka). SE występuje również po padaczce uogólnionej (ryc. 1B, czerwona ramka). Wyniki te zostały przyjęte z13. Nasze wyniki sugerują, że wstrzyknięcie IP w dawce 300 mg/kg pilokarpiny jest wiarygodną metodą wywoływania uogólnionej padaczki i SE udokumentowanej przez ECoG. Jednak wskaźnik przeżycia po rozwoju SE wynosi od 15% do 20%. Model padaczki z rozpalaniem PTZ u myszy służy do rozwoju spontanicznej i nawracającej padaczki uogólnionej. PTZ w dawce 0,035 mg/g masy ciała myszy jest wstrzykiwany IP w określonym punkcie ZT (np. początek okresu ciemności, ZT13) co drugi dzień, a każde wstrzyknięcie jest oddzielone jednodniowym odstępem. Nie stwierdzono epileptycznych ECoG w okresie ciemności popierwszym wstrzyknięciu PTZ (ryc. 1C: a) lub w następnym okresie ciemności, kiedy jest dzień wolny od wstrzyknięcia (ryc. 1C: b). Nie stwierdzono znaczącej aktywności padaczkowej po2, 3 i 4 wstrzyknięciu (dane nie pokazane tutaj). Jednak padaczkowe ECoG są indukowane popiątym wstrzyknięciu PTZ (ryc. 1C: c i d), wraz ze spontanicznie i nawracająco uogólnioną padaczką (ryc. 1C: e i a').

Sklasyfikowaliśmy stany czujności na czuwanie, sen NREM i sen REM zgodnie z kryteriami, o których wspomnieliśmy w protokole. Czuwanie jest wizualnie oceniane przez zdesynchronizowane ECoG o niskiej amplitudzie i wysokiej częstotliwości. Wartości gęstości mocy w paśmie częstotliwości delta (0,5 - 4 Hz) są na ogół większe niż te w paśmie częstotliwości theta (6 - 9 Hz) podczas czuwania i stwierdza się więcej widm o wysokiej częstotliwości (> 10 Hz). Czuwanie charakteryzuje się dużą amplitudą EMG i dużą aktywnością lokomotoryczną. Co więcej, temperatura kory stopniowo wzrasta, gdy stan czujności przechodzi ze snu NREM lub snu REM do czuwania (ryc. 2). Sen NREM charakteryzuje się zsynchronizowanymi ECoG o dużej amplitudzie i niskiej częstotliwości. Wartości gęstości mocy są dominujące w paśmie częstotliwości delta. Amplituda EMG stopniowo maleje, a podczas snu NREM nie wykazuje się żadnej aktywności lokomotorycznej. Temperatura kory mózgowej spada, gdy stan czujności przechodzi ze stanu czuwania do snu NREM (ryc. 2). Podczas snu REM fala ECoG jest zdesynchronizowana, amplituda jest zmniejszona, dominująca gęstość mocy EEG występuje w zakresie częstotliwości theta (6,0 - 9,0 Hz), aktywność EMG jest najniższa, obserwuje się fazowe drganie ciała, a temperatura kory mózgowej gwałtownie wzrasta (ryc. 2).

Wykazaliśmy wyraźny wpływ EA na aktywność epilepsji, gdy EA stymuluje punkty akupunkturowe Fengchi za pomocą stymulacji o wysokiej częstotliwości (100 Hz) lub stymulacji o niskiej częstotliwości (10 Hz). Na rycinie 3A mikrowstrzyknięcie 0,5 μl pilokarpiny (2,4 mg/μL) do lewego CeA indukuje ogniskowe TLE, jak wspomniano wcześniej (B). Jednak 100-Hz EA obustronnych punktów akupunkturowych Fengchi zaostrza epileptyczne ECoG wywołane pilokarpiną (C). Wyniki te zostały zaadaptowane z 8. W przeciwieństwie do tego, 10-Hz EA obustronnego Fengchi hamuje eCG padaczkowe indukowane pilokarpiną (Figura 3B: C). Wyniki te zostały zaadaptowane z 7. Podanie pilokarpiny do lewego CeA również hamuje sen NREM w okresie światła 12-godzinnego cyklu światło: ciemność (ryc. 4A i 4B). Skrócenie snu NREM w ciągu kilku godzin okresu ciemności wynika przede wszystkim z efektu znieczulenia, a nie jest bezpośrednim skutkiem EA15. Zastosowanie EA 100 Hz dodatkowo pogarsza indukowane pilokarpiną tłumienie snu NREM (ryc. 4A). W przeciwieństwie do tego, 10-Hz EA obustronnych punktów akupunkturowych Fengchi zwiększa sen NREM per se w okresie ciemności i blokuje wywołane pilokarpiną zmniejszenie snu NREM w okresie światła (Figura 4B). Wyniki te są przyjmowane z punktu 9.

Rycina 1: Różne modele padaczki u szczurów i myszy. A demonstruje ogniskowy TLE u szczurów. B wyjaśnia uogólnioną padaczkę z SE u szczurów. C oznacza spontaniczne i nawracające EKG padaczkowe. (A) (a), (b), (c), (d), (e) i (f) reprezentują sygnały ECoG zarejestrowane z elektrod umieszczonych odpowiednio na lewej korze czołowej, lewej ciemieniowej, lewej potylicznej, prawej czołowej, prawej ciemieniowej i prawej potylicznej. (B) Strzałka wskazuje wstrzyknięcie pilokarpiny w IP. W szarym polu (a) przedstawiono wyjściowe ECoG uzyskane przed wstrzyknięciem pilokarpiny. Niebieskie pole pokazuje padaczkowe ECoG padaczki uogólnionej. Czerwona rubryka b) oznacza SE. Sygnały ECoG wyodrębnione z lit. a) i b) są pokazane w lit. a') i b'. (C) (a) reprezentuje ECoG nabyte po pierwszym wstrzyknięciuPTZ oraz (b) reprezentuje ECoG zarejestrowane dzień po pierwszym wstrzyknięciuPTZ u myszy. Aktywność padaczkowa występuje po 5. wstrzyknięciuPTZ (c) i po. Nawracające epileptyczne ECoG, które występują następnego dnia po 5. wstrzyknięciuPTZ, przedstawiono w (d). Nawracające epileptyczne ECoG zarejestrowane 5 dni popiątym wstrzyknięciu PTZ przedstawiono w (e). Rysunek u dołu (a') przedstawia ECoG wyodrębnione z czerwonej ramki. Kliknij tutaj, aby zobaczyć większą wersję tego rysunku.

Rysunek 2: Klasyfikacja stanów czujności: czuwanie, sen NREM i sen REM. Stany czujności szczurów są klasyfikowane na podstawie parametrów z ECoG, widm ECoG, EMG, aktywności lokomotorycznej i temperatury kory mózgowej. Stany czujności myszy charakteryzują się tymi samymi parametrami, z wyjątkiem tego, że nie ma zastosowania temperatura kory mózgowej.
Kliknij tutaj, aby zobaczyć większą wersję tego rysunku.

Rysunek 3: Wpływ EA 100 Hz i 10 Hz na padaczkę. W (A) pierwszy ślad ECoG pokazuje podstawowe ECoG (a). Mikrowstrzyknięcie pilokarpiny do lewego CeA indukuje ogniskowe TLE (b). Zastosowanie 100-Hz EA w obustronnych punktach akumetrycznych Fengchiego zaostrza padaczkowe ECoG (c). W (B) pierwszy ślad ECoG pokazuje podstawowe ECoG (a). Mikrowstrzyknięcie pilokarpiny do lewego CeA indukuje ogniskowe TLE (b). Zastosowanie 10-Hz EA w obustronnych punktach akupunkturowych Fengchi hamuje e-EKG padaczkowe (c). Kliknij tutaj, aby zobaczyć większą wersję tego rysunku.

Rysunek 4: Wpływ EA 100 Hz i 10 Hz na zakłócenia snu wywołane padaczką. (A) Ogniskowe TLE wywołane mikrowstrzyknięciem pilokarpiny do lewego CeA skraca sen NREM w okresie światła. 100 Hz EA dodatkowo pogarsza zaburzenia snu wywołane padaczką. (B) Zastosowanie 10-Hz EA blokuje wywołane padaczką zmniejszenie snu NREM w okresie świetlnym. Co więcej, 10-Hz EA poprawia sen NREM w okresie ciemności. Wartości są reprezentowane jako średnia ± SEM. Czarne kółko reprezentuje wartości uzyskane przed mikroiniekcją pilokarpiny, otwarte kółko przedstawia dane uzyskane po wstrzyknięciu pilokarpiny, a otwarty trójkąt przedstawia wartości uzyskane po bodźcach EA. pasek reprezentuje ciemny okres 12-godzinnego cyklu światło:ciemność, a biały pasek przedstawia okres światła. * reprezentuje różnicę statystyczną między grupą 100-Hz EA + pilokarpiną a grupą kontrolną (ANOVA, P < 0,05), a # oznacza różnicę statystyczną między grupą 10-Hz EA + pilokarpiną a grupą pilokarpiny (ANOVA, p < 0,05). Kliknij tutaj, aby zobaczyć większą wersję tego rysunku.

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.