Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Ekstrakcja i oczyszczanie polifenoli z liofilizowanego proszku jagodowego do leczenia komórek mięśni gładkich naczyń krwionośnych in vitro

18.9K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/55605

⸱

5 lipca 2017

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Dietetics and Nutrition, University of Arkansas for Medical Sciences, 2Department of Nutrition, Food and Exercise Sciences, Florida State University, 3Center for Advancing Exercise and Nutrition Research on Aging (CAENRA), Florida State University

W tym artykule

Podsumowanie

Ta praca szczegółowo opisuje krok po kroku metodę przygotowania bogatych w polifenole ekstraktów z liofilizowanego proszku jagodowego. Ponadto zawiera dokładny opis sposobu stosowania tych bogatych w polifenole ekstraktów w hodowli komórkowej w obecności hormonu peptydowego angiotensyny II (Ang II) przy użyciu komórek mięśni gładkich naczyń krwionośnych (VSMC).

Streszczenie

Badania epidemiologiczne wskazują, że zwiększone spożycie flawonoidów koreluje ze zmniejszoną śmiertelnością z powodu chorób sercowo-naczyniowych (CVD) w Stanach Zjednoczonych (USA) i Europie. Jagody są powszechnie spożywane w USA i mają wysoką zawartość polifenoli. Wykazano, że polifenole wchodzą w interakcje z wieloma celami molekularnymi i wywierają liczne pozytywne funkcje biologiczne, w tym działanie przeciwutleniające, przeciwzapalne i kardioprotekcyjne. Polifenole wyizolowane z jeżyny (BL), maliny (RB) i maliny czarnej (BRB) zmniejszają stres oksydacyjny i starzenie się komórek w odpowiedzi na angiotensynę II (Ang II). Niniejsza praca zawiera szczegółowy opis protokołu stosowanego do przygotowania ekstraktów polifenolowych z liofilizowanych jagód. Ekstrakcje polifenoli z liofilizowanego proszku jagodowego przeprowadzono przy użyciu 80% wodnego etanolu i metody ekstrakcji wspomaganej ultradźwiękami. Surowy ekstrakt poddano dalszemu oczyszczaniu i frakcjonowaniu przy użyciu odpowiednio chloroformu i octanu etylu. Działanie zarówno surowych, jak i oczyszczonych ekstraktów przetestowano na komórkach mięśni gładkich naczyń krwionośnych (VSMC) w hodowli.

Wprowadzenie

Polifenole to związki zawierające co najmniej jeden pierścień fenolowy w swojej strukturze i są obficie obecne w królestwie roślin1. Ludzie od tysiącleci spożywają rośliny w celach leczniczych, nie zdając sobie sprawy z istnienia takich związków2. Wiele owoców i warzyw ma pewne wspólne związki polifenolowe, choć w różnych ilościach, w tym flawonoidy, stylbeny i kwasy fenolowe3. Chociaż polifenole są często kojarzone z kolorowymi owocami i warzywami, nie jest to do końca prawda. Na przykład zeaksantyna i ksantyna są obecne w warzywach, które nie są zbyt kolorowe, takich jak cebula i czosnek, które pochodzą z rodziny szalotek i są związane z licznymi korzyściami zdrowotnymi4. Oprócz tego, że polifenole kojarzą się z wieloma korzyściami zdrowotnymi5, służą również roślinom, chroniąc je przed owadami i promieniowaniem ultrafioletowym2. Polifenole są powszechnie spotykane w diecie człowieka i są uważane za silne przeciwutleniacze, ponieważ mogą wymiatać reaktywne formy tlenu (ROS)6,7,8. Mają również właściwości przeciwzapalne9, przeciwbakteryjne10, przeciwnadciśnieniowe11 i przeciwrakotwórcze12,13.

Badania epidemiologiczne wykazują odwrotny związek między spożyciem flawonoidów a częstością występowania chorób sercowo-naczyniowych (CVD)16,17 i śmiertelność14,15. Jagody są powszechnie spożywane w USA i zawierają duże ilości polifenoli, w tym flawonoidów. Na przykład spożywanie soku z jeżyn (BL) (300 ml/d) przez osiem tygodni znacznie obniżyło skurczowe ciśnienie krwi u pacjentów z dyslipidemią18. Jeong i wsp.19 poinformował, że mężczyźni i kobiety z nadciśnieniem spożywający 2,5 g ekstraktu z czarnej maliny (BRB) dziennie mieli niższe ciśnienie krwi w ciągu 24 godzin i nocy w porównaniu do osób spożywających placebo. Maliny (RB) obniżyły ciśnienie krwi, jednocześnie zwiększając ekspresję dysmutazy ponadtlenkowej (SOD) u szczurów z samoistnym nadciśnieniem20. Niedawno wykazano, że BL, RB i BRB obniżają poziom ROS i starzenia się indukowanego przez angiotensynę II (Ang II) w komórkach mięśni gładkich naczyń krwionośnych (VSMCs)21. Ponadto frakcja antocyjanów z ekstraktu BL zmniejszała ekspresję indukowalnej syntazy tlenku azotu (iNOS) i hamowała aktywność czynnika jądrowego kappa B (NF-κB) i kinazy regulowanej sygnałem zewnątrzkomórkowym (ERK) w stymulowanych lipopolisacharydami (LPS) komórkach J774 stymulowanych lipopolisacharydami22. Ekstrakty BRB zmniejszyły aktywację NF-κB i ekspresję cyklooksygenazy 2 (COX-2) in vitro 23, poprawiły profil lipidowy i zapobiegły powstawaniu zmian miażdżycowych u myszy karmionych dietą wysokotłuszczową24. Antocyjany, które są uważane za najobficiej występujące flawonoidy w jagodach, modulują odpowiedź zapalną w makrofagach RAW 264.7 stymulowanych przez LPS poprzez zmniejszenie produkcji czynnika martwicy nowotworu alfa (TNF-α) 25 i zmniejszają proliferację i migrację VSMCs26.

Ponieważ rośnie zainteresowanie zrozumieniem roli polifenoli w ludzkim zdrowiu i chorobach, ważne jest, aby zoptymalizować metodę ekstrakcji. Ekstrakcja rozpuszczalnikowa jest szeroko stosowana w tym celu, ponieważ jest opłacalna i łatwa do odtworzenia. W tym badaniu zastosowano ekstrakcję rozpuszczalnikiem etanolem, wraz z metodą ekstrakcji wspomaganej ultradźwiękami, która została zaadaptowana z Kim and Lee27. Oczyszczanie i frakcjonowanie surowych ekstraktów (CE) przy użyciu chloroformu i octanu etylu przeprowadzono w celu uzyskania oczyszczonej frakcji ekstraktu (PE), która została zaadaptowana z Queires et al28. Ponadto porównano skuteczność surowych i oczyszczonych ekstraktów polifenolowych z BL w zmniejszaniu podstawowej fosforylacji ERK1/2 i przedstawiono reprezentatywne przykłady hamującego wpływu oczyszczonego ekstraktu polifenolowego BL na indukowane przez Ang II redukcje sygnalizacji VSMC.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

1. Przygotowanie odczynników

  1. Przygotuj 80% etanol (100 ml), mieszając 80 ml absolutnego etanolu (klasy biologicznej molekularnej) i 20 ml sterylnej wody do hodowli komórkowych.
  2. Aby przygotować ekstrakt polifenolowy (10 mg/ml), należy odważyć 10 mg CE lub PE. Dodaj 1 ml zwykłego zmodyfikowanego podłoża Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) pod kapturem do hodowli komórkowych. Wiruj roztwór. Podwielokrotność rozliczyć w porcjach po 200 μl i przechowywać w temperaturze -20 °C.
  3. Przygotować bufor do lizy.
    1. Dodać 5 ml 1 M roztworu podstawowego HEPES (pH 7,4; 50 mM wersja ostateczna), 1 ml 5 M roztworu podstawowego NaCl (50 mM wersja ostateczna), 1 ml 0,5 M roztworu podstawowego EDTA (5 mM wersja ostateczna), 2 ml 0,5 M roztworu podstawowego NaF (10 mM wersja ostateczna), 286 μl roztworu podstawowego 700 mM Na3VO4 (2 mM wersja ostateczna), 5 ml 200 mM roztworu podstawowego Na4P2O7 (10 mM końcowy) i 5 ml 20% roztworu podstawowego Triton-X-100 przygotowanego w wodzie (1% końcowy). Dodaj wodę, aby osiągnąć objętość 100 ml. Przechowywać w temperaturze 4 °C.
    2. Dodać 10 μl/ml koktajlu inhibitorów proteazy. Dodaj świeże, gdy komórki będą gotowe do lizy.
  4. Przygotować bufor do próbek Laemmli (4x).
    1. Dodać 31,25 ml 2 M roztworu podstawowego Tris (pH 6,8), 100 ml glicerolu, 50 ml 20% roztworu dodecylosiarczanu sodu (SDS) przygotowanego w wodzie i 50 ml β-merkaptoetanolu. Dodaj wodę do 250 ml. Przechowywać w temperaturze 4 °C.
  5. Aby przygotować bufor do soli fizjologicznej (TBS), należy odważyć 3 g Tris (25 mM wersja ostateczna), 0,18 g KCl (2,5 mM wersja ostateczna) i 8,76 g NaCl (150 mM wersja ostateczna). Ustaw pH na 7,4 i dodaj wodę do 1 l. Trzymaj w temperaturze RT.
  6. Aby przygotować TBS-T, dodaj 997,5 ml TBS i 2,5 ml 20% roztworu Triton-X-100 przygotowanego w wodzie. Trzymaj się RT.

2. Przygotowanie ekstraktów z czerni

  1. Przygotowanie surowego ekstraktu z liofilizowanego proszku jagodowego.
    1. Zważ 10 g liofilizowanej jeżyny w proszku (lub 5 g świeżego proszku). Jeśli używane są mrożone owoce, przed rozpoczęciem ekstrakcji pokrój je na bardzo małe kawałki.
    2. Wymieszać proszek owocowy ze 100 ml 80% wodnego roztworu etanolu w okrągłodennej kolbie Erlenmeyera o pojemności 1 l.
    3. Sonikować mieszaninę przez 20 minut przy 42 kHz, 135 W, używając łaźni ultradźwiękowej w temperaturze 25 °C, bez żadnych odstępów czasowych pomiędzy nimi. Wykonaj sonikację z ciągłym przedmuchiwaniem azotem w przytłumionym świetle. W przypadku mrożonych owoców wydłuż czas inkubacji do 4 godzin.
    4. Przefiltrować mieszaninę przez bibułę filtracyjną #2 za pomocą schłodzonego lejka Buchnera z odsysaniem próżniowym.
      UWAGA: Pod koniec tego etapu na bibule filtracyjnej pojawiają się pozostałości próbki; Nazywa się to placekiem filtracyjnym.
    5. Przepłukać placek filtracyjny 50 ml 100% etanolu. Zachować filtrat i dodać placek filtracyjny do kolby okrągłodennej o pojemności 1 litra zawierającej 100 ml 80% wodnego roztworu etanolu.
    6. Powtórzyć proces ekstrakcji pozostałości (etapy 2.1.2 - 2.1.4).
    7. Połączyć oba filtraty w kolbie okrągłodennej z dodatkowymi 50 ml 80% wodnego roztworu etanolu.
      UWAGA: Ostateczna objętość powinna wynosić około 300 ml.
    8. Użyć wyparki obrotowej o temperaturze 62 °C i prędkości 50 obr./min, aby odparować rozpuszczalnik. Kontynuuj ten proces, aż etanol przestanie parować.
      UWAGA: Ten proces trwa około 45 minut.
    9. Przenieść próbkę do stożkowej probówki o pojemności 50 ml. Odparować etanol, wstrzykując gazowy azot w górnej części rurki przez 10 min.
      UWAGA: Ten krok jest potrzebny, aby zapewnić całkowite odparowanie etanolu. Objętość próbki na tym etapie wynosi około 20 ml.
    10. Zamrażać próbkę w temperaturze -80 °C przez co najmniej 24 h.
      UWAGA: Ten krok jest potrzebny, aby umożliwić bardziej wydajny proces liofilizacji.
    11. Próbkę należy liofilizować w temperaturze -50 °C przez około 8 godzin. Próbki przechowywać w temperaturze -20 °C.
      UWAGA: Liofilizator wytwarza silne podciśnienie w temperaturze -50 °C wewnątrz komory w celu wysuszenia próbek, ale zachowuje większość związków, takich jak polifenole.
  2. Otrzymywanie oczyszczonych ekstraktów polifenolowych z ekstraktów surowych.
    1. Zważyć liofilizowane próbki ekstrahowane.
      UWAGA: Objętość ekstraktu na tym etapie wynosi około 10 ml.
    2. Dodać dwie objętości (~20 ml) chloroformu do surowego ekstraktu i wstrząsać roztworem przez 5 minut na mieszance.
    3. Wlej mieszaninę do rozdzielacza. Pozostaw ekstrakt surowy na 1 godzinę w temperaturze pokojowej, aby uzyskać oczyszczoną frakcję.
      UWAGA: Na tym etapie utworzy się dwufazowa mieszanina.
    4. Wyrzucić dolną warstwę (fazę chloroformu) z rozdzielacza i zebrać warstwę wodną do czystej zlewki.
    5. Dodać dwie objętości octanu etylu do frakcji wodnej i za pomocą mieszadła magnetycznego mieszać mieszaninę przez 5 minut w temperaturze pokojowej.
    6. Przefiltrować mieszaninę przez bibułę filtracyjną #2 za pomocą schłodzonego lejka Buchnera z odsysaniem próżniowym.
    7. Zebrać przefiltrowaną próbkę i przenieść ją do kolby okrągłodennej, która ma być używana z wyparką obrotową.
    8. Ustawić parownik obrotowy na 62 °C i 50 obr./min i odparowywać octan etylu przez około 30 minut.
    9. Próbkę liofilizować w temperaturze -50 °C przez około 8 godzin. Przenieść próbkę do stożkowej probówki o pojemności 50 ml i przechowywać w temperaturze -20 °C.

3. Leczenie VSMC ekstraktami z jagód

  1. Kultura VSMC.
    1. Wyizoluj VSMC z aort piersiowych szczurów Sprague-Dawley, przeprowadzając trawienie enzymatyczne, jak opisano wcześniej29. Kultura VSMC zgodnie z opisem29.
    2. Przygotować kompletną pożywkę do hodowli VSMC przy użyciu DMEM zawierającego 1 g / l glukozy i uzupełnionego 10% płodową surowicą bydlęcą (FBS), 100 U / ml penicyliny, 100 mg / ml streptomycyny i 2 mM L-glutaminy. Przechowywać całe podłoże w temperaturze 4 °C.
  2. Inkubacja VSMC z ekstraktami polifenolowymi.
    1. Aby podzielić VSMC, wyrzuć pożywkę hodowlaną i dwukrotnie przemyj komórki solą fizjologiczną buforowaną fosforanami (PBS). Dodaj 4 ml PBS i 2 ml trypsyny EDTA 0,25%. Inkubować komórki przez 5 minut w temperaturze 37 °C w inkubatorze CO2 .
      1. Zebrać komórki, wymieszać je z 2 ml kompletnej pożywki w probówce wirówkowej o pojemności 15 ml i odwirować przy 1 100 × g przez 5 minut. Odrzucić supernatant i ponownie zawiesić osad komórkowy z 1 ml PBS. Policz komórki za pomocą hemocytometru.
      2. Wysiewaj 50 000 VSMC na dołek na 6-dołkowych płytkach hodowlanych i hoduj je na kompletnym podłożu zawierającym 10% FBS, aż osiągną 90% konfluencji (około 3 dni). Utrzymuj VSMC w temperaturze 37 °C w nawilżonym inkubatorze o stężeniu 5% CO2 .
    2. Przygotuj pożywkę do zabiegu za pomocą pożywki DMEM zawierającej 1 g/l glukozy, 100 U/ml penicyliny, 100 mg/ml streptomycyny, 2 mM L-glutaminy i 0,5% FBS. Przechowywać pożywkę zabiegową w temperaturze 4 °C.
      UWAGA: Ekstrakty polifenolowe i Ang II są dodawane bezpośrednio do komórek za pomocą tego podłoża.
    3. Przygotować roztwór podstawowy 10 mg/ml surowego ekstraktu (CE) lub oczyszczonego ekstraktu (PE) polifenoli, rozpuszczając 10 mg ekstraktu w 1 ml zwykłej pożywki DMEM. Przechowywać zapas w podwielokrotnościach 200 μl w temperaturze -20 °C.
    4. Inkubować VSMC z 2 ml pożywki zabiegowej zawierającej 0,5% FBS i dodać ekstrakty CE lub PE do uzyskania stężenia 50 - 500 μg/ml. Zmieniaj pożywkę co 24 godziny, dodając świeże ekstrakty polifenolowe. Traktuj komórki przez 3 dni.
    5. W przypadku leczenia Ang II lub innymi hormonami i czynnikami wzrostu, należy zagłodzić komórki przez co najmniej 24 godziny poprzez inkubację komórek z pożywką zawierającą 0,5% FBS przed dodaniem Ang II (100 nM).
      UWAGA: Zaleca się inkubację z CE i PE i bez CE i PE w 0,5% pożywce zabiegowej FBS przed dodaniem Ang II.
      1. Po 24 godzinach głodu dodaj 100 nM Ang II. Podłoże zabiegowe należy wymieniać na świeże CE, PE lub Ang II co 24 godziny przez 3 dni.
  3. Przygotowanie próbek komórek.
    1. Umyj poddane działaniu substancji komórki dwukrotnie w zimnym PBS i poddaj je lizie za pomocą 200 μl buforu do lizy na lodzie.
    2. Zebrać lizaty komórkowe za pomocą skrobaków do komórek i przenieść lizaty do probówek mikrowirówek o pojemności 1,5 ml. Inkubować całkowite lizaty komórkowe przez 20 minut na lodzie i wirować co 5 minut.
    3. Sonizacja ekstraktów komórkowych za pomocą trzech impulsów o mocy 125 W przez 10 s każdy, z przerwą na 2 s pomiędzy nimi. Próbki należy przechowywać na lodzie przez cały czas trwania sonikacji.
    4. Zmierzyć stężenie białka za pomocą odczynnika do oznaczania białek przy długości fali 595 nm.
    5. Próbki należy przechowywać w temperaturze -20 °C do analizy metodą Western blot.
  4. Western blot.
    1. Zmieszać równe ilości białka (około 50 μg) z próbek kontrolnych niepoddanych działaniu substancji i próbek poddanych działaniu polifenoli lub próbek poddanych działaniu Ang II z buforem do lizy, aby uzyskać maksymalną całkowitą objętość 50 μl. Dodać 16 μl 4x buforu do próbek Laemmli. Podgrzewać próbki przez 5 minut w temperaturze 75 °C.
    2. Rozdzielić próbki w 10% żelach SDS-PAGE i przenieść je do membran PDVF pod napięciem 10 V przez 75 minut w półsuchym systemie transferowym do analizy Western blot ze specyficznymi przeciwciałami.
    3. Zatkać membranę 2% mlekiem w buforze TBS 0,05% Triton-X100 (TBS-T) na 20 min.
    4. Usunąć mleko, przemywając membranę co najmniej trzykrotnie TBS (po 5 minut każdy) i inkubować z pierwszorzędowymi przeciwciałami przez 1 godzinę w temperaturze pokojowej lub O/N w temperaturze 4 °C.
    5. Przemyć błonę trzy razy po 10 minut za pomocą TBS-T i inkubować z przeciwciałem drugorzędowym sprzężonym z HRP przez 45 minut.
    6. Przemyć membranę trzy razy po 10 minut za pomocą TBS-T i wywołać metodą wzmocnionej chemiluminescencji (ECL).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Wcześniej wykazano, że ekstrakty polifenolowe wyizolowane z BL, RB i BRB hamowały starzenie się VSMC w odpowiedzi na Ang II21. Wykazano, że te oczyszczone ekstrakty polifenolowe modulują sygnalizację Ang II poprzez redukcję fosforylacji Akt, kinazy p38 MAPK (Mitogen-Activated Protein Kinase) oraz ERK1/2. BL zapobiega starzeniu poprzez zmniejszenie ekspresji oksydazy NADPH (Nox) 1, enzymu produkującego aniony ponadtlenkowe, którego ekspresja jest silnie zwiększana p...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Polifenole wyizolowane z jagód zawierają różne składy. Opisany tutaj protokół ekstrakcji na bazie etanolu pozwolił na identyfikację różnych poziomów kwasów fenolowych i flawonoidów obecnych w surowych i oczyszczonych ekstraktach polifenolowych BL (tab. 1). CE został wzbogacony w kwas galusowy, kwas ferulowy, kwas 4-O-kawoilochinowy i kwas 5-O-kawoilochinowynowy. Proces oczyszczania nie zmienił istotnie poziomu kwasu galusowego i kwasu p-kumarowego. Zwiększył jednak poziom kwasu 3-O-kawoilochinowego ze 17...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

Ta praca została sfinansowana przez American Heart Association (14GRNT20180028) oraz Florida State University Council on Research and Creativity (COFRS).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Angiotensyna IISigma-Aldrich, Inc.A9525-10MGLeczenie VSMC
i beta-aktynySigma-Aldrich, Inc.A2228Przeciwciało pierwszorzędowe (1:5000)
Owoce jeżynyMercer FoodsLiofilizowana jeżyna w proszku
Katalaza Calbiochem219010Przeciwciało pierwszorzędowe (1:1000)
ChloroformBiotech Grd, Inc.97064-678Przygotowanie oczyszczonych ekstraktów polifenolowych
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)Mediatech, Inc.10-014-CVHodowla VSMC
Etanol (absolutna klasa biologii molekularnej)Sigma-Aldrich, Inc.E7023-500MLPreparat ekstraktów polifenolowych 
Octan etyluSigma-Aldrich, Inc.439169Przygotowanie oczyszczonych ekstraktów polifenolowych
ERK1/2Cell Signaling Technology, Inc.9102S Przeciwciałopierwszorzędowe (1:500)
EDTA, 500 mM, pH 8,0Teknova, Inc.E0306Bufor do lizy
LiofilizatorLabconcoVirTis Benchtop KPrzygotowanie ekstraktów polifenolowych
Surowica bydlęca płodu (FBS)Seradigm1400-500Hodowla komórkowa
HEPESSigma-Aldrich, Inc.H3375Bufor do lizy 
NaClEMD Millipore, Inc.7760Bufor do lizy
NaFJ.T.Baker, Inc.3688-01 Bufor do lizy
Na3VO4Sigma-Aldrich, Inc.450243Bufor do lizy
Na4P2O7 , dziesięciowodnySigma-Aldrich, Inc.S-9515Bufor do lizy
fosfo ERK1/2 Technologia sygnalizacji komórkowej, Inc.9101S Przeciwciałopierwotne (1:1000)
Koktajl inhibitorów proteazySigma-Aldrich, Inc.P8340-5mlBufor do lizy
Odczynnik barwnikowy do oznaczania białekBio-Rad Laboratories, Inc.500-0006Pomiar stężenia białka Membrana
transferowa PVDFThermo Scientific, Inc.88518Western blot
Parownik obrotowyBuchi LabortechnikRotavapor
R3000		Przygotowanie ekstraktów polifenolowych
Sterylna wodaMediatech, Inc.25-055-CVPrzygotowanie ekstraktów polifenolowych
SonicatorQSonica, LLCQ125Przygotowanie ekstraktów komórkowych
SOD2Enzo Life Sciences, Inc.ADI-SOD-110-FPrzeciwciało pierwszorzędowe (1:1000)
Triton-X-100Sigma-Aldrich, Inc.X100Western blots
Whatman #2GE Healthcare, Inc.28317-241Otrzymywanie ekstraktów polifenolowych
Bibuła filtracyjna

Bibliografia

  1. Morton, L. W., Abu-Amsha Caccetta, R., Puddey, I. B., Croft, K. D. Chemistry and biological effects of dietary phenolic compounds: relevance to cardiovascular disease. Clin Exp Pharmacol Physiol. 27 (3), 152-159 (2000).
  2. Sekirov, I., Russell, S. L., Antunes, L. C., Finlay, B. B. Gut microbiota in health and disease. Physiol Rev. 90 (3), 859-904 (2010).
  3. Manach, C., Scalbert, A., Morand, C., Remesy, C., Jimenez, L. Polyphenols: food sources and bioavailability. Am J Clin Nutr. 79 (5), 727-747 (2004).
  4. Griffiths, G., Trueman, L., Crowther, T., Thomas, B., Smith, B. Onions--a global benefit to health. Phytother Res. 16 (7), 603-615 (2002).
  5. Mazzoni, L., et al. The genetic aspects of berries: from field to health. J Sci Food Agric. 96 (2), 365-371 (2016).
  6. Wang, S. Y., Jiao, H. Scavenging capacity of berry crops on superoxide radicals, hydrogen peroxide, hydroxyl radicals, and singlet oxygen. J Agric Food Chem. 48 (11), 5677-5684 (2000).
  7. Choi, M. H., Shim, S. M., Kim, G. H. Protective effect of black raspberry seed containing anthocyanins against oxidative damage to DNA, protein, and lipid. J Food Sci Technol. 53 (2), 1214-1221 (2016).
  8. Forbes-Hernandez, T. Y., et al. The Healthy Effects of Strawberry Polyphenols: Which Strategy behind Antioxidant Capacity? Crit Rev Food Sci Nutr. 56, Suppl 1. S46-S59 (2016).
  9. Figueira, M. E., et al. Protective effects of a blueberry extract in acute inflammation and collagen-induced arthritis in the rat. Biomed Pharmacother. 83, 1191-1202 (2016).
  10. Daglia, M. Polyphenols as antimicrobial agents. Curr Opin Biotechnol. 23 (2), 174-181 (2012).
  11. Hügel, H. M., Jackson, N., May, B., Zhang, A. L., Xue, C. C. Polyphenol protection and treatment of hypertension. Phytomedicine. 23 (2), 220-231 (2016).
  12. Niedzwiecki, A., Roomi, M. W., Kalinovsky, T., Rath, M. Anticancer Efficacy of Polyphenols and Their Combinations. Nutrients. 8 (9), E552(2016).
  13. Kresty, L. A., Mallery, S. R., Stoner, G. D. Black raspberries in cancer clinical trials: Past, present and future. J Berry Res. 6 (2), 251-261 (2016).
  14. Hertog, M. G., et al. Flavonoid intake and long-term risk of coronary heart disease and cancer in the seven countries study. Arch Intern Med. 155 (4), 381-386 (1995).
  15. Peterson, J. J., Dwyer, J. T., Jacques, P. F., McCullough, M. L. Associations between flavonoids and cardiovascular disease incidence or mortality in European and US populations. Nutr Rev. 70 (9), 491-508 (2012).
  16. Cassidy, A., et al. High anthocyanin intake is associated with a reduced risk of myocardial infarction in young and middle-aged women. Circulation. 127 (2), 188-196 (2013).
  17. Jacques, P. F., Cassidy, A., Rogers, G., Peterson, J. J., Dwyer, J. T. Dietary flavonoid intakes and CVD incidence in the Framingham Offspring Cohort. Br J Nutr. 114 (9), 1496-1503 (2015).
  18. Aghababaee, S. K., et al. Effects of blackberry (Morus nigra L.) consumption on serum concentration of lipoproteins, apo A-I, apo B, and high-sensitivity-C-reactive protein and blood pressure in dyslipidemic patients. J Res Med Sci. 20 (7), 684-691 (2015).
  19. Jeong, H. S., et al. Effects of Rubus occidentalis extract on blood pressure in patients with prehypertension: Randomized, double-blinded, placebo-controlled clinical trial. Nutrition. 32 (4), 461-467 (2016).
  20. Jia, H., et al. The antihypertensive effect of ethyl acetate extract from red raspberry fruit in hypertensive rats. Pharmacogn Mag. 7 (25), 19-24 (2011).
  21. Feresin, R. G., et al. Blackberry, raspberry and black raspberry polyphenol extracts attenuate angiotensin II-induced senescence in vascular smooth muscle cells. Food Funct. 7 (10), 4175-4187 (2016).
  22. Pergola, C., Rossi, A., Dugo, P., Cuzzocrea, S., Sautebin, L. Inhibition of nitric oxide biosynthesis by anthocyanin fraction of blackberry extract. Nitric Oxide. 15 (1), 30-39 (2006).
  23. Lu, H., Li, J., Zhang, D., Stoner, G. D., Huang, C. Molecular mechanisms involved in chemoprevention of black raspberry extracts: from transcription factors to their target genes. Nutr Cancer. 54 (1), 69-78 (2006).
  24. Kim, S., et al. Aqueous extract of unripe Rubus coreanus fruit attenuates atherosclerosis by improving blood lipid profile and inhibiting NF-κB activation via phase II gene expression. J Ethnopharmacol. 146 (2), 515-524 (2013).
  25. Wang, J., Mazza, G. Effects of anthocyanins and other phenolic compounds on the production of tumor necrosis factor alpha in LPS/IFN-gamma-activated RAW 264.7 macrophages. J Agric Food Chem. 50 (15), 4183-4189 (2002).
  26. Pascual-Teresa, S., Moreno, D. A., Garcia-Viguera, C. Flavanols and anthocyanins in cardiovascular health: a review of current evidence. Int J Mol Sci. 11 (4), 1679-1703 (2010).
  27. Kim, D. O., Lee, C. Y. Extraction and Isolation of Polyphenolics. Curr Protoc Food Analyt Chem. 1, John Wiley & Sons. New York. 2.1-2.12 (2002).
  28. Queires, L. C., et al. Polyphenols purified from the Brazilian aroeira plant (Schinus terebinthifolius, Raddi) induce apoptotic and autophagic cell death of DU145 cells. Anticancer Res. 26 (1A), 379-387 (2006).
  29. Griendling, K. K., Taubman, M. B., Akers, M., Mendlowitz, M., Alexander, R. W. Characterization of phosphatidylinositol-specific phospholipase C from cultured vascular smooth muscle cells. J Biol Chem. 266 (23), 15498-15504 (1991).
  30. Vuong, T., et al. Role of a polyphenol-enriched preparation on chemoprevention of mammary carcinoma through cancer stem cells and inflammatory pathways modulation. J Transl Med. 14, (2016).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Ekstrakcja polifenoliOczyszczanie polifenoliEkstrakcja ultrad wi kowaEkstrakcja etanolemFrakcjonowanie chloroformemFrakcjonowanie octanem etyluWestern blotFosforylacja ERK
Ekstrakcja i oczyszczanie polifenoli z liofilizowanego proszku jagodowego do leczenia komórek mięśni gładkich naczyń krwionośnych in vitro
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki Korzystania

Zasady

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.