Przedstawiono protokół tworzenia genetycznie modyfikowanego mysiego modelu raka jelita grubego poprzez segmentowe zakażenie adeno-cre i jego nadzorowanie za pomocą kolonoskopii o wysokiej rozdzielczości.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Genetycznie zmodyfikowany mysi model sporadycznego raka jelita grubego
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Pomimo zalet łatwej aplikacji i opłacalności, mysie modele raka jelita grubego oparte na wstrzykiwaniu komórek nowotworowych mają poważne ograniczenia i nie symulują dokładnie biologii guza i rozprzestrzeniania się komórek nowotworowych. Aby przezwyciężyć te ograniczenia, wprowadzono genetycznie zmodyfikowane modele myszy; Jednak takie modele są wymagające technicznie, szczególnie w dużych narządach, takich jak okrężnica, w których pożądany jest tylko pojedynczy guz.
W rezultacie opracowano immunokompetentny, genetycznie modyfikowany mysi model raka jelita grubego, który rozwija bardzo jednolite guzy i może być wykorzystany do badań biologicznych nowotworów, jak również do prób terapeutycznych. Rozwój guza jest inicjowany przez chirurgiczne, segmentowe zakażenie dystalnej części jelita grubego wirusem adeno-cre u myszy warunkowo zmutowanych złożonych. Guzy można łatwo wykryć i monitorować za pomocą kolonoskopii. Opisujemy tutaj technikę chirurgiczną segmentowego zakażenia adeno-cre jelita grubego, nadzór nad guzem za pomocą kolonoskopii o wysokiej rozdzielczości i przedstawiamy powstałe guzy jelita grubego.
Wprowadzenie
Rak jelita grubego (CRC) nadal jest jedną z głównych przyczyn zgonów związanych z rakiem w krajach zachodnich. 1 Podczas gdy rokowanie pacjentów z wczesnym stadium choroby jest dobre, wiele nowotworów jest diagnozowanych w późniejszych stadiach, w których, pomimo licznych opcji leczenia, rokowanie jest ograniczone. 2,3,4,5
Większość obecnych mysich modeli CRC opiera się na implantacji komórek nowotworowych pochodzących z linii komórkowych lub guzów pacjenta myszom z niedoborem odporności. 6,7,8 Prowadzi to do miejscowych i, w zależności od miejsca wstrzyknięcia i komórek nowotworowych użytych do wstrzyknięcia, czasami do guzów przerzutowych. 9,10 Powstałe modele ksenoprzeszczepów mają jednak poważne ograniczenia. Muszą one zostać ustalone u myszy z niedoborem odporności, eliminując w ten sposób złożoną interakcję między guzem a układem odpornościowym gospodarza. Ponadto, ponieważ zrąb guza pochodzi z komórek gospodarza, interakcja między ludzkim miąższem guza a mysim zrębem jest wadliwa, a zatem nie jest reprezentatywna dla choroby. Niedoborów tych można uniknąć, stosując mysie linie komórkowe do wstrzykiwań. Jednak dostępnych jest tylko kilka mysich linii komórkowych CRC i, podobnie jak większość dostępnych ludzkich linii komórkowych CRC, są monoklonalne i wysoce anaplastyczne. 11 Podsumowując, większość obecnie dostępnych modeli myszy CRC jest wysoce sztuczna i nie w pełni reprezentatywna dla ludzkiej choroby.
Genetycznie modyfikowane modele myszy (GEMM) CRC mogą uniknąć tych wad, ponieważ zawierają prawdziwe guzy myszy, które powstają poprzez indukcję kluczowych mutacji CRC w okrężnicy. 12,13,14 Można to osiągnąć poprzez aktywację warunkowych (floxowanych) mutacji linii zarodkowej przez rekombinazę cre w błonie śluzowej jelita grubego. Podczas gdy w GEMM wielu innych jednostek nowotworowych stosuje się ekspresję cre linii zarodkowej (indukowalną) napędzaną przez promotory specyficzne dla tkanki, cre linii zarodkowej nie można stosować w okrężnicy, ponieważ prowadzi to do dużej liczby gruczolaków w całej okrężnicy, powodując śmierć z powodu łagodnego obciążenia guzem w bardzo młodym wieku. Dlatego w opisywanym tu modelu wektor adenowirusowy eksprymujący cre jest używany do zakażenia krótkiego odcinka jelita grubego. Prowadzi to do indukcji nowotworzenia w tym segmencie błony śluzowej w punkcie czasowym określonym przez badacza, co prowadzi do progresji gruczolaków do raka inwazyjnego i przerzutowego. Guzy są prawdziwymi nowotworami myszy, rosną w nienaruszonym mikrośrodowisku i dlatego są w stanie symulować całość onkogenezy jelita grubego, w tym interakcję guz-gospodarz i kaskadę przerzutów. Model ten jest zatem atrakcyjną platformą do badań nad biologią nowotworów i przedklinicznych badań terapeutycznych.
Główną wadą genetycznie modyfikowanych mysich modeli CRC jest ich techniczna złożoność. Miejscowe podawanie cre za pomocą lewatywy adeno-cre doodbytniczej u myszy przenoszących floksowane allele Apc zostało opisane wcześniej; Jednak częstość występowania, mnogość i lokalizacja guzów jelitowych może być bardzo zmienna w przypadku tej techniki. 15 Dlatego opracowano technikę ograniczania infekcji adeno-cre poprzez chirurgiczne zaciskanie segmentu, który ma być indukowany. 13 Zmodyfikowaliśmy tę procedurę, aby poprawić dobrostan zwierząt, a także zmniejszyć śmiertelność i liczbę powstających nowotworów. Dzięki temu protokołowi wszystkie laboratoria z doświadczeniem w chirurgii małych gryzoni powinny być w stanie odtworzyć model i wytworzyć guzy, które są wysoce powtarzalne i łatwo dostępne do kolonoskopii. W zależności od mutacji warunkowych stosowanych do nowotworzenia można zaobserwować pełne spektrum gruczolaka, raka inwazyjnego i przerzutów. Ponieważ guzy znajdują się w dalszej części jelita grubego, w tym modelu łatwo możliwa jest seryjna ocena endoskopowa.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Przedstawione tutaj eksperymenty na zwierzętach zostały niezależnie ocenione i zatwierdzone przez instytucjonalny i rządowy Komitet ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt i zostały przeprowadzone zgodnie z wytycznymi Federacji Stowarzyszeń Badań nad Zwierzętami Laboratoryjnymi (FELASA). Podjęto wszelkie możliwe środki, aby zminimalizować cierpienie, w tym znieczulenie i analgezję lub, jeśli to konieczne, przedwczesną eutanazję.
1. Miejscowa indukcja guza poprzez chirurgiczne zakażenie adeno-cre
- Przygotowanie zwierząt do zabiegu chirurgicznego
UWAGA: Praktycznie każda mutacja warunkowa ("floksowana") może być wywołana za pomocą opisanej tutaj metody. Zaleca się stosowanie mutacji w genach istotnych dla raka jelita grubego, takich jak Apc, Kras lub Tp53. Skuteczność rekombinacji cre zależy od wielkości konstruktu, który ma zostać wycięty. Duże sekwencje floxowane są wycinane mniej wydajnie. Rekombinacja wszystkich alleli powinna zostać potwierdzona w nowotworach metodą PCR.- Do rozwoju nowotworów jelita grubego należy użyć krzyżówki następujących alleli warunkowych dla podstawowego modelu CRC (numer bazy danych MGI w nawiasach):
Apctm2Rak (MGI: 3688435)16
Krastm4Tyj (MGI: 2429948)17
Tp53tm2Tyj (MGI: 3039263)18 - Jeśli wymagany jest allel reporterowy fluorescencji (np. do wykrywania mikroprzerzutów), należy użyć następującego allelu:
Gt(ROSA)26Sortm6(CAG-ZsGreen1)Hze (MGI: 3809522)19
UWAGA: Wszystkie powyższe szczepy są dostępne za pośrednictwem NCI Mouse Repository lub Jackson Laboratory. Nie jest wymagany post, ponieważ cały pozostały kał może zostać wypłukany przed infekcją adenowirusową. Post przedoperacyjny prowadzi do wyższej śmiertelności okołooperacyjnej i stanowi ogromny stres dla małych gryzoni. - Stosować sewofluran w stężeniu 3 - 3,5% obj. do znieczulenia ogólnego. Utrata odruchu szczypania palca u nogi wskazuje na wystarczające znieczulenie.
- Przed pierwszym nacięciem należy wstrzyknąć podskórnie 0,05 mg/kg buprenorfiny.
- Zakryj oczy znieczulonej myszy maścią okulistyczną, aby uniknąć wysuszenia rogówki.
- Umieść mysz w pozycji leżącej na małym stole. Użyj nieurazowych taśm samoprzylepnych, aby unieruchomić mysz.
- Ogol brzuch golarką elektryczną (alternatywnie można użyć kremu do depilacji) i zdezynfekuj wacikami nasączonymi alkoholem lub jodem. Stosować czas kontaktu zalecany przez producenta.
- Przykryj pole operacyjne sterylnymi serwetami.
UWAGA: Stosowanie antybiotyków okołooperacyjnych jest opcjonalne i podlega wytycznym instytucjonalnym. - Do wszystkich zabiegów chirurgicznych używaj sterylnych narzędzi jednorazowego użytku lub wysterylizowanych.
- Do rozwoju nowotworów jelita grubego należy użyć krzyżówki następujących alleli warunkowych dla podstawowego modelu CRC (numer bazy danych MGI w nawiasach):
- Laparotomia w linii środkowej i odsłonięcie jelita grubego
- Za pomocą nożyczek (alternatywnie można użyć skalpeli), aby wykonać nacięcie w linii środkowej (~ 15 mm) skóry na dolnej części brzucha.
- Podnieś muskulaturę ściany brzucha kleszczami i ostrożnie naciąć ją nożyczkami, otwierając w ten sposób jamę brzuszną.
- Zidentyfikuj dystalną okrężnicę, dotykaj jej tylko atraumatycznymi kleszczami. Zacisnąć okrężnicę delikatnym zaciskiem (np. zaciskiem naczyniowym Micro Serrefine) około 15 mm proksymalnie od odbytu.
UWAGA: Przez cały czas zwracaj szczególną uwagę na wrażliwość jelita grubego. Perforacja nieuchronnie prowadzi do zapalenia otrzewnej i sepsy oraz wymaga eutanazji zwierzęcia.
- Segmentowe zakażenie jelita grubego wirusem Adeno-cre
- Włóż elastyczną rurkę teflonową przezodbytniczo i ostrożnie przesuwaj ją, aż osiągnie okluzję światła uzyskaną przez zacisk umieszczony wcześniej w odległości 15 mm od krawędzi odbytu. Nie używaj nadmiernej siły, ponieważ może to prowadzić do perforacji.
- Kankanulować probówkę kaniulą 30G, podłączyć standardową strzykawkę o pojemności 1 ml i przepłukać okrężnicę zwykłą solą fizjologiczną w celu usunięcia pozostałego kału. Może to wymagać kilku ml soli fizjologicznej.
- Gdy dystalna okrężnica jest pusta, wyjmij rurkę i zastąp ją świeżą rurką teflonową i ponownie ustaw ją bezpośrednio dystalnie do zacisku, jak opisano powyżej.
- Okrężnica należy zatkać drugim zaciskiem ~ 3 mm dystalnie do zacisku proksymalnego (tj. nad wprowadzoną rurką, ~ 12 mm od krawędzi odbytu), co skutkuje izolowanym segmentem o grubości 3 mm, który ma zostać zainfekowany.
UWAGA: Do dystalnej niedrożności segmentu klipsy do tętnic wieńcowych Fogarty okazały się najbardziej odpowiednie, ponieważ są gumowane, co prowadzi do ciasnej niedrożności okrężnicy pomimo rurki śródświetlnej między gałęziami zacisku. - Użyj drugiej strzykawki (standardowo 1 ml z kaniulą 30G), aby ostrożnie wstrzyknąć 50 - 80 μl 0,25% trypsyny-EDTA do zaciśniętego segmentu okrężnicy i inkubować przez 10 minut. Pozostaw kaniulę i strzykawkę podłączone do rurki teflonowej, aby zapobiec cofaniu się płynu.
UWAGA: Okrężnica musi być napompowana, aby rozbić barierę śluzówkową i dotrzeć do krypt komórek macierzystych, ale nie za bardzo, aby uniknąć perforacji zaciśniętego segmentu. - Najpierw usuń dystalny zacisk, a następnie rurkę trypsyny.
- Przepłucz dystalną część jelita grubego ~ 500 μl soli fizjologicznej, aby usunąć pozostałą trypsynę.
- Włóż nową rurkę teflonową, umieść dystalny zacisk z powrotem na miejscu i napompuj segment okrężnicy 50 - 80 μl roztworu adenowirusowego (1011 jednostek tworzących blaszki (PFU)/ml w roztworze soli fizjologicznej buforowanej fosforanami) i inkubuj przez 30 minut (Rysunek 2A).
UWAGA: Nie rozlewaj roztworu wirusa, ponieważ kontakt z adeno-cre może prowadzić do rozwoju guza w jakiejkolwiek tkance warunkowo zmutowanych myszy. - Usuń zaciski i rurkę.
- Zamknięcie brzucha i rekonwalescencja pooperacyjna
- Zamknij ścianę brzuszną za pomocą 6-0 szybko wchłanialnych szwów biegowych (np. polidioksanon (PDS)).
- Zamknij skórę klipsami chirurgicznymi do ran.
- Umieść mysz na poduszce grzewczej ustawionej na 38 °C, aż całkowicie wyzdrowieje ze znieczulenia.
- Podać kolejny bolus 0,05 mg/kg buprenorfiny domięśnie 12 godzin po zabiegu, a następnie dodatkowe bolusy buprenorfiny co 12 godzin, jeśli to konieczne.
- Monitoruj myszy co najmniej raz dziennie pod kątem oznak niepokoju spowodowanego wzrostem guza.
2. Kolonoskopia
UWAGA: W zależności od zastosowanych mutacji warunkowych, infekcja adenowirusowa prowadzi do endoskopowo widocznych guzów w ciągu 2 - 4 tygodni. Dlatego pierwszą kolonoskopię pooperacyjną należy wykonać 2 tygodnie po indukcji adenowirusa i powtarzać co 2 tygodnie. Do kolonoskopii mysiej zalecany jest dostępny na rynku system. 20
- Przygotowanie zwierząt do kolonoskopii
UWAGA: Post nie jest wymagany. Pozostały kał jest zwykle dobrze uformowany w dystalnej części okrężnicy i może zostać wypchnięty poza guz podczas kolonoskopii, dzięki czemu stresujący proces powtarzającego się postu nie jest potrzebny.- Stosować sewofluran w stężeniu 3 - 3,5% obj. do znieczulenia ogólnego. Utrata odruchu szczypania palca u nogi wskazuje na wystarczające znieczulenie.
- Zakryj oczy znieczulonych myszy maścią okulistyczną, aby uniknąć wysuszenia rogówki.
- Unieruchamiaj myszy w pozycji leżącej na małym stole.
- Kolonoskopia
- Włóż lunetę (średnica 1,9 mm; długość 10 cm) do przewodu pokarmowego przez odbyt i ostrożnie wdmuchuj powietrze pod kontrolą wzrokową, aby rozciągnąć okrężnicę. Nie wdmuchiwać więcej powietrza niż jest to wymagane do badania.
UWAGA: Do wdmuchiwania powietrza można użyć pompy powietrza przeciwmgielnego systemu kolonoskopowego. Jeśli nie jest dostępna pompa powietrza przeciwmgielnego, można użyć dowolnej innej pompy powietrza z bardzo niskimi ustawieniami ciśnienia lub powietrza pod ciśnieniem z delikatnym zaworem redukcyjnym ciśnienia. Dwutlenek węgla (CO2 ) łatwo prowadzi do kwasicy u małych gryzoni i dlatego należy go unikać. - Ostrożnie popchnij lunetę do przodu, aż będzie można zidentyfikować zmianę śluzówkową w dalszej części jelita grubego (Rysunek 1A - 1D).
- Zapisz obrazy endoskopowe do późniejszej oceny. Endoskopowy system punktacji guzów śródświetlnych został opisany wcześniej. 20
- Ostrożnie zdejmij lunetę i umieść mysz na poduszce grzewczej ustawionej na 38 °C, aż całkowicie wyzdrowieje ze znieczulenia.
- Włóż lunetę (średnica 1,9 mm; długość 10 cm) do przewodu pokarmowego przez odbyt i ostrożnie wdmuchuj powietrze pod kontrolą wzrokową, aby rozciągnąć okrężnicę. Nie wdmuchiwać więcej powietrza niż jest to wymagane do badania.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Przy prawidłowym wykonaniu procedury guzy rozwijają się u > 85% zwierząt. Śmiertelność przy prezentowanym tutaj zabiegu chirurgicznym wynosi < 5%, natomiast śmiertelność podczas kolonoskopii jest praktycznie nieobecna. U większości myszy wykrywana jest pojedyncza zmiana; w około 30% przypadków można stwierdzić 2 – 3 małe gruczolaki, które zazwyczaj zlewają się w jeden guz w ciągu 2 – 3 tygodni po indukcji nowotworu.
Fenoty...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Chociaż są one na ogół łatwe do wygenerowania i utrzymania, klasyczne mysie modele CRC oparte na wstrzyknięciu linii komórkowej są sztuczne i nie są w stanie w pełni odtworzyć ludzkiej choroby. W związku z tym opracowano GEMM-y. Pierwszą CRC GEMM była mysz ApcMin, która jest nosicielem heterozygotycznej mutacji zerowej w genie Apc, naśladując w ten sposób ludzką dziedziczną polipowatość gruczolakowatą (FAP). 21 Jednak myszy ApcMin niezmiennie rozwijają mnogie gruczolaki jelit...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Podziękowania
Ta praca jest poświęcona pamięci profesora Moritza Kocha.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Odczynniki / materiały eksploatacyjne | |||
| Dulbecco's Phosphate Buffered Saline | Life Technologies GmbH | 14190169 | |
| Trypsin-EDTA (0,25%, czerwień fenolowa) | Life Technologies GmbH | 25200072 | |
| Sól fizjologiczna 0,9% (E154) | Serumwerk Bernburg AG | 10013 | |
| Aqua ad injectabilia | B. Braun Melsungen AG | 235144 | |
| Ad5CMV-Cre (adenowirus, c = 2E+11 PFU/mL) | Wektor transferu genów Core University of Iowa | ||
| 15 mL, 50 mL probówki wirówkowe | Greiner Bio-One GmbH | 188271/227270 | |
| Probówki Eppendorf 1,5 ml/ 2 ml | Sarstedt AG & Co. | 72,695,400 | |
| Szalka Petriego PS 100/15 mm (sterylna, Nuclon) | Fisher Scientific GmbH | 10508921/ NUNC150350 | |
| Strzykawka 1 ml (bez objętości martwej) - Injekt-F SOLO Igła | Braun/neoLab | 194291661 | |
| 30G | BECTON DICKINSON | 304000 | |
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy< | strong>Uwagi |
| Analgezja / znieczulenie | |||
| Sevoflurane (Sevoflurane AbbVie) | AbbVie Germany GmbH & Co. KG-Tlen | ||
| medyczny Air Liquide Medical | |||
| (Temgesic) | Indivior Eu Ltd. | - | |
| Bepanthen - maść okulistyczna | Bayer Vital GmbH | 10047757 | |
| Stołowy aparat do znieczulenia badawczego x/O2 Flush w/ Sevoflurane Vaporizer | Parkland Scientific | V3000PS/PK | |
| strong>Nazwa | Company | Numer katalogowy | Komentarze |
| Waciki Surgical Equipment | |||
| Celuloza | Lohmann & Rauscher Deutschland | 13356 | |
| Strzykawka insulinowa EMG 1 ml (z kaniulą 30G) | B. Braun Melsungen AG | 9161627S | |
| Rurka drobnootworowa (otwór: 0,28 mm / średnica: 0,61 mm) | Smiths Medical Deutschland | 800/100/100 | |
| Kleszczyki Micro-Adson | Fine Science Tools | 11018-12 | |
| Nożyczki do tęczówki - ToughCut | Fine Science Tools | 14058-11 | |
| Uchwyt igły Olsen-Hegar | Fine Science Tools | 12002-12 | |
| Zestaw AutoClip | Fine Science Tools | 12020-00 | |
| PDS Z1012H 6/0 C1 (szew chirurgiczny) | Johnson & Johnson Medical GmbH | Z1012H | |
| Zakrzywiony zacisk naczyniowy Micro Serrefine | Fine Science Tools | 18055-05 | |
| Fogarty Spring Clips | Edwards | CDSAFE 6 | |
| Płyta grzejna 062 | Labotect | 13854 | |
| Isis - Golarka do włosów | Aesculap - Braun | - | |
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Uwagi |
| Kolonoskopia | |||
| Fontanna światła zimnego XENON 175 SCB | Karl Storz | 20132101-1 | Karl Storz Coloview System Moguncja |
| światłowodowy | Karl Storz | 69495NL | Karl Storz Coloview System Moguncja |
| TRICAM Głowica kamery z trzema | chipami Karl Storz | 20221030 | Karl Storz Coloview System Moguncja |
| TRICAM SLII Jednostka sterująca kamerą | Karl Storz | 20223011-1 | Karl Storz Coloview System Moguncja |
| 15-calowy monitor z płaskim ekranem EndoVue | Karl Storz | 9415NN | Karl Storz Coloview System Moguncja |
| HOPKINS Teleskop prosty średnica 1,9 mm; długość 10 cm autoklawowalny w autoklawie wbudowana światłowodowa transmisja światła | Karl Storz | 64301AA | |
| Osłona ochronno-badawcza | Karl Storz | 61029C |
Bibliografia
- Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics, 2016. CA Cancer J Clin. 66 (1), 7-30 (2016).
- Weitz, J., et al. Colorectal cancer. Lancet. 365 (9454), 153-165 (2005).
- Bork, U., et al. Prognostic relevance of minimal residual disease in colorectal cancer. World J Gastroenterol. 20 (30), 10296-10304 (2014).
- Steinert, G., Schölch, S., Koch, M., Weitz, J. Biology and significance of circulating and disseminated tumour cells in colorectal cancer. Langenbecks Arch Surg. 397 (4), 535-542 (2012).
- García, S. A., et al. LDB1 overexpression is a negative prognostic factor in colorectal cancer. Oncotarget. 7 (51), 84258-84270 (2016).
- van Noort, V., et al. Novel Drug Candidates for the Treatment of Metastatic Colorectal Cancer through Global Inverse Gene-Expression Profiling. Cancer Res. 74 (20), 5690-5699 (2014).
- Nanduri, L. K., García, S., Weitz, J., Schölch, S. Mouse Models of Colorectal Cancer-Derived Circulating Tumor Cells. Med Chem (Los Angeles). 6 (7), 497-499 (2016).
- Taketo, M. M., Edelmann, W. Mouse models of colon cancer. Gastroenterology. 136 (3), 780-798 (2009).
- Schölch, S., et al. Circulating tumor cells exhibit stem cell characteristics in an orthotopic mouse model of colorectal cancer. Oncotarget. 7 (19), 27232-27242 (2016).
- Schölch, S., et al. Radiotherapy combined with TLR7/8 activation induces strong immune responses against gastrointestinal tumors. Oncotarget. 6 (7), 4663-4676 (2015).
- Corbett, T. H., Griswold, D. P., Roberts, B. J., Peckham, J. C., Schabel, F. M. Jr Tumor induction relationships in development of transplantable cancers of the colon in mice for chemotherapy assays, with a note on carcinogen structure. Cancer Res. 35 (9), 2434-2439 (1975).
- Roper, J., Hung, K. E. Priceless GEMMs: genetically engineered mouse models for colorectal cancer drug development. Trends Pharmacol Sci. 33 (8), 449-455 (2012).
- Hung, K. E., et al. Development of a mouse model for sporadic and metastatic colon tumors and its use in assessing drug treatment. Proc Natl Acad Sci USA. 107 (4), 1565-1570 (2010).
- Sharpless, N. E., Depinho, R. A. The mighty mouse: genetically engineered mouse models in cancer drug development. Nat Rev Drug Discov. 5 (9), 741-754 (2006).
- Shibata, H., et al. Rapid colorectal adenoma formation initiated by conditional targeting of the Apc gene. Science. 278 (5335), 120-123 (1997).
- Kuraguchi, M., et al. Adenomatous polyposis coli (APC) is required for normal development of skin and thymus. PLoS Genet. 2 (9), e146(2006).
- Jackson, E. L., et al. Analysis of lung tumor initiation and progression using conditional expression of oncogenic K-ras. Genes Dev. 15 (24), 3243-3248 (2001).
- Olive, K. P., et al. Mutant p53 gain of function in two mouse models of Li-Fraumeni syndrome. Cell. 119 (6), 847-860 (2004).
- Madisen, L., et al. A robust and high-throughput Cre reporting and characterization system for the whole mouse brain. Nature Neurosci. 13 (1), 133-140 (2010).
- Becker, C., Fantini, M. C., Neurath, M. F. High resolution colonoscopy in live mice. Nat Protoc. 1 (6), 2900-2904 (2006).
- Moser, A. R., Pitot, H. C., Dove, W. F. A dominant mutation that predisposes to multiple intestinal neoplasia in the mouse. Science. 247 (4940), 322-324 (1990).
- de Wind, N., Dekker, M., Berns, A., Radman, M., te Riele, H. Inactivation of the mouse Msh2 gene results in mismatch repair deficiency, methylation tolerance, hyperrecombination, and predisposition to cancer. Cell. 82 (2), 321-330 (1995).
- Reitmair, A. H., et al. Spontaneous intestinal carcinomas and skin neoplasms in Msh2-deficient mice. Cancer Res. 56 (16), 3842-3849 (1996).
- Ayala, J. E., et al. Standard operating procedures for describing and performing metabolic tests of glucose homeostasis in mice. Dis Model Mech. 3 (9-10), 525-534 (2010).
- Jensen, T. L., Kiersgaard, M. K., Sørensen, D. B., Mikkelsen, L. F. Fasting of mice: a review. Lab Anim. 47 (4), 225-240 (2013).
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
Tagi
mysi model raka jelita grubegoiniekcja wirusa Adeno-Cresegmentowa infekcja okrężnicykolonoskopia o wysokiej rozdzielczościtechnika nadzoru nad nowotworamimyszy modyfikowane genetyczniechirurgiczna procedura okrężnicyśrodki bezpieczeństwa biologicznego dla adenowirusówfluorescencyjny allel reporterowy Creguzy dystalnego odcinka okrężnicy
