Przedstawiono protokół tworzenia genetycznie modyfikowanego mysiego modelu raka jelita grubego poprzez segmentowe zakażenie adeno-cre i jego nadzorowanie za pomocą kolonoskopii o wysokiej rozdzielczości.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Genetycznie zmodyfikowany mysi model sporadycznego raka jelita grubego
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Pomimo zalet łatwej aplikacji i opłacalności, mysie modele raka jelita grubego oparte na wstrzykiwaniu komórek nowotworowych mają poważne ograniczenia i nie symulują dokładnie biologii guza i rozprzestrzeniania się komórek nowotworowych. Aby przezwyciężyć te ograniczenia, wprowadzono genetycznie zmodyfikowane modele myszy; Jednak takie modele są wymagające technicznie, szczególnie w dużych narządach, takich jak okrężnica, w których pożądany jest tylko pojedynczy guz.
W rezultacie opracowano immunokompetentny, genetycznie modyfikowany mysi model raka jelita grubego, który rozwija bardzo jednolite guzy i może być wykorzystany do badań biologicznych nowotworów, jak również do prób terapeutycznych. Rozwój guza jest inicjowany przez chirurgiczne, segmentowe zakażenie dystalnej części jelita grubego wirusem adeno-cre u myszy warunkowo zmutowanych złożonych. Guzy można łatwo wykryć i monitorować za pomocą kolonoskopii. Opisujemy tutaj technikę chirurgiczną segmentowego zakażenia adeno-cre jelita grubego, nadzór nad guzem za pomocą kolonoskopii o wysokiej rozdzielczości i przedstawiamy powstałe guzy jelita grubego.
Wprowadzenie
Rak jelita grubego (CRC) nadal jest jedną z głównych przyczyn zgonów związanych z rakiem w krajach zachodnich. 1 Podczas gdy rokowanie pacjentów z wczesnym stadium choroby jest dobre, wiele nowotworów jest diagnozowanych w późniejszych stadiach, w których, pomimo licznych opcji leczenia, rokowanie jest ograniczone. 2,3,4,5
Większość obecnych mysich modeli CRC opiera się na implantacji komórek nowotworowych pochodzących z linii komórkowych lub guzów pacjenta myszom z niedoborem odporności. <....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Przedstawione tutaj eksperymenty na zwierzętach zostały niezależnie ocenione i zatwierdzone przez instytucjonalny i rządowy Komitet ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt i zostały przeprowadzone zgodnie z wytycznymi Federacji Stowarzyszeń Badań nad Zwierzętami Laboratoryjnymi (FELASA). Podjęto wszelkie możliwe środki, aby zminimalizować cierpienie, w tym znieczulenie i analgezję lub, jeśli to konieczne, przedwczesną eutanazję.
1. Miejscowa indukcja guza poprzez chirurgiczne zakażenie adeno-cre
- Przygotowanie zwierząt do zabiegu chirurgicznego
UWAGA: Praktycznie każda mutacja warunkowa ("floksowana") m....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Przy prawidłowym wykonaniu procedury guzy rozwijają się u > 85% zwierząt. Śmiertelność przy prezentowanym tutaj zabiegu chirurgicznym wynosi < 5%, natomiast śmiertelność podczas kolonoskopii jest praktycznie nieobecna. U większości myszy wykrywana jest pojedyncza zmiana; w około 30% przypadków można stwierdzić 2 – 3 małe gruczolaki, które zazwyczaj zlewają się w jeden guz w ciągu 2 – 3 tygodni po indukcji nowotworu.
Fenoty.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Chociaż są one na ogół łatwe do wygenerowania i utrzymania, klasyczne mysie modele CRC oparte na wstrzyknięciu linii komórkowej są sztuczne i nie są w stanie w pełni odtworzyć ludzkiej choroby. W związku z tym opracowano GEMM-y. Pierwszą CRC GEMM była mysz ApcMin, która jest nosicielem heterozygotycznej mutacji zerowej w genie Apc, naśladując w ten sposób ludzką dziedziczną polipowatość gruczolakowatą (FAP). 21 Jednak myszy ApcMin niezmiennie rozwijają mnogie gruczolaki jelit.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Podziękowania
Ta praca jest poświęcona pamięci profesora Moritza Kocha.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Odczynniki / materiały eksploatacyjne | |||
| Dulbecco's Phosphate Buffered Saline | Life Technologies GmbH | 14190169 | |
| Trypsin-EDTA (0,25%, czerwień fenolowa) | Life Technologies GmbH | 25200072 | |
| Sól fizjologiczna 0,9% (E154) | Serumwerk Bernburg AG | 10013 | |
| Aqua ad injectabilia | B. Braun Melsungen AG | 235144 | |
| Ad5CMV-Cre (adenowirus, c = 2E+11 PFU/mL) | Wektor transferu genów Core University of Iowa | ||
| 15 mL, 50 mL probówki wirówkowe | Greiner Bio-One GmbH | 188271/227270 | |
| Probówki Eppendorf 1,5 ml/ 2 ml | Sarstedt AG & Co. | 72,695,400 | |
| Szalka Petriego PS 100/15 mm (sterylna, Nuclon) | Fisher Scientific GmbH | 10508921/ NUNC150350 | |
| Strzykawka 1 ml (bez objętości martwej) - Injekt-F SOLO Igła | Braun/neoLab | 194291661 | |
| 30G | BECTON DICKINSON | 304000 | |
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy< | strong>Uwagi |
| Analgezja / znieczulenie | |||
| Sevoflurane (Sevoflurane AbbVie) | AbbVie Germany GmbH & Co. KG-Tlen | ||
| medyczny Air Liquide Medical | |||
| (Temgesic) | Indivior Eu Ltd. | - | |
| Bepanthen - maść okulistyczna | Bayer Vital GmbH | 10047757 | |
| Stołowy aparat do znieczulenia badawczego x/O2 Flush w/ Sevoflurane Vaporizer | Parkland Scientific | V3000PS/PK | |
| strong>Nazwa | Company | Numer katalogowy | Komentarze |
| Waciki Surgical Equipment | |||
| Celuloza | Lohmann & Rauscher Deutschland | 13356 | |
| Strzykawka insulinowa EMG 1 ml (z kaniulą 30G) | B. Braun Melsungen AG | 9161627S | |
| Rurka drobnootworowa (otwór: 0,28 mm / średnica: 0,61 mm) | Smiths Medical Deutschland | 800/100/100 | |
| Kleszczyki Micro-Adson | Fine Science Tools | 11018-12 | |
| Nożyczki do tęczówki - ToughCut | Fine Science Tools | 14058-11 | |
| Uchwyt igły Olsen-Hegar | Fine Science Tools | 12002-12 | |
| Zestaw AutoClip | Fine Science Tools | 12020-00 | |
| PDS Z1012H 6/0 C1 (szew chirurgiczny) | Johnson & Johnson Medical GmbH | Z1012H | |
| Zakrzywiony zacisk naczyniowy Micro Serrefine | Fine Science Tools | 18055-05 | |
| Fogarty Spring Clips | Edwards | CDSAFE 6 | |
| Płyta grzejna 062 | Labotect | 13854 | |
| Isis - Golarka do włosów | Aesculap - Braun | - | |
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Uwagi |
| Kolonoskopia | |||
| Fontanna światła zimnego XENON 175 SCB | Karl Storz | 20132101-1 | Karl Storz Coloview System Moguncja |
| światłowodowy | Karl Storz | 69495NL | Karl Storz Coloview System Moguncja |
| TRICAM Głowica kamery z trzema | chipami Karl Storz | 20221030 | Karl Storz Coloview System Moguncja |
| TRICAM SLII Jednostka sterująca kamerą | Karl Storz | 20223011-1 | Karl Storz Coloview System Moguncja |
| 15-calowy monitor z płaskim ekranem EndoVue | Karl Storz | 9415NN | Karl Storz Coloview System Moguncja |
| HOPKINS Teleskop prosty średnica 1,9 mm; długość 10 cm autoklawowalny w autoklawie wbudowana światłowodowa transmisja światła | Karl Storz | 64301AA | |
| Osłona ochronno-badawcza | Karl Storz | 61029C |
Bibliografia
- Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics, 2016. CA Cancer J Clin. 66 (1), 7-30 (2016).
- Weitz, J., et al. Colorectal cancer. Lancet. 365 (9454), 153-165 (2005).
- Bork, U., et al.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
Przeglądaj więcej artykułów
mysi model raka jelita grubegoiniekcja wirusa Adeno-Cresegmentowa infekcja okrężnicykolonoskopia o wysokiej rozdzielczościtechnika nadzoru nad nowotworamimyszy modyfikowane genetyczniechirurgiczna procedura okrężnicyśrodki bezpieczeństwa biologicznego dla adenowirusówfluorescencyjny allel reporterowy Creguzy dystalnego odcinka okrężnicy
