Artykuł metodologiczny
Wewnętrzna powierzchnia płuc (ISA) jest krytycznym kryterium oceny morfologii i fizjologii płuc w chorobach płuc i regeneracji pęcherzyków płucnych wywołanej urazem. Opisujemy tutaj znormalizowaną metodę, która może zminimalizować błąd systematyczny pomiaru ISA zarówno w modelach myszy do pneumonektomii płuc, jak i implantacji protez.
Morfologia, fizjologia i funkcje oddechowe płuc zmieniają się zarówno w warunkach fizjologicznych, jak i patologicznych. Wewnętrzna powierzchnia płuc (ISA), reprezentująca zdolność płuc do wymiany gazowej, jest krytycznym kryterium oceny czynności oddechowej. Jednak stronniczość obserwatora może znacząco wpływać na mierzone wartości parametrów morfologicznych płuc. Opisany przez nas protokół minimalizuje odchylenia podczas pomiarów dwóch parametrów morfologicznych wykorzystywanych do obliczania ISA: wewnętrznej objętości płuc (ILV) i średniego przecięcia liniowego (MLI). Wykorzystując ISA jako parametr morfometryczny i funkcjonalny do określenia wyniku regeneracji wyrostka zębodołowego zarówno w modelach myszy do pneumonektomii (PNX), jak i implantacji protez, stwierdziliśmy, że zwiększony ISA po leczeniu PNX był znacznie zablokowany przez implantację protezy do jamy klatki piersiowej1. Oczekuje się, że możliwość dokładnego ilościowego określenia ISA nie tylko poprawi wiarygodność i odtwarzalność badań nad czynnością płuc w modelach regeneracji pęcherzyków płucnych wywołanych kontuzjami, ale także przyczyni się do mechanistycznych odkryć wielu chorób płuc.
Podstawową funkcją płuc jest wymiana tlenu i dwutlenku węgla między naczyniami krwionośnymi a atmosferą. Choroby płuc, takie jak dysplazja oskrzelowo-płucna (BPD), przewlekła obturacyjna choroba płuc (POChP) oraz ostre infekcje dróg oddechowych, prowadzą do zmniejszenia ISA2. Badacze zajmujący się chorobami płuc opracowali kilka ilościowych metod oceny zmian morfologicznych w płucach, w tym MLI, ILV, liczbę jednostek wymiany gazowej, ISA oraz podatność tkanki płucnej2,3. Pionierskie badania przeprowadzone przez Weibel et al.4 oraz Duguid et al.<....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wszystkie procedury użyte w tym protokole zostały przeprowadzone zgodnie z zaleceniami zawartymi w Wytycznych dotyczących opieki i użytkowania zwierząt laboratoryjnych Narodowego Instytutu Nauk Biologicznych w Pekinie. 8-tygodniowe samce myszy CD-1 były trzymane w specyficznym ośrodku wolnym od patogenów (SPF) do czasu przeprowadzenia eksperymentów. Operacje przeprowadzano przy użyciu całkowicie znieczulonych myszy (tj. bez reakcji na uszczypnięcie palca). Po operacji myszy trzymano w ciepłym, wilgotnym pomieszczeniu z wystarczającą ilością pożywienia i świeżej wody. Myszy zostały uśmiercone przy użyciu przedawkowania środka znieczulającego podawanego w wstrz....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przeprowadziliśmy tutaj eksperyment z grupą traktowaną PNX oraz grupą z implantacją protezy (Prosthesis-implanted). Podział na grupy jest taki sam, jak w opublikowanej wcześniej badaniu naszej grupy badawczej14.
Procedury PNX u myszy oraz implantacji protezy przedstawiono na Rysunku 2. Do zabiegów chirurgicznych i analiz ilościowych wykorzystano 8-tygodniowe samce myszy linii.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
W tym protokole podajemy szczegółowe opisy dotyczące pomiaru parametrów płucnych po implantacji PUX lewego płuca myszy i protezie. ISA jest obecnie uważany za kluczowy wskaźnik oceny funkcji oddechowej w wielu chorobach płuc oraz w regeneracji pęcherzyków płucnych wywołanej urazem. Jednakże, chociaż społeczność badaczy pulmonologów jest zgodna co do użyteczności ISA jako użytecznego wskaźnika, do tej pory niewiele uwagi poświęcono standaryzacji pomiaru ILV i MLI, dwóch parametrów używanych do obliczania ISA. Oczywiście, .......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Autorzy pragną podziękować Narodowemu Instytutowi Nauk Biologicznych w Pekinie za pomoc. Prace te były wspierane przez Miejską Fundację Nauk Przyrodniczych w Pekinie (nr Z17110200040000).
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Niedrogi zestaw do kauteryzacji | Fine Science Tools | 18010-00 | |
| Nożyczki Noyes | Fine Science Tools | 15012-12 | |
| Kleszcze o standardowym wzorze | Fine Science Tools | 11000-12 | |
| Castroviejo Micro Igły | Fine Science Tools | 12060-01 | |
| Klipsy do naczyń | Fine Science Tools | 18374-44 | |
| I. V. Kaniula-20 miernik | Jinhuan Medical Product Co., LTD. | 29P0601 | |
| Szew chirurgiczny | Jinhuan Medical Product Co., LTD. | F602 | |
| Platforma do intubacji myszy | Penn-Century, Inc | Model MIP | |
| Laryngoskop dla małych zwierząt | Penn-Century, Inc | Model LS-2-M | |
| TOPO Wentylator dla małych zwierząt | Kent Scientific | RSP1006-05L | |
| Podkładka termiczna | Sprzęt Stuart | SBH130D | |
| Sól sodowa pentobarbitalu | Sigma | P3761 | |
| Sól sodowa heparyny | Sigma | H3393 | |
| Roztwór hematoksyliny | Sigma | GHS132 | |
| Roztwór eozyny Y, alkoholik | Sigma | HT110116 | |
| 10 ml Pipeta | Thermo Scientific 170356 | ||
| Paraformaldehyd | Sigma | P6148 | |
| O.C.T | Compound Tissue-Tek | 4583 | |
| maszyna do kriosekcji | Leica | CM1950 | |
| Jednorazowe formy bazowe | Fisher HealthCare | 22-363-553 | |
| Igła o rozmiarze 18 | Becton Dickinson | 305199 | |
| Jod powidonu | Fisher Scientific | 19-027132 | |
| 70% etanolu | Fisher Scientific | BP82011 | |
| Zestawy infuzyjne dla osób pojedynczych użyj | Weigao | SFDA 2012 3661704 | |
| Sól fizjologiczna buforowana fosforanem | Gibco | 10010023 | |
| Taśmy | 3M Scotch | 8915 | |
| Podkładka bawełniana | Vinda | Dr.P | |
| Proteza silikonowa | Wykonany | ||
| mikroskop | Brightfield Olympus | VS120 | |
| Linijka narzędzie | Adobe Przeglądarka Photoshop |
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE
Poproś o pozwolenie