Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Snap Chip do multipleksowanych testów immunologicznych typu sandwich wolnych od reaktywności krzyżowej i Spotterów

6.3K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/56230

⸱

13 listopada 2017

 ,  ,  , 
1McGill University and Génome Québec Innovation Centre, 2Biomedical Engineering Department, McGill University, 3Parallex BioAssays Inc.

W tym artykule

Podsumowanie

Demonstrujemy technologię chipową do wykonywania testów immunologicznych typu sandwich bez reaktywności krzyżowej, po prostu pstrykając dwa slajdy. Aparat zatrzaskowy służy do niezawodnego przenoszenia odczynników z mikromacierzy do mikromacierzy. Chip zatrzaskowy może być stosowany do wszelkich reakcji biochemicznych wymagających kolokalizacji różnych odczynników bez zanieczyszczenia krzyżowego.

Streszczenie

Analiza białek multipleksowanych wykazała wyższą czułość i dokładność diagnostyczną w porównaniu z pojedynczymi białkami. Mikromacierze przeciwciał pozwalają na wykonywanie tysięcy testów immunologicznych w mikroskali jednocześnie na jednym chipie. Format testu warstwowego poprawia swoistość testu poprzez wykrywanie każdego celu z dwoma przeciwciałami, ale cierpi z powodu reaktywności krzyżowej między odczynnikami, co ogranicza ich możliwości multipleksowania. Mikromacierz kolokalizacyjna przeciwciał (ACM) została opracowana do wykrywania białek multipleksowanych bez reaktywności krzyżowej, ale wymaga drogiego obserwatora na miejscu do wytwarzania mikromacierzy podczas testów. W tej pracy demonstrujemy technologię chipów zatrzaskowych, która przenosi odczynnik z mikromacierzy do mikromacierzy, po prostu łącząc ze sobą dwa chipy, dzięki czemu nie jest potrzebny obserwator podczas inkubacji próbki, a następnie aplikacji przeciwciał detekcyjnych (dAbs) po przechowywaniu wstępnie wykrytych szkiełek, oddzielając przygotowanie szkiełka od wykonania testu. Przedstawiono zarówno pojedyncze, jak i podwójne metody transferu w celu uzyskania dokładnego wyrównania między dwiema mikromatrycami oraz opisano wytwarzanie szkiełek dla obu metod. Wyniki pokazują, że wyrównanie <40 μm osiągnięto przy podwójnym transferze, osiągając gęstość matrycy 625 plamek/cm2. Przeprowadzono test immunologiczny z 50 pleksami, aby wykazać przydatność chipa snap w multipleksowanej analizie białek. Granice wykrywalności 35 białek mieszczą się w zakresie pg/ml.

Wprowadzenie

Panel biomarkerów składający się z wielu białek może zapewnić wyższą czułość i swoistość niż pojedynczy biomarker w diagnostyce złożonych chorób, takich jak nowotwory1,2. Test immunoenzymatyczny (ELISA) jest złotym standardem technologicznym stosowanym w laboratoriach klinicznych, który osiąga granicę wykrywalności przy niskim pg/ml w osoczu, ale ogranicza się do jednego celu na test3,4,5. Mikromacierze przeciwciał zostały opracowane z myślą o tysiącach zminiaturyzowanych testów przeprowadzanych równolegle na jednym szkiełku mikroskopowym6,7,8. Jednak zdolność tej metody do multipleksowania jest ograniczona przez reaktywność krzyżową sterowaną odczynnikami, wynikającą z zastosowania mieszaniny dAbs, i staje się bardziej problematyczna wraz ze wzrostem liczby celów9,10,11. Pla i wsp. stwierdzili, że wynikająca z tego podatność testu kanapkowego multipleksowego skaluje się jako 4N(N-1), gdzie N to liczba celów12.

Aby złagodzić reaktywność krzyżową w mikromacierzach przeciwciał, w naszym laboratorium opracowano mikromacierz kolokalizacji przeciwciał (ACM) do multipleksowego testu kanapkowego12. Przeciwciała wychwytujące (cAb) są wykrywane na podłożu za pomocą obserwatora mikromacierzy. Po zablokowaniu próbki są nakładane na powierzchnię, a następnie poszczególne dAb są nakrapiane w tych samych miejscach z kompleksem cAb-antygen. Wszystkie scenariusze reaktywności krzyżowej między przeciwciałami i antygenami można złagodzić za pomocą ACM, a granice wykrywalności na pg/ml zostały osiągnięte. Protokół testu wymaga jednak przygotowania i wykrycia dAb podczas eksperymentów przy użyciu lokalnego obserwatora mikromacierzy o wysokiej precyzji w celu wyrównania, co jest kosztowne i czasochłonne, co ogranicza szerokie zastosowanie tej technologii w innych laboratoriach. Ręczny ACM, nazwany chipem snap, został opracowany do wielowarstwowych testów immunologicznych bez reaktywności krzyżowej i bez obserwatorów13,14,15. cAb i dAb są wstępnie nanoszone odpowiednio na szkiełko testowe i szkiełko transferowe w formacie mikromacierzy i przechowywane. Podczas testu szkiełka są pobierane, a mikromacierz dAb jest przenoszona zbiorczo na szkiełko testowe, po prostu łącząc ze sobą dwa chipy. Do niezawodnego przenoszenia odczynników służy aparat zatrzaskowy. Szkiełka pokryte nitrocelulozą o stosunkowo dużej zdolności wiązania przeciwciał zostały wykorzystane jako szkiełka testowe do absorpcji kropelek cieczy, a tym samym ułatwienia transferu odczynników, jednak szkiełka są droższe niż zwykłe szkiełka szklane, a do akwizycji sygnału potrzebne są skanery mikromatrycowe kompatybilne z szkiełkami nieprzezroczystymi.

W tej pracy demonstrujemy protokół wykonywania multipleksowego testu immunologicznego typu kanapkowego za pomocą chipa snap. Opracowano nowatorski aparat zatrzaskowy do wygodniejszego i bardziej niezawodnego transferu odczynników z mikromacierzy do mikromacierzy. Co ważne, tutaj ustaliliśmy metodę przenoszenia odczynnika na zwykłe szkiełka podstawowe za pomocą chipa zatrzaskowego. 1024 plamki udało się przenieść i wyrównać na szklanym szkiełku, co znacznie rozszerzyło zastosowanie tej technologii w większości laboratoriów.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

1. Wytwarzanie i przechowywanie chipów snap

  1. Metoda pojedynczego transferu (Rysunek 1a)
    1. Punktowe roztwory cAb zawierające 400 μg/ml przeciwciał i 20% glicerolu w roztworze soli fizjologicznej buforowanym fosforanami (PBS) na szkiełku testowym nitrocelulozowym (lub funkcjonalizowanym szkłem) za pomocą atramentowego skanera mikromacierzy 13 przy wilgotności względnej 60% (1,2 nl na każdą plamkę) w odstępach 800 μm od środka do środka. Upewnij się, że zjeżdżalnia jest zamocowana na pokładzie obserwatora zgodnie z jednym rogiem (tutaj użyto lewego dolnego rogu).
    2. Inkubować szkiełko testowe plamkowe w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę przy wilgotności względnej 60%.
    3. Zaciśnij uszczelkę modułu suwaka z 16 komorami na szkiełku testowym, aby podzielić ją na 16 dołków. Przepłukać szkiełko trzykrotnie, dodając 80 μl PBS zawierającego 0,1% Tween-20 (PBST) do każdego dołka i wstrząsając z prędkością 450 obr./min na wytrząsarce, za każdym razem 5 minut.
    4. Do każdej studzienki dodać 80 μl roztworów blokujących i wstrząsać przez 1 godzinę z prędkością 450 obr./min.
    5. Zdejmij uszczelkę i osusz szkiełko testowe strumieniem azotu.
    6. Zamocuj suwak transferowy na pokładzie obserwatora i dociśnij lewy dolny róg zjeżdżalni do lewego dolnego rogu pokładu obserwatora. Drukarka atramentowa wykrywa szereg znaczników wyrównania (roztwór mikrokulek polistyrenu) o takim samym układzie, jak w przypadku cAbs.
    7. Pozostaw znaczniki wyrównania do wyschnięcia. Odwróć suwak transferowy i umieść go z powrotem na pokładzie obserwatora, przymocowując do lewego dolnego rogu.
    8. Przygotuj roztwory do plamienia dAb zawierające 20 μg/ml przeciwciał, 20% glicerolu i 1% BSA.
    9. Korzystając z kamery obserwatora, zrób zdjęcie znaku wyrównania. Zaimplementuj ten obraz w programie do wykrywania jako powiernik i uzyskaj system rozpoznawania obrazu skanera atramentowego, aby zidentyfikować najbardziej górny lewy znak. Użyj jego współrzędnych jako pierwszego miejsca tablicy dAb. Punktowo 8 nL na kroplę w odstępach od środka do środka 800 μm.
  2. Metoda podwójnego transferu (Rysunek 1b)
    1. Umieść suwak transferowy 1 na pokładzie skanera atramentowego w lewym dolnym rogu. Punktowe roztwory cAbs zawierające 400 μg/ml przeciwciał, 20% glicerolu i 1% BSA w PBS na szkiełku za pomocą skanera do mikromacierzy atramentowej o wilgotności względnej 60% (0,4 nL dla każdej plamki i średnicy ~ 200 μm). Odstęp między środkami wynosi 400 μm.
    2. Zatrzaśnij szkiełko transferowe za pomocą szkiełka testowego pokrytego nitrocelulozą (lub funkcjonalizowanego szkła) za pomocą aparatu zatrzaskowego (Rysunek 2), aby przenieść kropelki cAb na szkiełko testowe.
      1. Obróć wszystkie sześć przycisków z boku aparatu zatrzaskowego o 90 stopni, aby pociągnąć i zablokować wszystkie tłoki w pozycji otwartej. Włóż suwak transferowy do uchwytu suwaka w jego gnieździe z zaciśniętym rogiem skierowanym w stronę stałego kołka pogo. Obróć pierwszy zestaw trzech przycisków, aby zwolnić tłoki za pomocą złotego kołka pogo i upewnij się, że suwaki są dociśnięte do kołków wyrównujących.
      2. Włóż szkiełko pokryte nitrocelulozą do aparatu zatrzaskowego do góry nogami, siedząc na 4 kołkach pogo. Obróć drugi zestaw trzech przycisków, aby zwolnić tłoki za pomocą srebrnego kołka i upewnij się, że suwaki są dociśnięte do kołków wyrównujących.
      3. Zamknij aparat zatrzaskowy, umieszczając górną powłokę na uchwycie szkiełka za pomocą słupków wyrównujących i otworów w celu precyzyjnego pozycjonowania.
      4. Włóż zamknięty aparat zatrzaskowy do klatki i całkowicie dociśnij klapkę zamykającą w dół, aby ustawić mikromatryce twarzą w twarz, wywierając odpowiedni nacisk. Trzymaj zamknięte przez 1 minutę.
    3. Oddziel slajdy. Inkubować szkiełko testowe w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę przy wilgotności względnej 60%. Umyć, zablokować i wysuszyć szkiełko testowe zgodnie z opisem w krokach 1.1.3 - 1.1.5.
    4. Umieść kolejny suwak transferowy na pokładzie skanera atramentowego i dociśnij do lewego dolnego rogu. Punktowe roztwory dAb zawierające 50 lub 100 μg/ml przeciwciał (patrz Tabela 1), 20% glicerolu i 1% BSA w PBS. Upewnij się, że każda plamka ma 0.8 nl, a odstęp między punktami od środka do środka wynosi 400 μm.
    5. Przechowywać test i szkiełko transferowe. Zamknąć zarówno szkiełka testowe, jak i transferowe w hermetycznej torbie zawierającej środek osuszający i umieścić w zamrażarce o temperaturze -20 °C.

2. Multipleksowane testy immunologiczne z chipami snap

  1. Wyjmij szkiełko testowe z zamrażarki. Pozostaw worek szczelnie zamknięty na 30 minut, aż szkiełko osiągnie temperaturę pokojową.
  2. Przygotować 7-punktowe, seryjnie rozcieńczane roztwory próbek, dodając białka do PBS zawierającego 0,05% Tween-20,
    UWAGA: W tym przypadku stosuje się 5-krotny współczynnik rozcieńczenia. Stężenia wyjściowe dla każdego białka są wymienione w tabeli 1.
  3. W razie potrzeby przygotować roztwory próbek. Na przykład rozcieńczyć ludzką surowicę 4 razy w buforze PBST.
  4. Zacisnąć 16-komorową uszczelkę na szkiełku testowym.
  5. Napełnij jedną kolumnę z 8 studzienkami 7 roztworami rozcieńczającymi białka i bezbiałkowym roztworem buforowym PBST przez pipetowanie. Odpipetować roztwory próbek w pozostałych 8 dołkach na tym samym szkiełku.
    UWAGA: W każdym dołku można zmieścić 80 μl roztworów. W razie potrzeby można użyć większej liczby szkiełek do pomiaru dodatkowych próbek.
  6. Próbki inkubować na wytrząsarce z prędkością 450 obr./min przez 1 godzinę w temperaturze pokojowej lub przez noc w temperaturze 4 °C. Przemyć szkiełko trzykrotnie PBST na wytrząsarce przy 450 obr./min, za każdym razem 5 min. Zdejmij uszczelkę i osusz szkiełko pod strumieniem gazowego azotu.
  7. Wyjmij szkiełko transferowe z dAbs z zamrażarki. Przechowywać worek szczelnie zamknięty przez 30 minut w temperaturze pokojowej. Następnie inkubuj szkiełko w zamkniętej komorze (np. pustym pudełku z końcówkami) zawierającej 60% kulki stabilizujące wilgotność przez 20 minut w celu ponownego nawodnienia.
  8. Zatrzaśnij szkiełko transferowe ze szkiełkiem testowym za pomocą aparatu zatrzaskowego (Rysunek 2), aby przenieść kropelki dAb. Patrz sekcja 1.2.2 w celu zapoznania się z działaniem urządzenia zatrzaskowego.
  9. Oddziel slajdy. Szkiełko testowe inkubować w zamkniętej komorze zawierającej 60% kulki stabilizujące wilgotność przez 1 godzinę. Zacisnąć szkiełko testowe z uszczelką 16-komorową i przepłukać szkiełko 4 razy za pomocą PBST na wytrząsarce z prędkością 450 obr./min, za każdym razem po 5 minut.
  10. Do każdej studzienki należy pobrać pipetą 80 μl roztworów zawierających 2,5 μg/ml fluoroforu streptawidyny w PBS. Inkubować przez 20 minut na wytrząsarce z prędkością 450 obr./min.
  11. Przepłukać szkiełko 3 razy PBST i raz wodą destylowaną na wytrząsarce przy 450 obr./min. Zdejmij uszczelkę i osusz szkiełko za pomocą azotu.

3. Skanowanie slajdów i analiza danych

  1. Zeskanuj szkiełko testowe za pomocą fluorescencyjnego skanera mikromatrycowego przy użyciu lasera 635 nm.
  2. Wyodrębnij intensywność netto każdego punktu za pomocą oprogramowania analitycznego (np. array-pro analyzer)16.
  3. Obliczyć granicę wykrywalności (LOD) każdego białka za pomocą oprogramowania statystycznego i określić stężenia białka w próbkach.
    UWAGA: LOD definiuje się jako punkt przecięcia z osią Y krzywej wzorcowej zwiększony o trzykrotność odchylenia standardowego trzech niezależnych testów.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Procedura analizy dla obu metod transferu — pojedynczego i podwójnego — przedstawiona jest na Rysunku 1. W transferze pojedynczym przeciwciała uchwytujące (cAbs) są naniesione bezpośrednio na slajd analityczny, a przeciwciała detekcyjne (dAbs) są przenoszone na slajd w momencie użycia w układzie lustrzanym względem cAbs (Rysunek 1a). Wymagana jest tylko jedna procedura transferu, jednak metoda ta jest obarczona błędem niedopasowa...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

W tej pracy przedstawiliśmy technologię snap chip, która sprawia, że multipleksowe testy immunologiczne wolne od reaktywności krzyżowej są szeroko dostępne dla badaczy z podstawową konfiguracją eksperymentalną. W odróżnieniu od istniejących mikromacierzy przeciwciał, użytkownicy końcowi nie potrzebują obserwatora mikromacierzy. Zademonstrowano zarówno metodę pojedynczego, jak i podwójnego transferu, przy czym podwójny transfer zapewnia doskonałą dokładność wyrównania do ~ 40 μm dla 98% miejsc, z największą niewspółosiowo...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Uniwersytet McGill złożył wniosek patentowy na niektóre aspekty tej pracy, a wynalazcami byli Huiyan Li i David Juncker.

Podziękowania

Dziękujemy Dr. Robowi Sladkowi za korzystanie z skanera atramentowego. Doceniamy ostateczne wsparcie ze strony Kanadyjskich Instytutów Badań nad Zdrowiem (CIHR), Kanadyjskiej Rady ds. Badań Nauk Przyrodniczych i Inżynierii (NSERC), Instytutu Badawczego Kanadyjskiego Towarzystwa Onkologicznego oraz Kanadyjskiej Fundacji Innowacji (CFI). D.J. dziękuje za wsparcie ze strony Kanadyjskiego Przewodniczącego ds. Badań.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Tabletka soli fizjologicznej buforowanej fosforanamiFisher Scientific5246501EA
Cy5 sprzężony z paciorkowcemRocklands000-06
Tween-20Sigma-Aldrichp1379
Albumina surowicy bydlęcejJackson ImmunoResearch Laboratories, Inc001-000-162
GlicerolSigma-AldrichG5516
Rozwiązanie blokujące: Stabilizator mikromatrycowy StabilGuard Choice bez BSASurModics, IncSG02
Szkiełka powlekane nitroceluloząGrace Bio-Laboratories, Inc305116
Szkiełka pokryte aminozylanemSchott North America1064875
Snap DeviceParallex BioAssays Inc.PBA-SD01
Skaner mikromacierzy atramentowejGeSiMNanoplotter 2.0
Uszczelka modułu suwakaGrace Bio-Laboratories, Inc204862
Koraliki stabilizacji wilgotnościTesty biologiczne Parallex Inc.PBA-HU60
Oprogramowanie Array-Pro AnalyzerCybernetykaWersja 4.5
Skaner mikromacierzy fluorescencyjnychSkanermikromacierzy Agilent SureScan Oprogramowanie
biostatystyczneOprogramowanie GraphPadGraphPad Prism 6
Przeciwciało wychwytujące endoglinR& D SystemsMAB10972
Białko EndoglinR& D Systems1097-PL
Przeciwciało wykrywające endoglinR& Systemy DBAF1097
IL-6a (patrz tabela 1)R& D Systems
IL-6b (patrz Tabela 1)Invitrogen
Media

Bibliografia

  1. Mor, G., et al. Serum protein markers for early detection of ovarian cancer. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102 (21), 7677-7682 (2005).
  2. Nicolini, A., et al. Intensive post-operative follow-up of breast cancer patients with tumour markers: CEA, TPA or CA15.3 vs MCA and MCA-CA15.3 vs CEA-TPA-CA15.3 panel in the early detection of distant metastases. BMC Cancer. 6 (1), 1-9 (2006).
  3. Hnasko, R., Lin, A., McGarvey, J. A., Stanker, L. H. A rapid method to improve protein detection by indirect ELISA. Biochem. Biophys. Res. Commun. 410 (4), 726-731 (2011).
  4. Percy, A. J., Chambers, A. G., Yang, J., Hardie, D. B., Borchers, C. H. Advances in multiplexed MRM-based protein biomarker quantitation toward clinical utility. Biochim. Biophys. Acta - Proteins and Proteomics. 1844 (5), 917-926 (2014).
  5. Ekins, R. P. Multi-analyte immunoassay. J Pharm Biomed Anal. 7 (2), 155-168 (1989).
  6. Mahlknecht, P., et al. An antibody microarray analysis of serum cytokines in neurodegenerative Parkinsonian syndromes. Proteome Sci. 10 (1), 71-80 (2012).
  7. Miller, J. C., et al. Antibody microarray profiling of human prostate cancer sera: Antibody screening and identification of potential biomarkers. Proteomics. 3 (1), 56-63 (2003).
  8. Li, H., Leulmi, R. F., Juncker, D. Hydrogel droplet microarrays with trapped antibody-functionalized beads for multiplexed protein analysis. Lab Chip. 11 (3), 528-534 (2011).
  9. Juncker, D., Bergeron, S., Laforte, V., Li, H. Cross-reactivity in antibody microarrays and multiplexed sandwich assays: shedding light on the dark side of multiplexing. Curr. Opin. Chem. Biol. 18, 29-37 (2014).
  10. Blank, K., et al. Double-chip protein arrays: force-based multiplex sandwich immunoassays with increased specificity. Anal. Bioanal. Chem. 379 (7), 974-981 (2004).
  11. Albrecht, C., et al. DNA: A Programmable Force Sensor. Science. 301 (5631), 367-370 (2003).
  12. Pla-Roca, M., et al. Antibody Colocalization Microarray: A Scalable Technology for Multiplex Protein Analysis in Complex Samples. Mol. Cell. proteomics. 11 (4), (2012).
  13. Li, H., Bergeron, S., Juncker, D. Microarray-to-Microarray Transfer of Reagents by Snapping of Two Chips for Cross-Reactivity-Free Multiplex Immunoassays. Anal. Chem. 84 (11), 4776-4783 (2012).
  14. Li, H., Munzar, J. D., Ng, A., Juncker, D. A versatile snap chip for high-density sub-nanoliter chip-to-chip reagent transfer. Sci. Rep. 5, 11688(2015).
  15. Li, H., Bergeron, S., Annis, M. G., Siegel, P. M., Juncker, D. Serial analysis of 38 proteins during the progression of human breast tumor in mice using an antibody colocalization microarray. Mol. Cell. Proteomics. 14, 1024-1037 (2015).
  16. Bergeron, S., Laforte, V., Lo, P. S., Li, H., Juncker, D. Evaluating mixtures of 14 hygroscopic additives to improve antibody microarray performance. Anal. Bioanal. Chem. 407 (28), 8451-8462 (2015).
  17. Whiteaker, J. R., et al. Sequential Multiplexed Analyte Quantification Using Peptide Immunoaffinity Enrichment Coupled to Mass Spectrometry. Mol. Cell. Proteomics. 11 (6), (2012).
  18. Xu, K., Wang, X., Ford, R. M., Landers, J. P. Self-Partitioned Droplet Array on Laser-Patterned Superhydrophilic Glass Surface for Wall-less Cell Arrays. Anal. Chem. 88 (5), 2652-2658 (2016).
  19. Lee, M. -Y., Park, C. B., Dordick, J. S., Clark, D. S. Metabolizing enzyme toxicology assay chip (MetaChip) for high-throughput microscale toxicity analyses. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102 (4), 983-987 (2005).
  20. Fernandes, T. G., et al. Three-dimensional cell culture microarray for high-throughput studies of stem cell fate. Biotechnol. Bioeng. 106 (1), 106-118 (2010).
  21. Kwon, C. H., et al. Drug-Eluting Microarrays for Cell-Based Screening of Chemical-Induced Apoptosis. Anal. Chem. 83 (11), 4118-4125 (2011).
  22. Jogia, G. E., Tronser, T., Popova, A. A., Levkin, P. A. Droplet Microarray Based on Superhydrophobic-Superhydrophilic Patterns for Single Cell Analysis. Microarrays. 5 (4), 28(2016).
  23. Schena, M., Shalon, D., Davis, R. W., Brown, P. O. Quantitative Monitoring of Gene Expression Patterns with a Complementary DNA Microarray. Science. 270 (5235), 467-470 (1995).
  24. Wu, J., et al. A sandwiched microarray platform for benchtop cell-based high throughput screening. Biomaterials. 32 (3), 841-848 (2011).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Technologia Snap ChipMultiplexowy ImmunoanalizaDetekcja bez Reaktywności KrzyżowejMicroarray bez SpotteraMicroarray PrzeciwciałFormat Analizy KanapkowejMetoda Podwójnego TransferuSkaner FluorescencyjnyStreptawidyna Fluoro-4Granica Wykrywalności
Snap Chip do multipleksowanych testów immunologicznych typu sandwich wolnych od reaktywności krzyżowej i Spotterów
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki korzystania z usługi

Zasady

Prawa autorskie © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.