Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Napromienianie pod kontrolą PET i MRI szczurzego modelu glejaka przy użyciu mikropromiennika

9.3K wyświetleń

DOI:

10.3791/56601

28 grudnia 2017

W tym artykule

Podsumowanie

W przeszłości, napromienianie małych zwierząt było zazwyczaj wykonywane bez możliwości celowania w dobrze zdefiniowaną objętość guza. Celem było naśladowanie leczenia glejaka u ludzi u szczurów. Korzystając z platformy do napromieniania małych zwierząt, przeprowadziliśmy konforemne napromienianie 3D pod kontrolą MRI ze zwiększeniem podobjętości na podstawie PET w warunkach przedklinicznych.

Streszczenie

Przez dziesięciolecia, badania nad promieniowaniem małych zwierząt były głównie prowadzone przy użyciu dość prymitywnych ustawień eksperymentalnych, stosując proste techniki pojedynczej wiązki, bez możliwości celowania w konkretną lub dobrze wytyczoną objętość guza. Dostarczanie promieniowania osiągnięto za pomocą stałych źródeł promieniowania lub akceleratorów liniowych wytwarzających meganapięciowe (MV) promieniowanie rentgenowskie. Urządzenia te nie są w stanie osiągnąć precyzji submilimetrowej wymaganej dla małych zwierząt. Co więcej, wysokie dawki dostarczane do zdrowych tkanek otaczających utrudniają ocenę odpowiedzi. Aby zwiększyć translację między badaniami na małych zwierzętach a ludźmi, naszym celem było naśladowanie leczenia glejaka u ludzi na modelu szczurzym. Aby umożliwić dokładniejsze napromienianie w warunkach przedklinicznych, niedawno opracowano precyzyjne, sterowane obrazem platformy badawcze do badania promieniowania małych zwierząt. Podobnie jak w przypadku systemów planowania u ludzi, planowanie leczenia za pomocą tych mikropromienników opiera się na tomografii komputerowej (CT). Jednak niski kontrast tkanek miękkich w tomografii komputerowej sprawia, że lokalizacja celów w niektórych tkankach, takich jak mózg, jest bardzo trudna. W związku z tym włączenie obrazowania metodą rezonansu magnetycznego (MRI), które charakteryzuje się doskonałym kontrastem tkanek miękkich w porównaniu z tomografią komputerową, umożliwiłoby bardziej precyzyjne wyznaczenie celu napromieniowania. W ostatniej dekadzie zainteresowanie w leczeniu radioterapią zyskały również techniki obrazowania biologicznego, takie jak pozytonowa tomografia emisyjna (PET). PET umożliwia wizualizację m.in. zużycia glukozy, transportu aminokwasów czy niedotlenienia, występujących w guzie. Celowanie w te wysoce proliferacyjne lub odporne na promieniowanie części guza za pomocą wyższej dawki może przynieść korzyści w zakresie przeżycia. Hipoteza ta doprowadziła do wprowadzenia biologicznej objętości guza (BTV), oprócz konwencjonalnej objętości docelowej brutto (GTV), klinicznej objętości docelowej (CTV) i planowanej objętości docelowej (PTV).

W laboratorium obrazowania przedklinicznego Uniwersytetu w Gandawie dostępne są mikro-promienniki, PET, oraz 7-tonowy rezonans magnetyczny dla małych zwierząt. Celem było włączenie napromieniania pod kontrolą MRI i zwiększania podobjętości pod kontrolą PET do modelu szczura glejaka.

Wprowadzenie

Glejak wysokiego stopnia jest najczęstszym i najbardziej agresywnym złośliwym nowotworem mózgu u dorosłych, z medianą przeżycia wynoszącą 1 rok, pomimo obecnych metod leczenia. Standard opieki obejmuje maksymalną resekcję chirurgiczną, po której następuje połączona radioterapia wiązką zewnętrzną (RT) i temozolomidem (TMZ), a następnie leczenie podtrzymujące TMZ1,2,3. Od czasu wprowadzenia TMZ ponad 15 lat temu, nie poczyniono żadnych znaczących postępów w leczeniu tych nowotworów. W związku z tym wdrożenie nowych strategii terapeutycznych jest pilne, ale powinno być najpierw ....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Badanie zostało zatwierdzone przez komisję etyki do eksperymentów na zwierzętach (ECD 09/23 i ECD 12/28). Wszystkie szczegóły handlowe znajdują się w Tabeli Materiałów.

1. Model komórki szczura F98 GB

  1. Hodować komórki F98 GB, uzyskane z ATCC, w monowarstwach przy użyciu zmodyfikowanego Eagle Medium firmy Dulbecco, 10% surowicy cielęcej, 1% penicyliny, 1% streptomycyny, 1% L-glutaminy i 0,1% amfoterycyny b i umieścić w inkubatorze CO2 (5% CO2 i 37 °C).
  2. Zaszczepić komórki glejaka w mózgu samic szczurów Fischer F344 (masa ciała 170 g).
    1. Używaj sterylnych narzędzi i zawsze n....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Aby odtworzyć metodologię leczenia glioblastoma u ludzi w modelu przedklinicznym, konieczne było zastosowanie radioterapii sterowanej obrazowaniem MRI. Dzięki wykorzystaniu PCTPS oraz interfejsu mikro-irradiatora możliwe było naświetlanie glioblastoma F98 u szczurów za pomocą wielu konformalnych łuków niekoplanarnych, celujących w obszar wzmocniony kontrastem w obrazowaniu MRI w trybie T117. Do rejestracji obrazów między MRI a planowaną tomografią komputerową (CT) .......

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Aby uzyskać dokładne napromienianie docelowego guza glejaka w mózgu szczura, wbudowana w mikropromiennik tomografia komputerowa nie była wystarczająca. Guzy mózgu są prawie niewidoczne z powodu niewystarczającego kontrastu tkanek miękkich, nawet jeśli zastosowano by wzmocnienie kontrastu. W związku z tym należy uwzględnić rezonans magnetyczny, aby umożliwić bardziej precyzyjne napromienianie. Korzystając z sekwencyjnej akwizycji MR w systemie 7 T i akwizycji CT na mikropromienniku, byliśmy w stanie skierować dawkę do tka.......

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy nie mają do ujawnienia konfliktu interesów

Podziękowania

Autorzy chcieliby podziękować Stichting Luka Hemelaere i Soroptimist International za wsparcie tej pracy.

....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
GB Model RAT
F98 Linia komórkowa glejakaATCCCRL-2397
Fischer F344/Ico crl SzczuryCharles RiverN/A
http://www.criver.com/products-services/basic-research/find-a-model/fischer-344-rat System mikropompWorld Precision InstrumentsUMP3Micro 4: https://www.wpiinc.com/products/top-products/make-selection-ump3-ultramicropump/#tabs-1
Ramka stereotaktycznaKopf902Model 902 Podwójne małe zwierzę Rama stereotaktyczna
wiertło diamantVellemanVTHD02https://www.velleman.eu/products/view/?id=370450
Wosk kostnyAesculap1029754https://www.aesculapusa.com/products/wound-closure/hemostatic-bone-wax
Strzykawka insulinowa MicrofineBeckton-Dickinson3209241 mL, 29G
Lampa podczerwieniIR PhilipsHP3616/01
EthilonEthicon662G/662HFS-2, 4-0, 3/8, 19 mm
Nazwa<silny>Firma Numer katalogowyUwagi
Hodowla komórkowa
DMEMInvitrogen14040-091
Penicylina-streptomycynaInvitrogen15140-148
L-glutaminaInvitrogen25030-032
FungizoneInvitrogen15290-018
Trypsin-EDTAInvitrogen25300-062
PBSInvitrogen14040-224
FalconsThermo Scientific178883175 cm2 Powierzchnia nunklonu, jednorazówki do hodowli komórkowych z nasadkami filtrującymi
Pożywka do zamrażania komórekSigma-aldrichC6164Pożywka do zamrażania komórek-DMSO, sterylnie filtrowana, odpowiednia do hodowli komórkowych testowany pod kątem endotoksyn
NazwaFirmaNumer katalogowyUwagi
Animal napromieniowanie
Micro-irradiatorX-strahlSARRP
oprogramowanie do napromienianiaX-strahlSystem planowania leczenia przedklinicznego MuriPlan (PCTPS), wersja 2.0.5.
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Małe zwierzę PET
microPET możliwość systemuMolecubesB-Cubehttp://www.molecubes.com/b-cube/
możliwość systemu microPET 2TriFoil Obrazowanie, Northridge CAFLEX Triumph IIhttp://www.trifoilimaging.com
Znaczniki PETProdukowane18F-FDG, 18F-FET, 18F-FAZA, 18F-Cholina
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Rezonans magnetyczny dla małych zwierząt
System mikrorezonansu magnetycznegoBruker BiospinPharmascan 70/16https://www.bruker.com/products/mr/preclinical-mri/pharmascan/overview.html
Środek kontrastowy Dotarem Środek kontrastowyGuerbetMRI, cewka nadajnika całego ciała szczura Dotarem 0,5 mmol/ml
powierzchniowa mózguRapid BiomedicalV-HLS-070
cewka powierzchniowa mózgu szczuraRapid BiomedicalP-H02LE-070
Urządzenie grzewcze na bazie wodyBruker BiospinMT0125
30 G Igła do wstrzykiwań dożylnychBeckton-Dickinson30512830 G
PE 10 rurki (60 cm / wstrzyknięcie)Instech laboratories, IncBTPE-10BTPE-10, rurka polietylenowa 0,011 x 0,024 cala (0,28 x 60 mm), niesterylna, szpula 30 m (98 stóp), laboratoria Instech, Inc Plymouth spotkanie PA USA- (800) 443-4227- http://www.instechlabs.com
nieheparynizowanych mikronaczyń włosowatych hematokrytuGMBH7493 21te naczynia włosowate są wypełnione wodą w celu wytworzenia markerów widocznych na MRI i CT
silny>Nazwa<silny>FirmaNumer katalogowyUwagi
Materiały eksploatacyjne
izofluran: IsofloZoetisB506Znieczulenie
ketamina: KetamidorEcupharZnieczulenie
ksylazyna: SedaxylCodifar NVanestezjologiczny
TerumoVersatus-W26G
TemozolomidSigma-aldrichT2577-100MGchemioterapia
DMSOSigma-aldrich276855-100ML
Strzykawka insulinowa MicrofineBeckton-Dickinson3209241 mL, 29G
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Analiza obrazu
Oprogramowanie PMODPMOD technologies LLCPFUS (narzędzie do fuzji)oprogramowanie do kwantyfikacji obrazu biomedycznego (BIQS), wersja 3.405, https://www.pmod.com/web/?portfolio=22-image-processing-pfus
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Anesyzjo-sprzęt
Jednostka anestezjologicznaASA LTDASA 0039ASA LTD, 5 valley road, Keighley, BD21 4LZ
Generator tlenuTechnika weterynaryjna Int.7F-3BDO-Medipass, Ijmuiden
1 we własnym zakresie Cewka szczura < Cewnik

Bibliografia

  1. Stupp, R., et al. Promising survival for patients with newly diagnosed glioblastoma multiforme treated with concomitant radiation plus temozolomide followed by adjuvant temozolomide. J Clin Oncol. 20 (5), 1375-1382 (2002).
  2. Dhermain, F.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

na wietlanie pod kontrol obrazowfuzja PET MRIwstrzykni cie stereotaktyczneMRI z kontrastemTK planowania leczeniabiologiczna obj to docelowahistogram dawka obj toobrazowanie wielomodalne