Niniejszy protokół opisuje procedurę oceny nasienia ryb za pomocą wspomaganych komputerowo urządzeń do analizy nasienia i chłodzenia. Oprogramowanie zapewnia szybką, dokładną i ilościową analizę jakości nasienia ryb na podstawie ruchliwości plemników, co może być przydatnym narzędziem w akwakulturze w celu poprawy sukcesu reprodukcyjnego.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Ocena nasienia ryb za pomocą oprogramowania i urządzeń chłodzących
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Do oceny jakości gamet istnieją innowacyjne, szybkie i ilościowe techniki, które mogą dostarczyć użytecznych danych dla akwakultury. Komputerowe systemy do analizy nasienia zostały opracowane w celu pomiaru kilku parametrów, a jednym z najczęściej mierzonych jest ruchliwość plemników.
Początkowo ta technologia komputerowa była przeznaczona dla gatunków ssaków, chociaż może być również używana do analizy nasienia ryb. Ryby mają specyficzne cechy, które mogą wpływać na ocenę plemników, takie jak krótki czas ruchliwości po aktywacji i, w niektórych przypadkach, adaptacja do niższych temperatur. W związku z tym konieczna jest modyfikacja zarówno komponentów programowych, jak i sprzętowych, aby analiza ruchliwości była bardziej wydajna w przypadku analizy nasienia ryb. W przypadku plemników ssaków płytka grzewcza służy do utrzymania optymalnej temperatury plemników. Jednak w przypadku niektórych gatunków ryb korzystne jest stosowanie niższej temperatury w celu przedłużenia czasu ruchliwości, ponieważ plemniki pozostają aktywne przez mniej niż 2 minuty. W związku z tym urządzenia chłodzące są niezbędne do schładzania próbek w stałej temperaturze w czasie analizy, w tym pod mikroskopem optycznym. Protokół ten opisuje analizę ruchliwości plemników ryb przy użyciu oprogramowania do analizy nasienia i nowych urządzeń chłodzących w celu optymalizacji wyników.
Wprowadzenie
Skuteczność reprodukcji zależy od jakości obu gamet (komórek jajowych i plemników)1,2. Jest to główny czynnik, który przyczynia się do udanego zapłodnienia, umożliwiając rozwój żywotnego potomstwa3,4. Wygodna ocena jakości gamet jest najlepszym narzędziem do określenia potencjału płodności próbki.
Mieszanie nasienia od wielu samców jest powszechną praktyką w produkcji wielu komercyjnych gatunków wodnych4. Jednak zmienność plemników między samcami może prowadzić do konkurencji plemników, a w konsekwen....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Procedury z udziałem zwierząt zostały zatwierdzone (2015/VSC/PEA/00064) przez Generalną Dyrekcję Produkcji Rolnej i Hodowli na Universitat Politècnica de València.
1. Zbieraj plemniki od dojrzałych węgorzy europejskich w niewoli
UWAGA: Używaj samców węgorza europejskiego trzymanych w zbiornikach z wodą morską i systemem recyrkulacji o stałej temperaturze (20 °C). Leczenie hormonami poprzez cotygodniowe wstrzyknięcie dootrzewnowe (ludzka gonadotropina kosmówkowa (hCG); 1,5 IU na g masy ciała ryby). Aklimatyzuj ryby stopniowo, zaczynając od 3 dni w słodkiej wodzie, a następnie zastępuj je wodą morską (1/3 całkowitej ....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Analiza wpływu czasu na ruchliwość plemników
W przypadku węgorza europejskiego odsetek spermatozoów nieruchomych wzrósł od 15 s do 120 s po aktywacji (z 24,4% do 40,7%), natomiast odsetek progresywnie ruchomych spermatozoów spadł (z 36,9% do 20,9%) (Rycina 1A i 1B). Pod względem prędkości komórki spermatozoów wykazały spadek prędkości w czasie (.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Oprogramowanie do analizy nasienia używane w tym protokole było używane przez naukowców na całym świecie dla różnych gatunków, w tym ryb. Jednak ryby mają pewne specyficzne cechy, które mogą wpływać na ocenę nasienia. Plemniki ryb wykazywały dużą prędkość w momencie aktywacji, która szybko spada i prowadzi do krótkiego czasu ruchliwości po aktywacji. Poza tym temperatura rozmnażania jest zależna od gatunku i w niektórych przypadkach może wynosić około 4 °C 2,4,8,12.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Podziękowania
Ten projekt otrzymał dofinansowanie od Stowarzyszenia COST (Food and Agriculture COST Action FA1205: AQUAGAMETE, oraz programu Unii Europejskiej Horyzont 2020 w zakresie badań i innowacji w ramach projektu Marie Skłodowska-Curie IMPRESS (GA nr 642893). Serdecznie dziękujemy zespołowi naukowemu PROiSER, a w szczególności studentowi Alberto Vendrellowi Bernabéu, za jego aktywny udział w nagraniu wideo tego projektu.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Ludzka gonadotropina kosmówkowa | Argent Chemical Laboratories | hCG | Hormon |
| Benzokaina | Merck | E1501 Sigma | Znieczulenie |
| Wodorowęglan sodu | Merck | S5761 Sigma | P1 średni |
| chlorek sodu | Merck | 1.06406 EMD Millipore | P1 średni |
| chlorek magnezu | Merck | 1374248 USP | P1 średni |
| chlorek potasu | Merck | P3911-500G | P1 średni |
| chlorek wapnia | Merck | C7902-500G | P1 średnia |
| sól handlowa | Aqua Medic | Rozwiązanie Meersalz | Activator |
| Rozwiązanie aktywatora BSA | Merck | 05470 Sigma | |
| Probówki Falcon 15 ml | Merck | T1943-1000EA | |
| Rurki Falcon wspornik | Merck | R5651-5EA | |
| Eppendorfs | Merck | T9661-1000EA | |
| Mikropipeta 20 i mikro; l | Gilson | PIPETMAN® Klasyczna | |
| mikropipeta 10 i mikro; l | Końcówki Merck | Z683787-1EA | |
| do mikropipet 20 i mikro; l | Końcówki Merck | Z740030-1000EA | |
| do mikropipet 10 i mikro; l | Merck | Z740028-2000EA | |
| Spermtrack | PROiSER | zliczająca | |
| TruMorph | PROiSER | TruMorph | |
| UB 200i Serie | PROiSER | ||
| Mikroskop Płyta chłodząca | PROiSER | Prototyp | |
| Prototyp | |||
| ISAS v1 | Oprogramowanie PROiSER | ISAS |
Bibliografia
- Kime, D. E., et al. Use of computer-assisted sperm analysis (CASA) for monitoring the effects of pollution on sperm quality of fish; application to the effects of heavy metals. Aquatic Toxicology. 36, 223-237 (1996).
- Kime, D. E., et al. Computer-assisted sperm analy....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
