Ocena nasienia ryb za pomocą oprogramowania i urządzeń chłodzących

Summary

Niniejszy protokół opisuje procedurę oceny nasienia ryb za pomocą wspomaganych komputerowo urządzeń do analizy nasienia i chłodzenia. Oprogramowanie zapewnia szybką, dokładną i ilościową analizę jakości nasienia ryb na podstawie ruchliwości plemników, co może być przydatnym narzędziem w akwakulturze w celu poprawy sukcesu reprodukcyjnego.

Abstract

Do oceny jakości gamet istnieją innowacyjne, szybkie i ilościowe techniki, które mogą dostarczyć użytecznych danych dla akwakultury. Komputerowe systemy do analizy nasienia zostały opracowane w celu pomiaru kilku parametrów, a jednym z najczęściej mierzonych jest ruchliwość plemników.

Początkowo ta technologia komputerowa była przeznaczona dla gatunków ssaków, chociaż może być również używana do analizy nasienia ryb. Ryby mają specyficzne cechy, które mogą wpływać na ocenę plemników, takie jak krótki czas ruchliwości po aktywacji i, w niektórych przypadkach, adaptacja do niższych temperatur. W związku z tym konieczna jest modyfikacja zarówno komponentów programowych, jak i sprzętowych, aby analiza ruchliwości była bardziej wydajna w przypadku analizy nasienia ryb. W przypadku plemników ssaków płytka grzewcza służy do utrzymania optymalnej temperatury plemników. Jednak w przypadku niektórych gatunków ryb korzystne jest stosowanie niższej temperatury w celu przedłużenia czasu ruchliwości, ponieważ plemniki pozostają aktywne przez mniej niż 2 minuty. W związku z tym urządzenia chłodzące są niezbędne do schładzania próbek w stałej temperaturze w czasie analizy, w tym pod mikroskopem optycznym. Protokół ten opisuje analizę ruchliwości plemników ryb przy użyciu oprogramowania do analizy nasienia i nowych urządzeń chłodzących w celu optymalizacji wyników.

Introduction

Skuteczność reprodukcji zależy od jakości obu gamet (komórek jajowych i plemników)^1,2. Jest to główny czynnik, który przyczynia się do udanego zapłodnienia, umożliwiając rozwój żywotnego potomstwa^3,4. Wygodna ocena jakości gamet jest najlepszym narzędziem do określenia potencjału płodności próbki.

Mieszanie nasienia od wielu samców jest powszechną praktyką w produkcji wielu komercyjnych gatunków wodnych⁴. Jednak zmienność plemników między samcami może prowadzić do konkurencji plemników, a w konsekwen....

Protocol

Procedury z udziałem zwierząt zostały zatwierdzone (2015/VSC/PEA/00064) przez Generalną Dyrekcję Produkcji Rolnej i Hodowli na Universitat Politècnica de València.

1. Zbieraj plemniki od dojrzałych węgorzy europejskich w niewoli

UWAGA: Używaj samców węgorza europejskiego trzymanych w zbiornikach z wodą morską i systemem recyrkulacji o stałej temperaturze (20 °C). Leczenie hormonami poprzez cotygodniowe wstrzyknięcie dootrzewnowe (ludzka gonadotropina kosmówkowa (hCG); 1,5 IU na g masy ciała ryby). Aklimatyzuj ryby stopniowo, zaczynając od 3 dni w słodkiej wodzie, a następnie zastępuj je wodą morską (1/3 całkowitej ....

Results

Analiza wpływu czasu na ruchliwość plemników

W przypadku węgorza europejskiego, odsetek statycznych plemników wzrósł z 15 s do 120 s po aktywacji (z 24,4% do 40,7%), a odsetek ruchomych plemników progresywnych zmniejszył się (z 36,9% do 20,9%) (Rysunek 1A i 1B). Na podstawie prędkości, komórki plemników wykazały spadek prędkości w czasie (Rysunek 1C i

Discussion

Oprogramowanie do analizy nasienia używane w tym protokole było używane przez naukowców na całym świecie dla różnych gatunków, w tym ryb. Jednak ryby mają pewne specyficzne cechy, które mogą wpływać na ocenę nasienia. Plemniki ryb wykazywały dużą prędkość w momencie aktywacji, która szybko spada i prowadzi do krótkiego czasu ruchliwości po aktywacji. Poza tym temperatura rozmnażania jest zależna od gatunku i w niektórych przypadkach może wynosić około 4 °C 2,4,8,12.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Ludzka gonadotropina kosmówkowa	Argent Chemical Laboratories	hCG	Hormon
Benzokaina	Merck	E1501 Sigma	Znieczulenie
Wodorowęglan sodu	Merck	S5761 Sigma	P1 średni
chlorek sodu	Merck	1.06406 EMD Millipore	P1 średni
chlorek magnezu	Merck	1374248 USP	P1 średni
chlorek potasu	Merck	P3911-500G	P1 średni
chlorek wapnia	Merck	C7902-500G	P1 średnia
sól handlowa	Aqua Medic	Rozwiązanie Meersalz	Activator
Rozwiązanie aktywatora BSA	Merck	05470 Sigma
Probówki Falcon 15 ml	Merck	T1943-1000EA
Rurki Falcon wspornik	Merck	R5651-5EA
Eppendorfs	Merck	T9661-1000EA
Mikropipeta 20 i mikro; l	Gilson	PIPETMAN® Klasyczna
mikropipeta 10 i mikro; l	Końcówki Merck	Z683787-1EA
do mikropipet 20 i mikro; l	Końcówki Merck	Z740030-1000EA
do mikropipet 10 i mikro; l	Merck	Z740028-2000EA
Spermtrack	PROiSER		zliczająca
TruMorph	PROiSER	TruMorph
UB 200i Serie	PROiSER
Mikroskop Płyta chłodząca	PROiSER		Prototyp
			Prototyp
ISAS v1	Oprogramowanie PROiSER	ISAS