Kompleksowa procedura oceny wydajności in vitro przypuszczalnego neowaskularyzmu naczyniaka zarodkowego przy użyciu testu kiełkowania sferoidalnego

Summary

Ten artykuł przedstawia kompleksową procedurę oceny in vitro, czy klasyczna angiogeneza nowotworów występuje w naczyniakach zarodkowych (HBs) i jaka jest jej rola w HBs. Wyniki podkreślają złożoność neowaskularyzacji HB i sugerują, że ta powszechna forma angiogenezy jest jedynie mechanizmem uzupełniającym w neowaskularyzacji HB.

Abstract

Inaktywacja genu supresorowego nowotworu von Hippel-Lindau (VHL) odgrywa kluczową rolę w rozwoju naczyniaków zarodkowych (HBs) w ludzkim ośrodkowym układzie nerwowym (OUN). Jednak zarówno pochodzenie cytologiczne, jak i proces ewolucyjny HBs (w tym neowaskularyzacja) pozostają kontrowersyjne, a antyangiogeneza VHL-HBs, oparta na klasycznej angiogenezie HBs, przyniosła rozczarowujące wyniki w badaniach klinicznych. Jedną z głównych przeszkód w skutecznym klinicznym przełożeniu leczenia przeciwnaczyniowego jest brak dokładnego zrozumienia neowaskularyzacji w tym guzie naczyniowym. W tym artykule przedstawiono kompleksową procedurę oceny in vitro, czy w HBs występuje klasyczna angiogeneza guza, a także jej rola w HBs. Dzięki tej procedurze naukowcy mogą dokładnie zrozumieć złożoność neowaskularyzacji HB i zidentyfikować funkcję tej powszechnej formy angiogenezy w HBs. Protokoły te można wykorzystać do oceny najbardziej obiecującej terapii przeciwnaczyniowej nowotworów, która ma wysoki potencjał translacyjny zarówno w leczeniu nowotworów, jak i w optymalizacji leczenia antyangiogennego HBs w przyszłych translacjach. Wyniki podkreślają złożoność neowaskularyzacji HB i sugerują, że ta powszechna forma angiogenezy jest jedynie mechanizmem uzupełniającym w neowaskularyzacji HB.

Introduction

Hemangioblastoma (HBs) to łagodne guzy naczyniowe, które występują wyłącznie w ludzkim ośrodkowym układzie nerwowym (OUN). Rozwijają się one u pacjentów z chorobą von Hippla-Lindaua (VHL) lub zmianami sporadycznymi. VHL-HBs są trudne do wyleczenia poprzez leczenie chirurgiczne ze względu na częste nawroty i liczne zmiany wynikające z tego zaburzenia genetycznego¹. Chociaż inaktywacja genu supresorowego guza VHL została uznana za główną przyczynę nowotworzenia VHL-HBs, pochodzenie cytologiczne (w tym neowaskularyzacja) i proces ewolucyjny HBs pozostają w dużej mierze kontrowersyjne². W związku z tym lepsze zrozumienie mec....

Protocol

Ta metoda została wykonana zgodnie z zatwierdzonymi wytycznymi i przepisami Komisji Etyki Badań Szpitala Huashan Uniwersytetu Fudan. Na każdym etapie przestrzegano odpowiednich standardowych środków bezpieczeństwa. Aby zapoznać się ze schematyczną prezentacją, zapoznaj się z rysunkiem 1.

1. Hodowla komórkowa i konstrukt plazmidu

1. Rutynowo utrzymuj ludzką komórkę śródbłonka żyły pępowinowej (HUVEC) w zmodyfikowanym pożywce Eagle's Medium (DMEM) firmy Dulbecco, uzupełnionej 10% płodową surowicą bydlęcą (FBS), 100 jednostkami/ml penicyliny i 100 μg/ml streptomycyny w wilgotnym inkubatorze o stężeniu 5% CO_{2 w}

Results

Oryginalne obrazy są wykonywane przez mikroskop z odwróconym światłem. Typowe obrazy grupy kontrolnej i grupy VHL są pokazane w Rysunek 2-A1 i Rysunek 2-A2. Długość kiełkowania w grupie kontrolnej jest krótsza niż w grupie VHL.

Po przesłaniu obrazów, platforma internetowa dostarcza wyniki analizy bezpośrednio. Dane wyjściowe składają się z .......

Discussion

Ostatnio wiele dziedzin badań biologii naczyniowej zostało pobudzonych przez badanie śródbłonka angiogennego¹⁵. W tym artykule opracowaliśmy technikę kiełkowania sferoidy śródbłonka jako model eksperymentalny do badania tworzenia naczyń, które wynikają z utraty funkcji genu VHL w zmanipulowanych komórkach śródbłonka w celu identyfikacji nowych cząsteczek kandydujących kaskady angiogennej. Zgodnie z naszą najlepszą wiedzą, jest to pierwszy raport, w którym zbadano angiogenne działanie endogennych z.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
ludzka komórka śródbłonka żyły pępowinowej	Fudan IBS Cell Center	FDCC-HXN180
dulbecco' s zmodyfikowany orzeł" s średni	Gibco	11995040
płodowa surowica bydlęca	Gibco
PLKO.1-puro vector	Addgene	#8453
plazmid upakowania psPAX2	Addgene	#12260
plazmid kopertowy pMD2.G	Addgene	#12259
3D okrągłodenne 96-dołkowe płytki	S-Bio	MS-9096M
matrigel	BD Biosciences	354234
Opti-MEM podłoże	Gibco	31985-070	zredukowana pożywka surowicy
Płytka 15-dołkowa	Ibidi	81501	Pęcherzyki powietrza w żelu można zredukować poprzez wyrównanie μ – Przesuń angiogenezę przed użyciem w inkubatorze na noc
suplementy wzrostu komórek śródbłonka	Sciencell	#1052
10-centymetrowe naczynie hodowlane	Corning	Scipu000813
Puromycin	Gibco	A1113802
typsin-EDTA	Gibco	25200056
Automatyczny system licznika komórek	biotechnologicznego
	Winmasis		http://mywim.wimasis.com