Artykuł metodologiczny

Łaskotanie, technika wywoływania pozytywnego afektu podczas obchodzenia się ze szczurami

DOI:

10.3791/57190

⸱

8 maja 2018

 ,  ,  ,  , 
1Center for the Study of Animal Well-being, Department of Integrative Physiology and Neuroscience, Washington State University, 2Canadian Council on Animal Care, 3Department of Animal Sciences, Center for Animal Welfare Science, College of Agriculture, Purdue University, 4Department of Animal and Aquacultural Sciences, Faculty of Biosciences, Norwegian University of Life Sciences

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ten artykuł demonstruje ustandaryzowane zastosowanie zabawnego obchodzenia się, techniki łaskotania zaprojektowanej tak, aby naśladować brutalną zabawę szczura. Technika ta jest skuteczna w zmniejszaniu lękliwych reakcji na ludzi i generowaniu pozytywnego wpływu, gdy szczury są traktowane w celu wykonywania wspólnych czynności hodowlanych oraz procedur medycznych i badawczych, takich jak wstrzykiwanie.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Obchodzenie się z małymi zwierzętami, takimi jak szczury, może prowadzić do wielu negatywnych skutków. Należą do nich strach przed ludźmi, opór przed obchodzeniem się, zwiększone ryzyko obrażeń zarówno zwierząt, jak i rąk ich opiekunów, zmniejszony dobrostan zwierząt i mniej ważne dane badawcze. Aby zminimalizować negatywny wpływ na wyniki eksperymentów i relacje człowiek-zwierzę, zwierzęta badawcze są często przyzwyczajone do obchodzenia się z nimi. Metody habituacji są jednak bardzo zmienne i często mają ograniczoną skuteczność. Co więcej, ludzie mogą naśladować aspekty zabawnego, szorstkiego zachowania zwierząt podczas obchodzenia się z nimi. W systematycznym stosowaniu u szczurów laboratoryjnych, to zabawne obchodzenie się, określane jako łaskotanie, konsekwentnie powoduje pozytywne reakcje behawioralne. Ten artykuł zawiera szczegółowy opis znormalizowanej techniki łaskotania szczurów. Metoda ta może przyczynić się do przyszłych badań nad pozytywnymi stanami afektywnymi u zwierząt, ułatwić obchodzenie się ze szczurami w typowych czynnościach hodowlanych, takich jak zmiana klatki lub procedury medyczne/badawcze, takie jak iniekcja, a także zostać wdrożona jako źródło wzbogacenia społecznego. Stwierdzono, że metoda ta może być stosowana do skutecznego i praktycznego zmniejszania lękliwości szczurów przed ludźmi i poprawy ich dobrostanu, a także niezawodnego modelowania pozytywnych stanów afektywnych.

Wprowadzenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Obchodzenie się z małymi zwierzętami, takimi jak szczury domowe (Rattus norvegicus) trzymane w laboratoriach i jako zwierzęta domowe, może powodować znaczny wzrost behawioralnych i fizjologicznych wskaźników stresu1, a także reakcje awersyjne sugerujące cierpienie emocjonalne2. Obchodzenie się ze szczurami może wywoływać reakcje oparte na strachu wobec ludzi3,4, co może utrudnić dalsze obchodzenie się ze zwierzętami, zwiększyć ryzyko zranienia zarówno zwierzęcia, jak i przewodnika, oraz ograniczyć ważność danych eksperymentalnych5.

Aby uniknąć negatywnego wpływu obchodzenia się z nimi na wyniki eksperymentów i relacje człowiek-zwierzę, powszechną praktyką jest dawanie nowo nabytym młodym zwierzętom czasu na przyzwyczajenie się do interakcji z człowiekiem przed przypisaniem ich do eksperymentalnych metod leczenia. W tym okresie aklimatyzacji opiekunowie mogą narażać szczury na szereg zdarzeń, które mogą być bardzo zmienne zarówno pod względem formy, jak i czasu trwania. Może to obejmować bierną ekspozycję na ludzi, dotykanie, podnoszenie, pieszczoty, trzymanie, mówienie i oferowanie smakołyków. Chociaż doniesiono, że kombinacje takich procedur zmniejszają strach przed ludźmi6, nie jest jasne, które konkretne praktyki są najbardziej skuteczne w przypadku zapracowanych opiekunów zwierząt. Istnieją doniesienia, że szczury mogą mieć albo niepożądane reakcje, albo przynajmniej nie mieć żadnej pozytywnej reakcji, na niektóre z tych indywidualnych technik2,7,8,9.

Przeciwnie, liczne dowody potwierdzają wniosek, że łaskotanie, technika obchodzenia się z dzieckiem, która naśladuje aspekty zabawnego, agresywnego zachowania szczurów, jest bardzo korzystną formą kontaktów społecznych, szczególnie dla młodych szczurów10,11,12,13. Szczury są ssakami bardzo towarzyskimi, co jasno wynika z obserwacji czasu, jaki spędzają razem na zabawie jako młode osobniki14 oraz ich silnej motywacji do ponownego nawiązania i utrzymania kontaktów społecznych z przedstawicielami tego samego gatunku15,16,17. Łaskotanie szczurów czerpie z zabawnej społecznej natury szczurów, aby przekształcić obchodzenie się z nimi w pozytywne doświadczenie. Koncepcja ta została pierwotnie opracowana jako model do badania neurobiologicznych podstaw pozytywnych stanów afektywnych wywoływanych przez zachowania związane z zabawą społeczną7. Od tego czasu łaskotanie szczurów zostało wykorzystane w ponad 56 różnych eksperymentach, z których 22 porównywały łaskotanie z innymi technikami obchodzenia się z nim13.

Nieokrzesana zabawa szczura charakteryzuje się dwoma kluczowymi zachowaniami: "kontakt grzbietowy" i "szpilka" (Rysunek 1)18,19. Podczas ostrej zabawy szczur rozpoczyna zabawę, nawiązując kontakt grzbietowy z karkiem partnera. Odbiorca odpowiada, zwijając się na wznak i zostaje przygwożdżony przez inicjatora stojącego powyżej19. Gra toczy się dalej, a szczury na zmianę znajdują się w każdej pozycji, na górze i na dole18. Opiekunowie są w stanie naśladować dwa kluczowe elementy zabawy w stylu szorstkim, naprzemiennie dotykając karku szczura (kontakt grzbietowy) i powierzchni brzusznej (szpilka) za pomocą energicznych, szybkich ruchów palców podobnych do tych, których używa się podczas łaskotania dziecka. Oczywiście łaskotanie nie jest dokładną kopią szczurzej zabawy, ponieważ szczury nie mogą przygwoździć ludzkiej ręki podczas łaskotania. Rzeczywiście, poziom zaangażowania poszczególnych osób w brutalną zabawę i łaskotanie może się różnić20,21. Mimo to wydaje się, że łaskotanie wywołuje te same mechanizmy nagrody, co szorstka zabawa wśród przedstawicieli tego samego gatunku. Łaskotanie jest aktywnie zabiegane przez zwierzęta i może służyć jako nagroda za instrumentalne uczenie się, dostarczając dowodów na to, że łaskotanie jest znacznie satysfakcjonujące dla młodych szczurów7,11,12,13,22. Mimo, że doniesiono również, że szczury uczą się zadania instrumentalnego w zamian za delikatne głaskanie jako nagrodę, szybciej podchodziły do ręki osoby oferującej łaskotanie w porównaniu do głaskania7.

Szpilki używane do łaskotania mogą wydawać się podobne do typowych procedur krępowania, ale istnieją dowody na to, że szczury inaczej postrzegają te rodzaje obchodzenia się. Kiedy szczury są wielokrotnie krępowane, na przykład podczas procedury wstrzykiwania, wydzielają nadmierną ilość porfiryn, co powoduje chromodacryorrhea ("czerwone łzy")8. Chromodacryorrhea występuje w odpowiedzi na ostre czynniki stresogenne i powoduje, że skóra i sierść wokół oczu i nosa stają się zabarwione na czerwonawy kolor23. Wielokrotnie przytrzymywane i krępowane na plecach jak w szpilce, szczury wykazywały mniejszy pociąg do ludzi niż wtedy, gdy były łaskotane12. Wyniki te sugerują, że powtarzające się krótkie krępowanie i zwalnianie podczas łaskotania są odbierane inaczej niż powściągliwość bez zabawy. Tak więc dokładna technika stosowana w łaskotaniu ma ważne implikacje dla generowania pozytywnego stanu afektywnego, a nie przyczynia się do radzenia sobie ze stresem.

Monitorowanie wpływu łaskotania na stan afektywny szczura można łatwo osiągnąć, zwracając uwagę na wokalizacje szczurów. Szczury zazwyczaj wytwarzają dwie kategorie wokalizacji ultradźwiękowych (USV), przy około 22 kHz i 50 kHz, oprócz wokalizacji słyszalnych. USV 22 kHz zwykle występują, gdy przewidywane są zdarzenia awersyjne i towarzyszy im podwyższona aktywność cholinergiczna mózgu24. Dlatego uważa się, że USV 22 kHz wskazują na negatywny afektywny stan lęku. USV 50 kHz, zwłaszcza typu "tryl" z modulacją częstotliwości (Rysunek 2), są na ogół związane z sytuacjami i bodźcami nagradzającymi i towarzyszy im zwiększona aktywność dopaminergiczna mózgu24,25. W związku z tym uważa się, że wyrażenie licznych USV 50 kHz odzwierciedla pozytywny stan afektywny24,26,27,28. Wreszcie, słyszalne wokalizacje są zwykle kojarzone, a zatem używane jako markery fizycznego bólu i dyskomfortu. Zróżnicowana produkcja tych trzech form wokalizacji stanowi zatem wiarygodny zapis zmian w stanie afektywnym szczurów26. Szczury wytwarzają USV o częstotliwości około 22 kHz podczas ekspozycji na drapieżniki, ekspozycji na bolesne bodźce, takie jak wstrząs stopy i walki między samcami28. Doniesiono również, że głaskanie wywołuje wiele USV 22 kHz u naiwnych szczurów, co wskazuje na negatywny afekt2. W przeciwieństwie do tego, gdy są łaskotane przez ludzi, na przykład gdy są zaangażowane w brutalną zabawę z innymi szczurami, szczury wytwarzają liczne USV o częstotliwości 50 kHz. Wynika z tego, że częstotliwość USV 50 kHz zapewnia stopniowaną miarę pozytywnej reakcji afektywnej generowanej przez tickling29,30.

Istniejące opisy "jak łaskotać szczura" są raczej krótkie i mogą prowadzić do różnych wyników. Co więcej, początkujący "łaskotki szczurów" mogą być zbyt niepewni w swoich próbach naśladowania brutalnej zabawy. Słowa "łaskotać energicznie" są łatwiejsze do zrozumienia, gdy są demonstrowane wizualnie. Dlatego celem tego artykułu jest przedstawienie szczegółowego opisu i pokazanie, jak naśladować pozytywne, zabawne interakcje szczurów w skuteczny i spójny sposób, który niezawodnie wywołuje pozytywne reakcje u większości szczurów podczas obsługi. Protokół ten opisuje znormalizowaną technikę łaskotania i wyjaśnia, w jaki sposób łaskotanie można połączyć z procedurami, takimi jak krępowanie i wstrzykiwanie, w celu złagodzenia potencjalnie nieprzyjemnych doświadczeń afektywnych.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wszystkie eksperymenty zostały przeprowadzone zgodnie z Przewodnikiem National Institutes of Health dotyczącym opieki i użytkowania zwierząt laboratoryjnych31,32 w obiektach akredytowanych przez AAALAC International i zostały zatwierdzone przez Komitet ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt Uniwersytetu Stanu Waszyngton. Poniższy protokół może narazić personel na alergeny zwierząt laboratoryjnych. Środki ochrony indywidualnej należy nosić zgodnie z zaleceniami instytucjonalnego programu bezpieczeństwa i higieny pracy oraz świadczeniodawców opieki zdrowotnej. Protokół przedstawia procedury w typowych warunkach laboratoryjnych, ale może być dostosowany do stosowania w obiektach o wyższym poziomie bezpieczeństwa biologicznego (np. przy użyciu szafy bezpieczeństwa biologicznego itp.).  

1. Przygotowanie sprzętu i ustawienie

  1. Skrzynka manipulacyjna
    1. Przygotować klatkę domową zwierzęcia lub inne pomieszczenie do łaskotania, zwane dalej boksem manipulacyjnym.
    2. Upewnij się, że skrzynka transportowa jest wystarczająco duża, aby zapewnić miejsce na rękę łaskotki i poruszanie się szczurów, jednocześnie uniemożliwiając im wyskoczenie.
    3. Upewnij się, że skrzynka manipulacyjna jest wolna od przeszkód. Tak więc, jeśli przeprowadzasz łaskotanie w klatce domowej, usuń wszelkie przedmioty, takie jak chaty, patyki do gryzienia i pomarszczony papier.
    4. Wyłóż podłogę skrzyni manipulacyjnej pościelą33. Można użyć innych rodzajów miękkich pokryć podłogowych, ale nie są one tak skuteczne w wywoływaniu wokalizacji 50 kHz13.
    5. Umieść skrzynkę manipulacyjną na stole lub blacie na wysokości, która umożliwia wygodne dotarcie ręki obsługi do całej powierzchni podłogi skrzynki manipulacyjnej.
    6. Zminimalizuj efekt nowości, przyzwyczajając szczury do pudełka do obsługi przed łaskotaniem, jeśli to konieczne.
  2. Timer: Aby wskazać początek i koniec 15-sekundowych walk, umieść urządzenie do pomiaru czasu w pobliżu skrzynki manipulacyjnej, gdzie można je łatwo odczytać. Alternatywnie, sygnał czasu słuchowego może być przesyłany do łaskotania przez słuchawki.
  3. Nagrywanie wokalizacji
    1. Jeśli wokalizacje są nagrywane w celu ilościowego określenia różnych typów wokalizacji do celów badawczych, użyj mikrofonu zdolnego do przechwytywania dźwięku szerokopasmowego o częstotliwości 10-120 kHz, podłączonego do urządzenia zdolnego do nagrywania dźwięków o wysokiej częstotliwości.
    2. Zawieś lub przymocuj mikrofon na górze lub z boku pudełka, wystarczająco nisko, aby wyraźnie wykrywać rozmowy i uniknąć pomylenia z odgłosami szczurów w pobliskich klatkach, ale poza fizycznym zasięgiem szczurów.
    3. Jeśli wokalizacje muszą być monitorowane tylko w celu potwierdzenia prawidłowej techniki łaskotania, użyj wykrywacza nietoperzy i ustaw go z boku pudełka. Jeśli używasz prostego detektora heterodynowego, ustaw urządzenie na 50 kHz.
  4. Rękawice laboratoryjne: Podczas łaskotania używaj gołej lub cienkiej dłoni w rękawiczce. Technika łaskotania została opracowana przy użyciu gołej ręki. Jednak ręka w cienkiej rękawiczce jest również skuteczna w wywoływaniu zabawnych zachowań i produkcji USV 50 kHz, jednocześnie pozwalając treserowi wyczuć siłę nacisku wywieranego na ciało szczura i poczuć reakcje szczura przez rękawicę.

2. Procedura łaskotania

  1. W razie potrzeby załóż rękawice laboratoryjne. Przynieś klatkę domową do stołu lub stołu warsztatowego. Delikatnie przenieś szczura do pudełka manipulacyjnego, jeśli łaskotanie nie odbywa się w klatce domowej. Uruchom minutnik i nagrywanie dźwięku, jeśli to konieczne.
  2. Aby zapewnić konsekwentną aplikację, naprzemiennie przez 15 s kontaktu z dłonią i 15 s po odłączeniu od kontaktu, łącznie przez 2 minuty. Stwierdzono, że ten czas interakcji jest wystarczający do zwiększenia atrakcyjności szczurów dla ludzi11.
    1. Aby rozpocząć sesję łaskotania od zwolnienia na 15 sekund, umieść rękę nieruchomo po jednej stronie pudełka do przenoszenia. Obecność dłoni pozwala szczurom na nakłanianie do interakcji poprzez kierowanie liźnięć i lekkich szczypania (skubnięć) w kierunku dłoni, wskazując na zainteresowanie szczura interakcją22. Kiedy tak się stanie, odsuń rękę od szczura, co może skłonić szczura do żartobliwego gonienia ręki. Alternatywnie, pozostaw rękę wyjętą z pudełka podczas zwalniania po 15 sekundach.
    2. Po uwolnieniu z 15 sekundami łaskotania rozpocznij interakcję od kontaktu grzbietowego (2-4 s). Jedną ręką energicznie dotknij opuszkami palców karku szczura (grzbietowej powierzchni szyi), wykonując szybkie ruchy palców, jak to zwykle bywa w przypadku łaskotania ludzi. Unikaj kontaktu z zadem, ponieważ ten obszar ciała jest celem podczas agresywnych spotkań34.
    3. Podążaj za stykiem grzbietowym za pomocą szpilki. Umieść kciuk i środkowy palec pod przednimi łapami szczura; Podnieś szczura na tyle wysoko, aby umożliwić szybkie obrócenie szczura na grzbiet, upewniając się, że ogon nie jest załamany.
      UWAGA: Pomocne może być lekkie popchnięcie grzbietu szczura małym palcem podczas obracania szczura na plecy.
    4. Trzymaj szczura luźno, ale mocno, bądź asertywny, ale nie natarczywy. Gdy szczur znajdzie się na plecach na podłodze, przytrzymaj ciało luźno, poruszając palcami szybko i energicznie, ale delikatnie po brzuchu, jak to jest powszechnie stosowane w łaskotaniu ludzi.
    5. Mimo że stymulacja jest szybka i asertywna, utrzymuj szybkie przypinanie (2-4 s/pin), aby zminimalizować negatywne reakcje. Pozwól szczurowi wyprostować się i szybko podążaj za nim z kontaktem grzbietowym.
    6. Kontynuuj naprzemiennie między stykami grzbietowymi a szpilkami. Średnio powinno być od 4 do 5 pinów/15 s35.
    7. Nie podnoś szczura obiema rękami. Podczas 15 s łaskotania zawsze utrzymuj palce w ruchu i w kontakcie z ciałem szczura, nawet w przejściach między szpilkami i kontaktami grzbietowymi.
    8. Wykonaj trzy dodatkowe 15-sekundowe łaskotki i 15-sekundowe uwolnienia, w sumie przez 2 minuty.
  3. Jeśli używasz pudełka do przenoszenia, przywróć szczura do jego klatki domowej. Jeśli korzystasz z klatki domowej, umieść przedmioty wzbogacające z powrotem w klatce. Wyczyść pudełko manipulacyjne ręcznikami papierowymi, aby usunąć kał i mocz, które nie zostały wchłonięte przez pościel.
  4. W razie potrzeby powtórz z następną klatką szczurów.

3. Łaskotanie wielu szczurów jednocześnie

  1. Szczury mogą być łaskotane jako group36. Jeśli czas obchodzenia się z szczurem nie jest istotny, naprzemiennie łaskotaj każdego szczura przez 15 sekund. W razie potrzeby czas trwania sesji łaskotania można wydłużyć powyżej 2 minut, tak aby każdy szczur otrzymał cztery napady łaskotania w dłoń przeplatane uwalnianiem.
  2. Jeśli czas obsługi jest istotny dla wyników badań, należy zastosować następujące procedury:
    1. W przypadku par łaskotaj jednego szczura przez 15 sekund, a następnie natychmiast łaskotaj drugiego szczura przez następne 15 sekund (tj. podczas wypuszczania pierwszego szczura) i tak dalej. Łaskotka nie ma okresu odpoczynku.
    2. W przypadku trojaczków należy zastosować procedurę opisaną w ppkt 3.2.1 w celu łaskotania dwóch szczurów i łaskotania trzeciego w tym samym czasie, co jeden z pozostałych, używając drugiej ręki.
    3. W przypadku grup składających się z 4 lub więcej szczurów łaskocz każdego szczura lub parę szczurów przez 15 sekund. W razie potrzeby czas trwania sesji łaskotania można przedłużyć powyżej 2 minut.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Czynniki wpływające lub potencjalnie wpływające na reakcje na łaskotanie są podsumowane w Tabeli 1. Pozytywne wyniki łaskotania szczurów zostały wskazane przez wiele miar dobrostanu szczurów i pozytywnego wpływu. Typowe wyniki obejmują zwiększoną produkcję USV 50 kHz, lepsze zachowanie podczas zbliżania i zwiększoną łatwość obsługi. Zgłoszone efekty łaskotania szczurów na poziomie genetycznym i komórkowym obejmują zmienioną ekspresję genów w podwzgórzu37 oraz zwiększoną neurogenezę w zakręcie zębatym hipokampa38,39. Odnotowano również wyniki wskazujące na zmniejszony uogólniony lęk i strach przed ludźmi, takie jak zmniejszone opóźnienie podejścia w 9 różnych eksperymentach13, mniej zamrożenia po warunkowaniu strachu40,41, oraz zwiększone wejścia na środek areny na otwartym polu przez indywidualnie trzymane szczury36. Aby uzyskać więcej informacji, zobacz LaFollette et al., którzy przedstawiają systematyczny przegląd literatury dotyczącej łaskotania, który identyfikuje 22 raporty badające wyniki łaskotania szczurów w porównaniu z innymi technikami13.

Następnie, przedstawione są konkretne przykłady wyników, które można uzyskać, gdy technika łaskotania jest połączona z procedurami wstrzyknięć dootrzewnowych (IP).

Szczury Sprague-Dawley (samce; 85-94 dni życia; n = 48) łaskotane przez 2 minuty bezpośrednio przed i po wstrzyknięciu soli fizjologicznej IP codziennie przez 10 dni, zwłaszcza w połączeniu z doświadczeniem łaskotania młodocianych (2 min/dzień od 25-45 dnia życia), wytworzyły więcej 50-kHz USV tuż przed (GLM ANOVA, F3, 44 = 9,59, p < 0,0001; Rysunek 3A) i tuż po (F3, 44 = 8,74, p = 0,0001; Rysunek 3B) iniekcji (Tukey-Kramer, p < 0,05) w porównaniu ze szczurami narażonymi na pasywne działanie ręki10. Podczas faktycznego krótkiego dostarczania iniekcji produkcja USV 50 kHz została ograniczona (średnio ± SE, 15 ± 1,4 USV/min), a obchodzenie się z leczeniem nie miało wpływu na ich szybkość10. Stwierdzono, że łaskotanie, stosowane zarówno przed, jak i po zabiegu iniekcji, wywoływało pozytywny stan afektywny, który łagodził awersję do zabiegu, szczególnie u tych, którzy byli narażeni na łaskotanie jako młodociani.

Aby dowiedzieć się, czy łaskotanie byłoby skuteczne, gdyby zostało zredukowane do okresu przed lub po wstrzyknięciu, a nie do obu, a jeśli tak, to który czas byłby lepszy, porównano reakcje szczurów na łaskotanie przed, po i przed-po wstrzyknięciu. Wskaźniki USV 50 kHz i połączeń dźwiękowych zostały zmierzone jako wskaźniki odpowiednio pozytywnego i negatywnego wpływu12. Szczury Sprague-Dawley (samce; w wieku 32-41 dni; n = 96) były albo krępowane i podawane im codziennie wstrzykiwanie soli fizjologicznej (INJ), albo skrępowane bez otrzymania zastrzyku (kontrola, CON) i wystawione na jeden z następujących zabiegów: brak łaskotania, szczury nie były dotykane przed i po zabiegu krępowania (TN); łaskotany przez 2 minuty tuż przed (TB), po (TA) lub przed i po (TBA) powściągliwości12. W ciągu 2 minut przed unieruchomieniem szczury z zabiegów, które otrzymały łaskotanie przed unieruchomieniem (TB, TBA), wytworzyły najwięcej USV 50 kHz (GLMM ANOVA, F3,88 = 49,19, p < 0,0001; Rysunek 3C). Szczury TA i TN nie różniły się pod względem częstości występowania USV wytwarzanych przed procedurą ograniczenia. Podczas zabiegu każdy szczur, który otrzymał łaskotanie (TA, TB, TBA) wytwarzał więcej USV 50 kHz niż te, które nie były łaskotane (TN; F3,88 = 50,67, p < 0,0001; Rysunek 3D). Wśród szczurów łaskotanych, te, które otrzymały łaskotanie przed zabiegiem (TB, TBA), wytwarzały więcej USV 50 kHz podczas krępowania w porównaniu z tymi, które były łaskotane po zabiegu (TA; p < 0,05). W okresie 2 minut po zabiegu szczury we wszystkich łaskotanych grupach (TA, TB, TBA) wytwarzały więcej USV 50 kHz niż te, które nie były łaskotane (TN; F3,88 = 53,64, p < 0,0001; Rysunek 3E). Ponadto podczas zabiegu szczury łaskotane przed unieruchomieniem (TB, TBA) wydawały mniej słyszalnych odgłosów w porównaniu ze szczurami, które nie otrzymywały łaskotania (TN), podczas gdy szczury łaskotane później (TA) nie różniły się od szczurów w innych grupach (F3,88 = 3,67, p = 0,02; Rysunek 3F). Wyniki pokazują, że łaskotanie szczurów przed skrępowaniem ich do wstrzyknięcia IP powodowało oznaki większego pozytywnego wpływu w okresach przed, w trakcie i po zabiegu niż łaskotanie tylko po powściągliwości12.

Opiekunowie stosowali jeden z następujących zabiegów na szczury (samce Sprague-Dawley; n = 32) od 57 do 74 dnia życia: (1) Minimalne obchodzenie się raz w tygodniu przy zmianie klatki; (2) Narażenie na bierną rękę przez 2 minuty dziennie; (3) 2 minuty łaskotania każdego dnia, aby naśladować zabawę towarzyską; (4) 2 minuty dziennie unieruchamiania na grzbiecie szczura, symulując bezzwrotne przypinanie przez dominujący11. W ciągu minuty po wstrzyknięciu IP, szczury z terapii Tickled i Passive spędzały więcej czasu na odchowywaniu się w przedniej połowie klatki, blisko miejsca, w którym stał badacz, w porównaniu do szczurów z leczenia Minimal i Restraint (GLM ANOVA, F3, 27 = 5,70, p = 0,004; Rysunek 3G). Dodatkowo, łaskotane szczury wydały więcej USV 50 kHz niż szczury w leczeniu pasywnym, gdy były wystawione na kontakt ze znaną lub nieznaną ręką przez 3 minuty w teście podejścia człowieka (średnia przekształcona logarytmicznie ± SE wywołań/min, Minimalna: 0,7 ± 0,26, Pasywna: 0,6 ± 0,18, Łaskotana: 1,8 ± 0,30, Powściągliwość: 1,4 ± 0,28; F3,28 = 4,04, p = 0,02). Tak więc zwykła obecność biernej ręki pomogła przyzwyczaić szczury do ludzi w porównaniu z minimalnym obchodzeniem się, ale łaskotanie było najskuteczniejszą metodą wywoływania pozytywnej reakcji na ludzi11.

figure-results-1
Rysunek 1: Szczur podczas brutalnej zabawy. (A) Kontakt grzbietowy; (B) Klasa Pin18. Kliknij tutaj, aby zobaczyć większą wersję tego rysunku.

figure-results-2
Ryc. 2: 50-kHzowe wokalizacje ultradźwiękowe typu "trylowego" modulowanego częstotliwościowo. Pięć wokalizacji trylowych zostało wytworzonych w ciągu 1 s przez szczura podczas łaskotania. Linie poziome o częstotliwości 17, 25 i 70 kHz zostały wytworzone przez sprzęt elektroniczny znajdujący się w pomieszczeniu (np. komputer, mikrofon, kamera).

figure-results-3
Rycina 3: Reakcje szczurów narażonych na łaskotanie przed lub w połączeniu z procedurami eksperymentalnymi, takimi jak wstrzyknięcia dootrzewnowe (IP). Szybkość (średnia ± wywołaniach SE/min) USV 50 kHz wytwarzanych (A) przed i (B) po zabiegu wstrzyknięcia przez dorosłe samce szczurów narażonych na minimalne obchodzenie się z nimi (M) lub łaskotanie (T) jako młode osobniki oraz bierną rękę (P) lub łaskotanie (T) bezpośrednio przed i po wstrzyknięciu (dające cztery kombinacje dawkowania: M-P, T-P, M-T, T-T); od Cloutier i wsp.10. Szybkość 50-kHz USV (średnia ± SE wywołani/min) wytwarzanych (C) przed, (D) w trakcie i (E) po unieruchomieniu (z lub bez wstrzyknięcia IP) raz dziennie przez 10 kolejnych dni przez młode samce szczurów, które nie otrzymały łaskotania (TN) ani łaskotania przed (TB), po (TA), lub zarówno przed, jak i po (TBA) zabiegu; oraz (F) częstotliwość sygnałów dźwiękowych wydawanych podczas krępowania; od Cloutier i wsp.12. (G) Czas (średnia ± SE s) hodowli w pobliżu badacza w ciągu 1 minuty po wstrzyknięciu IP przez samce szczurów narażonych na minimalne, pasywne, łaskotanie lub ograniczanie przez opiekunów; od Cloutier i wsp.11. Słupki z różnymi literami (a, b, c) wskazują różnice w porównaniach parami (Tukey-Kramer, p < 0,05). Kliknij tutaj, aby zobaczyć większą wersję tego rysunku.

czynnikEfektOdwołania
nieodłączny
wiekBrak różnicy w wokalizacjach ultradźwiękowych (USV) 50 kHz między szczurami w wieku 24-44 i 89-92 dni18, 29, 42
Zmniejszenie USV 50 kHz dla szczurów z 71 dni do 148 dni29
17-dniowe samce wykonały znacznie więcej USV 50 kHz niż 7-9 miesięczne samceRozdział 43
Szczury łaskotane zarówno jako młode, jak i dorosłe wykazywały najbardziej pozytywne wyniki, w porównaniu do szczurów łaskotanych tylko jako młode lub dorosłe.10
płećSamce szczurów wytwarzały więcej USV 50 kHz w wieku 44 i 71 dni, ale samice produkowały więcej USV 50 kHz w wieku 148 dni29
Samce szczurów wytwarzały więcej USV 50 kHz niż samice po 44 i 58 dniach.Rozdział 43
Brak różnic płci w USV 50 kHz u 96 młodych szczurów Long-Evans i 52 młodych szczurów Wistar42, 44
Samice młodocianych szczurów rasy Wistar wyprodukowały więcej USV 22 kHz niż samceRozdział 44
Różnice międzyosobniczeSzczury, które wydawały więcej 50-kHz USV, wykazywały krótszy czas zbliżania się do samodzielnego łaskotania, zwiększoną stronniczość pozytywnej oceny po łaskotaniu i zwiększoną proliferację komórek hipokampa po łaskotaniu27, 37, 45
Więcej zabawnych szczurów wyprodukowało więcej USV 50 kHzRozdział 43
naprężaćNie podano, ale niepotwierdzone dowody sugerują, że szczury z różnych szczepów i hodowców różnią się reakcją na łaskotanie. Linie szczurów rozchodziły się, gdy zostały wybrane przy wysokiej i niskiej szybkości USV 50 kHz w odpowiedzi na łaskotanie.22, 26, 42, 46
Wcześniejsze doświadczenie z łaskotaniemZwiększona produkcja ultradźwiękowych USV 50 kHz12
Zewnętrzne
pościelSzczury wytwarzały więcej USV 50 kHz, gdy były łaskotane na znajomym posłaniu, niż bez pościeli33 Rozdział 33
stresŁaskotanie szczurów 1 godzina, ale nie 23 godziny, po zmniejszeniu stresu związanego z ograniczeniami produkcji USV 50 kHz47, 48
CzasŁaskotanie szczurów przed wstrzyknięciem było bardziej skuteczne w zwiększaniu USV 50 kHz niż łaskotanie po wstrzyknięciu12
Płeć prezenteraNie znaleziono efektuPanksepp, J. 2014, Dane niepublikowane
Zaznajomienie szczura z przewodnikiemSzczury produkowały więcej 50-kHz USV i spędzały więcej czasu w pobliżu chowańca niż nieznanego łaskotnika11
Doświadczenie w łaskotaniu przewodnika / wigor łaskotania przez przewodnikaWpłynęło na produkcję USV 50 kHz, ale nie wpłynęło na preferencje i zachowanie podejściaCloutier, S. 2011, Dane niepublikowane
Czas trwania szpilek według prowadzącego / częstotliwość naprzemienności między stykami grzbietowymi a szpilkamiNiższa częstotliwość skubania (interpretowana jako nakłanianie do zabawy) była skierowana do ręki nakładającej 15-sekundowe szpilki (powściągliwość) niż ręka dająca łaskotki z wieloma kontaktami grzbietowymi i szpilkami na 15 s11
Substancje zapachowe (np. perfumy, szampony, kremy do golenia) używane przez osobę obsługującąNie zgłoszono
Wielkość grupy społecznejW większości eksperymentów indywidualne mieszkania zwiększały pozytywne reakcje na łaskotanie w porównaniu do grupowych. Łaskotanie szczurów trzymanych w grupach z kolegami z klatki w klatce domowej zmniejszyło tę różnicę7, 22, 27, 36
Natężenie światłaŁaskotanie przy 1000 luksach zredukowało USV 50 kHz w porównaniu do 25 luksów.Rozdział 43
hałasNie zgłoszono
Czyszczenie klatki przed łaskotaniemIndukowana produkcja USV 22 kHz u niektórych szczurów12
Pora dniaBrak wpływu na produkcję USV 50 kHz, gdy jest wykonywana na początku lub na końcu okresu światła. Łaskotanie szczurów na początku/końcu okresu światła i w środku okresu jasnego lub ciemnego nie zostało jeszcze porównaneCloutier, S. 2011, Dane niepublikowane

Tabela 1: Lista czynników wpływających lub potencjalnie wpływających na reakcje szczurów na łaskotanie, zabawną technikę obchodzenia się z nim, mającą na celu naśladowanie szczurzej zabawy

.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Protokół ten opisuje technikę łaskotania szczurów, zabawną technikę obchodzenia się z nim, naśladującą zachowanie szczura podczas zabawy, która jest skuteczna w generowaniu wokalizacji wskazujących na pozytywny afekt i zwiększaniu zachowania zbliżonego, gdy szczury są traktowane w celu wspólnej hodowli lub procedur medycznych i badawczych, takich jak wstrzykiwanie IP.

Zaproponowano, aby zabawa społeczna, typowo pozytywna forma kontaktu społecznego, pomagała w kalibracji reakcji emocjonalnych na przerażające sytuacje42,43 i generowała odporność na lęk i depresję44. Naśladując zabawę społeczną szczura, łaskotanie wydaje się mieć podobnie korzystne efekty7. Tak więc, aby zastosowanie łaskotania było skuteczne w wywoływaniu pozytywnych stanów afektywnych, ważne jest, aby pamiętać, że ręka ma działać jako "partner do zabawy" podczas łaskotania. Ręka jest atrakcyjna, ponieważ symuluje zachowania, których szczury oczekują i lubią od innego szczura podczas ostrej gry. W związku z tym podnoszenie i trzymanie szczura obiema rękami nie naśladuje zabawy szczura i może nie mieć takiego samego efektu. W rzeczywistości szczury laboratoryjne nauczą się unikać niezabawnych ograniczeń, w których treser trzyma je jedną ręką, a głaszczedrugą ręką. Podczas łaskotania szczurów ważne jest również, aby poruszać ręką pewnie i asertywnie, będąc jednocześnie żywym i zabawnym. Utrzymywanie szybkiego przypinania (2-4 s/pin) powinno zminimalizować negatywne reakcje, ponieważ w brutalnej zabawie między szczurami, powtarzające się przypinanie prowadzi do wypowiadania USV22 kHz 18.

Mimo że młode szczury są bardziej zabawne i wykazują silniejsze reakcje na łaskotanie niż dorosłe szczury18, łaskotanie w wieku dorosłym ma również korzyści10. Stwierdzonorównież, że łaskotanie szczurów w młodości przynosi korzyści w późniejszym życiu, co sugeruje, że szczury doświadczają przedłużonego pozytywnego wpływu na ich emocjonalną reakcję na obecność człowieka. Różnice płci w odpowiedzi na łaskotanie są niespójne, z doniesieniami o braku różnic płci u młodych szczurów46,47, młodocianych samców wytwarzających więcej wokalizacji 50 kHz i mniej wokalizacji 22 kHz niż młode samice 29,48,39 i starszych samic wytwarzających więcej wokalizacji 50 kHz niż samce w tym samym wieku 29, podobnie jak wyniki dotyczące zabawy społecznej49.

Skuteczność techniki łaskotania można ocenić za pomocą wzorców ruchowych szczurów i wokalizacji. Szczury będą skubać i lizać palce przewodnika podczas 15-sekundowych okresów uwalniania po łaskotaniu11. Skubania to lekkie, nieszkodliwe ugryzienia, które zostały opisane jako zachowania związane z nakłanianiem do zabawy u młodych szczurów22. Kiedy treser porusza ręką po pudełku manipulacyjnym, szczur będzie za nim podążał i gonił. Szczury, zwłaszcza młode, będą również biegać, biegać wokół pudełka między atakami łaskotania i wykazywać wyraźny wzrost aktywności po napadzie łaskotania, podobnie jak w przypadku biegania, który charakteryzuje ostrą zabawę. Jeśli szczur pozostaje nieruchomy podczas uwalniania, prawdopodobnie konieczne jest dostosowanie techniki łaskotania, takie jak skrócenie czasu trwania szpilki lub danie mniejszej liczby szpilek. Na pierwszą sesję łaskotania najlepiej jest dać szpilki o krótkim czasie trwania. Czas trwania i liczbę szpilek można zwiększyć, gdy szczury przyzwyczają się do łaskotania. Szczury wydają dźwięki USV o częstotliwości 50 kHz, w tym tryle, podczas łaskotania i między napadami łaskotania. Stopniowy wzrost liczby trylów wytwarzanych podczas wypuszczania 15-s można zaobserwować w ciągu pierwszych dwóch tygodni codziennego łaskotania, zanim ustabilizował się47. Różnice indywidualne pozwalają podzielić łaskotane szczury na osoby o wysokiej i niskiej liczbie rozmówców, które różnie reagują na stres, niepokój i anhedonię 46,47,50.

Łaskotanie szczurów było z powodzeniem stosowane w celu wywołania pozytywnego afektu, jak oceniono na podstawie produkcji 50-kHz USV podczas łaskotania13. Ostatnio został wdrożony jako technika zmniejszająca strach przed ludźmi u szczurów i łagodząca ich awersję do procedur medycznych i badawczych, takich jak zastrzyki. Dowody sugerują, że łaskotanie jest skuteczną i praktyczną metodą ograniczania unikania ludzi przez zaledwie 2 minuty dzienniena zwierzę. Biorąc pod uwagę, że młode szczury bawią się razem przez około 60 minut dziennie 51,52,53, łaskotanie przez 2 minuty dziennie jest praktyczne, ale przypuszczalnie zbyt krótkie, aby odtworzyć pełne efekty zabawy społecznej wśród szczurów. Właściciele szczurów domowych, którzy na ogół mają więcej czasu na zajmowanie się swoimi szczurami niż opiekunowie laboratoryjni, mogą zapewnić szczurom dodatkowe łaskotanie, o ile szczury nadal będą reagować pozytywnie. Na podstawie Burgdorf i wsp.44,45, pierwsze 15 minut ostrej zabawy wydaje się być najbardziej pozytywne dla szczurów. Z kolei skuteczniejsze może okazać się łaskotanie szczurów przez okres do 15 minut, zwłaszcza jeśli z uzasadnionego powodu nie mogą być trzymane w grupie społecznej. Jednakże, opierając się na zabawie jako "treningu na nieoczekiwane"38, bardziej zróżnicowana technika niż opisana tutaj może być potrzebna, aby utrzymać zabawę podczas dłuższych sesji łaskotania. Dodatkowe sesje łaskotania każdego dnia mogą być również korzystne, o ile inne biologicznie ważne czynności, takie jak sen i karmienie, nie są zakłócone. Oprócz przyczyniania się do poprawy dobrostanu szczurów laboratoryjnych i domowych, opisana standaryzowana technika łaskotania może być wykorzystana w dalszych badaniach mających na celu zrozumienie wpływu zabawy społecznej i jej składników na rozwój behawioralny, społeczny i mózgu.

Gdy łaskotanie wykonywano w okolicach wstrzyknięcia, szczególnie w połączeniu z wcześniejszymi doświadczeniami z łaskotaniem (kończącymi się 40-50 dni wcześniej), zwiększało to częstotliwość 50 kHz USV przed i po wstrzyknięciu oraz zmniejszało częstotliwość słyszalnych nawoływań podczas wstrzyknięcia10. Wydaje się więc, że łaskotanie złagodziło niekorzystne skutki wstrzyknięć IP, zwłaszcza u szczurów przyzwyczajonych do łaskotania jako młode osobniki10. Mimo że łaskotanie nie zapobiegło dyskomfortowi związanemu z wstrzyknięciem, jak oceniono na podstawie produkcji sygnałów dźwiękowych, zwiększyło ono USV 50 kHz w porównaniu z warunkami kontrolnymi, przed, w trakcie i po procedurze krępowania12. Zgodnie z danymi USV 50 kHz najbardziej efektywnym momentem stosowania łaskotania był okres tuż przed procedurą krępowania, a nie po niej12. Łaskotanie szczurów przed wstrzyknięciem miało efekt przeniesienia, który nasilał pozytywny wpływ podczas zabiegu12. Łaskotanie może zatem zminimalizować potencjalny negatywny wpływ rutynowych procedur medycznych na dobrostan i zachowanie szczurów. Konieczne są dalsze badania, aby określić, w jaki sposób technika ta może być skutecznie połączona z innymi technikami iniekcji i innymi procedurami medycznymi/eksperymentalnymi.

Ogólnie rzecz biorąc, wykazaliśmy, że łaskotanie szczurów skutkuje pozytywnymi wynikami, takimi jak zwiększona produkcja USV 50 kHz i zachowanie podczas zbliżania się, a także zmniejszone unikanie ludzi i odporność na obchodzenie się. Zalecamy łaskotanie szczurów jako realną metodę poprawy dobrostanu szczurów i modelowania pozytywnych stanów afektywnych.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy oświadczają, że nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Sylvie Cloutier, Megan LaFollette, Brianna Gaskill i Ruth Newberry pragną poświęcić ten artykuł pamięci Jaaka Pankseppa, naszego ukochanego współautora, który zmarł w końcowej fazie tworzenia tego rękopisu. Z sentymentem wspominamy Jaaka jako "ojca łaskotania szczurów" - jego spostrzeżenia na temat emocji zwierząt stanowią fundamentalną inspirację dla tej pracy. Materiał ten jest częściowo oparty na pracach wspieranych przez Washington State University Veterinary Summer Research Fellowship, Animal Welfare Enhancement Award od Animal Welfare Institute oraz "Grant for Laboratory Animal Science" od American Association for Laboratory Animal Science. Publikacja tego artykułu była sponsorowana przez Petco Animal Supplies, Inc. Chcielibyśmy podziękować Carol Dowell i Purdue University's Laboratory Animal Program za umożliwienie nam łaskotania ich szczurów podczas sesji.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Stół lub stółNie jest zalecana żadna konkretna marka.
Pudełko manipulacyjne (klatka domowa dla szczurów lub inna wybiega)Nie jest zalecana żadna konkretna marka.
Pościel lub inny rodzaj miękkiego pokrowcaNie jest zalecana żadna konkretna marka.
Rękawiczki (cienkie rękawice laboratoryjne)Opcjonalnie.
Urządzenie do pomiaru czasuDeltaworksInterwał czasowy:Czas treningu HIIT, treningów
https://itunes.apple.com/us/app/interval-timer-timing-for-hiit-training-workouts/id406473568?mt=8		Opcjonalnie. Każdy timer będzie dobry, chociaż wygodnie jest używać timera interwałowego, jeśli łaskoczesz wiele szczurów.
Mikrofon ultradźwiękowy, taki jak wykrywacz nietoperzy lub mikrofon USBMagenta Electronics LTDBat4 Bat4 Bat Detector
https://www.magenta2000.co.uk/acatalog/Bat_Detector_Bat4.html		Opcjonalnie. Wykrywacz nietoperzy Magenta jest stosunkowo niedrogi i łatwy w użyciu, ale może wykrywać wokalizacje tylko w jednym zakresie na raz.
DodotronicUltramic 200K
http://www.dodotronic.com/ultramics/?v=7516fd43adaa		opcjonalnie. Ten mikrofon sprawdził się w naszych eksperymentach. Istnieje wiele innych opcji dla mikrofonów ultradźwiękowych.
Oprogramowanie bioakustyczneCIBRASeaWave
http://www-3.unipv.it/cibra/seawave.html		Opcjonalnie. Darmowe oprogramowanie z ograniczonymi możliwościami nagrywania.
CIBRASeaPro
http://www-3.unipv.it/cibra/seapro.html		Opcjonalnie. To oprogramowanie ma szerokie możliwości nagrywania i dobrze sprawdziło się w naszych badaniach. Istnieje wiele innych pakietów oprogramowania, które współpracują z mikrofonami bioakustycznymi.
warsztatowy ,

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Gartner, K., Buttner, D., Dohler, K., Friedel, R., Lindena, J., Trautschold, I. Stress response of rats to handling and experimental procedures. Lab Anim. 14 (3), 267-274 (1980).
  2. Brudzynski, S. M., Ociepa, D. Ultrasonic vocalization of laboratory rats in response to handling and touch. Physiol Behav. 52 (4), 655-660 (1992).
  3. Davis, H., Pérusse, R. Human-based social interaction can reward a rat's behavior. Anim Learn Behav. 16 (1), 89-92 (1988).
  4. Hurst, J. L., West, R. S. Taming anxiety in laboratory mice. Nat Methods. 7 (10), 825(2010).
  5. Sherwin, C. M. The influences of standard laboratory cages on rodents and the validity of research data. Anim Welf. 13 (1), 9-15 (2004).
  6. Maurer, B. M., Doering, D., Scheipl, F., Kuechenhoff, H., Erhard, M. H. Effects of a gentling programme on the behaviour of laboratory rats towards humans. Appl Anim Behav Sci. 114 (3-4), 554-571 (2008).
  7. Burgdorf, J., Panksepp, J. Tickling induces reward in adolescent rats. Physiol Behav. 72 (1-2), 167-173 (2001).
  8. Cloutier, S., Newberry, R. C. Use of a conditioning technique to reduce stress associated with repeated intra-peritoneal injections in laboratory rats. Appl Anim Behav Sci. 112 (1-2), 158-173 (2008).
  9. Werner, C. M., Anderson, D. F. Opportunity for interaction as reinforcement in a T-maze. Pers Soc Psychol Bull. 2 (2), 166-169 (1976).
  10. Cloutier, S., Wahl, K., Baker, C., Newberry, R. C. The social buffering effect of playful handling on responses to repeated intraperitoneal injections in laboratory rats. J Am Assoc Lab Anim Sci. 53 (2), 168-173 (2014).
  11. Cloutier, S., Panksepp, J., Newberry, R. C. Playful handling by caretakers reduces fear of humans in the laboratory rat. Appl Anim Behav Sci. 140 (3-4), 161-171 (2012).
  12. Cloutier, S., Wahl, K. L., Panksepp, J., Newberry, R. C. Playful handling of laboratory rats is more beneficial when applied before than after routine injections. Appl Anim Behav Sci. 164, 81-90 (2015).
  13. LaFollette, M. R., O'Haire, M. E., Cloutier, S., Blankenberger, W. B., Gaskill, B. N. Rat tickling: A systematic review of applications, outcomes, and moderators. PLOS ONE. 12 (4), e0175320(2017).
  14. Lawlor, M. M. Comfortable quarters for rats in research institutions. Comf Quart Lab Anim. , 26-32 (2002).
  15. Hurst, J. L., Barnard, C. J., Nevison, C. M., West, C. D. Housing and welfare in laboratory rats: welfare implications of isolation and social contact among caged males. Anim Welf. 6 (4), 329-347 (1997).
  16. Hurst, J. L., Barnard, C. J., Nevison, C. M., West, C. D. Housing and welfare in laboratory rats: the welfare implications of social isolation and social contact among females. Anim Welf. 7 (2), 121-136 (1998).
  17. Patterson-Kane, E. G., Hunt, M., Harper, D. Rats demand social contact. Anim Welf. 11 (3), 327-332 (2002).
  18. Panksepp, J. Affective neuroscience: The foundations of human and animal emotions. , Oxford University Press. New York, NY. (1998).
  19. Panksepp, J. The ontogeny of play in rats. Dev Psychobiol. 14 (4), 327-332 (1981).
  20. Lampe, J. F., Burman, O., Würbel, H., Melotti, L. Context-dependent individual differences in playfulness in male rats. Dev Psychobiol. 59 (4), 460-472 (2017).
  21. Melotti, L., Bailoo, J. D., Murphy, E., Burman, O., Wurbel, H. Play in rats: association across contexts and types, and analysis of structure. Anim Behav Cogn. 1 (4), 489-501 (2014).
  22. Panksepp, J., Burgdorf, J. 50-kHz chirping (laughter?) in response to conditioned and unconditioned tickle-induced reward in rats: Effects of social housing and genetic variables. Behav Brain Res. 115 (1), 25-38 (2000).
  23. Mason, G. J., Hampton, C., Würbel, H., Wilson, D. Non-invasively assessing disturbance and stress in laboratory rats by scoring chromodacryorrhoea. Altern Lab Anim. 32 (32), 153-159 (2004).
  24. Brudzynski, S. M. Communication of adult rats by ultrasonic vocalization: biological, sociobiological, and neuroscience approaches. ILAR J. 50 (1), 43-50 (2009).
  25. Wintink, A. J., Brudzynski, S. M. The related roles of dopamine and glutamate in the initiation of 50-kHz ultrasonic calls in adult rats. Pharmacol Biochem Behav. 70 (2), 317-323 (2001).
  26. Burgdorf, J., Panksepp, J., Brudzynski, S. M., Kroes, R., Moskal, J. R. Breeding for 50-kHz positive affective vocalization in rats. Behav Genet. 35 (1), 67-72 (2005).
  27. Burgdorf, J., Kroes, R. A., Moskal, J. R., Pfaus, J. G., Brudzynski, S. M., Panksepp, J. Ultrasonic vocalizations of Rats (Rattus norvegicus) during mating, play, and aggression: behavioral concomitants, relationship to reward, and self-administration of playback. J Comp Psychol. 122 (4), 357-367 (2008).
  28. Knutson, B., Burgdorf, J., Panksepp, J. Ultrasonic vocalizations as indices of affective states in rats. Psychol Bull. 128 (6), 961-977 (2002).
  29. Panksepp, J., Burgdorf, J. "Laughing" rats and the evolutionary antecedents of human joy? Physiol Behav. 79 (3), 533-547 (2003).
  30. Burgdorf, J., Panksepp, J. The neurobiology of positive emotions. Neurosci Biobehav Rev. 30 (2), 173-187 (2006).
  31. National Research Council. Guide for the care and use of laboratory animals. , National Academies Press. Washington, D.C. (1996).
  32. National Research Council. Guide for the care and use of laboratory animals. , National Academies Press. Washington, D.C. (2011).
  33. Natusch, C., Schwarting, R. K. W. Using bedding in a test environment critically affects 50-kHz ultrasonic vocalizations in laboratory rats. Pharmacol Biochem Behav. 96 (3), 251-259 (2010).
  34. Pellis, S. M. Agonistic versus amicable targets of attack and defense. Aggress Behav. 14 (2), 85-104 (1988).
  35. Panksepp, J., Yovell, Y. Preclinical modeling of primal emotional affects (SEEKING, PANIC and PLAY): gateways to the development of new treatments for depression. Psychopathology. 47 (6), 383-393 (2014).
  36. Cloutier, S., Baker, C., Wahl, K., Panksepp, J., Newberry, R. C. Playful handling as social enrichment for individually- and group-housed laboratory rats. Appl Anim Behav Sci. 143 (2-4), 85-95 (2013).
  37. Hori, M., Hayashi, T., Nakagawa, Y., Sakamoto, S., Urayama, O., Murakami, K. Positive emotion-specific changes in the gene expression profile of tickled rats. Mol Med Rep. 2 (2), 157-161 (2009).
  38. Yamamuro, T., et al. Neurogenesis in the dentate gyrus of the rat hippocampus enhanced by tickling stimulation with positive emotion. Neurosci Res. 68 (4), 285-289 (2010).
  39. Wohr, M., Schwarting, R. K. W. Affective communication in rodents: ultrasonic vocalizations as a tool for research on emotion and motivation. Cell Tissue Res. 354 (1), 81-97 (2013).
  40. Hori, M., et al. Effects of repeated tickling on conditioned fear and hormonal responses in socially isolated rats. Neurosci Lett. 536 (1), 85-89 (2013).
  41. Hori, M., et al. Tickling during adolescence alters fear-related and cognitive behaviors in rats after prolonged isolation. Physiol Behav. 131, 62-67 (2014).
  42. Pellis, S., Pellis, V. The playful brain: venturing to the limits of neuroscience. , Oneworld Publications. Oxford. (2009).
  43. Spinka, M., Newberry, R. C., Bekoff, M. Mammalian play: training for the Unexpected. Q Rev Biol. 76 (2), 141-168 (2001).
  44. Burgdorf, J., Kroes, R. A., Beinfeld, M. C., Panksepp, J., Moskal, J. R. Uncovering the molecular basis of positive affect using rough-and-tumble play in rats: a role for insulin-like growth factor I. Neuroscience. 168 (3), 769-777 (2010).
  45. Werner, C. M., Anderson, D. F. Opportunity for interaction as reinforcement in a T-maze. Pers Soc Psychol Bull. 2 (2), 166-169 (1976).
  46. Burgdorf, J., et al. The effects of selective breeding for differential rates of 50-kHz ultrasonic vocalizations on emotional behavior in rats. Dev Psychobiol. 51 (1), 34-46 (2009).
  47. Mällo, T., et al. Tickling-induced 50-kHz ultrasonic vocalization is individually stable and predicts behaviour in tests of anxiety and depression in rats. Behav Brain Res. 184 (1), 57-71 (2007).
  48. Panksepp, J., Burgdorf, J. Laughing rats? Playful tickling arouses high-frequency ultrasonic chirping in young rodents. Am J Play. 2 (3), 357-372 (2010).
  49. Pellis, S. M., Field, E. F., Smith, L. K., Pellis, V. C. Multiple differences in the play fighting of male and female rats. Implications for the causes and functions of play. Neurosci Biobehav Rev. 21 (1), 105-120 (1997).
  50. Burgdorf, J., Wood, P. L., Kroes, R. A., Moskal, J. R., Panksepp, J. Neurobiology of 50-kHz ultrasonic vocalizations in rats: electrode mapping, lesion, and pharmacology studies. Behav Brain Res. 182 (2), 274-283 (2007).
  51. Panksepp, J. Rough and tumble play: A fundamental brain process. Parent-Child Play. , 147-184 (1993).
  52. Panksepp, J., Siviy, S., Normansell, L. The psychobiology of play: theoretical and methodological perspectives. Neurosci Biobehav Rev. 8 (4), 465-492 (1984).
  53. Pellis, S. M., Pellis, V. C. Rough-and-tumble play and the development of the social brain. Curr Dir Psychol Sci. 16 (2), 95-98 (2007).

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

askotanie szczur wwokalizacje ultrad wi kowetechnika post powaniadobrostan zwierz tredukcja strachuzabawa w walkkontakt grzbietowyprocedura unieruchomieniarejestracja wokalizacji

Powiązane artykuły