Przedstawiono przygotowanie i przeszczep arkuszy komórek macierzystych pochodzących z tkanki tłuszczowej (ASC) na niedostatecznie zszyte zespolenia jelita grubego w modelu szczurzym. To nowatorskie zastosowanie pokazuje, że arkusze ASC mogą zmniejszyć nieszczelność zespolenia jelita grubego.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Przeszczep arkusza komórek macierzystych pochodzących z tkanki tłuszczowej w celu zmniejszenia przecieku po częściowej kolektomii w modelu szczurzym
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Nieszczelność zespolenia jest katastrofalnym powikłaniem po operacji jelita grubego. Chociaż obecne metody zapobiegania wyciekom mają różny poziom skuteczności klinicznej, do tej pory były to rozwiązania niedoskonałe. Terapia komórkami macierzystymi z wykorzystaniem arkuszy ASC może zapewnić rozwiązanie tego problemu. ASC są uważane za obiecujących kandydatów do wspomagania gojenia tkanek ze względu na ich właściwości troficzne i immunomodulujące. W tym miejscu przedstawiamy metody produkcji arkuszy ASC o dużej gęstości, które są przeszczepiane na zespolenie jelita grubego w modelu szczurzym w celu zmniejszenia przecieku. ASC tworzyły arkusze komórek w termoczułych naczyniach hodowlanych, które można było łatwo odłączyć. W dniu przeszczepienia wykonano częściową kolektomię z 5-szwowym zespoleniem jelita grubego. Zwierzętom natychmiast przeszczepiono 1 arkusz ASC na szczura. Arkusze ASC przylegały samoistnie do zespolenia bez kleju, szwów czy biomateriału. Grupy zwierząt uśmiercano 3 i 7 dni po operacji. W porównaniu ze zwierzętami przeszczepionymi, częstość występowania ropni zespolenia i przecieków była wyższa u zwierząt kontrolnych. W naszym modelu przeszczepienie arkuszy ASC po zespoleniu jelita grubego zakończyło się sukcesem i wiązało się z niższym wskaźnikiem przeciekania.
Wprowadzenie
Częściowa kolektomia z pierwotnym zespoleniem to często wykonywana operacja, która może być wykonana w przypadku wielu chorób wpływających na okrężnicę, takich jak rak jelita grubego, choroba Leśniowskiego-Crohna i zapalenie uchyłków1,2. Najbardziej przerażającym powikłaniem po zespoleniu jelita grubego jest nieszczelność zespolenia3. Chociaż zidentyfikowano kilka czynników ryzyka związanych z nieszczelnościami zespolenia, rozwiązania zapobiegające przeciekom pozostają nieznane4,5.
Komórki zrębowe poc....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Podskórna tkanka tłuszczowa w jamie brzusznej została pobrana od ludzkich dawców za zgodą Komisji Etyki Medycznej (#MEC-2014-092), Erasmus MC University Medical Center, Rotterdam, Holandia. Wszystkie eksperymenty na zwierzętach zostały zatwierdzone przez Komisję Etyczną ds. Doświadczeń na Zwierzętach, Erasmus MC University Medical Center, Rotterdam, Holandia (133-14-01).
1. Izolacja i kultura ASC człowieka
- Przygotować 3 ml pożywki izolacyjnej na 1 g tkanki tłuszczowej. Wymieszaj zmodyfikowaną pożywkę Eagle's Eagle's o niskim poziomie glukozy (LG-DMEM) z 10 g/l albuminy surowicy bydlęcej (BSA) i 1 g/l kolagenazy typu 1.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Schemat blokowy niniejszego badania, przedstawiający zarówno hodowlę arkuszy ASC, jak i procedurę resekcji i anastomozy jelita grubego, został przedstawiony na Rysunku 1. Rysunek 2 przedstawia morfologię mikroskopową arkuszy ASC oraz wygląd makroskopowy arkusza ASC podczas i po oddzieleniu. Rysunek 3 przedstawia poszczególne etapy oddzielania i transplantacji arkuszy ASC. Rysunek.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Nieszczelność zespolenia jest najpoważniejszym zdarzeniem niepożądanym po resekcji jelita grubego z zespoleniem pierwotnym. Nadal brakuje optymalnych technik zapobiegania przerwaniu zespolenia i przeciekaniu. Przeprowadzono lokalne zastosowanie szeregu biomateriałów, uzyskując różne wyniki 25,26,27. Celem terapii komórkowych jest ułatwienie naprawy tkanek poprzez wymianę tkanek lub stymulację miejscowego gojenia poprzez wydziela.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy deklarują, że badanie zostało przeprowadzone przy braku jakichkolwiek powiązań handlowych lub finansowych, które mogłyby być interpretowane jako potencjalny konflikt interesów.
Podziękowania
Autorzy są wdzięczni Prof. Dr. S.E.R. Hoviusowi, Dr. M.A.M. Mureau i wszystkim chirurgom z Oddziału Chirurgii Plastycznej za pobranie podskórnej tkanki tłuszczowej. P. Sukho jest wspierany przez grant z programu The Netherlands Fellowship (NFP-12/435), podczas prowadzenia badania. Y.M. Bastiaansen-Jenniskens jest wspierany przez granty z Dutch Arthritis Foundation (LP11).
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| LG DMEM | Gibco, Technologie życiowe | 22320022 | izolacja i hodowla ASC |
| Kolagenaza typu I | Gibco, Life technologies | 17100-01 | ASC Izolacja |
| Albumina surowicy bydlęcej | Sigma-Aldrich | A9418 | ASC Izolacja |
| Surowica bydlęca | płodu Gibco, Life technologies | 10270-106 | FBS, izolacja i hodowla ASC |
| 3% octu kwas z błękitem metylenowym | Stemcell Technologies | 7060 | Izolacja ASC |
| Gentamycyna | Gibco, Life technologies | 15750-037 | Izolacja i hodowla ASC |
| Amfonicyna B | Gibco, Life technologies | 15290-018 | do izolacji i hodowli ASC |
| (Gallenkamp Environmental Shaker Model 10X 400) | Akribis Scientific | F240 | Izolacja |
| ASCWirówka | Hettichlab | Rotina380 | ASC izolacja i hodowla |
| Bufor fosforanowy sól fizjologiczna | Gibco, Life technologies | 14190-094 | PBS, izolacja i hodowla ASC |
| Kwas askorbinowy-2-fosforan | Sigma-Aldrich | A8960 | Izolacja i hodowla ASC |
| Ludzki rekombinowany czynnik wzrostu fibroblastów 2 | AbD Serotec | AF-100-15 | FGF2, izolacja i hodowla ASC |
| Trypsyna EDTA | Gibco, Life technologies | 25200-056 | Kultura ASC |
| Dimetylosulfotlenek | Sigma-Aldrich | D2650-5x | DMSO, ASC |
| zamrażanie Termoczułe naczynia hodowlane | Nunc Thermo scientific | 174904 | ASC |
| Niewchłanialny jedwab pleciony 4/0 | B Braun | 21151042 | surgery |
| Niewchłanialna żyłka poliamid 8/0 | B Braun | G1118170 | chirurgii |
| Wchłanialny pleciony kwas poliglikolowy 5/0 | B Braun | C1048207 | chirurgii |
Bibliografia
- Kawahara, H., et al. Single-incision laparoscopic right colectomy for recurrent Crohn's disease. Hepatogastroenterology. 57 (102-103), 1170-1172 (2010).
- Saia, M., Buja, A., Mantoan, D., Agresta, F., Baldo, V. Colon Cancer Surger....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
Przeglądaj więcej artykułów
