Neowaskularyzacja tęczówki wywołana nakłuciem jako mysi model rubeozy tęczówki

Podsumowanie

Neowaskularyzacja tęczówki, częste powikłanie choroby niedokrwiennej siatkówki, może prowadzić do zagrażającej wzrokowi jaskry neowaskularnej. W tym miejscu opisujemy mysi protokół indukowania eksperymentalnej neowaskularyzacji tęczówki, który może być wykorzystany do nieinwazyjnej oceny substancji modulujących angiogenezę.

Streszczenie

Opisujemy model neowaskularyzacji tęczówki wywołanej nakłuciem jako ogólny model do nieinwazyjnej oceny angiogenezy. Model jest również przydatny w zwalczaniu jaskry neowaskularnej, zagrażającego wzrokowi powikłania retinopatii cukrzycowej. Metoda ta opiera się na indukcji odpowiedzi naczyniowej tęczówki poprzez serię samouszczelniających się nakłuć błony naczyniowej oka u myszy BALB / c i wykorzystuje dojrzewanie naczyń naczyniowych oka myszy po porodzie. Młode myszy przechodzą nakłucie błony naczyniowej oka od 12,5 dnia po urodzeniu, kiedy młode naturalnie otwierają oczy, do 24,5 dnia po urodzeniu. Ze względu na przezroczystość rogówki, unaczynienie tęczówki można łatwo analizować w czasie za pomocą nieinwazyjnych metod in vivo. Co więcej, półprzezroczysta tęczówka myszy BALB/c może być montowana płasko w celu szczegółowej analizy immunohistologicznej przy minimalnym niespecyficznym barwieniu tła. W tym modelu angiogeneza jest napędzana głównie przez układ zapalny i aktywujący plazminogen. Model indukowany nakłuciem jest pierwszym, który indukuje neowaskularyzację tęczówki u małych gryzoni i ma tę zaletę, że umożliwia bezpośrednią, nieinwazyjną analizę procesu angiogennego in vivo. Co więcej, model może być łączony z substancjami modulującymi angiogenność, co podkreśla jego potencjał w badaniach nad angiogenezą z perspektywy in vivo.

Wprowadzenie

Tęczówka, wraz z ciałem rzęskowym i naczyniówką, obejmuje błonę naczyniową oka, która jest najbardziej unaczynioną tkanką oka. Unaczynienie tęczówki jest niezbędne do utrzymania homeostazy w przedniej komorze oka. W wyniku licznych połączeń zespoleniowych między tętnicami i żyłami, naczynia krwionośne tęczówki dostarczają składniki odżywcze i tlen nie tylko do samej tęczówki, ale do całego przedniego odcinka oka¹.

Tworzenie nowych naczyń krwionośnych, czyli angiogeneza z wcześniej istniejących, ma fundamentalne znaczenie w procesach fizjologicznych, takich jak rozwój i gojenie się ran². Angiog....

Protokół

BALB/c mysie szczenięta obu płci zostały użyte zgodnie z oświadczeniem o wykorzystaniu zwierząt w badaniach okulistycznych i wzrokowych, a protokoły zostały zatwierdzone przez sztokholmski Komitet ds. Etycznych Badań nad Zwierzętami. Myszy były trzymane w miotach, razem z matką karmiącą, z 12-godzinnym cyklem dnia i nocy, swobodnym dostępem do pożywienia i wody oraz monitorowane codziennie.

UWAGA: Podczas zabiegu chirurgicznego, myszy były znieczulone lotnym izofluranem. Podczas zabiegów okulistycznych odradza się stosowanie maści do oczu, ponieważ mogą one zakłócać działanie zabiegów i stosowanych substancji. W razie potrzeby, aby zapobiec....

Wyniki

Szczury myszy albinos BALB/c w wieku P12,5 poddano nakłuciom błony naczyniowej, powtarzanym co czwarty dzień (dzień eksperymentalny 0, 4, 8, 12), aż do dnia P24,5. W dniu P27,5 myszy zostały uśmiercone, a tęczówki ostrożnie wypreparowane (dzień eksperymentalny 15). Przed każdą serią nakłuć w każdym dniu eksperymentalnym wykonywano zdjęcia oczu myszy za pomocą kamery przymocowanej do stereoskopu chirurgicznego, aby przeprowadzić nieinwazyjną ocenę odpowiedzi naczyniowej tęczówki. Nakłucia .......

Dyskusja

W niniejszym protokole przedstawiono nowatorską metodę indukcji odpowiedzi naczyniowej tęczówki poprzez nakłucie błony naczyniowej oka. Nakłucie uruchamia mechanizmy gojenia się ran i wspomaga reakcje naczyniowe w tęczówce^10,11. Jest to zgodne z patologiami oczu, takimi jak PDR i NVG, w których zaostrzone odpowiedzi angiogenne z siatkówki w tylnym segmencie oka kończą się stanem klinicznym rubeozy tęczówki, zwiększonym unaczynieniem tęczówki^12,1.......

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Nożyczki do oczu Bonn	Bausch & Lomb	23060
Nożyczki zakrzywione Clayman-Vannas	Bausch & Nożyczki proste Lomb	E3383 C
Clayman-Vannas	Bausch & Lomb	E3383 S
Adapter obiektywu do aparatu	Ręcznie robione	Nie dotyczy	Lub dowolny system, który umożliwia dostosowanie kamery do mikroskopu
Poduszka grzewcza 100-110 watów	Nie dotyczy		Dostępne w sklepach zoologicznych/weterynaryjnych
Igła skośna podskórna 30g	KDM GmBH niemcy	911914
Iphone 4S	Apple	Nie dotyczy	Lub inne urządzenie do pozyskiwania obrazów o wysokiej rozdzielczości
Isoflurane	Baxter	KDG 9623
Kleszcze do wiązania McPhersona	Bausch & Lomb	E1815 S
Mikro kleszczyki do wiązania	Bausch & Lomb	63140
Minims chlorowodorek tetrakainy	Bausch & Lomb	N/A	1 % (w/v) Krople do oczu
Formalina buforowana neutralnie	Bioreagens	0018-40
Roztwór soli fizjologicznej	Fresenius Kabi	210352	0,9 % (w/v) NaCl w wodzie do wstrzykiwań
Sól fizjologiczna buforowana fosforanami	ThermoFisher Scientific	10010023	Zbilansowany i buforowany PBS pH 7,4
szalka Petriego 10 cm	Starstedt	83.3902
Petriego 3 cm	Starstedt	83.3900
Bezpieczna probówka uszczelniająca 2,0 ml	Starstedt	72.685.200	Lub dowolna probówka typu eppendorf
Płytka TC 96-dołkowa	Starstedt	83.3924
Pipeta transferowa 3,5 ml	Starstedt	86.1171	Lub dowolna inna pipeta Pasteura
Jednostka anestezjologiczna Univentor 400	Univentor Limited	N/A	Lub równoważny regulator przepływu z komorą indukcyjną i maską do znieczulenia lotnego
Mikroskop chirurgiczny Wild M650	Wild Heerbrugg	N/A	Lub inny stereoskop chirurgiczny lub powiększający

szalka