Tutaj pokazujemy, jak zbudowane są fantomy optyczne naśladujące tkanki na bazie agarozy i jak określa się ich właściwości optyczne za pomocą konwencjonalnego systemu optycznego z całkującą kulą.
Method Article
* These authors contributed equally
Tutaj pokazujemy, jak zbudowane są fantomy optyczne naśladujące tkanki na bazie agarozy i jak określa się ich właściwości optyczne za pomocą konwencjonalnego systemu optycznego z całkującą kulą.
Ten protokół opisuje, jak tworzyć fantomy naśladujące tkanki na bazie agarozy i pokazuje, jak określić ich właściwości optyczne za pomocą konwencjonalnego systemu optycznego z całkującą kulą. Układy pomiarowe do akwizycji widm odbicia rozproszonego i całkowitej transmitancji są zbudowane z szerokopasmowego źródła światła białego, światłowodu, soczewki achromatycznej, kuli całkującej, uchwytu próbki, sondy światłowodowej i spektrometru wielokanałowego. Forma akrylowa składająca się z dwóch prostokątnych kawałków akrylu i kawałka akrylu w kształcie litery U jest skonstruowana tak, aby stworzyć fantom naskórka i fantom skórny z pełną krwią. Zastosowanie roztworu ditionianu sodu (Na2S2O4) do fantomu skórnego umożliwia badaczowi odtlenienie hemoglobiny w czerwonych krwinkach rozmieszczonych w fantomie skóry. Odwrotną symulację Monte Carlo z widmami rozproszonego współczynnika odbicia i całkowitej transmitancji mierzonymi za pomocą spektrometru ze sferą całkującą przeprowadza się w celu wyznaczenia widma współczynnika absorpcji μa(λ) i widma zredukowanego współczynnika rozpraszania μs'(λ) każdego fantomu warstwy. Dwuwarstwowy fantom naśladujący rozproszony współczynnik odbicia ludzkiej tkanki skórnej jest również demonstrowany przez nawarstwienie fantomu naskórka na fantomie skórnym.
Fantomy optyczne to obiekty naśladujące właściwości optyczne tkanek biologicznych i były szeroko stosowane w dziedzinie optyki biomedycznej. Są one zaprojektowane w taki sposób, aby właściwości optyczne, takie jak współczynniki rozpraszania i absorpcji światła, odpowiadały właściwościom żywych tkanek ludzkich i zwierzęcych. Fantomy optyczne są zwykle używane do następujących celów: symulacja transportu światła w tkankach biologicznych, kalibracja nowo opracowanego projektu systemu optycznego, ocena jakości i wydajności istniejących systemów, porównanie wydajności między systemami oraz walidacja zdolności metod optycznych do ilościowego określania właściwości optycznych1,2,3,4,5. Dlatego do tworzenia fantomów optycznych wymagane są łatwe do zdobycia substancje, prosty proces wytwarzania, wysoka powtarzalność i stabilność optyczna.
Różne rodzaje fantomów optycznych z różnymi materiałami bazowymi, takimi jak zawiesina wodna6, żel żelatynowy7, żel agarozowy8,9,10, żel poliakrylamidowy11, żywica12,13,14,15,16, oraz silikon wulkanizujący w temperaturze pokojowej17 zostały opisane w poprzedniej literaturze. Doniesiono, że żele na bazie żelatyny i alginianu są przydatne w fantomach optycznych o niejednorodnej strukturze18. Fantomy alginianowe mają odpowiednią stabilność mechaniczną i termiczną do oceny efektów fototermicznych, takich jak badania ablacji laserowej i badania hipertermii laserowej18. Żele agarozowe mają zdolność wytwarzania niejednorodnych struktur, a ich właściwości mechaniczne i fizyczne są stabilne przez długi czas18. Żele agarozowe o wysokiej czystości mają bardzo niskie zmętnienie i słabą absorpcję optyczną. W związku z tym właściwości optyczne fantomów na bazie agarozy można łatwo zaprojektować za pomocą odpowiednich środków rozpraszających i pochłaniających światło. Ostatnio kopolimer19 i żele z polichlorku winylu (PVC) 20 zostały zgłoszone jako interesujące materiały fantomowe do technik optycznych i fotoakustycznych.
Mikrosfery polimerowe7,12,21,22, sproszkowany tlenek tytanu1, oraz emulsje lipidowe23,24,25,26 takie jak mleko i emulsja lipidowa są używane jako środki rozpraszające światło, podczas gdy tusz27,28 i barwniki molekularne29,30 są używane jako absorbery światła. Rozproszone widma odbicia większości żywych narządów są zdominowane przez absorpcję natlenionej i odtlenionej hemoglobiny w czerwonych krwinkach. Dlatego roztwory hemoglobiny31,32 i krew pełna8,9,10,33,36 są często używane jako absorbery światła w fantomach do spektroskopii odbicia dyfuzyjnego i obrazowania wielospektralnego.
Metoda opisana w tym artykule służy do stworzenia optycznego fantomu naśladującego transport światła w tkankach biologicznych i do scharakteryzowania jego właściwości optycznych. Jako przykład przedstawiono dwuwarstwowy fantom optyczny naśladujący właściwości optyczne ludzkiej tkanki skórnej. Przewagą tej metody nad technikami alternatywnymi jest możliwość odwzorowania rozproszonych widm odbicia żywych tkanek biologicznych w zakresie długości fal od widzialnego do bliskiej podczerwieni, a także prostota wykonania przy użyciu łatwo dostępnych materiałów i konwencjonalnych instrumentów optycznych. W związku z tym fantomy optyczne wykonane tą metodą będą przydatne do opracowania metod optycznych opartych na spektroskopii odbicia dyfuzyjnego i obrazowaniu wielospektralnym
.Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
1. Budowa konwencjonalnego systemu spektroskopowego o rozproszonym współczynniku odbicia i całkowitej transmitancji
Uwaga: Zbuduj systemy pomiarowe dla widm odbicia dyfuzyjnego i całkowitej transmitancji, używając szerokopasmowego źródła światła białego, światłowodu, soczewki achromatycznej, kuli całkującej, uchwytu na próbkę, światłowodu i spektrometru wielokanałowego. Rolą pułapki świetlnej jest usunięcie składowej odbicia zwierciadlanego ze spektrum odbicia. Uchwyt próbki kuli integrującej składa się z płyty montażowej oraz zespołu zacisku na jaskółczy ogon i sprężynę, który przytrzymuje próbkę przy porcie. Zespół zacisku na jaskółczy ogon i sprężynę jest wyjmowany z uchwytu próbki, a zamiast tego do płyty montażowej mocowany jest ręcznie wykonany sześcienny cokół z pianki polistyrenowej. Układy komponentów optycznych, pokazane na Rysunek 1a i 1b, mogą być wykorzystane w procedurze konstrukcyjnej dla pomiarów odbicia rozproszonego i pomiarów całkowitej transmitancji.
2. Przygotowanie formy akrylowej
Uwaga: Akrylowa forma, która składa się z dwóch prostokątnych kawałków akrylu i akrylowego elementu w kształcie litery U, jest skonstruowana w celu stworzenia monowarstwowego fantomu żelowego. Rysunek 2 może być wykorzystany do tej procedury konstrukcyjnej.
3. Przygotowanie materiału bazowego
4. Przygotowanie fantomów optycznych naśladujących skórę
Uwaga: Roztwór kawy jest używany do naśladowania widma absorpcji melaniny. Roztwór kawy zawiera brązowy pigment zwany melanoidyną. Doniesiono, że spektrum absorpcji melanoidyny jest podobne do melaniny10.
5. Akwizycja widm odbicia dyfuzyjnego
6. Przejęcie całkowitego widma transmitancji
7. Szacowanie właściwości absorpcji i rozpraszania światła
Uwaga: Zestaw widma rozproszonego odbicia i całkowitego widma transmitancji jest zapisywany na dysku twardym komputera osobistego i analizowany w trybie offline. Następnie przeprowadzana jest odwrotna symulacja Monte Carlo8,38,39,40 jest następnie wykonywana w celu oszacowania widma współczynnika absorpcji μa(λ) oraz widma zredukowanego współczynnika rozpraszania μs'(λ). W tej odwrotnej symulacji Monte Carlo szacowany współczynnik rozpraszania μs, przy założeniu, że współczynnik anizotropii g wynosi 0, jest traktowany jako zredukowany współczynnik rozpraszania μs'. Zarówno dane dotyczące współczynnika odbicia, jak i transmitancji są wykorzystywane w jednym przebiegu symulacji. Szczegółowy algorytm zastosowany w tym protokole został opisany w poprzedniej literaturze8,39. Oszacowaliśmy widmo współczynnika absorpcji μa(λ) oraz widmo zmniejszonego współczynnika rozpraszania μs'(λ) warstwy naskórka ze zbioru widma odbicia rozproszonego i całkowitego widma przepuszczalności uzyskanego z warstwy naskórka. W ten sam sposób oszacowaliśmy μa(λ) i μs'(λ) warstwy skórnej z zestawu widma odbicia rozproszonego i całkowitego widma przepuszczalności uzyskanego z warstwy skórnej.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Rysunek 3 pokazuje reprezentatywne szacowane widma zredukowanego współczynnika rozpraszania i współczynnika absorpcji dla fantomu naskórka i fantomu skórnego. Wyniki pokazane w Rysunek 3 to średnie z dziesięciu pomiarów zarówno widm odbicia, jak i transmitancji. Zredukowany współczynnik rozpraszania μs' ma szerokie spektrum rozpraszania, wykazując większą wielkość przy krótszych długościach fal. Cechy...
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Najważniejszym krokiem w tym protokole jest kontrola temperatury materiału bazowego. Temperatura potrzebna do utrzymania materiału bazowego wahała się od 58 do 60 °C. Jeśli temperatura jest wyższa niż 70 °C, nastąpi denaturacja zarówno emulsji lipidowej, jak i krwi pełnej. W konsekwencji właściwości optyczne fantomu ulegną pogorszeniu. Jeśli temperatura jest niższa niż 40 °C, materiał bazowy zostanie nierównomiernie zżelowany, a zatem czynniki rozpraszające i absorpcyjne światła będą niejednorodnie rozmieszczone w fantom...
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Część tej pracy była wspierana przez Grant-in-Aid na badania naukowe (C) od Japońskiego Towarzystwa Promocji Nauki (25350520, 22500401, 15K06105) oraz projektu badawczo-rozwojowego US-ARMY ITC-PAC (FA5209-15-P-0175, FA5209-16-P-0132).
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
|---|---|---|---|
| Źródło światła lampy halogenowej 150 W | Hayashi Watch Works Co., Ltd, Tokio, Japonia | LA-150SAE | |
| Światłowód | Hayashi Watch Works Co., Ltd, Tokio, Japonia | LGC1-5L1000 | |
| Integracja Sphere | Labsphere Incorporated, North Sutton, NH, USA | RT-060-SF | |
| Adapter portu | Labsphere Incorporated, North Sutton, NH, USA | PA-050-SMA-SF | |
| Pułapka świetlna | Labsphere Incorporated, North Sutton, NH, USA | LTRP-100-C | |
| Spektron biały standard z 99% odbiciem rozproszonym | Labsphere Incorporated, North Sutton, NH, USA | SRS-99-020 | |
| Światłowód | Ocean Optics Inc., Dunedin, Floryda, USA | P400-2-VIS-NIR | |
| Miniaturowy spektrometr światłowodowy | Ocean Optics Inc., Dunedin, Floryda, USA | ||
| Soczewki achromatyczne | Chuo Precision Industrial Co., Ltd, Tokio, Japonia | ACL-50-75M | |
| Intralipid | Fresenius Kabi AB, Uppsala, Szwecja | Intralipid 10% | |
| Kawa (Blendy Mocha Blend Regular Coffee) | Ajinomoto AGF, Inc. Tokio, Japonia | Niedostępne | |
| Pełna krew | Nippon Bio-Test Laboratories Inc. Saitama, Japonia | 0103-2 | |
| Agarose | Nippon Genetics Co., Ltd, Tokio, Japonia | NE-AG02 | |
| Grzejnik kuchenny | TOSHIBA CORPORATION Tokio, Japonia | HP-103K |
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request Permission