Przygotowanie, procedury i ocena iniekcji osocza bogatopłytkowego w leczeniu choroby zwyrodnieniowej stawu kolanowego

Podsumowanie

Choroba zwyrodnieniowa stawu kolanowego jest często obserwowana na oddziale ortopedycznym. Szczegółowo przedstawiamy cały proces leczenia choroby zwyrodnieniowej stawu kolanowego za pomocą iniekcji osocza bogatopłytkowego, w tym przygotowanie, zabiegi i ocenę.

Streszczenie

Choroba zwyrodnieniowa stawu kolanowego (KOA) jest jedną z najczęściej spotykanych chorób na oddziale ortopedycznym. Dotychczasowe metody leczenia niechirurgicznego mają ograniczony wpływ na naprawę chrząstki i regenerację kości. Osocze bogatopłytkowe (PRP) jest autologiczną substancją bioaktywną, która może naprawiać uszkodzenia chrząstki i skutecznie przyspieszać regenerację kości. Jednak zgłaszanie protokołów przygotowania PRP w badaniach klinicznych jest wysoce niespójne, a większość badań dostarcza niewystarczających informacji, aby umożliwić odtworzenie protokołu. Opisano powtarzalną metodę wizualnego przygotowania PRP, leczenie KOA za pomocą iniekcji dostawowej PRP oraz metody oceny wyniku. Osocze bogatopłytkowe (PRP) przygotowano przy użyciu ręcznego podwójnego wirowania. Warstwę PRP pobrano z krwi obwodowej i wykorzystano do iniekcji do jamy stawu kolanowego. Oceny obejmowały ocenę stężeń płytek krwi i wyników klinicznych. Przygotowanie PRP przez ręczne wirowanie wymaga mniejszej ilości aparatury i jest mniej kosztowne niż filtracja plazmowa lub wirowanie przy użyciu sprzętu. Czas wirowania naszej metody podwójnego wirowania wynosił 6 i 5 minut dla odpowiednich wirowań przy siłach odpowiednio 800 i 1400 x g, aby umożliwić spójne przygotowanie znormalizowanego PRP. Jednak metoda ręczna jest podatna na błędy operatora, a przygotowanie partii PRP nie jest dostępne. Dostawowe wstrzyknięcie PRP okazało się skutecznym sposobem leczenia choroby zwyrodnieniowej stawu kolanowego. Cała procedura leczenia trwała mniej niż 30 minut, stężenie płytek krwi w PRP można było ustandaryzować, a leczenie okazało się skuteczne, gdy zostało ocenione w ramach obserwacji.

Wprowadzenie

Choroba zwyrodnieniowa stawu kolanowego (KOA) jest jedną z najczęściej obserwowanych chorób na oddziale ortopedycznym; 30%-50% osób w wieku powyżej 65 lat doświadcza tej choroby¹. Obecnie leczenie zachowawcze KOA obejmuje głównie doustne podawanie niesteroidowych leków przeciwzapalnych i odżywczych na chrząstki, dostawowe wstrzyknięcie hialuronianu sodu oraz fizjoterapię. Metody te nie są jednak w stanie zatrzymać procesu zwyrodnienia stawu kolanowego². Ubytki chrząstki stawowej mogą powodować zużycie powierzchni stawowej, niestabilność stawów i zmiany metaboliczne, które są częścią patogenezy KOA³. Jednak ze względu na brak naczyń krwionośnych, nerwów i tkanki limfatycznej w chrząstce stawowej powrót do zdrowia po uszkodzeniu jest trudny. Skuteczna metoda naprawy chrząstki jest szczególnie ważna w leczeniu KOA. Leczenie osteoklazji jest również kluczowym celem w leczeniu KOA.

Osocze bogatopłytkowe (PRP) jest autologiczną substancją biologiczną, a zastosowanie PRP w leczeniu problemów z kośćmi i stawami jest coraz częściej badane. Biologiczne uzasadnienie klinicznego zastosowania PRP obejmuje jego wpływ na miejscowe dostarczanie czynników wzrostu i modyfikację odpowiedzi zapalnej oraz jego pozytywny wpływ na proliferację i różnicowanie komórek⁴. Po aktywacji po wstrzyknięciu dostawowym, PRP uwalnia α-granulki poprzez degranulację i wydziela różne czynniki wzrostu, w tym czynnik wzrostu pochodzenia płytkowego, transformujący czynnik wzrostu-β, insulinopodobny czynnik wzrostu, naskórkowy czynnik wzrostu, czynnik wzrostu śródbłonka naczyń krwionośnych i czynnik wzrostu fibroblastów. Sprzyjają one proliferacji osteoblastów i chondrocytów, hamują degenerację chrząstki, wzmacniają stabilność chrząstki i kości podchrzęstnej, regulują tkankowy inhibitor ekspresji genów metaloproteinazy oraz utrzymują równowagę syntezy i degradacji proteoglikanów5^,6. Dlatego PRP może naprawiać uszkodzenia chrząstki i przyspieszać regenerację kości.

Na wynik iniekcji PRP wpływają różne czynniki, w tym miejsce pobierania próbek⁷, rodzaj metody przygotowania wirówki⁸, oraz użycie antykoagulantów⁹ i activators¹⁰. Istnieją z grubsza 3 rodzaje metod odśrodkowych do przygotowania PRP. Dostępne są techniki wirowania ręcznego, wirowania sprzętowego lub filtracji plazmowej, chociaż najczęściej stosowane są metody ręczne i sprzętowe. Metoda ręczna wymaga najmniejszego sprzętu, jest wygodna, tania i prosta do wykonania (ilustracja 1). Osocze bogatopłytkowe (PRP) przygotowuje się przez dwukrotne odwirowanie ręczne. Mieszanina krwi obwodowej i antykoagulantu jest odwirowywana w celu oddzielenia hemocytów od osocza i płytek krwi. Po odrzuceniu czerwonych krwinek z dolnej warstwy, ciecz sklarowaną nad osadem odwirowuje się w celu ponownego rozdzielenia, dzieląc ją na supernatant osocza ubogiego w płytki krwi, środkowe PRP i subnatant resztkowe krwinki czerwone. Warstwa środkowa służy do iniekcji do jamy stawu kolanowego (jeśli ilość jest niewystarczająca, można pobrać część supernatantu). Ocena metody obejmuje ocenę stężenia płytek krwi i wyników klinicznych.

Raportowanie protokołów przygotowania PRP w badaniach klinicznych jest wysoce niespójne, a większość badań nie dostarcza wystarczających informacji, aby umożliwić odtworzenie protokołu¹¹. W tym miejscu opisano powtarzalną metodę przygotowania PRP i leczenia KOA za pomocą iniekcji dostawowej PRP, wraz z oceną wyniku. Kryteriami włączenia byli pacjenci z chorobą zwyrodnieniową stawu kolanowego, którzy mają słabą ulgę w bólu po prostych lekach przeciwbólowych (takich jak paracetamol) i leczeniu zachowawczym. Kryteria wykluczenia obejmowały pacjentów z powrotem żylnym lub zaburzeniami drenażu limfatycznego; pacjenci z infekcjami stawu kolanowego; pacjenci z dermatozą lub infekcją w miejscu wstrzyknięcia; pacjenci z gorączką; pacjenci z zaburzeniami czynności krzepnięcia; pacjentów z poważnymi chorobami układu krążenia. Cała procedura leczenia trwa mniej niż 30 minut, a udowodniono, że stężenie płytek krwi w PRP osiąga ustandaryzowany pomiar. Jego skuteczność wykazano poprzez ocenę wyników podczas ścisłej obserwacji.

Protokół

Opisane metody zostały zatwierdzone przez Komisję Etyki Szpitala Ogólnego w Guangdong.

1. Uzyskanie PRP przez ręczne wirowanie

1. Przygotować pacjenta w pozycji leżącej na plecach w sterylnej sali operacyjnej z przepływem laminarnym o komfortowej temperaturze i wilgotności pokojowej: temperatura pokojowa wynosi 22 °C, a wilgotność w pomieszczeniu 60%.
2. Za pomocą strzykawki o pojemności 1 ml pobierz 0,2 ml heparyny sodowej (2 ml = 12 500 j.), a następnie zwilż strzykawkę o pojemności 50 ml.
   UWAGA: 3 ml cytrynianu sodu jest również typowe na tym etapie w celu zastąpienia heparyny sodu.
3. Załóż opaskę uciskową, wysterylizuj łokieć 2-3 razy i za pomocą wilgotnej strzykawki o pojemności 50 ml pobierz 30 ml krwi obwodowej z żyły łokciowej.
4. Wykonaj pierwsze wirowanie.
   1. Podziel krew obwodową równo na dwie sterylne probówki wirówkowe o pojemności 50 ml.
   2. Umieść dwie probówki w poziomych wirnikach, a następnie w wirówce, w warunkach aseptycznych.
   3. Wirować przez 6 minut przy 800 x g.
   4. Wyjmij poziome wirniki, załóż sterylne rękawice i wyjmij probówki wirówkowe.
   5. Obserwuj stratyfikacje, aby upewnić się, że krew obwodowa jest rozwarstwiona na dwie warstwy.
   6. Użyj czystej strzykawki o pojemności 10 ml, aby zebrać sklarowany płyn z tych dwóch probówek wirówkowych do czystej probówki wirówkowej.
5. Wykonaj drugie wirowanie.
   1. Użyj czystej strzykawki o pojemności 10 ml, aby dodać równoważną ilość sterylnej wody lub zwykłego soli fizjologicznej do innej czystej probówki wirówkowej w celu uzyskania równowagi. Umieść rurki w poziomych wirnikach. Oznacz ten z warstwą sklarowanej cieczy za pomocą tynku samoprzylepnego.
   2. Wirować przez 5 minut przy 1400 x g.
   3. Wyjmij poziome wirniki i obserwując rozwarstwienia, sprawdź, czy ciecz z zaznaczonej rurki jest podzielona na trzy warstwy.
   4. Za pomocą strzykawki o pojemności 10 ml pobrać 4 ml płynu ze środkowej warstwy komórek ziarnistych (bogatej w leukocyty, warstwy PRP) i dolnej warstwy supernatantu. Jeśli ilość środkowej warstwy jest wystarczająca, po prostu pobierz z niej 4 ml.
   5. Umieścić 0,4 ml płynu w sterylnej probówce przeciwzakrzepowej (K₂EDTA, 3,6 mg) w celu oceny, pozostawiając 3,6 ml płynu w strzykawce.
      UWAGA: W tym miejscu protokół można wstrzymać.

2. Dostawowe podawanie PRP

1. Pozwól pacjentowi położyć się na plecach na stole operacyjnym i zegnij kolano pod kątem 90 stopni.
2. Zlokalizuj miejsce nakłucia na dolnym brzegu rzepki i 1 cm od więzadła rzepki bocznej. Użyj markera, aby oznaczyć witrynę.
3. Trzykrotnie przeprowadzić sterylizację skóry w miejscu wkłucia za pomocą anerdian III, używając sterylnych rękawiczek i przykryć aseptycznym ręcznikiem.
4. Umieść strzykawkę równolegle do płaskowyżu piszczelowego, a następnie wykonaj nakłucie pod kątem 45 stopni. Całkowicie wprowadzić igłę w skórę.
5. Wstrzyknąć 3,6 ml PRP ze strzykawki do jamy stawu kolanowego.
6. Przykryj miejsce nakłucia sterylną gazą i przymocuj go plastrem samoprzylepnym.
7. Uciskaj ranę przez 10 minut. Przez 30 minut należy obserwować, czy nie wystąpiły ciężkie działania niepożądane.
8. Podawać w sumie trzy wstrzyknięcia w odstępach miesięcznych.
   UWAGA: W tym miejscu protokół można wstrzymać.

3. Pooperacyjna ocena iniekcji PRP

1. Oceń stężenie płytek krwi w PRP.
   1. Użyj 0,4 ml PRP z probówki przeciwzakrzepowej (_K2EDTA, 3,6 mg).
   2. Analizuj stężenie płytek krwi w PRP za pomocą automatycznego analizatora krwinek.
2. Oceń wynik pooperacyjny wstrzyknięcia PRP.
   1. Po konsultacji 1 dzień przed każdym z trzech zabiegów należy przeprowadzić dalszą obserwację pacjenta 1 dzień po każdym zabiegu, 3 dni po każdym zabiegu, 1 tydzień po każdym zabiegu, 1 miesiąc po trzecim zabiegu, 3 miesiące po trzecim zabiegu i 6 miesięcy po trzecim zabiegu.
   2. Użyj wizualnej skali analogowej (VAS), wskaźnika choroby zwyrodnieniowej stawów Western Ontario i McMaster Universities (WOMAC), oceny Towarzystwa Kolanowego (KSS) i skali funkcjonalnej kolana Lysholm, aby ocenić efekt pooperacyjny.

Wyniki

W rezultacie, liczba płytek krwi w PRP osiągnęła standardowy poziom stężenia 1121 x 10³/μL. Przeprowadziliśmy 15 badań kontrolnych opisanych w protokole na 55-letnim mężczyźnie z wczesnym KOA. Było oczywiste, że wczesny wynik kliniczny był zadowalający po dostawowym podaniu PRP (Ryc. 2). Jednak skuteczność średnioterminowa była nieco gorsza. Zaobserwowano wyraźnie istotne działanie przeciwbólowe (Ryc. 2A). Wynik KSS kolana był wyższy niż ...

Dyskusja

Stężenie płytek krwi w normalnej ludzkiej krwi wynosi od 150 000 / μL do 350 000 / μL i powszechnie uważa się, że stężenie płytek krwi PRP powinno osiągnąć 1 000 000 / μL, czyli od 3 do 5 razy więcej niż normalne stężenia⁹. Zgodnie z systemem hierarchii PAW uważa się, że PRP nie ma oczywistego wpływu, gdy stężenie płytek krwi jest mniejsze niż trzy razy większe niż normalne stężenie, podczas gdy PRP ma działanie hamujące, gdy stężenie płytek krwi jest ponad sześciokrotnie większe niż normalne stęż...

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Wirówka	Eppendorf	5702
Probówka wirówkowa	CORNING	430828
Rotor poziomy	Eppendorf	LL080
Anerdian III	Shanghai Likang Dezynfekant HiTech Co., LTD	310173	Dezynfekcja skóry
1ml Strzykawka	KDL  Sprzęt medyczny Co., LTD	0,4 * 13 RWLB
10 ml Strzykawka	KDL  Sprzęt medyczny Co., LTD	1,2 * 38 TWSB
50 ml Strzykawka	KDL  Medical Equipment Co., LTD	0,7 * 32 TWLB
Medyczna opaska uciskowa	Changzhou Jinli Latex Products Co., LTD	0087-2011
Jednorazowe sterylne gumowe rękawice chirurgiczne	Shanghai jinxiang Latex Products Co., LTD	17060
Jednorazowa igła do pobierania krwi	KDL  Sprzęt medyczny Co., LTD	0,55 * 20 L (II) RWLB
Heparyna sodowa do wstrzykiwań	SPH nr 1 Biochemiczne i Pharmaceutical Co., LTD	1706101	2 ml: 12500U
Jifro Antyseptyczny żel do rąk bez spłukiwania	Shanghai Likang Disinfectant HiTech Co., LTD	311793
Bawełniany wacik medyczny	Foshan Kangzheng Medical Supplies Co., LTD	KZ3-12	Dezynfekcja skóry
10 ml soli fizjologicznej	Jiangxi Shuangshi Pharmecutical Co., LTD	140211458
Automatyczny analizator komórek krwi	Beckman Coulter	LH-750
Sterylna
(probówki do pobierania krwi, K2E 3,6 mg)	Becton, Dickinson and Company	CNL17-COO56	Przechowywać w chłodnym, suchym miejscu w temperaturze od 4 do 25 stopni Celsjusza
Pęseta	RWD LIFE SCIENCE	F12006-10
Sterylna gaza	Guangdong ze Chang Trade Co., LTD	170915
Plaster samoprzylepny	3M Transpore	1527C-0
Marker do skóry	Guangzhou Mingjia Medical Device Manufacturing Co., LTD	10110