Badanie potencjału arkusza mezenchymalnych komórek macierzystych w rozwoju raka wątrobowokomórkowego in vivo

Summary

Tutaj prezentujemy protokół do opracowania modelu raka in vivo przy użyciu technologii arkuszy komórkowych. Taki model może być bardzo przydatny do oceny terapii przeciwnowotworowych.

Abstract

Model zwierzęcy in vivo, który naśladuje ludzkiego raka, może mieć różne zastosowania, które dostarczają istotnych informacji klinicznych. Obecnie stosowane techniki opracowywania modeli nowotworów in vivo mają znaczne ograniczenia. Dlatego w tym badaniu dążymy do wdrożenia technologii arkuszy komórkowych w celu opracowania modelu raka in vivo. Rak wątrobowokomórkowy (HCC) jest z powodzeniem rozwijany u nagich szczurów przy użyciu arkuszy komórkowych utworzonych z komórek linii komórkowej HCC. Arkusze komórek rakowych są generowane w wyniku adhezji wewnątrzkomórkowej i tworzenia struktury warstwowej, kontrolowanej przez macierz zewnątrzkomórkową. Pozwala to na przeszczepienie arkusza HCC do wątroby i stworzenie modelu zwierzęcego z guzem w ciągu miesiąca. Ponadto badana jest rola mezenchymalnych komórek macierzystych (MSC) w rozwoju tego modelu nowotworu. Oprócz arkusza linii komórkowej HCC tworzone są kolejne dwa arkusze komórek: arkusz komórek HCC i MSC szpiku kostnego (BMMSC) oraz arkusz komórek HCC i MSC pępowiny (UCMSC). Arkusze, które zawierają kombinację zarówno komórek HCC, jak i MSC, są również zdolne do wytworzenia zwierzęcia z nowotworem. Jednak dodanie MSCs zmniejsza rozmiar powstałego guza, a ten niekorzystny wpływ na rozwój guza różni się w zależności od źródła zastosowanych MSCs. Wskazuje to, że arkusz komórek wykonany z niektórych podtypów MSC może być wykorzystany w leczeniu i kontroli nowotworu.

Introduction

HCC to pierwotny rak wątroby, który jest znacząco związany ze złym rokowaniem. Rocznie u prawie pół miliona nowych pacjentów diagnozuje się HCC, co stanowi 85% pacjentów z rakiem wątroby na całym świecie¹. Hepatokarcynogeneza nie jest chorobą występującą w jednej postaci; Jest to raczej zbiór chorób, które mają różne cechy histopatologiczne oraz zmienność genetyczną i genomową, a także zróżnicowane wyniki prognostyczne 1. Dlatego głównymi wyzwaniami w opracowaniu skutecznej strategii terapeutycznej HCC są ograniczona wiedza na temat biologii HCC oraz brak odpowiedniego eksperymentalnego modelu zwierzęcego, który mógłby p....

Protocol

Protokół jest zgodny z wytycznymi komitetu etycznego Uniwersytetu Króla Sauda w zakresie opieki nad zwierzętami. Zabiegi chirurgiczne, środki znieczulające i inne leki stosowane u zwierząt są zatwierdzone przez komisję etyczną Uniwersytetu Króla Sauda. Wszystkie prace eksperymentalne wykonywane są przez odpowiednio przeszkolony personel.

1. Budowa arkusza komórkowego

1. Posmaruj szalki hodowlane (3,5-centymetrowe szalki hodowlane reagujące na temperaturę) nierozcieńczoną płodową surowicą bydlęcą (FBS) i upewnij się, że pokryły całą powierzchnię naczynia.
   UWAGA: Ten krok jest ważny dla oderwania arkusza komórek, ponieważ wspo....

Results

Rakotwórczość przeszczepionych komórek u szczurów:

Miesiąc po przeszczepie, u wszystkich przeszczepionych komórek w wątrobach szczurów rozwinęły się guzy (Rysunek 3). Średnia wielkość guzów rozwiniętych z arkuszy komórkowych HepG2, HepG2/BMMSC i HepG2/UCMSC wynosiła odpowiednio 4,5 cm, 4 cm i 2,5 cm¹⁰.

Discussion

Szeroko zakrojona liczba badań poświęcona jest opracowaniu odpowiedniego przedklinicznego modelu zwierzęcego in vivo , który przypomina ludzkie nowotwory. Obecnie główne podejścia stosowane do tworzenia zwierzęcych modeli nowotworów obejmują inżynierię genetyczną i przeszczepianie komórek¹¹. Genetycznie modyfikowane modele zwierzęce są dobrymi narzędziami do identyfikacji i walidacji docelowych genów, a także do zrozumienia mechanizmów molekularnych leżących u podstaw toksyczności wywołan.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
odczynniki
FBS	Gibco/Invitrogen	10270106
DMEM o wysokiej zawartości glukozy	Sigma	D5671-500ML
Penicylina/streptomycyna	Life Technology	15070063
Sterylna sól fizjologiczna	Sigma	S0817-1GA
Ludzka linia komórkowa HepG2	ATCC, USA	HB-8065
Linia komórkowa MSCs ludzkiego szpiku kostnego	PromoCell, USA	C-12974
ludzka tkanka pępowinowa MSCs	PromoCell, USA	C-12971
Ketamina 50%	Rompun, Bayer
Ksylazyna 2%	Rompun	23076-35-9
Alfadyna®   rozwiązanie.	Riyadh Pharma	LBL0816
Jednorazówki:
15 ml polipropylenowa probówka wirówkowa PP o wysokiej czystości	Falcon
3,5 cm sterylne szalki do hodowli UpCell z bibułą filtracyjną (membraną)	Sigma	174904-1CS
100-1000 µ l   Końcówki do pipet	Sigma	CLS4868-1000EA
Podstawowa procedura serwety	Thermofisher	PMD5293.0
Equipment  Pipeta
Plus, zmienna objętość	Eppendorf®   Badania®	Z683779-1EA
Inkubator do hodowli tkankowych 37 ° C, 5% CO2	Dowolna marka
Szafa bezpieczeństwa biologicznego	Dowolna marka
Inkubator kultur tkankowych 20 ° C, 5% CO2	Dowolna marka
Sterylne narzędzia chirurgiczne i nagie szczury:
Kleszcze
Nożyczki
nbsp;
Szew nylonowy  5-0	Accutome	AB-3854S	Monofilament, Lancet
1 ml Strzykawki tuberkulinowe	Fisher Scientific	14-826-88
Nagie szczury	Rzeka