Opracowaliśmy prosty i wszechstronny system do karmienia królików laboratoryjnych twardymi kleszczami. Nasz niepracochłonny protokół wykorzystuje łatwo dostępne materiały i może być dostosowywany w zależności od wymagań różnych ustawień eksperymentalnych. Metoda ta pozwala na komfortowe monitorowanie i/lub pobieranie próbek kleszczy przez cały okres karmienia.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Wszechstronny model inwazji kleszczy twardych na królikach laboratoryjnych
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Wykorzystanie żywych zwierząt w badaniach nad kleszczami jest kluczowe dla różnych celów eksperymentalnych, w tym dla utrzymania kolonii kleszczy twardych w laboratorium. U kleszczy wszystkie etapy rozwojowe (z wyjątkiem jaja) są hematofagiczne, a uzyskanie mączki z krwi po przyczepieniu do kręgowców gospodarzy jest niezbędne do pomyślnego zakończenia ich cyklu życiowego. Tutaj pokazujemy prostą metodę, która wykorzystuje łatwo otwierane kapsułki do karmienia twardych kleszczy na królikach. Do zalet proponowanej metody należy jej prostota, krótki czas trwania, a przede wszystkim wszechstronne dostosowanie do potrzeb konkretnych wymagań doświadczalnych. Metoda ta umożliwia użycie wielu komór (o różnych rozmiarach) na tym samym zwierzęciu, co pozwala na karmienie wielu etapów lub różnych grup doświadczalnych przy jednoczesnym zmniejszeniu ogólnego zapotrzebowania zwierzęcia. Zastosowane niedrażniące i łatwo dostępne materiały minimalizują dyskomfort zwierząt, które można łatwo odzyskać z eksperymentu i zaoferować do adopcji lub ponownie wykorzystać, jeśli pozwala na to protokół etyczny.
Wprowadzenie
Kleszcze twarde (Ixodidae) są dobrze znane jako wolno żerujące stawonogi i mogą być przyczepione do żywiciela na kilka dni lub tygodni, w zależności od gatunku i etapu rozwoju1. Te obowiązkowe stawonogi hematofagiczne są wektorami szerokiej gamy czynników zakaźnych, takich jak bakterie, pierwotniaki i wirusy, a zatem stanowią znaczne zagrożenie dla zdrowia ludzi i zwierząt1. Podczas badania biologii kleszczy lub oceny nowych metod kontroli, ustanowienie skutecznego systemu żywienia kleszczy ma kluczowe znaczenie dla skutecznego zaprojektowania eksperymentów i osiągnięcia celu (celów) badania. Ostatnio opracowano kilka sy....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
UWAGA: W tym badaniu, króliki były trzymane w standardowych klatkach z jedzeniem i wodą oferowanymi ad libitum w akredytowanych przez Francuską Agencję ds. Żywności, Środowiska i Bezpieczeństwa i Bezpieczeństwa (ANSES) obiektach dla zwierząt w Maisons-Alfort, Francja. Zwierzęta były monitorowane dwa razy dziennie przez dwóch doświadczonych techników pod kątem wszelkich nieprawidłowych reakcji skórnych, problemów zdrowotnych lub powikłań. Pomieszczenie doświadczalne zostało zabezpieczone poprzez obramowanie wnętrza drzwi taśmą dwustronną, aby uniknąć przypadkowej ucieczki kleszczy. Metoda sprawdza się najlepiej, gdy dwie osoby pracują w zespole, ale możliwe je....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
W niniejszym opracowaniu po raz pierwszy proponujemy szczegółową metodę krok po kroku karmienia kleszczy twardych w kapsułkach z pianki EVA przymocowanych do wygolonego grzbietu królika i przykrytych kamizelką (Rysunek 1 oraz Rysunek 2). Protokół ten jest odpowiedni do różnych rodzajów eksperymentów, w których wymagane jest zastosowanie różnych grup kleszczy na tym samym żywicielu, i może być również wykorzystyw.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Najważniejszym krokiem w całym tym protokole jest mocne przyklejenie kapsułki do ogolonej skóry. Z tego powodu kluczowe znaczenie ma stałe ciśnienie przez co najmniej 3 minuty, zwłaszcza na zakrętach. Podczas zaszczepiania kleszczy do kapsułki ważne jest, aby umieścić je głęboko w przeciwległym rogu niż otwarty, aby uniknąć ucieczki kleszcza podczas uszczelniania. Planując eksperymenty, upewnij się, że wszystkie kapsułki są zakryte kurtką, aby uniknąć uszkodzeń spowodowanych żuciem lub drapaniem. Upewnij się, że obszar s.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Podziękowania
Dziękujemy za pomoc techniczną Evelyne Le Naour, Francuskiemu Narodowemu Instytutowi Badań Rolniczych (INRA), Alainowi Bernierowi (INRA) i Océane Le Bidel (ANSES). Consuelo Almazán otrzymała stypendium z Laboratorium Doskonałości, Biologii Integracyjnej Pojawiających się Chorób Zakaźnych (LabEx IBEID) w Instytucie Pasteura. Króliki i owce zostały zakupione przez ANSES. Część tych prac została sfinansowana z grantu National Institutes of Health RO1AI090062 dla Y. Parka. Dr Jeffrey L. Blair jest autorem recenzji manuskryptu.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Króliki nowozelandzkie (2,5-3,5 kg) | Charles River | Kod szczepu 571 | |
| Owce Rambouillet | Lokalny dostawca - gospodarstwo wolne od kleszczy | Suczka 6 miesięcy | |
| Pianka EVA o grubości 5 mm | Sklep Cosplay | EVA-PE451kg (950mm x 450mm) | 10 mm Pianka PE45 kg ze Sklepu Cosplay może być używana do dużych dorosłych gatunków kleszczy |
| Arkusz pianki 9" X 12" 6 mm-Biały | Amazon | FOAMSHT6-20 | 6 mm-pianka EVA można zamówić przez Amazon jako alternatywę dla pianki ze sklepu Cosplay |
| Kurtki królika na całej długości | Aparatura Harvarda, Inc. | 620077- średnie, 6270078 - duże | |
| Nietoksyczny klej lateksowy | Środek do naprawy łez | Tkaniny & Pończocha ortopedyczna skórzana samoprzylepna | |
| bawełniana | BSN Medical | 9076 (szerokość 12-15 cm) | |
| Siatka przeciw komesrom | Loisirs Creatifs | Bardzo cienka tkanina nylonowa z filtrem | Dowolna siatka przeciw komarom lub materiał zasłonowy o rozmiarze oczek mniejszym niż 50 μ m jest odpowiedni. |
| Leukoplast | BSN medical S.A.S | LF 72361-02 | |
| Taśma samoprzylepna na rzep | AIEX store | AIEX 39,37 stóp/12 m Taśma samoprzylepna w rolce, szerokość 20 mm, kolor biały | Wypełnione przez Amazon |
| Szybkoschnący klej | Fixtout | Klej Superglue |
Bibliografia
- Sonenshine, D. E., Roe, M. Ticks, People and Animals. Biology of Ticks, Vol I. , Oxford University Press. (2014).
- Kröber, T., Guerin, P. M. In vitro feeding assays for hard ticks. Trends in Parasitology. 23 (9), 445-449 (2007).
- Bonnet, S., Jouglin, M., Malandrin, L., Becker, C., Agoulon, A., L'hostis, M., Chauvin, A.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
