Tutaj prezentujemy protokół dla modelu raka płuc ex vivo, który naśladuje etapy progresji guza i pomaga wyizolować guz pierwotny, krążące komórki nowotworowe i zmiany przerzutowe.
Artykuł metodologiczny
Tutaj prezentujemy protokół dla modelu raka płuc ex vivo, który naśladuje etapy progresji guza i pomaga wyizolować guz pierwotny, krążące komórki nowotworowe i zmiany przerzutowe.
Trudno jest wyizolować komórki nowotworowe w różnych punktach progresji nowotworu. Stworzyliśmy model płuc ex vivo, który może pokazać interakcję komórek nowotworowych z naturalną macierzą i ciągłym przepływem składników odżywczych, a także model, który pokazuje interakcję komórek nowotworowych z normalnymi składnikami komórkowymi i naturalną matrycą. Bezkomórkowy model płuc ex vivo jest tworzony przez wyizolowanie bloku płuco-serce szczura i usunięcie wszystkich komórek w procesie decelularyzacji. Prawe oskrzele główne jest wiązane, a komórki nowotworowe są umieszczane w tchawicy za pomocą strzykawki. Komórki poruszają się i zasiedlają lewe płuco. Płuco jest następnie umieszczane w bioreaktorze, w którym tętnica płucna otrzymuje ciągły przepływ mediów w obiegu zamkniętym. Guz wyrosły na lewym płucu jest guzem pierwotnym. Komórki nowotworowe, które są izolowane w krążących pożywkach, są krążącymi komórkami nowotworowymi, a komórki nowotworowe w prawym płucu są zmianami przerzutowymi. Komórkowy model płuc ex vivo jest tworzony przez pominięcie procesu decelularyzacji. Każdy model może być wykorzystany do udzielenia odpowiedzi na różne pytania badawcze.
Przerzuty raka są przyczyną większości zgonów związanych z rakiem i stanowią największe wyzwanie w walce z rakiem. Ogólnym celem tej metody jest zaprojektowanie protokołu dla czterowymiarowej (4-D) hodowli komórkowej, która oprócz trójwymiarowego (3D) wzrostu komórek ma wymiar przepływu. Reprezentuje trzy odrębne fazy procesu przerzutów [tj. guz pierwotny, krążące komórki nowotworowe (CTC) i zmiany przerzutowe].
W ciągu ostatnich trzech dekad naukowcy na całym świecie dostarczyli niezrównanego bogactwa informacji, aby zrozumieć mechanizmy leżące u podstaw progresji przerzutów w różnych nowotworach, co zwiększyło perspektywę wylecze....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokoły eksperymentów na zwierzętach zostały zatwierdzone przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt w Houston Methodist Research Institute i przeprowadzone zgodnie ze wszystkimi przepisami, obowiązującymi prawami, wytycznymi i politykami.
1. Żniwa z płuc szczurów
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Płuca pobrane od szczura zachowują nienaruszoną strukturę naczyń krwionośnych i pęcherzyków płucnych11 (Rysunek 3A i 3B). Po decelularyzacji zachowane zostają składniki macierzy zewnątrzkomórkowej acellularnego płuca, takie jak kolagen, fibronektyna i elastyna11 (Rysunek 3C, 3D, 3E oraz 3F). Decelularyzacja prowadzi.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Płuco 4-D ex vivo daje możliwość badania wzrostu guza i przerzutów w warunkach laboratoryjnych. Natywna macierz płucna to złożony system, który zapewnia wsparcie dla normalnej tkanki i utrzymuje interakcje komórka-komórka, interakcje komórka-macierz, różnicowanie komórkowe i organizację tkanek. Daje to możliwość dodania dowolnych składników mikrośrodowiska guza w celu zbadania ich wpływu na wzrost guza i interakcję z innymi komórkami.
Pobranie płuc jest kluczowym etapem dla 4-wymiaro.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Min P. Kim otrzymał wsparcie grantowe od Second John W. Kirklin Research Scholarship, American Association for Thoracic Surgery, Graham Research Foundation, Houston Methodist Specialty Physician Group Grant oraz Michael M. and Joann H. Cone Research Award. Dziękujemy Ann Saikin za redakcję językową manuskryptu.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Sprague Dowley rat | Harlan | 206M | męski |
| wacik z chlorheksydyną | Prevantics, Nowy Jork, USA | NDC 10819-1080-1 | |
| Heparin | Sagent Pharmaceuticals, Schaumburg, IL, USA | NDC 25021-400-10 | |
| igła o rozmiarze 18 McMaster | Carr, USA | 75165A249 | |
| 2-0 jedwabny krawat | Ethicon, San Angelo, TX, USA | A305H | |
| Pompa Masterflex L/S | Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA | EW-07554-80 | |
| Głowica pompy Masterflex L/S | Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA | EW-07519-05 | |
| Wkład pompy Masterflex L/S | Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA | EW-07519-70 | |
| Tygon Rurka | Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, Stany Zjednoczone | 14171211 | |
| Rurka pompy MasterFlex | Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, Stany Zjednoczone | 06598-16 | |
| Złącza żeńskie luer lock | Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA | 45508-34 | 75165A249 |
| Męskie złącza luer lock | Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA | 45513-04 | |
| nylonowy pierścień | Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA | EW-45509-04 | |
| Zestaw dożylny | CareFusion | 41134E | |
| Dodecylosiarczan sodu (SDS) | Fisher Scientific | CAS151-21-3 | |
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | X100-1L | |
| Antybiotyki | Gibco | 15240-062 | |
| Dotleniacz silikonowy | Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA | ABW00011 | Saint-GoBain-Siatka |
| druciana | 1164610105 | Lowes | Nowy Jork Drut |
| żeński luer Lug Style TEE | Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA | 45508-56 | |
| Męski zintegrowany pierścień blokujący luer do 200series Barb | Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA | 45518-08 | |
| Łącznik żeński z gwintem luer | Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA | 45508-22 | |
| Złącze Clave | ICU Medical | 11956 | |
| Hi-Flo & handel; 4-drogowy kran z obrotowym męskim ślusarzem luer | MX9341L | medycznym | |
| MasterFlex Rurka pompy | Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA | 06598-13 | do kaniuli |
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE
Poproś o pozwolenie