Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Synteza i charakterystyka nanocząstek lipidowo-polimerowych siarczanu chondroityny A (plCSA) ukierunkowanych na łożysko

7.8K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/58209

⸱

18 września 2018

 ,  ,  , 
1Laboratory for Reproductive Health, Institute of Biomedicine and Biotechnology, Shenzhen Institutes of Advanced Technology, Chinese Academy of Sciences (CAS), 2Guangdong Key Laboratory of Nanomedicine, CAS Key Lab for Health Informatics, Shenzhen Institutes of Advanced Technology, Chinese Academy of Sciences (CAS), 3Department of Chemistry, Guangdong Medical University

* These authors contributed equally

W tym artykule

Podsumowanie

Tutaj prezentujemy protokół syntezy łożyskowych nanocząstek lipidowo-polimerowych skojarzonych z peptydem wiążącym siarczan chondroityny A (plCSA-BP) za pomocą jednoetapowej techniki sonikacji i biokoniugatu. Cząstki te stanowią nowatorskie narzędzie do ukierunkowanego dostarczania leków do większości ludzkich nowotworów i trofoblastów łożyska w leczeniu nowotworów i zaburzeń łożyska.

Streszczenie

Skuteczna metoda leczenia raka zmniejsza i eliminuje guzy przy minimalnej toksyczności ogólnoustrojowej. Aktywne oddziaływanie na nanocząstki stanowi obiecujące podejście do terapii nowotworów. Glikozaminoglikan łożyskowy siarczan chondroityny A (plCSA) ulega ekspresji w szerokim zakresie komórek rakowych i trofoblastów łożyska, a VAR2CSA białkowe malarii mogą specyficznie wiązać się z plCSA. Zgłoszony peptyd wiążący siarczan chondroityny A łożyska (plCSA-BP), pochodzący z białka malarii VAR2CSA, może również specyficznie wiązać się z plCSA na komórkach rakowych i trofoblastach łożyska. W związku z tym nanocząstki sprzężone z plCSA-BP mogą być wykorzystywane jako narzędzie do ukierunkowanego dostarczania leków do nowotworów u ludzi i trofoblastów łożyska. W tym protokole opisujemy metodę syntezy nanocząstek lipidowo-polimerowych sprzężonych z plCSA-BP obciążonych doksorubicyną (plCSA-DNPs); Metoda składa się z pojedynczego etapu sonikacji i technik biokoniugatu. Ponadto opisano kilka metod charakterystyki plCSA-DNP, w tym określanie ich właściwości fizykochemicznych i wychwytu komórkowego przez komórki łożyskowego raka kosmówki (JEG3).

Wprowadzenie

Skuteczna metoda leczenia raka zmniejsza i eliminuje guzy przy minimalnej toksyczności ogólnoustrojowej. Dlatego selektywne celowanie w guz jest kluczem do zbadania skutecznych metod terapeutycznych. Nanocząstki stanowią obiecującą szansę w terapii przeciwnowotworowej, a zespoły molekularne z różnymi grupami funkcyjnymi zwiększą skuteczność leków i zmniejszą związane z nimi skutki uboczne1,2. Co więcej, systemy nanocząsteczkowe wykorzystują głównie pasywne i aktywne celowanie, aby dotrzeć do docelowych nowotworów3.

Pasywne celowanie wykorzystuje wrodzone cechy nanocząsteczek oraz efekty zwiększonej przepuszczalności i retencji (EPR), aby dotrzeć do komórek nowotworowych. Liposomy kationowe są z powodzeniem stosowane do dostarczania różnych leków przeciwnowotworowych do nowotworów w zastosowaniach klinicznych4,5,6. Pomimo potencjalnie skutecznego efektu terapeutycznego w leczeniu raka, niskie stężenie leku w regionie guza i niezdolność do odróżnienia komórek nowotworowych od normalnych tkanek to dwa główne ograniczenia nanocząstek ukierunkowanych pasywnie7.

Aktywne strategie celowania wykorzystują interakcje antygen-przeciwciało, ligand-receptor i inne molekularne rozpoznawanie, aby konkretnie dostarczać leki do nowotworów8. Glikozaminoglikan łożyskowy siarczan chondroityny A (plCSA) ulega szerokiej ekspresji w większości komórek nowotworowych i trofoblastów łożyska. Co więcej, białko malarii VAR2CSA może specyficznie wiązać się z plCSA9,10. W związku z tym może VAR2CSA być narzędziem do celowania w ludzkie komórki rakowe. Jednakże, gdy VAR2CSA jest sprzężone z nanocząstkami, białko o pełnej długości może ograniczać przenikanie nanocząstek do komórek nowotworowych. Niedawno odkryliśmy peptyd wiążący plCSA (plCSA-BP), pochodzący z białka malarii VAR2CSA. Sprzężone z plCSA-BP nanocząstki lipidowo-polimerowe szybko wiązały się z komórkami raka kosmówki i znacznie zwiększały aktywność przeciwnowotworową doksorubicyny (DOX) in vivo11; Cząstki te również specyficznie wiązały się z trofoblastami łożyska i mogły służyć jako narzędzie do ukierunkowanego dostarczania leków do łożyska12.

Nanocząstki polimeru lipidowego składają się z monowarstwowej powłoki lipidowej i hydrofobowego polimerowego rdzenia i stanowią nowy nośnik do dostarczania leków. Te nanocząstki łączą w sobie zalety liposomów i nanonośników polimerowych, takie jak kontrolowany rozmiar nanocząstek, wysoka biokompatybilność, przedłużone uwalnianie leku, wysoka wydajność ładowania leku (LE) i doskonała stabilność13. W tej pracy zastosowaliśmy jednoetapową metodę sonikacji do syntezy nanocząstek lipidowo-polimerowych. Ta metoda jest szybka, wygodna i odpowiednia do skalowania i jest szeroko stosowana do przygotowywania nanocząstek lipidowo-polimerowych przez naszą grupę11,14 i inne15,16,17,18.

1-etylo-3-(3-dimetyloaminopropylo)karbodimidowy chlorowodorek (EDC) jest popularnym karbodimidem używanym jako środek sieciujący do koniugacji biomolekuł zawierających aminy i karboksylany19. Oprócz EDC, N-hydroksysulfosuccinimid (NHS) jest najpowszechniejszym odczynnikiem koniugacyjnym w reakcjach koniugacji powierzchni i nanocząstek20,21. NHS może zmniejszyć liczbę reakcji ubocznych oraz zwiększyć stabilność i wydajność estrów pośrednich 22,23.

Tutaj opisujemy protokół syntezy nanocząsteczek lipidowo-polimerowych ukierunkowanych na plCSA. Po pierwsze, opisano jednoetapową syntezę sonikacyjną nanocząstek lipidowo-polimerowych (DNP) obciążonych DOX. Następnie wprowadzana jest technika biokoniugatu EDC/NHS do generowania nanocząstek lipidowo-polimerowych sprzężonych z plCSA-BP. Ta technika biokoniugatu może być również stosowana do koniugacji innych przeciwciał i peptydów z nanocząstkami. Na koniec opisujemy właściwości fizykochemiczne i test in vitro stosowany do charakteryzowania nanocząstek lipidowo-polimerowych ukierunkowanych na plCSA. Uważamy, że te nanocząstki lipidowo-polimerowe ukierunkowane na plCSA mogą stanowić skuteczny system do ukierunkowanego dostarczania leków na większość nowotworów u ludzi oraz ukierunkowanego dostarczania ładunków do łożyska w celu leczenia chorób łożyska.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

1. Przygotowanie roztworów podstawowych

  1. Przygotować wodny roztwór 4% etanolu, rozcieńczając 4 ml absolutnego alkoholu etylowego w 100 ml ultraczystej wody. Przechowywać roztwór w temperaturze 4 °C.
    UWAGA: Woda ultraczysta jest definiowana jako woda bez zanieczyszczeń, takich jak bakterie, cząstki stałe, jony lub nukleazy. Wodę ultraczystą uzyskano z systemu oczyszczania wody o docelowej rezystywności do 18,2 mΩ·cm, co oznacza niskie zanieczyszczenie anionowe.
  2. Przygotować roztwór podstawowy lecytyny sojowej o stężeniu 1 mg/ml, rozpuszczając 20 mg lecytyny sojowej w 20 ml wodnego roztworu 4% etanolu. Roztwór podstawowy lecytyny sojowej należy przechowywać w temperaturze 4 °C.
  3. Przygotować roztwór podstawowy o stężeniu 25 mg/ml DPE-PEG (2000)-COOH, rozpuszczając 100 mg DSPE-PEG-COOH w 4 ml wodnego roztworu 4% etanolu. Przechowywać roztwór podstawowy w temperaturze -20 °C.
  4. Przygotować roztwór podstawowy DOX o stężeniu 10 mg/ml, rozpuszczając 50 mg DOX w 5 ml ultraczystej wody. Przechowywać roztwór podstawowy DOX w temperaturze 4 °C w ciemności.
  5. Przygotować roztwór podstawowy PLGA o stężeniu 2 mg/ml, rozpuszczając 20 mg PLGA w 10 ml acetonitrylu. Przechowywać roztwór podstawowy PLGA w temperaturze 4 °C.
    UWAGA: Acetonitryl jest łatwopalny i toksyczny. Zachowaj ostrożność w dygestoriach i noś odpowiedni sprzęt osobisty, taki jak fartuchy laboratoryjne, okulary ochronne i rękawice lateksowe.
  6. Przygotować 0,1 M roztwór podstawowy kwasu 2-(morfolino)etanosulfonowego (MES, pH 6,0), rozpuszczając 2,17 g MES w 100 ml ultraczystej wody. Przechowywać roztwór podstawowy w temperaturze 4 °C.

2. Synteza DNP

UWAGA: Aby uniknąć degradacji fotochemicznej DOX, wszystkie operacje były wykonywane w ciemności.
Nanocząstki zostały zsyntetyzowane za pomocą wcześniej opisanej jednoetapowej metody sonikacji11,13,14.

  1. Dodać 3 ml wodnego roztworu 4% etanolu do sterylnej probówki wirówkowej o pojemności 10 ml. Następnie dodać 90 μg roztworu podstawowego lecytyny sojowej, 210 μg roztworu podstawowego DSPE-PEG-COOH i 750 μg roztworu podstawowego DOX do 3 ml wodnego roztworu 4% etanolu.
  2. Umieść probówkę wirówkową w łaźni lodowej i umieść łaźnię lodową na procesorze ultradźwiękowym.
  3. Za pomocą strzykawki o pojemności 1 ml odpipetować kroplami 2 mg roztworu podstawowego PLGA (1 kropla/4-6 s) do probówki wirówkowej. W międzyczasie należy poddać lampę sonifikacji za pomocą procesora ultradźwiękowego o częstotliwości 20 kHz i amplitudzie wyjściowej 30% przez 5 minut, aby zsyntetyzować DNPs.
    UWAGA: Aby zsyntetyzować jednorodne cząstki o małych rozmiarach, prędkość, z jaką roztwór PLGA wkrapla się do rurki, musi być wolna i należy unikać generowania pęcherzyków.
  4. Oczyścić DNP, przemłukując powyższy roztwór w 0,1 M buforze MES (pH 6,0) 3 razy za pomocą filtra wirówkowego (MWCO, 10 kDa). Wirować w temperaturze 4 °C i 1000 × g przez 3 minuty za każdym razem. Na koniec powinno pozostać około 1 ml nanocząstek rozpuszczonych w roztworze MES.
    UWAGA: Jest to dopuszczalny punkt zatrzymania procedury. Jeśli nie są używane do koniugacji peptydów, nanocząstki można oczyścić za pomocą buforu PBS (pH 7,4), a oczyszczone DNP można przechowywać w temperaturze 4°C w ciemności.

3. Koniugacja peptydów z DNP

  1. Aktywacja estru
    1. Dodać 0,4 mg EDC (stężenie końcowe 2 mM) do 1 ml DNP.
    2. Dodać 0,24 mg NHS do reakcji (końcowe stężenie 2 mM).
      UWAGA: W celu łatwego dodania odpowiedniej ilości EDC i NHS, można przygotować roztwór podstawowy, jeśli odczynniki zostaną rozpuszczone i natychmiast zużyte.
    3. Dobrze wymieszać składniki reakcji i umieścić reakcję na wytrząsarce; pozostawić na reakcję przez 30 min-1 godzinę w temperaturze pokojowej w ciemności.
  2. Reakcja aminowa
    1. Zwiększyć pH buforu do 7,2-7,5 za pomocą PBS (20×, pH 7,4).
    2. Dodać 0,5 mg peptydu ukierunkowanego na plCSA (plCSA-BP, EDVKDINFDTKEKFLAGCLIVSFHEGKC) do roztworu reakcyjnego.
      UWAGA: Przed dodaniem rozpuść peptydy w 20% acetonitrylu. Jeśli peptydy nie są rozpuszczalne, pomocna może być sonikacja w soniku do kąpieli.
    3. Dobrze wymieszać roztwór, a następnie umieścić go na shakerze; pozostawić reakcję do przebiegu w temperaturze 4 °C przez noc w ciemności.
    4. Umieścić sprzężony roztwór w workach do dializy (MWCO, 3,500 Da) w celu dializacji i oczyszczania plCSA-DNP za pomocą buforu PBS (pH 7,4) w temperaturze pokojowej przez 24 godziny w ciemności.
      UWAGA: Alternatywnie oczyszczanie można przeprowadzić jak w kroku 2.4 w celu uzyskania plCSA-DNP.
    5. W przypadku hodowli komórkowych należy przefiltrować odtworzony roztwór przez sterylny filtr strzykawkowy 0,22 μm w celu usunięcia potencjalnych osadów.

4. Charakterystyka nanocząstek lipidowo-polimerowych ukierunkowanych na plCSA

  1. Pomiar hydrodynamicznej wielkości nanocząstek za pomocą dynamicznego rozpraszania światła (DLS)
    1. Rozcieńczyć nanocząstki ultraczystą wodą (50-krotne rozcieńczenie). Załadować 500 μl próbki do kuwety zgodnie z instrukcjami DLS lub przyrządu do pomiaru potencjału zeta.
      UWAGA: Kuwety potencjału Zeta i DLS mogą się różnić w zależności od specyfikacji instrumentu.
    2. Po zakończeniu pomiaru zapisz średnicę cząstek, wskaźnik polidyspersyjności (PDI) i potencjał zeta. Uśrednij wyniki uzyskane z 4 powtórzonych odczytów i oblicz odchylenie standardowe.
  2. Transmisyjna mikroskopia elektronowa (TEM)
    UWAGA: Morfologię nanocząstek obserwowano za pomocą TEM metodą barwienia ujemnego. 24
    1. Rozcieńczyć nanocząstki ultraczystą wodą (rozcieńczenie 400-krotne). Dodać 20 μl próbki do siatki TEM i pozostawić na 5 minut.
    2. Dodać 100 μl 2% (w/v) kwasu fosforowego i odstawić na 2 minuty. Odprowadzić kroplę.
    3. Wysuszyć siatkę TEM w temperaturze pokojowej.
    4. Ustaw napięcie przyspieszenia TEM na 80 kV i powiększ obraz do 100 000× aby uwidocznić nanocząstki.
  3. Oznaczanie skuteczności enkapsulacji (EE) i LE
    1. Generowanie krzywej standardowej. Rozpuść DOX w ultraczystej wodzie, aby przygotować roztwory DOX o pięciu różnych stężeniach: 1 μg/ml, 5 μg/ml, 10 μg/mL, 50 μg/ml i 100 μg/ml. Zmierzyć absorpcję roztworów DOX przy 480 nm za pomocą spektrometru UV-VIS. Wygeneruj krzywą standardową na podstawie stężeń DOX.
    2. Rozcieńczyć 25 μl nanocząstek w 500 μl ultraczystej wody. Zmierzyć absorpcję przy długości fali 480 nm za pomocą spektrometru UV-VIS. Obliczyć stężenia leku za pomocą krzywej wzorcowej.
    3. Oblicz LE, korzystając z następującego równania:
      LE=((ilość leków w nanocząstkach)/(całkowita masa materiałów))×100%.
    4. Oblicz EE, korzystając z następującego równania:
      EE=((ilość narkotyków w nanocząstkach)/(ilość dodanego leku))×100%.
  4. Pomiar efektywności koniugacji za pomocą testu kwasu bicinchoninowego (BCA)25,26,27
    1. Odpipetować 25 μl wzorcowych roztworów peptydów (Tabela 1) lub plCSA-DNP do studzienek mikropłytek w dwóch egzemplarzach. Dodać 200 μl odczynnika roboczego do każdej studzienki i dobrze mieszać płytkę na wytrząsarce płytek przez 30 s.
    2. Przykryć płytkę i inkubować w temperaturze 37 °C przez 30 minut.
    3. Zmierzyć absorbancję przy długości fali 562 nm na czytniku płytkowym. Użyj wygenerowanej krzywej standardowej, aby obliczyć stężenia plCSA w plCSA-DNP.
    4. Oblicz sprawność koniugacji za pomocą następującego równania:
      Wydajność koniugacji=((ilość peptydu w nanocząstkach)/(ilość dodanego peptydu))×100%.
szt. szt. szt. szt. szt. szt. Rozdział szt. Rozdział szt. szt. szt.
fiolkaObjętość rozcieńczalnika (μl)Objętość i źródło peptydu (μL)Końcowe stężenie peptydu (μg/ml)
ZA0300 w magazynie1000
WZ kolei 250250 rozcieńczeń w fiolce A500
ZZ kolei 250250 rozcieńczenia B w fiolceZ kolei 250
DZ kolei 250250 rozcieńczeń C w fiolce125
E300200 rozcieńczeń D w fiolce50
ZZ kolei 250250 rozcieńczenia E w fiolce25
Z400100 rozcieńczenia F w fiolce5
H50000

Tabela 1. Przygotowanie peptydów wzorcowych

5. Mikroskopia fluorescencyjna oceniająca wychwyt nanocząstek ukierunkowanych na plCSA w komórkach raka skromówki (JEG3)

  1. Komórki nasienne na sterylnych 12-dołkowych płytkach w 1,0×104 komórki/basenik z kompletnym DMEM/F12 (cDMEM/F12, zawierające 1% penicyliny/streptomycyny i 10% płodowej surowicy bydlęcej (FBS)). Pozwól komórkom rosnąć do 60% konfluencji w temperaturze 37 °C i 5% CO2 w wilgotnych warunkach.
  2. Usuń pożywkę i dodaj 1 ml zimnej świeżej pożywki o niskiej zawartości surowicy (5% FBS) i DNP lub plCSA-DNP (5 μg ekwiwalentu DOX).
  3. Mieszaninę komórek i nanocząstek inkubować w temperaturze 4 °C przez 1 godzinę.
  4. Po inkubacji usunąć pożywkę i trzykrotnie umyć komórki PBS. Następnie dodać 1 ml świeżego cDMEM/F12 i inkubować komórki w temperaturze 37 °C przez 30 minut.
  5. Usuń cDMEM/F12 i umyj komórki trzykrotnie PBS.
  6. Dodaj 2 ml zimnego 4% paraformaldehydu (PFA) i inkubuj w temperaturze pokojowej przez 15 minut, aby utrwalić komórki.
  7. Usuń PFA. Umyj komórki 2 ml PBS raz. Dodać 1 ml PBS zawierającego DAPI (1 μg/ml) do barwienia jąder i inkubować w temperaturze pokojowej przez 10 minut.
  8. Odessać PBS i przemyć komórki trzykrotnie PBS.
  9. Dodaj pożywkę montażową i zobrazuj fluorescencję za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej, używając zielonych i niebieskich kanałów do wizualizacji odpowiednio DOX i jąder.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

W niniejszym protokole PLGA, DSPE-PEG-COOH oraz lecytyna sojowa stanowią odpowiednio reprezentatywny polimer, koniugat lipid-PEG-COOH i lipid. Synteza nanocząstek lipidowo-polimerowych celowanych w plCSA poprzez jednoetapową metodę sonikacji oraz technikę EDC/NHS przedstawiono na Rysunku 1. Najpierw, w warunkach sonikacji, lecytyna sojowa, PLGA i DSPE-PEG-COOH ulegają samoorganizacji, tworząc DNPs o strukturze rdzeń-otoczka. Rdzeń składa się z PLGA i...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Protokół ten zapewnia wydajną i powtarzalną metodę syntezy nanocząstek lipidowo-polimerowych sprzężonych z plCSA-BP. Jednoetapowa metoda sonikacji w celu przygotowania nanocząstek lipidowo-polimerowych jest szybka, powtarzalna i różni się od typowych metod nanoprecypitacji, które obejmują ogrzewanie, wirowanie lub odparowywanie. Stąd opracowana metoda znacznie skraca czas syntezy. Ponadto biokoniugat EDC/NHS zastosowany w tym protokole jest powszechnie stosowaną i wygodną techniką koniugacji peptydów i przeciwciał przeci...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

X.F. i B.Z. są wynalazcami patentu PCT/CN2017/108646 i 201710906587.6 złożonego przez SIAT, który obejmuje metodę i zastosowanie syntezy nanocząstek ukierunkowanej na plCSA. Pozostali autorzy nie ujawnili żadnych potencjalnych konfliktów interesów.

Podziękowania

Ta praca była wspierana przez granty z Narodowego Programu Kluczowych Badań i Rozwoju Chin (2016YFC1000402), Narodowej Fundacji Nauk Przyrodniczych (81571445 i 81771617) oraz Fundacji Nauk Przyrodniczych Prowincji Guangdong (2016A030313178) dla X.F. oraz Funduszu Badań Podstawowych Shenzhen (JCYJ20170413165233512) dla X.F.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Peptyd plCSAShanghai GL Biochem573518do syntezy peptydów
Absolutnyetanol Sinopharm Chemical10009218do syntezy nanocząstek
Lecytyna sojowaAvanti Polar Lipids441601do syntezy nanocząstek
DSPE-PEG-COOHAvanti Polar Lipids880125do syntezy
nanocząstekDoksorubicynaJKhemical113424do syntezy nanocząstek
AcetonitrylShanghai Lingfeng1008621do syntezy nanocząstek
PLGASigma-Aldrich719897do syntezy nanocząstek
Procesor ultradźwiękowySonicsVCX130do syntezy nanocząstek
Filtr wirówkowy (MWCO 10 kDa)MilliporeUFC801024do oczyszczania nanocząstek
Sigma3-18KSdo oczyszczania nanocząstek
Kwas 2-[morfolino]etanosulfonowy(MES)Sigma-AldrichM3671do koniugacji peptydów
chlorowodorek 1-etylo-3-(3-dimetyloaminopropylo)karbodimidu (EDC)Sigma-Aldrich3450do koniugacji peptydów
N-hydroksysukcynimidu (NHS)Sigma-Aldrich56480do koniugacji peptydów
Worki do dializySpectrum132592Tdo oczyszczania nanocząstek
PBSHycloneSH30028.01do hodowli komórkowych
probówki wirówkowe 10 ml, polipropylenAladdinS-025do syntezy nanocząstek
, probówki wirówkowe 15 ml, polipropylenCorning430791do różnych zastosowań
0,22 &m; m sterylny filtr strzykawkowyMilliporeSLGV033RBdo oczyszczania nanocząstek
Strzykawka 1 ml, polipropylenowaBD328421do syntezy nanocząstek
Malvern ZetasizerMalvernNano ZSdo analizatora wielkości cząstek
Kwasdo TEM
siatka TEMEMCNBZ10024ado TEM
Spektrometr UV-VISLeageneDZ0035do
transmisyjnego mikroskopu elektronowego TEM
JEOLJEM-100CXIIdo analizatora wielkości cząstek
Odczynnik BCA AThermo Fisher Scientific23228do testu BCA
Odczynnik BCA BThermo Fisher Scientific23224do testu BCA
96-dołkowe płytkiCorning3599do BCA test
Czytnik płytekThermo Fisher ScientificMultiskan™ GOdo testu BCA
12-dołkowe płytkiCorning3513do hodowli komórkowych
Komórka JEG3Bank komórek Chińskiej Akademii NaukTCHu195Łożysko ludzkie
DMEM/F12HyklonSH30272.01fenol bez czerwieni
Surowica bydlęca płodu (FBS)GIBCO10100do hodowli komórkowej
Penicylina/streptomycynaGIBCO15070063do hodowli komórkowych
Mikroskop fluorescencyjnyOLYMPUSCKK53do pobierania przez komórkę
ParaformaldehydShanghai Lingfeng1372021do pobierania komórkowego
DAPISangon BiotechA606584do wychwytu komórkowego
Medium montażoweLife P36961do pobierania komórkowego
do wirówki , , fosfowolframowy

Bibliografia

  1. Davis, M. E., Shin, D. M. Nanoparticle therapeutics: an emerging treatment modality for cancer. Nature Reviews Drug Discovery. 7 (9), 771(2008).
  2. Nie, S., Xing, Y., Kim, G. J., Simons, J. W. Nanotechnology applications in cancer. Annual Review of Biomedical Engineering. 9, 257-288 (2007).
  3. Jabir, N. R., et al. An overview on the current status of cancer nanomedicines. Current Medical Research and Opinion. 34 (5), 911-921 (2018).
  4. Pillai, G. Nanomedicines for Cancer Therapy: An Update of FDA Approved and Those under Various Stages of Development. SOJ Pharmacy & Pharmaceutical Sciences. 1 (2), 1-13 (2014).
  5. Marta, T., Luca, S., Serena, M., Luisa, F., Fabio, C. What is the role of nanotechnology in diagnosis and treatment of metastatic breast cancer? Promising Scenarios for the Near Future. Journal of Nanomaterials. 2016, e5436458(2016).
  6. Dasari, S., Tchounwou, P. B. Cisplatin in cancer therapy: molecular mechanisms of action. European journal of Pharmacology. 740, 364-378 (2014).
  7. Brigger, I., Dubernet, C., Couvreur, P. Nanoparticles in cancer therapy and diagnosis. Advanced Drug Delivery Reviews. 64, 24-36 (2012).
  8. Steichen, S. D., Caldorera-Moore, M., Peppas, N. A. A review of current nanoparticle and targeting moieties for the delivery of cancer therapeutics. European Journal of Pharmaceutical Sciences. 48 (3), 416-427 (2013).
  9. Salanti, A., et al. Targeting human cancer by a glycosaminoglycan binding malaria protein. Cancer Cell. 28 (4), 500-514 (2015).
  10. Seiler, R., et al. An Oncofetal Glycosaminoglycan Modification Provides Therapeutic Access to Cisplatin-resistant Bladder Cancer. European Urology. 72 (1), 142-150 (2017).
  11. Zhang, B., et al. Targeted delivery of doxorubicin by CSA-binding nanoparticles for choriocarcinoma treatment. Drug Delivery. 25 (1), 461-471 (2018).
  12. Zhang, B., et al. Placenta-specific drug delivery by trophoblast-targeted nanoparticles in mice. Theranostics. 26 (2), 130-137 (2018).
  13. Zhang, L., et al. Self-assembled lipid--polymer hybrid nanoparticles: a robust drug delivery platform. ACS Nano. 2 (8), 1696-1702 (2008).
  14. Zheng, M., et al. Single-step assembly of DOX/ICG loaded lipid-polymer nanoparticles for highly effective chemo-photothermal combination therapy. ACS. 7 (3), 2056-2067 (2013).
  15. Fang, R. H., Aryal, S., Hu, C. -M. J., Zhang, L. Quick synthesis of lipid− polymer hybrid nanoparticles with low polydispersity using a single-step sonication method. Langmuir. 26 (22), 16958-16962 (2010).
  16. Gu, L., et al. Folate-modified, indocyanine green-loaded lipid-polymer hybrid nanoparticles for targeted delivery of cisplatin. Journal of Biomaterials Science, Polymer Edition. 28 (7), 690-702 (2017).
  17. Mandal, B., Mittal, N. K., Balabathula, P., Thoma, L. A., Wood, G. C. Development and in vitro evaluation of core-shell type lipid-polymer hybrid nanoparticles for the delivery of erlotinib in non-small cell lung cancer. European Journal of Pharmaceutical Sciences. 81, 162-171 (2016).
  18. Shi, T., et al. Enhanced legumain-recognition and NIR controlled released of cisplatin-indocyanine nanosphere against gastric carcinoma. European Journal of Pharmacology. 794, 184-192 (2017).
  19. Grabarek, Z., Gergely, J. Zero-length crosslinking procedure with the use of active esters. Analytical Biochemistry. 185 (1), 131-135 (1990).
  20. Hadjipanayis, C. G., et al. EGFRvIII Antibody-Conjugated Iron Oxide Nanoparticles for Magnetic Resonance Imaging-Guided Convection-Enhanced Delivery and Targeted Therapy of Glioblastoma. Cancer Research. 70 (15), 6303-6312 (2010).
  21. Sadhukha, T., Wiedmann, T. S., Panyam, J. Inhalable magnetic nanoparticles for targeted hyperthermia in lung cancer therapy. Biomaterials. 34 (21), 5163-5171 (2013).
  22. Jennings, M., Nicknish, J. Localization of a site of intermolecular cross-linking in human red blood cell band 3 protein. Journal of Biological Chemistry. 260 (9), 5472-5479 (1985).
  23. Staros, J. V. N-hydroxysulfosuccinimide active esters: bis(N-hydroxysulfosuccinimide) esters of two dicarboxylic acids are hydrophilic, membrane-impermeant, protein cross-linkers. Biochemistry. 21 (17), 3950-3955 (1982).
  24. Valencia, P. M., et al. Single-step assembly of homogenous lipid− polymeric and lipid− quantum dot nanoparticles enabled by microfluidic rapid mixing. ACS. 4 (3), 1671-1679 (2010).
  25. Altintas, I., et al. Nanobody-albumin nanoparticles (NANAPs) for the delivery of a multikinase inhibitor 17864 to EGFR overexpressing tumor cells. Journal of Controlled Release. 165 (2), 110-118 (2013).
  26. Maya, S., et al. Cetuximab conjugated O-carboxymethyl chitosan nanoparticles for targeting EGFR overexpressing cancer cells. Carbohydrate Polymers. 93 (2), 661-669 (2013).
  27. Deepagan, V. G., et al. In vitro targeted imaging and delivery of camptothecin using cetuximab-conjugated multifunctional PLGA-ZnS nanoparticles. Nanomedicine. 7 (4), 507-519 (2012).
  28. Totaro, K. A., et al. Systematic investigation of EDC/sNHS-mediated bioconjugation reactions for carboxylated peptide substrates. Bioconjugate Chemistry. 27 (4), 994-1004 (2016).
  29. Sinz, A. Chemical cross-linking and mass spectrometry to map three-dimensional protein structures and protein-protein interactions. Mass Spectrometry Reviews. 25 (4), 663-682 (2006).
  30. Zhang, B., et al. LDLR-mediated peptide-22-conjugated nanoparticles for dual-targeting therapy of brain glioma. Biomaterials. 34 (36), 9171-9182 (2013).
  31. Koren, E., Apte, A., Sawant, R. R., Grunwald, J., Torchilin, V. P. Cell-penetrating TAT peptide in drug delivery systems: proteolytic stability requirements. Drug Delivery. 18 (5), 377-384 (2011).
  32. Chu, Y., et al. Topical ocular delivery to laser-induced choroidal neovascularization by dual internalizing RGD and TAT peptide-modified nanoparticles. International Journal of Nanomedicine. 12, 1353-1368 (2017).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Koniugacja peptyd wobci anie doksorubicyntest wychwytu kom rkowegomikroskopia fluorescencyjnapomiar potencja u zetaobrazowanie TEMsynteza nanocz steczek PLGAreakcja aktywacji estru
Synteza i charakterystyka nanocząstek lipidowo-polimerowych siarczanu chondroityny A (plCSA) ukierunkowanych na łożysko
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki Korzystania

Zasady

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.