Method Article

Metoda cięcia i pływania tkanki zatopionej w parafinie do cięcia

DOI:

10.3791/58288

⸱

September 5th, 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Institute of Life Science, Nanchang University, 2Queen Mary School, Medical Department, Nanchang University, 3School of Life Science, Nanchang University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tutaj prezentujemy protokół mający na celu poprawę podziału parafiny. Metoda ta łączy cięcie i pływanie za pomocą prostej studzienki termostatycznej, aby uniknąć procesu przenoszenia wymaganego przez metodę konwencjonalną. W rezultacie znacznie poprawiła się wydajność i liczba nienaruszonych skrawków parafiny.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Cięcie tkanki zatopionej w parafinie jest szeroko stosowane w histologii i patologii. Jest to jednak żmudne. Aby udoskonalić tę metodę, kilka firm komercyjnych opracowało złożone systemy przenoszenia przekrojów wykorzystujące płynną wodę. Aby uprościć tę technologię, stworzyliśmy prostą metodę przy użyciu domowego sprzętu, który łączy cięcie i pływanie w prostej komorze termostatycznej; Dzięki temu sekcje automatycznie wchodzą do łaźni wodnej na powierzchni wody. Hipokamp z mózgów dorosłych myszy, nerek dorosłych myszy, embrionalnych mózgów myszy i oczu dorosłych danio pręgowanego przecięto przy użyciu zarówno konwencjonalnego przekroju parafinowego, jak i przedstawionej metody dla porównania. Analiza statystyczna pokazuje, że nasza ulepszona metoda pozwoliła zaoszczędzić czas i pozwoliła uzyskać wyższą jakość sekcji. Ponadto cięcie parafinowe całej próbki w krótkim czasie jest łatwe dla młodszych operatorów.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Badanie morfologiczne jest ważne w badaniach biologicznych. Chociaż nowa technologia pozwoliła naukowcom obserwować swoje cele bezpośrednio z całej tkanki lub organizmu1,2,3, cięcie próbki na cienkie sekcje, a następnie barwienie, pozostaje podstawową metodą nie tylko morfologii tkanki, ale także białka ukierunkowanego bezpośrednio w tkance. W mikroskopii świetlnej wykorzystuje się trzy typy przekrojów: parafinowy, mrożony i półcienki. Chociaż kriosekcja jest powszechna w celu ochrony antygenowości tkanek, a przygotowanie próbki jest proste, morfologia zatrzymanej tkanki jest....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wszystkie opisane tutaj metody zostały zatwierdzone przez Komitet ds. Opieki nad Zwierzętami i Użytkowania Uniwersytetu Nanchang.

1. Złóż sprzęt i podłącz mikrotom

  1. Zaprojektuj parametr zgodnie z wymaganiami (Uzupełniające Rysunek 1).
  2. Prześlij parametr do lokalnej fabryki w celu wyprodukowania tablic akrylowych.
  3. Złóż wszystkie części po kolei: Użyj chloroformu, aby połączyć 7 komercyjnych płyt akrylowych w zbiornik z kanałem sekcyjnym i kąpielą wodną ( Rysunek 1).
    UWAGA: Chloroform wytwarza substancje toksyczne, gdy styka ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ulepszona metoda zwiększyła liczbę nienaruszonych skrawków parafiny. Przetestowaliśmy tę nową metodę na tkance hipokampa dorosłej myszy, nerkach dorosłych myszy, embrionalnych mózgach myszy i oczach zebry. Do zbiornika dodawano wodę, a temperatura wody utrzymywała się w zakresie od 38,0 °C do 40,0 °C. Po seryjnym przygotowaniu próbek tkanek zostały one pokrojone i porównane z konwencjonalnym cięciem. Nowa metoda pozwoliła uniknąć utraty sekcji i zwiększyła odsetek nienaruszonych skrawków .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Aby poprawić morfologię przekroju parafiny i rozwiązać problem marnowania czasu podczas konwencjonalnego cięcia parafiny, stworzyliśmy ulepszoną metodę cięcia parafiny, która łączy cięcie i rozwijanie. Ta ulepszona metoda opiera się na prostym sprzęcie, który składa się z kanału sekcyjnego, łaźni wodnej i grzałki z przełącznikiem wykrywania temperatury. Taśma sekcji wchodzi do łaźni wodnej przez kanał sekcji i rozwija się automatycznie podczas cięcia. Dlatego metoda ta poprawia jakość i wydajność cięcia parafiny, co zost.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy posiadają patent na to urządzenie i deklarują brak sprzecznych interesów.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ta praca była wspierana przez Narodową Fundację Nauk Przyrodniczych Chin (Grant nr 31400936, 31460260) oraz Fundację Nauk Przyrodniczych prowincji Jiangxi w Chinach (20171BAB215020). Dziękujemy również wspólnemu programowi Uniwersytetu Nanchang i Uniwersytetu Królowej Marii w Londynie za wsparcie tych prac.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
InkubatorBoekel Scientific133000-2
Etanol Sinopharm Chemical Reagent Co., Pokrywka64-17-5
Ksylen Sinopharm Chemical Reagent Co., pokrywka1330-20-7
ParaplastLeica39601006
Podgrzewany moduł zatapiania parafinyLeica
TrichlorometanSinopharm Chemical Reagent Co., Pokrywka67-66-3
Regulator temperatury (12 V 120 W)MingsuoXH-W3002
Mikrotom obrotowy Leica
Neutralny uszczelniaczsilikonowy Połącz kanał wodny z uchwytem noża do mikrotomów
Transformator napięciaDearllS-250-12
Ostrze jednorazoweAccu-Edge4689
HematoxylinBaso Diagnostics Inc.BA-4025
Eozyna Baso Diagnostyka Inc.BA-4025
Microslide Sail Marka7105
Neutralny balsamSinopharm Chemical Reagent Co., Pokrywka10004160
Szkiełko nakrywkowe Citoglas10212424C
MikroskopCarl Zeiss
Kwas solnyXilong Chemical7647-01-0
Kąpiel wodna do sekcji parafinowychLeica
HistoCore Arcadia C - Zimna płytaLeica
odstraszający parafinę Thermo Scientific9990420
Komercyjna płyta akrylowa Leica Rurowy elektryczny element grzejny (12 V 200 W) spray

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chung, K., Deisseroth, K. CLARITY for mapping the nervous system. Nature Methods. 10 (6), 508-513 (2013).
  2. Fujita, S. Analysis of neuron differentiation in the central nervous system by tritiated thymidine autoradiography. Journal of Comparative Neurology. 122 (3), 311-327 (1964).
  3. Mironov, V., Boland, ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Paraffin SectioningTissue SectioningCutting Floating MethodWater Bath SectioningMicrotome SectioningSection Transfer SystemThermostatic ChamberSection Quality AnalysisHematoxylin Eosin StainingWhole Specimen Sectioning

Related Articles