Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Zwiększenie skuteczności przeciwciał przeciwnowotworowych przez leki przeciwnowotworowe: wykrywanie synergizmu przeciwciało-lek za pomocą równania indeksu kombinacji

12K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/58291

⸱

19 stycznia 2019

 ,  ,  ,  ,  , 
1Centre de Recherche en Cancérologie et Immunologie Nantes Angers (CRCINA), Institut national de la santé et de la recherche médicale (INSERM), Université d'Angers, Université de Nantes, Nantes, France, 2Service de chirurgie pédiatrique, Centre hospitalier universitaire (CHU) de Nantes, Nantes, France, 3Unité de Formation et Recherche (UFR) des Sciences Pharmaceutiques et Biologiques, Université de Nantes, Nantes, France

* These authors contributed equally

W tym artykule

Podsumowanie

Ten protokół opisuje, jak ocenić synergizm między przeciwciałem przeciwnowotworowym a lekami przeciwnowotworowymi w modelach przedklinicznych za pomocą równania indeksu kombinacji Chou i Talalay.

Streszczenie

Wzmocnienie wrogich przeciwciał monoklonalnych (mAb) przez chemioterapeutyki stanowi cenną strategię projektowania skutecznej i bezpieczniejszej terapii przeciwko rakowi. W tym miejscu przedstawiamy protokół identyfikacji racjonalnej kombinacji na etapie przedklinicznym. Po pierwsze, opisujemy test oparty na komórkach w celu oceny synergii między przeciwnowotworowym mAb a lekami cytotoksycznymi, który wykorzystuje równanie indeksu kombinacji Chou i Talalay1. Obejmuje to pomiar wrażliwości komórek nowotworowych na leki i przeciwciała za pomocą testu MTT, a następnie zautomatyzowaną analizę komputerową w celu obliczenia wartości indeksu kombinacji (CI). Wartości CI wynoszące <1 wskazują na synergizm między badanymi mAb a czynnikami cytotoksycznymi1. Aby potwierdzić wyniki badań in vitro in vivo, opisujemy metodę oceny skuteczności schematu skojarzonego w modelu guza ksenoprzeszczepu. W tym modelu skojarzony schemat znacznie opóźnia wzrost guza, co skutkuje znacznym wydłużeniem przeżycia w porównaniu z kontrolami z pojedynczym środkiem. Co ważne, eksperymenty in vivo wykazały, że schemat skojarzony jest dobrze tolerowany. Protokół ten umożliwia skuteczną ocenę kombinacji leków przeciwnowotworowych w modelach przedklinicznych oraz identyfikację racjonalnej kombinacji do oceny w badaniach klinicznych.

Wprowadzenie

Konwencjonalne podejście w leczeniu wielu różnych typów nowotworów opierało się na monoterapii. Choć metoda ta jest wciąż stosowana w wielu przypadkach, napotkała ona szereg przeszkód, co doprowadziło do wyboru terapii skojarzonych2. W szczególności komórki nowotworowe są bardziej podatne na rozwój oporności podczas leczenia pojedynczym lekiem poprzez indukcję alternatywnych mechanizmów przetrwania3, co prowadzi do niepowodzenia terapeutycznego u pacjentów4. Ponadto w monoterapii leki są zazwyczaj podawane w wysokich dawkach. Sytuacja ta często skutkuje wystąpieniem silnych, zależnych od dawki działań niepożądanych, które mogą być nie do zniesienia i zmuszać lekarzy do przerwania leczenia2. Z tych powodów obecnie preferuje się łączenie cząsteczek przeciwnowotworowych nad monoterapią.

Idealne kombinacje leków to takie, które działają synergistycznie przeciwko komórkom nowotworowym, nie zwiększając jednocześnie toksyczności wobec komórek prawidłowych. Synergizm odnosi się do oddziaływania dwóch lub więcej leków, które wywołuje efekt terapeutyczny większy niż suma efektów każdego z leków działających osobno. Takie interakcje mogą prowadzić do zwiększenia klinicznej skuteczności terapeutycznej2. Ograniczają one oporność na leczenie, zwiększają skuteczność i mogą również zmniejszać toksyczność2. W rzeczywistości dawka każdego leku może zostać zmniejszona w celu zredukowania działań niepożądanych poprzez celowanie w różne szlaki sygnałowe. Ponadto jedna z cząsteczek może pełnić rolę czynnika uwrażliwiającego komórki nowotworowe. Działanie drugiego leku może zostać wzmocnione w komórkach uwrażliwionych, co pozwala na zastosowanie mniejszych dawek5.

Terapia skojarzona może obejmować dwa lub więcej leków chemioterapeutycznych i/lub leków biologicznych, takich jak przeciwciała monoklonalne6. Przeciwciała te specyficznie celują w komórki wykazujące ekspresję interesującego antygenu powierzchniowego i są zdolne do niszczenia komórek nowotworowych poprzez szlaki immunologiczne, w tym cytotoksyczność zależną od przeciwciał (ADCC), z udziałem efektorowych komórek układu odpornościowego7, oraz cytotoksyczność zależną od dopełniacza (CDC)6. Mogą one również działać via nieimmunologiczny mechanizm zapśredniczony przez apoptozę8,9,10,11. W takim przypadku indukcja procesu programowanej śmierci komórki może uwrażliwić komórki nowotworowe, osłabić ich funkcje i sprawić, że towarzyszący lek chemioterapeutyczny będzie bardziej skuteczny przy niższej dawce. W związku z tym proapoptotyczne przeciwciała monoklonalne są dobrymi kandydatami do projektowania schematów skojarzonych z lekami przeciwnowotworowymi.

Opisano różne modele matematyczne służące do oceny synergizmu leków; jednym z nich jest metoda indeksu kombinacji1. Metoda ta opiera się na zasadzie efektu medianowego opracowanej przez Chou1. Równanie efektu medianowego koreluje dawkę leku z efektem leku w następujący sposób.

Wzór na dyfuzję D=Dm[Fa/(1-Fa)]^(1/m), badania edukacyjne.

Tutaj D to dawka leku; Dm to dawka efektu medianowego; Fa to frakcja poddana działaniu dawki; m to wykładnik określający kształt wykresu zależność dawka-efekt1. Dawka efektu medianowego jest wykorzystywana do obliczenia dawki Dx leku, która hamuje lub zabija „x” procent komórek. Następnie oblicza się wartość CI, aby ocenić efekt addytywny kombinacji leków, w następujący sposób1.

Równanie CI dla analizy interakcji leków; wykorzystuje wzór CI=(D)1/(Dx)1+(D)2/(Dx)2.

Wartość CI równa 1 wskazuje na efekt addytywny, wartość CI <1 wskazuje na efekt synergistyczny, natomiast wartość CI >1 wskazuje na antagonizm1. Zastosowanie tej metody jest dodatkowo ułatwione dzięki dostępności programu komputerowego CompuSyn, który automatycznie określa synergizm i antagonizm dla wszystkich symulowanych dawek lub poziomów efektu12.

Nasz zespół opracował przeciwciało monoklonalne (mAb) 8B6 specyficzne dla antygenu neuroblastoma gangliozydy O-acetyl-GD2 (OAcGD2)13, a następnie wykazał, że mAb to jest w stanie indukować śmierć komórek o charakterze apoptozy11. Aby zbadać, czy mAb 8B6 może uwrażliwić komórki neuroblastoma na środek przeciwnowotworowy topotekan, zaadaptowaliśmy wspomnianą wyżej metodę opracowaną przez Chou1. Najpierw wyznaczamy wartości dawki efektywnej 50 (ED50) dla mAb 8B6 oraz topotekanu. Następnie komórki neuroblastoma poddaje się działaniu obu związków w stosunkach ekwiwalentnych w oparciu o wartości ED50, aby wyznaczyć wartości CI przy użyciu wspomnianego wcześniej oprogramowania symulacyjnego. Metoda ta pozwala nam wykazać synergizm między mAb 8B6 a topotekanem in vitro. W dalszej części opisujemy protokół służący do dalszej oceny skuteczności i bezpieczeństwa tego schematu skojarzonego in vivo. Protokół ten można z łatwością zastosować w celu wyboru skutecznych i bezpiecznych kombinacji przeciwnowotworowych przeciwciał monoklonalnych i środków chemioterapeutycznych w badaniach przedklinicznych. Schematyczna prezentacja tego badania została przedstawiona na Rysunku 1.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Hodowla zwierząt i procedura eksperymentalna zostały zatwierdzone przez rząd francuski (umowy #C44-278 i #APAFIS 03479.01). Opieka nad zwierzętami i procedury zostały przeprowadzone zgodnie z dyrektywą UE 2010/63/UE i francuską ustawą #2013-118 o ochronie zwierząt wykorzystywanych do celów naukowych.

1. Ocena interakcji między mAb 8B6 a topotekanem in vitro

  1. Przygotowanie próbki w 96 dołkach
    UWAGA: Skonsultuj się z komisją ds. zdrowia i bezpieczeństwa instytucji i postępuj zgodnie z lokalnymi przepisami dotyczącymi bezpieczeństwa laboratoryjnego. Review informacje z karty charakterystyki substancji niebezpiecznej przed rozpoczęciem pracy z jakimikolwiek pożywkami, liniami komórkowymi lub odczynnikami. Używaj odpowiedniej sterylnej techniki i pracuj w okapie z przepływem laminarnym. Wszystkie roztwory/urządzenia używane do manipulowania komórkami muszą być sterylne.
    UWAGA: Poniższy protokół został opracowany do użytku z komórkami przylegającymi. Wymagane są modyfikacje w celu zastosowania metody do nieprzylegających komórek rosnących w zawiesinie; W tym protokole stosuje się poczwórne duplikaty dla każdego warunku eksperymentalnego.
    1. Hoduj komórki IMR5 w kolbie T75.
    2. Pierwszego dnia (dzień 0) obserwuj hodowlę komórkową pod mikroskopem, aby sprawdzić zbieżność komórek. Odessać pożywkę komórkową z kolby, przemyć ją 5 ml soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (PBS) i dodać 3 ml 0,05% roztworu kwasu etylenodiaminotetraoctowego (EDTA)/PBS. Umieścić kolbę z powrotem w inkubatorze na 3 minuty (37 °C, 5% CO2 ).
    3. Zbadaj kulturę komórkową pod mikroskopem pod kątem oderwania komórek.
      UWAGA: W razie potrzeby umieść kolbę z powrotem w inkubatorze na dodatkowe 3 do 5 minut, w zależności od typu komórki nowotworowej.
    4. Dodać 10 ml kompletnej pożywki komórkowej do kolby i przenieść zawiesinę komórek do sterylnej stożkowej probówki o pojemności 15 ml. Odwirowywać komórki przez 5 minut przy 300 x g. Policz komórki za pomocą hemocytometru.
    5. Usunąć i wyrzucić sklarowany osad. Ponownie zawiesić osad komórkowy w kompletnym pożywce wzrostowej. Dostosuj objętość podłoża, aby uzyskać końcowe stężenie 1 x 105 komórek/ml.
    6. Wysiewaj 84 dołki z 96-dołkowej płytki hodowlanej z 104 komórkami każda, co daje 100 μl zawiesiny komórek. Postępuj zgodnie z eksperymentalnym układem pokazanym w Rysunek 2.
    7. Inkubować komórki przez 18 godzin w inkubatorze komórkowym (37 °C, 5% CO2 ).
  2. Przygotowanie roztworu leku
    UWAGA: W przypadku badań uczulenia na lek/mAb należy zmodyfikować czas, czas trwania i stężenie leczenia, aby dopasować je do konkretnego leku/mAb, o którym mowa. Należy pamiętać, że stężenie początkowe jest 3x większe niż stężenie końcowe.
    1. Następnego ranka (dzień 1) przygotuj następujące roztwory leków, używając kompletnej pożywki wzrostowej.
      1. Przygotowanie roztworu mAb
        1. Rozcieńczyć mAb w 500 μl kompletnej pożywki wzrostowej w celu uzyskania roztworu roboczego przeciwciała o stężeniu mAb 240 μg/ml.
        2. Wykonaj pięć podwójnych seryjnych rozcieńczeń, jak pokazano w Rysunek 2.
      2. Przygotowanie roztworu topotekanu
        1. Rozcieńczyć lek jak wyżej, w 500 μl kompletnej pożywki wzrostowej, aby otrzymać roztwór roboczy leku o końcowym stężeniu 120 nM.
        2. Wykonaj pięć podwójnych seryjnych rozcieńczeń, jak pokazano w Rysunek 2.
      3. Przygotowanie przeciwciał i roztworów leków
        1. Rozcieńczyć lek i roztwory mAb w 500 μl kompletnej pożywki wzrostowej, aby otrzymać roztwór o stężeniu 120 nM leku i 240 μg/ml mAb (roztworu roboczego).
        2. Wykonaj pięć podwójnych seryjnych rozcieńczeń, jak pokazano w Rysunek 2.
    2. Aby uzyskać końcowe stężenie, przenieś 50 μl każdego roztworu leku do odpowiednich studzienek, jak wskazano w układzie eksperymentalnym ( Rysunek 2).
      UWAGA: Przenieś 50 μl kompletnej pożywki wzrostowej do nietraktowanych dołków komórkowych, jak wskazano w Rysunek 2.
    3. Inkubować komórki przez 72 godziny w inkubatorze (37 °C, 5% CO2 ).
  3. Test MTT
    1. Dodać 10 μl roztworu odczynnika MTT do każdego dołka.
    2. Inkubować w temperaturze 37 °C przez 4 godziny.
    3. Dodać 100 μl roztworu do lizy (10% SDS w 0,01 M HCl) do każdego dołka za pomocą pipety wielokanałowej i dokładnie wymieszać pipetując.
    4. Inkubować w temperaturze 37 °C przez 4 godziny w wilgotnej komorze (95% wilgotności).
    5. Odczytać absorbancję przy 570 nm (A570) i 620 nm (A620) za pomocą spektrofotometru.
      UWAGA: Ponownie wymieszać każdą próbkę przez pipetowanie przed odczytaniem absorbancji; Absorbancja przy 620 nm pozwala na korekcję niespecyficznych wartości tła.
    6. Obliczyć skorygowaną absorbancję: skorygowana absorbancja = A570- A620.
    7. Obliczyć żywotność komórek w następujący sposób: żywotność komórek = 100 x (średnia skorygowana absorbancja próbki / kontrolna średnia skorygowana absorbancja).
    8. Obliczyć wartości wpływające na frakcję (Fa), stosując następujące równanie: 1 - (średnia skorygowana absorbancja próbki / kontrolna średnia skorygowana absorbancja).
  4. Oprogramowanie do symulacji analitycznej interakcji leków do badań pojedynczych i skojarzonych
    1. Uruchom oprogramowanie symulacyjne, aby otworzyć okno startowe.
    2. Kliknij przycisk Nowy eksperyment, aby otworzyć okno główne.
    3. Wpisz nazwę eksperymentu w oknie Nazwa.
      UWAGA: Datę można dodać w oknie Data.
    4. Kliknij przycisk Nowy pojedynczy lek.
    5. Wpisz imię i nazwisko w oknie Imię i nazwisko.
    6. Wpisz skrót w oknie Skrót.
    7. Wpisz jednostkę stężenia leku w oknie Jednostki.
    8. Wprowadź wartość dawki i Fa w punkcie danych 1, naciśnij Enter.
    9. Powtarzaj ten krok, aż zostaną wprowadzone wszystkie punkty danych.
    10. Kliknij przycisk Gotowe.
    11. Wykonaj te same czynności, aby wprowadzić mAb Data Points.
      UWAGA: Użyj tej samej jednostki stężenia, która jest używana przez lek.
    12. Kliknij przycisk New Drug Combo (Nowa kombinacja leków).
    13. Wybierz Lek i mAb.
    14. Wybierz Stały stosunek i kliknij OK.
    15. Wpisz imię i nazwisko w oknie Imię i nazwisko.
    16. Wpisz skrót w oknie Skrót.
    17. Wpisz stosunek leku/mAb w polu Stosunek okna.
    18. Wprowadź punkt danych 1 Dawka i naciśnij Enter.
      UWAGA: Program automatycznie obliczy dawki mAb i Combo.
    19. Wprowadź wartość punktu danych 1 Fa i naciśnij Enter.
    20. Powtarzaj ten krok, aż zostaną wprowadzone wszystkie punkty danych.
    21. Kliknij przycisk Gotowe, a następnie kliknij przycisk Generuj raport.
    22. Wybierz lek i mAb, a następnie kliknij przycisk OK.
    23. Wybierz opcję Combo, a następnie kliknij przycisk OK.
    24. Wybierz pozycję Nagłówek, Tabela ciągłej integracji i Tabela podsumowania. Następnie kliknij przycisk OK.
    25. Wpisz nazwę pliku analizy i kliknij przycisk ZAPISZ, aby wygenerować raport.
      UWAGA: Po kliknięciu przycisku OK raport zostanie automatycznie otwarty w domyślnej przeglądarce internetowej komputera.
    26. Aby wydrukować raport, wybierz opcję Drukuj z menu plików przeglądarki internetowej. Raport zawiera sekcję tabeli podsumowującej, która zawiera tytuł, datę, nazwę pliku, notatkę opisową, parametry (m, Dm i r), ED50 dla każdego leku stosowanego w monoterapii lub w skojarzeniu oraz tabelę CI dla każdej kombinacji w ED50, ED75, ED90 i ED95.
      UWAGA: Wartość CI <1 oznacza synergizm, wartość CI =1 oznacza addytywność, a wartość CI >1 oznacza antagonizm.

2. Generacja ludzkich ksenoprzeszczepów nerwiaka zarodkowego u nieotyłych myszy gamma z cukrzycą NOD (myszy NSG)

UWAGA: Wyklucz wszelkie zanieczyszczenia kultury komórkowej. Ponieważ matryca błony podstawnej tworzy żel o temperaturze powyżej 5 °C, wszystkie kultury lub podłoża mające kontakt z odczynnikiem do matrycy błony podstawnej powinny być wstępnie schłodzone/lodowate. Utrzymuj matrycę błony podstawnej na lodzie podczas całego procesu.

  1. Przygotowanie zawiesiny komórek IMR5
    1. Przed użyciem rozmrozić odczynnik do matrycy błony podstawnej przez noc, zanurzając fiolkę w lodzie w lodówce o temperaturze 4 °C.
    2. W dniu 0 zbierz wyhodowane komórki IMR5, jak opisano powyżej.
    3. Przenieść komórki do stożkowej probówki o pojemności 15 ml i wirować przy 300 x g przez 5 minut.
    4. Odrzucić supernatant. Umyj komórki 2x 15 ml lodowatego PBS i przygotuj zawiesinę komórek 5 x 107 komórek/ml w lodowatym PBS.
      UWAGA: W razie potrzeby przenieś zawiesinę komórek do probówki mikrowirówkowej o pojemności 1,5 ml.
    5. Zakręcić fiolkę z matrycą błony podstawnej.
      UWAGA: Odczynnik matrycy błony podstawnej należy rozmrozić i zdyspergować.
    6. Dodać jedną objętość odczynnika do macierzy błony podstawnej i wymieszać ją pipetując, aby uzyskać zawiesinę komórek o wymiarach 2,5 x 107 komórek/ml.
    7. Zawiesinę komórkową należy przechowywać na lodzie.
  2. Przygotowanie myszy
    UWAGA: Myszy powinny mieć od sześciu do siedmiu tygodni.
    1. Utrzymuj myszy w określonych warunkach wolnych od patogenów.
    2. Odczekaj trzy- do pięciu dni okres aklimatyzacji po przybyciu myszy.
    3. W dniu inokulacji należy ogolić bok, w którym zostanie wykonane wstrzyknięcie (patrz krok 2.3.6).
  3. Przygotowanie iniekcji do komórek nowotworowych
    UWAGA: Utrzymuj lodowate zawiesinę komórek macierzy błony podstawnej w aseptyki przez cały czas trwania zabiegu.
    1. Wymieszać komórki i ostrożnie pobrać zawiesinę komórek do strzykawki o pojemności 1 ml wyposażonej w igłę 21 G.
    2. Sprawdzić, czy w strzykawce nie ma pęcherzyków powietrza.
    3. Zdezynfekuj obszar inokulacji myszy roztworem antyseptycznym.
    4. Delikatnie ścisnąć skórę myszy na boku między palcami, w miejscu wstrzyknięcia.
    5. Wbić igłę dokładnie w fałd skórny. Nie należy umieszczać igły głęboko w tkance, aby zapewnić wstrzyknięcie podskórne.
    6. Wstrzyknąć 100 μl zawiesiny komórek IMR5 (tj. 2,5 x 106 komórek) podskórnie w dolną prawą flankę myszy.
    7. Obrócić strzykawkę, aby zapobiec wyciekowi i wyjąć igłę.
  4. Monitorowanie zmian masy ciała i wzrostu guza
    1. Zmierz długość (A) i szerokość (B) guza za pomocą suwmiarki.
    2. Oblicz objętość guza za pomocą wzoru (A x B2) x 0,5.
    3. Rozpocznij terapię, gdy guzy osiągną średnią objętość ~50 - 60 mm3.

3. Podawanie leków i przeciwciał u myszy

  1. Dożylne podawanie mAb 8B6
    1. Ostrożnie napełnić strzykawkę o pojemności 1 ml z igłą 25 G roztworem mAb.
    2. Umieść mysz pod lampą grzewczą na 10 minut, aby rozszerzyć żyłę ogonową.
    3. Unieruchomić mysz w unieruchomieniu gryzoni.
    4. Zdezynfekuj obszar inokulacji myszy roztworem antyseptycznym.
    5. Wprowadzić igłę równolegle do żyły ogonowej, wnikając 2 - 4 mm w światło, trzymając skos igły skierowany do góry (Rysunek 3A).
    6. Wstrzyknąć dożylnie 100 μl roztworu przeciwciał (dożylnie).
    7. Po zakończeniu wstrzyknięcia należy delikatnie uciskać miejsce wstrzyknięcia, aby zapobiec krwawieniu.
  2. Dootrzewnowe podawanie topotekanu
    1. Pobrać roztwór leku do strzykawki o pojemności 1 ml wyposażonej w igłę o pojemności 25 g.
    2. Trzymaj mysz w pozycji leżącej, z jej tylnym końcem lekko uniesionym.
    3. Zdezynfekuj obszar inokulacji myszy roztworem antyseptycznym.
    4. Zlokalizuj linię środkową brzucha myszy i mentalnie podziel brzuch na ćwiartki. Zlokalizuj miejsce wstrzyknięcia w prawym lub lewym dolnym kwadrancie (Rysunek 3B).
    5. Wbić igłę do brzucha (na głębokość 5 mm) pod kątem ~10°, w prawej lub lewej dolnej ćwiartce.
    6. Wstrzyknąć 100 μl roztworu leku dootrzewnowo (i.p.).
    7. Zdezynfekować miejsce inokulacji.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Reprezentatywne wyniki i rysunki zostały zaadaptowane za zgodą z wcześniej opublikowaną pracą14.

Przeciwciało monoklonalne Anti-OAcGD2 mAb 8B6 synergistycznie nasila hamujący wpływ topotekanu na wzrost linii komórkowej neuroblastoma:

Aby ustalić stężenia leku i przeciwciała do oceny synergizmu między topotekanem a mAb 8B6, w pie...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Aby przewidzieć wpływ interakcji między lekami, można zastosować trzy metody: metodologię izobogromu17, nieliniowy model mieszaniny18 oraz indeks kombinacji1. Kombinowana analiza indeksowa jest najczęściej stosowana, ponieważ jej zastosowanie jest uproszczone dzięki dostępności przyjaznego dla użytkownika programu komputerowego. W tym celu najpierw scharakteryzowaliśmy odpowiedź dawka-skutek każdego środka stosowanego samodzielnie lub w połączeniu, w...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

S.Fa., J.F. i S.B. są wyznaczeni jako wynalazcy oczekujących patentów obejmujących kliniczne zastosowanie przeciwciał terapeutycznych anty-O-acetylo-GD2.

Podziękowania

Grant support: Fondation de Projet de L'Université de Nantes, les Bagouz' à Manon, La Ligue contre le Cancer comité de Loire-Atlantique, comité du Morbihan, and comité de Vendée, une rose pour S.A.R.A.H, L'Etoile de Martin and la Société Française de Lutte contre les Cancers et les leucémies de L'Enfant et de de L'adolescent (SFCE). M.B. i J.F. są wspierani przez La Ligue Contre Le Cancer. Autorzy dziękują UTE-obiektowi Structure Fédérative de Recherche François Bonamy. Autorzy dziękują również dr S. Suzin (Inserm, Paryż) za dostarczenie komórek IMR5 oraz pani H. Estéphan za pomoc techniczną.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Zestaw do proliferacji komórek (MTT)Roche11-465-007-001
Oprogramowanie CompuSynCombosynmożna pobrać bezpłatnie ze strony http://www.combosyn.com
Golarka elektrycznaBiosebBIO-1556
Surowica cielęca płoduEurobioCVFSVFF00-0110% inaktywowana termicznie surowica cielęca płodu w RPMI 1640
Firefox Mozilla CorporationFirefox można pobrać za darmo ze strony http://www.mozilla.org/en-US/firefox/
Heat lampVerre& Kwarc4003/1R
Ludzka linia komórkowa nerwiaka zarodkowego IMR-5Accegen BiotechnologyABC-TC0450IMR-5 jest klonem ludzkiej linii komórkowej nerwiaka zarodkowego IMR32 5459762. Komórki IMR-5 zostały hojnie dostarczone przez Dr. Santos Susin (U.872, Paryż, Francja)
L-glutaminaGibco25030-0242 mM w roztworze do lizy RPMI 1640
 Roche 11-465-007-001
mAb 8B6University of NantesN/A
MatrigelCorning354248
Multiskan FCThermofischer Scientific N08625
Igła 21G 1 & frac12;  do 304432BD Microlance
25G 1TerumoNN-2525R
Myszy NSGCharles River Laboratories5557
Nunc MicroWell 96-dołkowe mikropłytkiThermofisher167008
PBSVWRL182-10
PBS, 0,05% EDTASigma-AldrichE9884
PC, który działa Windows 7MicrosoftWindows 7 można kupić pod adresem http://www.microsoft.com/en-gb/software-download/windows7
Penicylina-StreptomycynaGibco15140-122100 jednostek/ml penicyliny i 100 mg/ml streptomycyny w RPMI 1640
Zbiornik odczynnikaThermofischer Scientific8094
Odstraszacz gryzoniBiosebTV-150-SM
RPMI 1640Gibco31870-025
Strzykawka 1 mlHenke Sass Wolf5010.200V0
TopotecanSigma-AldrichT2705
Igła

Bibliografia

  1. Chou, T. C. Theoretical basis, experimental design, and computerized simulation of synergism and antagonism in drug combination studies. Pharmacological Reviews. 58 (3), 621-681 (2006).
  2. Bayat Mokhtari, R., et al. Combination therapy in combating cancer. Oncotarget. 8 (23), 38022-38043 (2017).
  3. Zahreddine, H., Borden, K. L. Mechanisms and insights into drug resistance in cancer. Frontiers in Pharmacology. 4, 28(2013).
  4. Martin, T. P., Baguley, D., et al. Re: "Postoperative validation of bone-anchored implants in the single-sided deafness population." Snapp et al. Otol Neurotol 2012: 33;291-6. Otol Neurotol. 34 (4), 777-778 (2013).
  5. Choi, B., et al. Sensitization of lung cancer cells by altered dimerization of HSP27. Oncotarget. 8 (62), 105372-105382 (2017).
  6. Weiner, L. M., Surana, R., Wang, S. Monoclonal antibodies: versatile platforms for cancer immunotherapy. Nature Reviews Immunology. 10 (5), 317-327 (2010).
  7. Mellor, J. D., Brown, M. P., Irving, H. R., Zalcberg, J. R., Dobrovic, A. A critical review of the role of Fc gamma receptor polymorphisms in the response to monoclonal antibodies in cancer. Journal of Hematology & Oncology. 6, 1(2013).
  8. Kowalczyk, A., et al. The GD2-specific 14G2a monoclonal antibody induces apoptosis and enhances cytotoxicity of chemotherapeutic drugs in IMR-32 human neuroblastoma cells. Cancer Letters. 281 (2), 171-182 (2009).
  9. Retter, M. W., et al. Characterization of a proapoptotic antiganglioside GM2 monoclonal antibody and evaluation of its therapeutic effect on melanoma and small cell lung carcinoma xenografts. Cancer Research. 65 (14), 6425-6434 (2005).
  10. Nakamura, K., et al. Apoptosis induction of human lung cancer cell line in multicellular heterospheroids with humanized antiganglioside GM2 monoclonal antibody. Cancer Research. 59 (20), 5323-5330 (1999).
  11. Cochonneau, D., et al. Cell cycle arrest and apoptosis induced by O-acetyl-GD2-specific monoclonal antibody 8B6 inhibits tumor growth in vitro and in vivo. Cancer Letters. 333 (2), 194-204 (2013).
  12. Chou, T. C., Martin, N. CompuSyn for drug combinations: PC software and user’s guide: a computer program for quantitation of synergism and antagonism in drug combinations, and the determination of IC50 and ED50 and LD50 values. , ComboSyn Inc. Paramus, NJ. (2005).
  13. Alvarez-Rueda, N., et al. A monoclonal antibody to O-acetyl-GD2 ganglioside and not to GD2 shows potent anti-tumor activity without peripheral nervous system cross-reactivity. PLoS One. 6 (9), e25220(2011).
  14. Faraj, S., et al. Neuroblastoma chemotherapy can be augmented by immunotargeting O-acetyl-GD2 tumor-associated ganglioside. Oncoimmunology. 7 (1), e1373232(2017).
  15. Ishikawa, F., et al. Development of functional human blood and immune systems in NOD/SCID/IL2 receptor {gamma} chain(null) mice. Blood. 106 (5), 1565-1573 (2005).
  16. Ullman-Cullere, M. H., Foltz, C. J. Body condition scoring: a rapid and accurate method for assessing health status in mice. Laboratory Animal Science. 49 (3), 319-323 (1999).
  17. Teicher, B. A. Assays for in vitro and in vivo synergy. Methods in Molecular Medicine. 85, 297-321 (2003).
  18. White, D. B., Slocum, H. K., Brun, Y., Wrzosek, C., Greco, W. R. A new nonlinear mixture response surface paradigm for the study of synergism: a three drug example. Current Drug Metabolism. 4 (5), 399-409 (2003).
  19. Mosmann, T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays. Journal of Immunological Methods. 65 (1-2), 55-63 (1983).
  20. Huyck, L., Ampe, C., Van Troys, M. The XTT cell proliferation assay applied to cell layers embedded in three-dimensional matrix. Assay and Drug Development Technologies. 10 (4), 382-392 (2012).
  21. Thompson, J., et al. Synergy of topotecan in combination with vincristine for treatment of pediatric solid tumor xenografts. Clinical Cancer Research. 5 (11), 3617-3631 (1999).
  22. Tan, M., Fang, H. B., Tian, G. L., Houghton, P. J. Experimental design and sample size determination for testing synergism in drug combination studies based on uniform measures. Statistic in Medicine. 22 (13), 2091-2100 (2003).
  23. Tang, X. X., et al. Implications of EPHB6, EFNB2, and EFNB3 expressions in human neuroblastoma. Proceding of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (20), 10936-10941 (2000).
  24. Mehta, R. R., Graves, J. M., Hart, G. D., Shilkaitis, A., Das Gupta, T. K. Growth and metastasis of human breast carcinomas with Matrigel in athymic mice. Breast Cancer Research and Treatment. 25 (1), 65-71 (1993).
  25. Mullen, P., Ritchie, A., Langdon, S. P., Miller, W. R. Effect of Matrigel on the tumorigenicity of human breast and ovarian carcinoma cell lines. International Journal of Cancer. 67 (6), 816-820 (1996).
  26. Feng, C., Tang, S., Wang, J., Liu, Y., Yang, G. Topotecan plus cyclophosphamide as maintenance chemotherapy for children with high-risk neuroblastoma in complete remission: short-term curative effects and toxicity. Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao. 33 (8), 1107-1110 (2013).
  27. Cheung, N. K., et al. Ganglioside GD2 specific monoclonal antibody 3F8: a phase I study in patients with neuroblastoma and malignant melanoma. Journal of Clininical Oncology. 5 (9), 1430-1440 (1987).
  28. Nair, A. B., Jacob, S. A simple practice guide for dose conversion between animals and human. Journal of Basic Clinical Pharmacy. 7 (2), 27-31 (2016).
  29. Dayde, D., et al. Tumor burden influences exposure and response to rituximab: pharmacokinetic-pharmacodynamic modeling using a syngeneic bioluminescent murine model expressing human CD20. Blood. 113 (16), 3765-3772 (2009).
  30. Racki, W. J., et al. NOD-scid IL2rgamma(null) mouse model of human skin transplantation and allograft rejection. Transplantation. 89 (5), 527-536 (2010).
  31. Sherif, A., Winerdal, M., Winqvist, O. Immune Responses to Neoadjuvant Chemotherapy in Muscle Invasive Bladder Cancer. Bladder Cancer. 4 (1), 1-7 (2018).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Leki chemioterapeutycznetest MTTmodel ksenoprzeszczepu nowotworutest ywotno ci kom rekrozcie czenia seryjnewykrywanie synergizmuhamowanie wzrostu guzaterapia skojarzona lekami
Zwiększenie skuteczności przeciwciał przeciwnowotworowych przez leki przeciwnowotworowe: wykrywanie synergizmu przeciwciało-lek za pomocą równania indeksu kombinacji
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki Korzystania

Zasady

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.