Opisujemy rozwój szczupłego modelu myszy podobnego do PCOS z granulką dihydrotestosteronu w celu zbadania patofizjologii PCOS i potomstwa z tych matek podobnych do PCOS.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Hiperandrogenny model myszy do badania zespołu policystycznych jajników
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Hiperandrogenemia odgrywa kluczową rolę w funkcjach reprodukcyjnych i metabolicznych u kobiet i jest cechą charakterystyczną zespołu policystycznych jajników. Opracowanie szczupłego modelu myszy podobnego do PCOS, który naśladuje kobiety z PCOS, ma znaczenie kliniczne. W niniejszym protokole opisujemy taki model. Wkładając 4 mm długości krystalicznej granulki proszku DHT (dihydrotestosteron) (całkowita długość granulki wynosi 8 mm) i wymieniając ją co miesiąc, jesteśmy w stanie wyprodukować model myszy podobny do PCOS, z poziomem DHT w surowicy 2 razy wyższym niż myszy bez implantacji DHT (no-DHT). Zaobserwowaliśmy dysfunkcję rozrodczą i metaboliczną bez zmiany masy ciała i składu ciała. Wykazując wysoki stopień niepłodności, niewielka podgrupa tych samic myszy podobnych do PCOS może zajść w ciążę, a ich potomstwo wykazuje opóźnione dojrzewanie i zwiększony poziom testosteronu w wieku dorosłym. Ten podobny do PCOS model szczupłej myszy jest użytecznym narzędziem do badania patofizjologii PCOS i potomstwa z tych matek podobnych do PCOS.
Wprowadzenie
Hiperandrogenizm jest cechą charakterystyczną zespołu policystycznych jajników (PCOS) według kryteriów NIH oraz Towarzystwa Nadmiar Androgenów i PCOS (AE-PCOS). Kobiety z PCOS mają trudności z zajściem w ciążę i mają zwiększone ryzyko powikłań ciąży1. Nawet jeśli zajdą w ciążę, ich potomstwo płci żeńskiej ma niekorzystne skutki zdrowotne2,3. Modele zwierzęce zostały opracowane przy użyciu różnych strategii4,5,6,7,8,
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Tutaj prezentujemy szczegółowe protokoły przygotowania i wprowadzania granulatu DHT oraz testów reprodukcyjnych i metabolicznych. Myszy użyte w tym badaniu miały mieszane tło (C57/B6, CD1, 129Sv) i były utrzymywane z jedzeniem i wodą ad libitum w cyklu 14/10 godzin światła/ciemności w temperaturze 24 °C w obiekcie dla zwierząt Broadway Research Building w Johns Hopkins University School of Medicine. Wszystkie procedury zostały zatwierdzone przez Komitet ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt Uniwersytetu Johnsa Hopkinsa.
1. Utwórz model myszy podobny do PCOS
- Przygotowanie granulatu DHT
- Autoklaw r....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Poziomy DHT w surowicy i test tolerancji glukozy
Poziomy DHT w pobranym surowicy zmierzono za pomocą testu ELISA oraz LC-MS zgodnie z protokołami 1.24–1.25 oraz 2.9, 3.0. Bezwzględne wartości DHT różnią się pomiędzy spektrometrią mas a testem ELISA, jednak względna krotność (około 2-krotna) poziomu DHT w grupie z implantacją DHT względem grupy bez implantacji jest podobna w obu testach oraz we wszystkich eksperymentach
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Hiperandrogenizm jest kluczową cechą PCOS. Poziomy DHT w surowicy (dwa razy wyższe u myszy DHT niż u myszy bez DHT) stosowane w tym protokole są niższe niż te zgłaszane przez innych badaczy w poprzednich badaniach i są skalibrowane tak, aby proporcjonalnie naśladować kobiety z PCOS 5,19,20,21. W przeciwieństwie do innych modeli, ten 2-krotny model DHT nie zmienia masy ciała i składu całego ciał.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Nic do ujawnienia.
Podziękowania
Ta praca była wspierana przez National Institutes of Health (Granty R00-HD068130 dla S.W.) oraz Baltimore Diabetes Research Center: Pilots and Feasibility Grant (dla S.W.).
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Krystaliczny proszek 5α-DHT | Sigma-Aldrich | A8380-1G | |
| Dow Corning Silastic rurki | Fisher Scientific | 11-189-15D | 0,04 cala / 1 mm średnica wewnętrzna x0,085 cala / 2,15 mm średnica zewnętrzna |
| Klej medyczny silikon | Czynnik II, InC. | A-100 | |
| Gogle, fartuchy laboratoryjne, rękawice i maski. | |||
| 10 &mikro; L końcówki do pipet bez filtra | USA Scientific 11113700 | ||
| Szkiełko mikroskopowe do rozmazu | Fisher Scientific | 12-550-003 | |
| Diff Quik do barwienia komórek | Fisher Scientific | NC9979740 | |
| Lancet | Fisher Scientific | NC9416572 | |
| mL Strzykawka | Becton, Dickinson and Company (BD), | 30985 | |
| dołączona igła: 20 G | BD | 305176 | |
| Linijka: dowolna długość niż 10 cm ze skalą milimetrową. | |||
| Xylazine | Vet one AnnSeA LA, MWI, Boise | NDC13985-704-10 | 100 mg/ml |
| Chlorowodorek ketaminy | Hospira, Inc | NDC 0409-2051-05 | 100 mg/ml |
| Zszywka chirurgiczna | AutoClip® System, Fine Science Tool | 12020-00 | |
| Strzykawka insulinowa | BD | 329461 | 1/2 CC, strzykawka insulinowa o niskiej dawce U-100 |
| Trokar | Innowacyjne badania Ameryki Mikroskop | MP-182 | |
| Carl Zeiss Primo Star | 415500-0010-001 | Niemcy | |
| Dziurkacz w ucho | Fisher Scientific | 13-812-201 | |
| ELISA testosteronu szczur/mysz zestaw | IBL | B79174 | |
| DHT Zestaw ELISA | Alpha Diagnostic International | 1940 | |
| Ultraglukometr jednym dotknięciem | Life Scan, Inc. | ||
| Ultra paski testowe za jednym dotknięciem | Life Scan, Inc. | ||
| Rurka Eppendorf | Fisher Scientific | 05-402-18 | |
| Żyletka | Fisher Scientific | 12-640 | |
| Clidox | Podkładka chirurgiczna Fisher Scientific | ||
| Fisher Scientific | 50587953 | Producent: Andwin Scientific 56616018 | |
| Roztwór antyseptyczny Betadine | Walgreens | ||
| 3M Vetbond (cyjanoakrylan n-butylu) | 3M Science. Odnoszące się do życia |
Bibliografia
- Palomba, S., de Wilde, M. A., Falbo, A., Koster, M. P., La Sala, G. B., Fauser, B. C. Pregnancy complications in women with polycystic ovary syndrome. Hum. Reprod. Update. 21 (5), 575-592 (2015).
- Doherty, D. A., Newnham, J. P., Bower, C., Hart, R. Implicati....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
