Tutaj prezentujemy protokół do budowy modelu wysięku opłucnowego u szczurów poprzez dotchawcze wkroplenie poliakrylanu/nanokrzemionki.
Artykuł metodologiczny
Model wysięku opłucnowego u szczurów przez dotchawicze wkroplenie poliakrylanu/nanokrzemionki
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Wysięk opłucnowy jest powszechnym objawem klinicznym wielu chorób płuc. Posiadanie użytecznego zwierzęcego modelu wysięku opłucnowego jest bardzo ważne do badania tych chorób płuc. Poprzednie modele wysięku opłucnowego zwracały większą uwagę na czynniki biologiczne niż na nanocząstki w środowisku. W tym miejscu przedstawiamy model wytwarzania wysięku opłucnowego u szczurów poprzez dotchwiarskie wkraplanie poliakrylanu/nanokrzemionki oraz metodę izolacji nanocząstek w wysięku opłucnowym. Po dotchawczym wkropleniu poliakrylanu/nanokrzemionki o stężeniach 3,125, 6,25 i 12,5 mg/kg∙mL, wysięk opłucnowy u szczurów prezentowany w dniu 3 osiągnął szczyt w dniach 7-10 w grupach 6,25 i 12,5 mg / kg∙ml, a następnie powoli zmniejszał się i zniknął w dniu 14. Gdy stężenie poliakrylanu/nanokrzemionki wzrasta, wysięk opłucnowy jest wytwarzany szybciej i szybciej. Ten płyn opłucnowy został wykryty w badaniu ultrasonograficznym lub tomografii komputerowej klatki piersiowej i potwierdzony przez sekcję szczurów. Nanocząstki krzemionki obserwowano w wysięku opłucnowym szczurów za pomocą transmisyjnego mikroskopu elektronowego. Wyniki te wykazały, że narażenie na poliakrylan / nanokrzemionkę prowadzi do indukcji wysięku opłucnowego, co było zgodne z naszym poprzednim raportem u ludzi. Ponadto model ten jest korzystny dla dalszych badań nad nanotoksykologią i chorobami związanymi z wysiękiem opłucnowym.
Wprowadzenie
Wysięk opłucnowy jest bardzo częstym objawem klinicznym chorób płuc o różnych przyczynach. Posiadanie użytecznego zwierzęcego modelu wysięku opłucnowego jest bardzo ważne do badania tych chorób płuc, roli dwóch warstw błony opłucnej, mechanizmów wysięku opłucnowego i jego leczenia. Jednak niektóre zgłoszone modele wysięku opłucnowego koncentrują się głównie na złośliwym wysięku opłucnowym lub czynnikach biologicznych, a nie na nanocząstkach w środowisku1,2. Tutaj wprowadzamy nowy model wysięku opłucnowego, który jest prosty, bezpieczny i skuteczny.
Wraz z rozwojem nanotechnologii i szerokim zastosowaniem nanoproduktów, istnieje obawa o potencjalne zagrożenia nanomateriałów dla środowiska i zdrowia ludzkiego3,4. Nanomateriały wprowadzają czynniki ryzyka i potencjalnie prowadzą do nowych zagrożeń w miejscu pracy lub poprzez zanieczyszczenie środowiska. Badania in vitro i in vivo pokazują, że nanomateriały mogą powodować wielonarządowe uszkodzenia płuc, serca, wątroby, nerek i układu nerwowego, a także układu rozrodczego i odpornościowegos5,6. Ponadto niektóre badania wykazały, że specyficzna toksyczność nanomateriałów wynika z ich unikalnych właściwości fizykochemicznych3,4,7.
Informowaliśmy, że grupa pracowników z zawodowym narażeniem na nanomateriały klinicznie wystąpiła u grupy pracowników z wysiękiem opłucnowym i osierdziowym, zwłóknieniem płuc i ziarniniakiem8,9. Nanocząstki krzemionki wyizolowano w wysięku opłucnowym tych pacjentów9. W celu odtworzenia i zweryfikowania wysięku opłucnowego wywołanego przez wdychane nanocząstki u ludzi, przeprowadziliśmy eksperyment, wkraplając poliakrylan / nanokrzemionkę (PA / NPSi) przez drogi oddechowe u szczurów, które naśladowały oddychanie człowieka w rzeczywistym środowisku i stwierdziliśmy, że dotchawicze wkroplenie PA / NPSi może powodować wysięk opłucnowy u szczurów. Tutaj przedstawiamy, jak wywołać wysięk opłucnowy u szczurów przez dotchawicze wkroplenie PA / NPSi i jak wyizolować nanocząstki w wysięku opłucnowym. Model ten może być przydatny do dalszych badań nad nanotoksykologią i chorobami wysięku opłucnowego.
Protokół
Badanie było zgodne z wytycznymi Stołecznego Uniwersytetu Medycznego (Pekin, PR Chiny) dotyczącymi opieki i wykorzystania zwierząt doświadczalnych. Wszystkie procedury zostały zatwierdzone przez Komisję Etyki Zwierząt Stołecznego Uniwersytetu Medycznego w Chinach.
1. Przygotowania eksperymentalne
UWAGA: Zaaklimatyzuj samice szczurów Wistar wolne od patogenów (waga: 200 ± 10 g) do środowiska eksperymentalnego na tydzień przed podaniem (Warunki środowiskowe: jasne/ciemne:12h/12h, temperatura 22 ± 2 °C, wilgotność 50 ± 10%).
- Użyj świeżych 10 ml zawiesin PA/NPSi (nanokrzemionka Ø:20 ± 5 nm metodą polimeryzacji emulsyjnej in situ) rozcieńczonych w roztworze soli fizjologicznej w stężeniach odpowiednio 3,125, 6,25 i 12,5 mg/ml10. Przed podaniem należy sonikować zawiesiny przez 20-30 minut i wirować przez 10 minut, aby zapobiec agregacji nanocząstek.
- Równo podziel w sumie 20 szczurów na cztery grupy: jedna grupa dla każdego stężenia PA / NPSi (0, 3,125, 6,25 i 12,5 mg / ml).
- Aby je znieczulić, umieść szczury w zamkniętym pojemniku z 1,5 ml eteru (99,5%) lub innymi protokołami zatwierdzonymi przez IACUC. Po 60-90 s znieczulenia sprawdź, czy nie ma reakcji na odruch pedałowania. Upewnij się, że szczury oddychają.
- Połóż znieczulonego szczura na desce i przymocuj jego przednie zęby za pomocą wysterylizowanej linki nylonu również na desce.
- Otwórz usta i odsłoń szczelinę głośni za pomocą kleszczy chirurgicznych i soczewki czołowej.
- Wkraplanie szczurom 0,5 ml zawiesiny PA/NPSi do płuc każdego szczura w sumie 1 ml za pomocą cienkiej probówki ze sterylizowaną igłą do obustronnego oskrzela.
- Umieść szczury na plastikowej desce w pozycji leżącej na plecach i pozwól szczurom powoli dojść do siebie w ciągu 5-10 minut.
2. Badanie ultrasonograficzne w kierunku wysięku opłucnowego
- Użyj systemu ultrasonograficznego z przetwornikiem liniowym (częstotliwość: 8 MHz) do badania szczurów w dniach 1, 3, 7 i 1410.
- Podać szczurom znieczulenie (10% hydrat chloralu, 0,35 ml/100 g, i.p.) i sprawdzić, czy nie ma odruchów pedałowania.
- Usuń włosy z klatki piersiowej i górnej części brzucha szczurów za pomocą golarki elektrycznej. Następnie umieść szczura na płycie montażowej w pozycji leżącej.
- Pokryj skórę pokrytym żelem, a następnie umieść przetwornik w przestrzeni międzyżebrowej i obszarze podżebrowym, aby wykryć płyn opłucnowy.
UWAGA: W celu dokładnego wykrycia wysięku, do wykonania badania ultrasonograficznego wybrano lewą i prawą pozycję boczną. - Po badaniu ultrasonograficznym połóż szczura na plastikowej desce w pozycji leżącej na plecach i pozwól szczurom powoli dojść do siebie w ciągu 10 minut.
3. Tomografia komputerowa klatki piersiowej w kierunku wysięku opłucnowego
- W 7 i 14 dniu po podaniu znieczulić szczury 10% hydratem chloralu (i.p). Uznaj to za wystarczającą głębokość znieczulenia, gdy szczur nie reaguje na odruchy pedałowania.
UWAGA: Dzień 7 po podaniu to najodpowiedniejszy czas na obserwację wysięku opłucnowego za pomocą tomografii komputerowej. - Umieść szczura na plastikowym arkuszu w pozycji leżącej, a następnie zeskanuj jego klatkę piersiową, aby zbadać wysięk opłucnowy za pomocą 64-kanałowej tomografii komputerowej. Użyj następujących ustawień: konfiguracja detektora 64 mm x 0,625 mm, 120 kV (szczyt) i 350 mAs.
4. Zbieranie wysięku opłucnowego i izolacja nanocząstek w wysięku opłucnowym
- Po tomografii komputerowej klatki piersiowej szczurów i w znieczuleniu wodzianem chloralu sprawdź odruch pedałowania u szczurów, zgol włosy od brzucha do klatki piersiowej, a następnie zdezynfekuj skórę jodem.
- Przyprowadź szczury na salę operacyjną.
- W znieczuleniu szybko przetnij 1-1,5 cm skóry i mięśni brzucha do mieczykowatej wzdłuż linii środkowej z nienaruszoną przeponą.
- Ostrożnie otwórz klatkę piersiową i sprawdź obustronne jamy opłucnej za pomocą pęsety, zwłaszcza obustronne żebrowe kąty przeponowe. Zebrać 1-2 ml jasnożółtego wysięku opłucnowego za pomocą sterylnej strzykawki o pojemności 2 ml.
- Po zakończeniu poświęć szczury za pomocą protokołu zatwierdzonego przez IACUC.
- Odwirować wysięk opłucnowy w probówce o pojemności 2 ml przez 15 minut przy sile 300 x g w celu wyizolowania nanocząstek.
- Użyj kropli górnej warstwy, która jest jasną cieczą i obserwuj pod transmisyjnym mikroskopem elektronowym (TEM) przy napięciu przyspieszającym 60-80 kV.
Wyniki
Za pomocą USG klatki piersiowej stwierdzono brak wysięku opłucnowego w 1. dniu we wszystkich grupach. Jednak w 3. dniu wysięk opłucnowy pojawił się w grupach 6,25 i 12,5 mg/kg∙mL. Wysięk występował głównie w prawym kącie przeponowo-żebrowym, podczas gdy wysięk osierdziowy wystąpił tylko w grupie 12,5 mg/kg∙mL. Ponadto w 7. dniu zarówno wysięk opłucnowy (Video 1), jak i wysięk osierdziowy (Video 2) zostały wykryte w grupie 6,25 mg/kg∙mL (Rycina 1). Wysięk opłucnowy powoli zwiększał się, osiągając największy stopień w dniach 7-10, a następnie stopniowo się zmniejszał. W 14. dniu nie stwierdzono już wysięku opłucnowego, jednak we wszystkich grupach wystąpiły oznaki zrostów opłucnowych.10
W 7. i 14. dniu nie stwierdzono oznak wysięku opłucnowego w grupach 3,125 oraz 6,25 mg/kg∙mL10. Jednak w grupie 12,5 mg/kg∙mL obraz tomografii komputerowej klatki piersiowej był nieprawidłowy, wykazując stępienie tylnego kąta przeponowo-żebrowego, co wskazywało na niewielką ilość wysięku opłucnowego (Rysunek 2a,b). Nie zaobserwowano oznak poziomu płynu, co wyjaśniono niewystarczającą ilością wody.
Podczas sekcji szczurów zaobserwowano bursztynowe lub bezbarwne wysięki w grupach 6,25 mg/kg∙mL oraz 12,5 mg/kg∙mL w 3. i 7. dniu. Objętość wysięku opłucnowego w grupach 6,25 mg/kg∙mL i 12,5 mg/kg∙mL wynosiła od 1-1,8 mL w każdej jamie opłucnowej. W grupie 3,125 mg/kg∙mL w jamach opłucnowych nie pojawił się płyn w całym procesie eksperymentalnym.
W badaniu TEM nanocząstki NPSi w odprowadzonej cieczy opłucnowej występowały pojedynczo oraz w formie skupisk. Średnica (Ø: 20 ± 5 nm) oraz morfologia w cieczy opłucnowej były zgodne z charakterystyką NPSi w przygotowanej zawiesinie. Nanocząstki były w przeważającej mierze sferyczne i dobrze rozproszone, a średnia wielkość pojedynczej nanocząstki wynosiła ~20 ± 5 nm (Rysunek 3a, b).
Rysunek 1: Reprezentatywne obrazy wysięku opłucnowego w badaniu sonograficznym w 7. dniu. (a, b) Obrazy sonograficzne szczura z grupy 3,125 mg/kg∙mL bez obecności płynu w jamie opłucnowej i osierdziowej. (c, d) Obrazy sonograficzne szczura z grupy 6,25 mg/kg∙mL z wyraźnym wysiękiem opłucnowym i wysiękiem w osierdziu. (e, f) Obrazy sonograficzne szczura z grupy 12,5 mg/kg∙mL z znacznie większą ilością płynu w jamach opłucnowej i osierdziowej. Kliknij tutaj, aby wyświetlić większą wersję tego rysunku.
Rycina 2. Reprezentatywne obrazy tomografii komputerowej klatki piersiowej u szczurów. Obraz TK szczura z grupy 3,125 mg/kg∙mL bez wysięku opłucnowego (a) oraz obraz TK szczura z grupy 12,5 mg/kg∙mL z negatywnym wynikiem w kierunku wolnego płynu, ale z tępym kątem przeponowo-żebrowym tylnym w jamie opłucnowej (b). Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.
Rysunek 3. Nanocząsteczki krzemionki w zawiesinie poliakrylan/nanokrzemionka oraz w wysięku opłucnowym szczura. (a) Nanocząsteczki krzemionki w nanokompozycie poliakrylan/krzemionka. (b) Nanocząsteczki krzemionki w wysięku opłucnowym szczura występujące w formie skupisk lub pojedynczych cząstek. Pasek skali: 200 nm. Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.
Wideo 1. Wysięk opłucnowy u szczura w grupie 6,25 mg/kg∙mL. Kliknij tutaj, aby obejrzeć to wideo. (Kliknij prawym przyciskiem myszy, aby pobrać.)
Wideo 2. Wysięk w osierdziu u szczura w grupie 6,25 mg/kg∙mL. Kliknij tutaj, aby obejrzeć to wideo. (Kliknij prawym przyciskiem myszy, aby pobrać.)
Dyskusja
Ultrasonografia jest najwygodniejszym narzędziem do określania chorób płuc, ze względu na doskonałą wrażliwość na wolny płyn w jamie opłucnej11. Dzieje się tak, ponieważ ultrasonografia może natychmiast wykryć kontrast impedancji akustycznej powietrza i płynów w płucach12. Poza tym ultrasonografia jest bardziej elastyczna w modelu małego zwierzęcia niż tomografia komputerowa. Niemniej jednak powietrze w płucach odbijało falę dźwiękową i utrudniało obserwację zmian wewnątrzpłucnych po wkropleniu nanocząstek. Dlatego połączyliśmy tomografię komputerową klatki piersiowej i ultrasonografię płuc w celu zbadania zmian wewnątrzpłucnych i płynu opłucnowego.
Po przeanalizowaniu danych obrazowych stwierdziliśmy, że wyniki obrazowania są niezwykłe. Po pierwsze, nasz model wykazał, że PA / NPSi rzeczywiście indukował niezwykłą toksyczność, która objawiała się jako wysięk opłucnowy i osierdziowy na wczesnym etapie w modelu szczurzym. Po drugie, model ten z powodzeniem odtworzył występowanie i rozwój ludzkich wysięków polisurowych; Tymczasem procesy te obserwowano u naszych pacjentów, u których wystąpiła wysięk opłucnowy i osierdziowy, zwłóknienie płuc oraz ziarniniak 8,9. Tak więc fakty te sugerowały, że błona surowicza, taka jak błona opłucnowa lub błona osierdziowa, była jednym z celów uszkodzenia PA/NPSi, które miało podobny charakter do tego spowodowanego przez azbest. Również oś czasu wysięków polisuroczynych była znacząca, jak stwierdzono w naszych ustaleniach.
Jeśli chodzi o projekt naszego modelu, kluczowym krokiem było wkroplenie dotchawicze. Metoda ta zapewniła, że toksyczność nanocząstek dostała się do organizmu przez tchawicę, która różniła się od poprzedniego badania13. Jednak wady tej metody były następujące: PA / NPSi był wkraplany do obustronnego oskrzela przez cienką rurkę, co wymagało wysoce eksperymentalnych umiejętności, aby zapobiec mechanicznemu uszkodzeniu tchawicy i kaszlowi spowodowanemu jej podrażnieniem. Punktem krytycznym była więc odpowiednia głębokość wkraplania dotchawiczego. Tymczasem utrzymanie odpowiedniego znieczulenia miało kluczowe znaczenie dla wykonania wyżej wymienionego kroku.
Wykorzystanie nanocząstek, drobnych cząstek do celów badawczych, cieszy się coraz większym zainteresowaniem. Im mniejsza średnica drobnych cząstek, tym trudniej jest je chronić. Z drugiej strony, nanokrzemionka o średnicy 20 ± 5 nm rzeczywiście wymagała zaawansowanej technologicznie metody przygotowania, aby przygotować się do tego badania, co spowodowało wzrost trudności ze spadkiem średnicy. Tak więc jedną z zalet naszej techniki była średnica nanokrzemionki, która była mniejsza niż w poprzednim badaniu13,14. Kolejną zaletą tego badania było to, że indukowaliśmy nanocząstkę przez tchawicę, a nie przez skórę lub krążenie 13,15,16. Na przykład ekspozycja dożylna utrudniała nam badanie narządu docelowego, który był trudny do odróżnienia uszkodzenia narządu docelowego wywołanego przez pierwotne lub wtórne uszkodzenie. W związku z tym, naszym zdaniem, wkroplenie dotchawicze będzie najlepszym sposobem zbadania toksyczności nanocząstek w płucach w nadchodzącej przyszłości. Poza tym dawka nanocząstek była niższa niż w poprzednim badaniu13, które wykazało wyższy stosunek opłacalności.
Jeśli chodzi o wysięk opłucnowy i osierdziowy wywołany przez PA/NPSi, przyczyną tego byłaby reakcja zapalna i produkcja reaktywnego systemu tlenowego (ROS). Wyjaśniliśmy to w następujący sposób: po pierwsze, nanokrzemionka zwiększała stężenie ROS, indukowała produkcję zapalną, powodowała depolaryzację mitochondriów i obniżała poziom glutationu zarówno in vivo, jak i in vitro 5,6. Po drugie, stan zapalny i produkcja ROS zwiększyły płyn śródmiąższowy w płucach lub przepuszczalność naczyń włosowatych opłucnej, co sprzyjało tworzeniu się wysięku opłucnowego na końcu. Poza tym potencjalne upośledzenie drenażu limfatycznego opłucnej może być również zaangażowane w gromadzenie się płynu opłucnowego. Wraz z większym nagromadzeniem płynu opłucnowego wzrosło ciśnienie onkotyczne, co ostatecznie indukowało odkładanie się PA/NPSi w jamach opłucnowych. Wynik ten był zgodny z naszymi wcześniejszymi eksperymentami na zwierzętach i zgłosił pacjentów 8,10.
Jeśli chodzi o sam wysięk opłucnowy, był on powszechny w klinice. Niemniej jednak wiele chorób układu oddechowego lub ogólnoustrojowego może powodować wysięk opłucnowy. W związku z tym skonstruowanie modelu zwierzęcego przyniosłoby korzyści w badaniu etiologicznym wysięku opłucnowego. Poprzednie badanie wykazało toksyczność nanokrzemionki13,17 dla płuc. Jednak poprzednio opisywane modele wysięku opłucnowego koncentrowały się głównie na czynnikach biologicznych, a nie na nanocząstkach18,19. W związku z tym dawkowanie nanocząstek pozostawało kwestią otwartą. Nasz model wykazał, że wysięk opłucnowy wystąpił w 3 dniu po podaniu stężenia PA / NPSi 6,25 mg / kg∙ml przez wkraplanie dotchawicze i osiągnął szczyt w dniach 7-10. Ponadto, wraz ze wzrostem stężenia PA/NPSi, wysięk opłucnowy wytwarzał się więcej i szybciej. Co więcej, w porównaniu z modelami biologicznymi18,19, nasz model wysięku opłucnowego był dobrze kontrolowany i skuteczny. Podsumowując, nasz model byłby korzystny dla przyszłych badań nad chorobami związanymi z wysiękiem opłucnowym, a w szczególności dla dalszych badań nad nanotoksycznością.
Oświadczenia
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Podziękowania
Obecne badania i produkcja tego artykułu zostały sfinansowane przez Narodową Fundację Nauk Przyrodniczych Chin (Grant 81773373, 81172614 i Grant 81441089). Dziękujemy Dr. Jin Yan i Dr. Pan Yujie, z Oddziału Ratunkowego Szpitala Beijing Chaoyang oraz Dr. Qu Peng z Oddziału Medycyny Ultrasonograficznej Szpitala Beijing Chaoyang za pomoc w produkcji filmu.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| System ultrasonograficzny Acuson S2000 z kolorowym dopplerem | Siemens Medical Solutions, Mountain View, CA& | ||
| nbsp; Poliakrylan / nanokrzemionka | Fudan University, Szanghaj, Chiny | wykonane na zamówienie z nanokrzemionki (20± 5) nm | |
| 10% hydrat chloralu | Beijing Chemical Works | 302-17-0 | |
| Prędkość światła 16 spiralna tomografia komputerowa | GE Healthcare, USA | ||
| Specyficzne wolne od patogenów | Centrum Zwierząt Wistar w Lianhelihua (Pekin, Chiny) | Szczury Wistar |
Bibliografia
- Stathopoulos, G. T., et al. Nuclear factor-kappaB affects tumor progression in a mouse model of malignant pleural effusion. American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 34 (2), 142-150 (2006).
- Shen, J., et al. The dosage-toxicity-efficacy relationship of kansui and licorice in malignant pleural effusion rats based on factor analysis. Journal of Ethnopharmacology. 186, 251-256 (2016).
- Nel, A., Xia, T., Mädler, L., Li, N. Toxic potential of materials at the nanolevel. Science. 311 (5761), 622-627 (2006).
- Maynard, A. D., et al. Safe handling of nanotechnology. Nature. 444 (7117), 267-269 (2006).
- Duan, J., et al. Toxic effects of silica nanoparticles on zebrafish embryos and larvae. PLoS One. 8 (9), 74606(2013).
- Skuland, T., Ovrevik, J., Låg, M., Schwarze, P., Refsnes, M. Silica nanoparticles induce cytokine responses in lung epithelial cells through activation of a p38/TACE/TGF-α/EGFR-pathway and NF-κΒ signaling. Toxicology and Applied Pharmacology. 279 (1), 76-86 (2014).
- Oberdörster, G., Oberdörster, E., Oberdörster, J. Nanotoxicology: an emerging discipline evolving from studies of ultrafine particles. Environmental Health Perspectives. 113 (7), 823-839 (2005).
- Song, Y., Li, X., Du, X. Exposure to nanoparticles is related to pleural effusion, pulmonary fibrosis and granuloma. European Respiratory Journal. 34 (3), 559-567 (2009).
- Song, Y., et al. Nanomaterials in humans: identification, characteristics, and potential damage. Toxicologic Pathology. 39 (5), 841-849 (2011).
- Zhu, X., et al. Polyacrylate/nanosilica causes pleural and pericardial effusion, and pulmonary fibrosis and granuloma in rats similar to those observed in exposed workers. International Journal of Nanomedicine. 11, 1593-1605 (2016).
- Havelock, T., et al. Pleural procedures and thoracic ultrasound: British Thoracic Society Pleural Disease Guideline 2010. Thorax. 65, Suppl 2 61-76 (2010).
- Jha, A., Ullah, E., Gupta, P., Gupta, G., Saud, M. Sonography of multifocal hydatidosis involving lung and liver in a female child. Journal of Medical Ultrasound. 40 (4), 471-474 (2013).
- Hikaru, N., et al. Histological analysis of 70-nm silica particles-induced chronic toxicity in rats. European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 72, 626-629 (2009).
- Sun, L., et al. Cytotoxicity and mitochondrial damage caused by silica nanoparticles. Toxicology in Vitro. 25, 1619-1629 (2011).
- Hikaru, N., et al. Silica nanoparticles as hepatotoxicants. European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 72, 496-501 (2009).
- Liu, T. I., et al. Single and repeated dose toxicity of mesoporous hollow silica nanoparticles in intravenously exposed mice. Biomaterials. 32, 1657-1668 (2011).
- Ding, M., et al. Diseases caused by silica: Mechanisms of injury and disease development. International Immunopharmacology. 2, 173-182 (2002).
- Shen, J., et al. The dosage-toxicity-efficacy relationship of kansui and licorice in malignant pleural effusion rats based on factor analysis. Journal of Ethnopharmacology. 186, 251-256 (2016).
- Ji, J. H., et al. Twenty-eight-day inhalation toxicity study of silver nanoparticles in Sprague-Dawley rats. Inhalation Toxicology. 19 (10), 857-871 (2007).
Przedruki i uprawnienia
