Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Zahamowanie wzrostu komórek szpiczaka mnogiego in vivo za pomocą jednościennych nanorurek węglowych (SWCNT) dostarczanych przez antysensowne oligonukleotydy MALAT1

5.9K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/58598

⸱

13 grudnia 2018

 ,  , 
1Department of Cancer Biology, Lerner Research Institute, Cleveland Clinic, 2Department of Medical Oncology, Dana-Farber Cancer Institute, Harvard Medical School

* These authors contributed equally

W tym artykule

Podsumowanie

Ten manuskrypt opisuje syntezę jednościennego oligonukleotydu antysensownego DNA MALAT1 z nanorurkami węglowymi (SWCNT) (SWCNT-anty-MALAT1), który demonstruje niezawodne dostarczanie SWCNT i silny efekt terapeutyczny anty-MALAT1 in vitro i in vivo. Opisano metody stosowane do syntezy, modyfikacji, koniugacji i wstrzykiwania SWCNT-anty-MALAT1.

Streszczenie

Jednościenna nanorurka węglowa (SWCNT) to nowy rodzaj nanocząsteczki, która została wykorzystana do dostarczania do komórek wielu rodzajów leków, takich jak białka, oligonukleotydy i syntetyczne leki małocząsteczkowe. SWCNT ma konfigurowalne wymiary, dużą powierzchnię powierzchniową i może elastycznie wiązać się z lekami poprzez różne modyfikacje na swojej powierzchni; Dlatego jest to idealny system do transportu leków do komórek. Długie niekodujące RNA (lncRNA) to skupisko niekodującego RNA dłuższego niż 200 nt, którego nie można przetłumaczyć na białko, ale odgrywają ważną rolę w procesach biologicznych i patofizjologicznych. Transkrypt 1 gruczolakoraka płuc związany z przerzutami (MALAT1) jest wysoce konserwatywnym lncRNA. Wykazano, że wyższe poziomy MALAT1 są związane ze złym rokowaniem w przypadku różnych nowotworów, w tym szpiczaka mnogiego (MM). Ujawniliśmy, że MALAT1 reguluje naprawę DNA i śmierć komórki w MM; w związku z tym MALAT1 może być uważany za cel terapeutyczny dla MM. Jednak skuteczne dostarczanie oligo antysensownego w celu zahamowania/knockdown MALAT1 in vivo nadal stanowi problem. W tym badaniu modyfikujemy SWCNT za pomocą PEG-2000 i sprzęgamy z nim oligo anty-MALAT1, testujemy dostarczanie tego związku in vitro, wstrzykujemy go dożylnie do rozsianego modelu myszy MM i obserwujemy znaczne zahamowanie progresji MM, co wskazuje, że SWCNT jest idealnym transportem dostarczającym DNA anty-MALAT1.

Wprowadzenie

SWCNT to nowatorski nanomateriał, który może stabilnie i efektywnie dostarczać różne rodzaje leków, takie jak białka, małe cząsteczki i kwasy nukleinowe, z idealną tolerancją i minimalną toksycznością in vitro1 i in vivo2. Funkcjonalizowany SWCNT ma doskonałą biokompatybilność i rozpuszczalność w wodzie, może być używany jako wahadłowiec dla mniejszych cząsteczek i może przenosić je w celu penetracji błony komórkowej3,4,5.

lncRNA to klaster RNA (>200 nt), który jest transkrybowany z genomu na mRNA, ale nie może być translowany na białka. Coraz więcej dowodów wskazuje na to, że lncRNA uczestniczą w regulacji ekspresji genów6 i są zaangażowane w inicjację i progresję większości typów raka, w tym MM7,8,9. MALAT1 jest wzbogaconym jądrowo niekodującym transkryptem 2 (NEAT2) i wysoce konserwatywnym lncRNA10. MALAT1 jest początkowo rozpoznawany w przerzutowym niedrobnokomórkowym raku płuca (NSCLC)11, ale uległ nadekspresji w wielu nowotworach5,12,13; jest to jeden z najbardziej eksprymowanych lncRNA i jest skorelowany ze złym rokowaniem w MM8,14. Poziom ekspresji MALAT1 jest znacznie wyższy u pacjentów z szpiczakiem szpikowym o przebiegu śmiertelnym w porównaniu z tymi, u których zdiagnozowano tylko MM15.

W poprzednim badaniu potwierdziliśmy, że oligonukleotydy anty-MALAT1 zdecydowanie prowadzą do uszkodzenia DNA i apoptozy w MM16 poprzez użycie oligonukleotydów antysensownych DNA gapmer ukierunkowanych na MALAT1 (anty-MALAT1) w komórkach MM. Gapmer DNA składa się z antysensownego DNA i jest połączone 2'-OMe-RNA, które mogą wywołać rozszczepienie MALAT1 przez aktywność RNazy H po związaniu17. Skuteczność dostarczania oligonukleotydów antysensownych in vivo nadal ogranicza ich zastosowanie kliniczne.

Aby przetestować efekt dostarczania SWCNT dla oligonukleotydów anty-MALAT1, DNA anty-MALAT1 jest sprzężone z SWCNT funkcjonalizowanym DSPE-PEG2000-aminą. SWCNT-anty-MALAT1 jest następnie wstrzykiwany dożylnie do mysiego modelu rozsianego MM; Uderzające zahamowanie obserwuje się po czterech zabiegach.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Wszystkie eksperymenty z udziałem zwierząt zostały wstępnie zatwierdzone przez Cleveland Clinic IACUC (Institutional Animal Care and Use Committee).

1. Synteza funkcjonalizowanych SWCNT

  1. Wymieszaj 1 mg SWCNT, 5 mg DSPE-PEG2000-aminy i 5 ml sterylizowanej wody wolnej od nukleaz w szklanej fiolce scyntylacyjnej (20 ml). Dobrze wstrząśnij, aby całkowicie rozpuścić wszystkie odczynniki.
  2. Poddaj sonifikację fiolki w łaźni wodnej o mocy 40 W przez 1 godzinę w temperaturze pokojowej (RT, 20 min x 3, zmieniaj wodę co 20 minut, aby uniknąć przegrzania). Następnie odwirować go w temperaturze 24 000 x g przez 6 godzin i zebrać roztwór sklarowanego osadu. Ten funkcjonalny roztwór SWCNT może być przechowywany w temperaturze 4 °C przez 2 miesiące.
  3. Dodaj 1 ml roztworu SWCNT z kroku 1.2 do filtra odśrodkowego MWCO o mocy 100 kDa, a następnie 4 ml wysterylizowanej wody wolnej od nukleaz. Wirować przez 10 minut przy 4,000 x g w temperaturze pokojowej, aby usunąć nadmiar DSPE-PEG2000-aminy. Powtórz dodawanie 4 ml wody i odwirowanie 5 razy. Więcej niż 0,5 ml pozostałego roztworu SWCNT pozostanie w filtrze po każdym odwirowaniu.
  4. Zmierzyć stężenie roztworu SWCNT pozostałego w filtrze za pomocą spektrometru UV/VIS przy długości fali 808 nm po ostatnim płukaniu. Końcowe stężenie wynosi zazwyczaj około 50 mg/L (obliczone zgodnie z metodą opracowaną przez Kam et al.18).
    nuta: Upewnij się, że SWCNT funkcjonalizowane DSPE-PEG są rozpuszczalne w wodzie po kroku 1.4 i są stabilne w różnych roztworach biologicznych bez widocznej agregacji po kilku tygodniach.

2. Koniugacja DNA gapmera anty-MALAT1 otoczonego zmodyfikowanymi 2'-O RNA do funkcjonalizowanego SWCNT

  1. Dodać 0,5 mg sulfo-LC-SPDP do 450 μl SWCNT funkcjonalizowanego DSPE-PEG2000-aminą. Dodać 50 μl 10x PBS, a następnie inkubować przez 2 godziny w temperaturze pokojowej.
  2. Aby usunąć nadmiar sulfo-LC-SPDP, dodaj reakcję z kroku 2.1 do odśrodkowego urządzenia filtrującego MWCO o mocy 100 kDa, a następnie 4 ml wody wolnej od nukleaz. Wirować przez 10 minut przy 4 000 x g w suchej temperaturze pokojowej. Powtórzyć dodawanie 4 ml wody i odwirowanie 5 razy.
  3. Dodać 200 nM zmodyfikowanego tiolem DNA gapmerowego anty-MALAT1-Cy3 do 1,5 ml komercyjnego roztworu DTT i inkubować przez 90 minut w temperaturze pokojowej. Oczyść produkt za pomocą kolumny NAP-5, postępując zgodnie z protokołem producenta. Eluować anty-MALAT1-Cy3 za pomocą 500 μl sterylizowanego produktu wolnego od nukleaz 1x PBS.
    nuta: Funkcjonalizowany SWCNT może być przechowywany z dodatkiem DTT, który może rozszczepiać wiązania dwusiarczkowe powstałe podczas przechowywania tiolowanego DNA gapmeru anty-MALAT1. Dodane DTT można usunąć za pomocą kolumny NAP-5 przed koniugacją z SWCNT.
  4. Zebrać roztwór DSPE-PEG2000-aminy SWCNT nasączony sulfo-LC-SPDP pozostawiony w filtrze i rozcieńczyć go 500 μl roztworu anty-MALAT1-Cy3. Następnie inkubować w temperaturze 4 °C przez 24 godziny. Sprzężony SWCNT-anty-MALAT1 może być przechowywany w temperaturze 4 °C przez 3 tygodnie. Postępując zgodnie z tą samą procedurą, sprzężony SWCNT z mieszającym się antysensownym oligo może być zsyntetyzowany i użyty jako kontrola SWCNT.

3. Wstrzyknięcie do żyły ogonowej SWCNT-Anti-MALAT1

  1. Wygeneruj model myszy z rozsianym MM.
    1. Aby osiągnąć najlepsze wyniki porównania, losowo ułóż 14 NOD. Myszy CB17-Prkdcscid / J (8 tygodni) do grup próbnych lub kontrolnych (siedem w każdej grupie) o tym samym stosunku samców / samic.
    2. Wyczyść stół operacyjny i wysterylizuj go 70% alkoholem.
    3. Użyj lampy grzewczej, aby ogrzać mysz, aby pomóc w pojawieniu się żyły ogonowej. Odpowiednio unieruchomić mysz za pomocą ogranicznika do wstrzykiwania ogona.
    4. Wstrzyknąć 5 x 106 MM.1S-Luc-mCherry w 50 μl PBS przez żyłę ogonową bez znieczulenia. Uciskać miejsce wstrzyknięcia wacikiem nasączonym alkoholem przez 30 s. Zaznacz mysz, której wstrzyknięto implant i umieść ją z powrotem w czystej klatce.
  2. Leczenie należy rozpocząć w 7 dniu po wstrzyknięciu komórek MM.1S.
    1. Wstrzyknąć 50 μl PBS zawierającego SWCNT-anty-MALAT1 do żyły ogonowej myszy. Użyj PBS zawierającego formant SWCNT-control jako formantu.
    2. Uciskać miejsce wstrzyknięcia wacikiem nasączonym alkoholem przez 30 s.
    3. Obserwuj miejscowe krwawienie na ogonie i ogólne zachowanie myszy przez 1 minutę, a następnie umieść ją z powrotem w czystej klatce. Należy ponownie obserwować wszystkie myszy, którym wstrzyknięto implanty przed umieszczeniem klatki z powrotem w stojaku, aby upewnić się, że zastrzyki są dobrze tolerowane.
  3. Powtarzaj wstrzyknięcie co 7 dni, aż do zakończenia eksperymentu.
    1. Eksperyment należy przerwać, gdy ogólny stan zdrowia myszy ulegnie pogorszeniu: gdy nie je ani nie pije, obserwuje się pojawienie się bladych łap, krwawienie podskórne, duszność, zmniejszoną aktywność, paraliż kończyn dolnych i/lub dotykalną masę w jamie brzusznej.

4. Ocena postępu choroby

  1. Oceniaj ogólny stan myszy każdego dnia po wstrzyknięciu komórek MM.1S-Luc-mCherry. Zwróć szczególną uwagę, jeśli u myszy rozwijają się paraliże kończyn dolnych.
  2. Oceń wzrost guza za pomocą systemu obrazowania in vivo 1 raz w tygodniu, przed wstrzyknięciem SWCNT-anty-MALAT1.
    1. Przygotuj świeże 15 mg / ml D-Lucyferyny z 1x PBS.
    2. Znieczulenie myszy za pomocą parownika izofluranu (3-5% w przypadku indukcji i 1-3% w celu konserwacji, w zależności od stanu myszy).
    3. Wstrzyknąć 150 mg / kg D-Lucyferyny każdej myszy dootrzewnowo, 5 minut przed obrazowaniem; następnie zobrazować myszy w pozycji leżącej za pomocą systemu obrazowania spektrum.
    4. Zbieraj sekwencyjne obrazy myszy co 2 minuty, aż do osiągnięcia nasycenia luminescencją. Dostosuj czas interwału zgodnie z wychwytem/sygnałem D-Lucyferyny.
  3. Użyj CO2 do złożenia w ofierze myszy po zakończeniu eksperymentu.
  4. Ponieważ jest to model rozsieskany przez MM, przetwarzaj myszy w następujący sposób.
    1. Zważ mysz przed sekcją.
    2. Zbierz krew obwodową z serca do pełnego testu morfologii krwi (CBC) wykonanego przez maszynę do liczenia krwinek. Pierwszorzędowymi wskaźnikami są liczba białych krwinek i czerwonych krwinek, a także stosunek limfocytów.
    3. Odizoluj śledzionę i zważ ją. Obliczyć stosunek masy śledziony do masy ciała; Rozważ >0,5% jako powiększenie śledziony.
    4. Zbierz tkanki szpiku kostnego, śledziony, węzłów chłonnych, nerek i tkanki z widocznymi przerzutami.
    5. Zbierz kręgosłup, jeśli u myszy rozwinął się paraliż kończyn dolnych.
    6. Ekstrakcja RNA i białka z próbek szpiku kostnego.
    7. Utrwal wszystkie pozostałe tkanki w formalinie.
    8. W celu odwapnienia zanurzyć próbki kości w 0,25 M roztworze EDTA (pH 8,0) na 5 dni po 24 godzinach utrwalania.
    9. Zanurz wszystkie próbki w 75% alkoholu w celu długotrwałego przechowywania.
  5. Porównaj siłę sygnału lucyferazy w tych samych punktach czasowych w dwóch grupach. Z obu grup zapisz daty poświęcenia każdej myszy i oblicz krzywe przeżycia obu grup za pomocą oprogramowania.
    nuta: Wszystkie procedury są podsumowane w Rysunek 1.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Aby zademonstrować efekt hamujący gapmer DNA anty-MALAT1 w MM, wyciszono ekspresję MALAT1 w komórkach H929 oraz MM.1S. Po czterdziestu ośmiu godzinach komórki zebrano w celu analizy wydajności wyciszenia oraz stanu apoptozy w komórkach transfekowanych gapmerem anty-MALAT1 lub kontrolnym DNA. Wyniki qRT-PCR wykazały, że gapmer DNA anty-MALAT1 efektywnie wyciszył ekspresję MALAT1 w komórkach H929 i MM.1S (Rycina 2A). Stan apoptozy określono za ...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Dowody wykazały, że lncRNA biorą udział w regulacji wielu procedur fizjologicznych i patofizjologicznych w nowotworach, w tym MM 7,8,9; Mają potencjał, aby stać się celem leczenia raka, które może być realizowane za pomocą oligonukleotydów antysensownych 20,21,22. Amerykańska Agencja ds. Żywności i Leków (FDA) zatwierdziła kilka antysen...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

Autorzy dziękują rdzeniom proteomicznym, genomicznym i obrazowym Instytutu Badawczego Lerner za ich pomoc i wsparcie. Finansowanie: Praca ta była wspierana finansowo przez grant NIH/NCI R00 CA172292 (dla J.J.Z.) i fundusze na rozpoczęcie działalności (dla J.J.Z.) oraz Clinical and Translational Science Collaborative (CTSC) of Case Western Reserve University Core Utilization Pilot Grant (dla J.J.Z.). W pracy wykorzystano mikroskop konfokalny Leica SP8, który został zakupiony dzięki dofinansowaniu z grantu National Institutes of Health SIG 1S10OD019972-01.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
SWCNTsMillipore-Sigma704113
DSPE-PEG2000-AmineAvanti Polar Lipids880128
sonikator do kąpieliVWR97043-992
Filtr odśrodkowy 4 mlMillipore-SigmaZ740208-8EA
Thermo Fisher ScientificaccuSkan GO Spektrofotometrmikropłytkowy UV/Viswspółczynnik ekstynkcji: 0,0465 L/mg/cm przy 808 nm
Sulfo-LC-SPDPProteoChemc1118
roztwór DTTMillipore-Sigma43815
kolumna NAP-5GE Healthcare17-0853-01
system obrazowania in vivoPerkinElmer
NOD. CB17-Prkdcscid/J myszyCharles River lab250
Cytometr przepływowyBecton Dickinso
LipofectamineInvitrogen11668019Lipofectamine2000
Płodowa surowica bydlęca (FBS)Invitrogen10437-028
RMPI-1640 pożywkaInvitrogen11875-093
MALAT1-QF:zsyntetyzowane przez IDT Przedsiębiorstwo5'- GTTCTGATCCCGCTGCTATT - 3'
MALAT1-QR:zsyntetyzowany przez firmę5'- TCCTCAACACTCAGCCTTTATC - 3'
GAPDH-QF:zsyntetyzowany przez firmę5'- CAAGAGCACAAGAGGAAGAGAG - 3'
GAPDH-QR:zsyntetyzowany przez firmę5'- CTACATGGCAACTGTGAGGAG - 3'
Ilościowy PCR z użyciem SYBR Green PCR master mixThermo Fisher ScientificA25780
Zestaw do syntezy cDNA RevertAidThermo Fisher ScientificK1621
anty-MALAT1syntetyzowany przez firmę5'-mC*mG*mA*mA*mA*A*T*T
*G*G*C*A*C*A*A*mC*mA*mG*mC*mA-3'
Zestaw do oznaczania żywotności komórekPromega CorporationG7570Zestaw do oznaczania żywotności komórek CellTiter-GloLuminescent
accuSkan GO UV/Vis Spektrofotometr mikropłytkowy ThermoFisher Naukowy
filtr odśrodkowyMillipore-SigmaUFC910008
Oprogramowanie SPSSIBMwersja 24.0
D-LucyferinMillipore-SigmaL9504
Spektrometr UV/VIS IDT IDT IDT IDT

Bibliografia

  1. Jiang, X., et al. RNase non-sensitive and endocytosis independent siRNA delivery system: delivery of siRNA into tumor cells and high efficiency induction of apoptosis. Nanoscale. 5 (16), 7256-7264 (2013).
  2. Murakami, T., et al. Water-dispersed single-wall carbon nanohorns as drug carriers for local cancer chemotherapy. Nanomedicine (Lond). 3 (4), 453-463 (2008).
  3. Kam, N. W., Dai, H. Carbon nanotubes as intracellular protein transporters: generality and biological functionality. Journal of the American Chemical Society. 127 (16), 6021-6026 (2005).
  4. Kam, N. W., Liu, Z., Dai, H. Functionalization of carbon nanotubes via. cleavable disulfide bonds for efficient intracellular delivery of siRNA and potent gene silencing. Journal of the American Chemical Society. 127 (36), 12492-12493 (2005).
  5. Kam, N. W., Liu, Z., Dai, H. Carbon nanotubes as intracellular transporters for proteins and DNA: an investigation of the uptake mechanism and pathway. Angewandte Chemie International Edition in English. 45 (4), 577-581 (2006).
  6. Ntziachristos, P., Abdel-Wahab, O., Aifantis, I. Emerging concepts of epigenetic dysregulation in hematological malignancies. Nature Immunology. 17 (9), 1016-1024 (2016).
  7. Evans, J. R., Feng, F. Y., Chinnaiyan, A. M. The bright side of dark matter: lncRNAs in cancer. Journal of Clinical Investigation. 126 (8), 2775-2782 (2016).
  8. Ronchetti, D., et al. Distinct lncRNA transcriptional fingerprints characterize progressive stages of multiple myeloma. Oncotarget. 7 (12), 14814-14830 (2016).
  9. Wong, K. Y., et al. Epigenetic silencing of a long non-coding RNA KIAA0495 in multiple myeloma. Molecular Cancer. 14, 175(2015).
  10. Schmidt, L. H., et al. The long noncoding MALAT-1 RNA indicates a poor prognosis in non-small cell lung cancer and induces migration and tumor growth. Journal of Thoracic Oncology. 6 (12), 1984-1992 (2011).
  11. Ji, P., et al. MALAT-1, a novel noncoding RNA, and thymosin beta4 predict metastasis and survival in early-stage non-small cell lung cancer. Oncogene. 22 (39), 8031-8041 (2003).
  12. Luo, J. H., et al. Transcriptomic and genomic analysis of human hepatocellular carcinomas and hepatoblastomas. Hepatology. 44 (4), 1012-1024 (2006).
  13. Guffanti, A., et al. A transcriptional sketch of a primary human breast cancer by 454 deep sequencing. BMC Genomics. 10, 163(2009).
  14. Cho, S. F., et al. MALAT1 long non-coding RNA is overexpressed in multiple myeloma and may serve as a marker to predict disease progression. BMC Cancer. 14, 809(2014).
  15. Handa, H., et al. Long non-coding RNA MALAT1 is an inducible stress response gene associated with extramedullary spread and poor prognosis of multiple myeloma. British Journal of Haematology. 179 (3), 449-460 (2017).
  16. Hu, Y., et al. Targeting the MALAT1/PARP1/LIG3 complex induces DNA damage and apoptosis in multiple myeloma. Leukemia. , (2018).
  17. Lennox, K. A., Behlke, M. A. Cellular localization of long non-coding RNAs affects silencing by RNAi more than by antisense oligonucleotides. Nucleic Acids Research. 44 (2), 863-877 (2016).
  18. Kam, N. W., O'Connell, M., Wisdom, J. A., Dai, H. Carbon nanotubes as multifunctional biological transporters and near-infrared agents for selective cancer cell destruction. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102 (33), 11600-11605 (2005).
  19. Zeineldin, R., Al-Haik, M., Hudson, L. G. Role of polyethylene glycol integrity in specific receptor targeting of carbon nanotubes to cancer cells. Nano Letters. 9 (2), 751-757 (2009).
  20. Amodio, N., D'Aquila, P., Passarino, G., Tassone, P., Bellizzi, D. Epigenetic modifications in multiple myeloma: recent advances on the role of DNA and histone methylation. Expert Opinion on Therapeutic Targets. 21 (1), 91-101 (2017).
  21. Ahmad, N., Haider, S., Jagannathan, S., Anaissie, E., Driscoll, J. J. MicroRNA theragnostics for the clinical management of multiple myeloma. Leukemia. 28 (4), 732-738 (2014).
  22. Amodio, N., et al. Drugging the lncRNA MALAT1 via. LNA gapmeR ASO inhibits gene expression of proteasome subunits and triggers anti-multiple myeloma activity. Leukemia. , (2018).
  23. Highleyman, L. FDA approves fomivirsen, famciclovir, and Thalidomide. Food and Drug Administration. BETA. 5, (1998).
  24. Smith, R. J., Hiatt, W. R. Two new drugs for homozygous familial hypercholesterolemia: managing benefits and risks in a rare disorder. JAMA Internal Medicine. 173 (16), 1491-1492 (2013).
  25. Aartsma-Rus, A. FDA Approval of Nusinersen for Spinal Muscular Atrophy Makes 2016 the Year of Splice Modulating Oligonucleotides. Nucleic Acid Therapeutics. 27 (2), 67-69 (2017).
  26. Nelson, S. F., Miceli, M. C. FDA Approval of Eteplirsen for Muscular Dystrophy. The Journal of the American Medical Association. 317 (14), 1480(2017).
  27. Liu, Z., Sun, X., Nakayama-Ratchford, N., Dai, H. Supramolecular chemistry on water-soluble carbon nanotubes for drug loading and delivery. American Chemical Society Nano. 1 (1), 50-56 (2007).
  28. Ali-Boucetta, H., et al. Multiwalled carbon nanotube-doxorubicin supramolecular complexes for cancer therapeutics. Chemical communications (Cambridge). (4), 459-461 (2008).
  29. Bianco, A., Kostarelos, K., Partidos, C. D., Prato, M. Biomedical applications of functionalised carbon nanotubes. Chemical communications. (5), Cambridge. 571-577 (2005).
  30. Hadidi, N., Kobarfard, F., Nafissi-Varcheh, N., Aboofazeli, R. Optimization of single-walled carbon nanotube solubility by noncovalent PEGylation using experimental design methods. International Journal of Nanomedicine. 6, 737-746 (2011).
  31. Padilla-Parra, S., et al. Quantitative imaging of endosome acidification and single retrovirus fusion with distinct pools of early endosomes. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (43), 17627-17632 (2012).
  32. Wu, H., Zhu, L., Torchilin, V. P. pH-sensitive poly(histidine)-PEG/DSPE-PEG co-polymer micelles for cytosolic drug delivery. Biomaterials. 34 (4), 1213-1222 (2013).
  33. Oishi, M., Nagatsugi, F., Sasaki, S., Nagasaki, Y., Kataoka, K. Smart polyion complex micelles for targeted intracellular delivery of PEGylated antisense oligonucleotides containing acid-labile linkages. Chembiochem. 6 (4), 718-725 (2005).
  34. Dong, H., Ding, L., Yan, F., Ji, H., Ju, H. The use of polyethylenimine-grafted graphene nanoribbon for cellular delivery of locked nucleic acid modified molecular beacon for recognition of microRNA. Biomaterials. 32 (15), 3875-3882 (2011).
  35. Arunachalam, B., Phan, U. T., Geuze, H. J., Cresswell, P. Enzymatic reduction of disulfide bonds in lysosomes: characterization of a gamma-interferon-inducible lysosomal thiol reductase (GILT). Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (2), 745-750 (2000).
  36. Lelimousin, M., Sansom, M. S. Membrane perturbation by carbon nanotube insertion: pathways to internalization. Small. 9 (21), 3639-3646 (2013).
  37. Thomas, M., Enciso, M., Hilder, T. A. Insertion mechanism and stability of boron nitride nanotubes in lipid bilayers. J Phys Chem B. 119 (15), 4929-4936 (2015).
  38. Jin, H., Heller, D. A., Strano, M. S. Single-particle tracking of endocytosis and exocytosis of single-walled carbon nanotubes in NIH-3T3 cells. Nano Letters. 8 (6), 1577-1585 (2008).
  39. Jin, H., Heller, D. A., Sharma, R., Strano, M. S. Size-dependent cellular uptake and expulsion of single-walled carbon nanotubes: single particle tracking and a generic uptake model for nanoparticles. American Chemical Society Nano. 3 (1), 149-158 (2009).
  40. Ruggiero, A., et al. Paradoxical glomerular filtration of carbon nanotubes. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (27), 12369-12374 (2010).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Oligonukleotyd antysensowny MALAT1dostarczanie oligonukleotyd wwstrzykni cie do ylnemodel mysiszpik kostnyqRT PCRindukcja apoptozydostarczanie lek w za pomoc nanocz steczek
Zahamowanie wzrostu komórek szpiczaka mnogiego in vivo za pomocą jednościennych nanorurek węglowych (SWCNT) dostarczanych przez antysensowne oligonukleotydy MALAT1
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki korzystania z usługi

Zasady

Prawa autorskie © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.