Artykuł metodologiczny

Badanie immunohistopatologiczne mające na celu profilowanie receptora kwasu foliowego beta makrofagów i naczyniowego mikrośrodowiska immunologicznego w olbrzymiokomórkowym zapaleniu tętnic

DOI:

10.3791/58713

⸱

8 lutego 2019

 ,  ,  ,  , 
1Department of Medicine, Penn State University, 2Department of Pathology, Penn State University, 3Penn State College of Medicine, 4Department of Oncology, Wayne State University School of Medicine

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Protokół ilustruje wykorzystanie badania histopatologicznego i immunohistochemii do profilowania makrofagów receptora kwasu foliowego beta i jego związku z całkowitym naciekiem komórek odpornościowych w biopsjach tętnic skroniowych w gigantycznokomórkowym zapaleniu tętnic.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Olbrzymiokomórkowe zapalenie tętnic (GCA) jest przewlekłą chorobą o podłożu immunologicznym średnich i dużych tętnic, która dotyka osoby starsze. GCA objawia się zapaleniem stawów i objawami okluzyjnymi, takimi jak bóle głowy, udar mózgu lub utrata wzroku. Makrofagi i limfocyty T-pomocnicze naciekają ścianę naczyń krwionośnych i wytwarzają odpowiedź prozapalną, która prowadzi do uszkodzenia naczyń i niedokrwienia. Do tej pory nie ma biomarkera GCA, który mógłby monitorować aktywność choroby i kierować odpowiedzią terapeutyczną.

Receptor kwasu foliowego beta (FRB) to białko glikozylofosfatydyloinozytolu, które jest zakotwiczone na błonach komórkowych i normalnie wyrażane w linii mielomonocytowej oraz w większości komórek białaczki szpikowej, jak również w makrofagach maziowych nowotworowych i reumatoidalnych, gdzie jego ekspresja koreluje z ciężkością choroby. Zdolność FRB do wiązania związków folianowych, koniugatów kwasu foliowego i leków przeciwfoliowych sprawiła, że stał się on celem badań nad rakiem i chorobami zapalnymi. W niniejszym artykule opisano metody histopatologiczne i immunohistochemiczne stosowane do oceny ekspresji i dystrybucji FRB w odniesieniu do GCAimmunopatologii.

Biopsje tętnicy skroniowej z GCA i normalnych kontrolnych utrwalone formaliną i parafiną zostały wybarwione Hematoksyliną i Eozyną w celu przeglądu histologii tkanek i zidentyfikowania cech patognomonicznych. Do wykrycia ekspresji FRB, CD68 i CD3 wykorzystano immunohistochemię. Przeprowadzono analizę mikroskopową w celu ilościowego określenia liczby dodatnio wybarwionych komórek na 10 wybranych odcinkach pola dużej mocy i ich odpowiednich lokalizacji w ścianie tętnicy.

Zapalenie limfohistiocytarne (LH) z towarzyszącym przerostem błony wewnętrznej i zaburzoną elastyczną blaszką zaobserwowano w GCA, a w grupie kontrolnej nie stwierdzono żadnego. Naciek LH składał się w około 60% z limfocytów i w 40% z makrofagów. Ekspresja FRB była ograniczona do makrofagów, stanowiących 31% całkowitej populacji makrofagów CD68 + i zlokalizowanych w pożywkach i przydankach. W grupie kontrolnej nie zaobserwowano FRB.

Ten protokół wykazał wyraźny numeryczny i przestrzenny wzór makrofaga FRB w stosunku do naczyniowego mikrośrodowiska immunologicznego w GCA.

Wprowadzenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Olbrzymiokomórkowe zapalenie tętnic (GCA) jest chorobą zapalną średnich i dużych tętnic, skierowaną do aorty i jej odgałęzień i dotykającą osoby starsze. Objawia się łagodnymi lub ciężkimi powikłaniami niedokrwiennymi, takimi jak bóle głowy, bóle szczęki, utrata wzroku, udar i zgorzel tkanek. Diagnoza jest potwierdzona przez wysokie markery stanu zapalnego, takie jak wskaźnik sedymentacji erytrocytów (ESR) i wyraźny wzór histopatologiczny w biopsji tętnicy skroniowej (TAB)1. GCA jest najczęstszym zapaleniem naczyń u dorosłych, a dostępność tętnicy skroniowej uzyskanej do diagnozy stanowi przewagę nad innymi waskulopatiami, umożliwiając w ten sposób łatwiejsze badanie jej patogenezy. Typowe wyniki TAB obejmują naciek makrofagów/histiocytów i limfocytów T znajdujących się we wszystkich warstwach naczyniowych błony wewnętrznej, pożywki i przydanki z jednoczesnym zniszczeniem elastycznej blaszki, która normalnie oddziela te przedziały2. Obecne dowody wskazują, że GCA obejmuje nieznany antygen, który aktywuje komórki dendrytyczne w przydankach naczyniowych, a następnie rekrutację pomocniczych limfocytów T (Th), w szczególności podtypów Th1 i Th17, które wydzielają odpowiednio interleukinę-17 i interferon-gamma (IFG). Następnie IFG rekrutuje i aktywuje makrofagi do produkcji cytokin i proteaz. Należą do nich cytokiny prozapalne; w tym IL-12, która wzajemnie aktywuje komórki Th1, zapewniając w ten sposób pętlę dodatniego sprzężenia zwrotnego; czynnik martwicy nowotworu i interleukina-6, które powodują zapalenie stawów i gorączkę oraz metaloproteazy, które uszkadzają elastyczną blaszkę. Glikokortykosteroidy (GC), które stanowią standardową terapię przewlekłą, częściowo kontrolują szlaki cytokin poprzez osłabienie Th17 / IL-17, ale nie ramienia Th1 / IFG odpowiedzi immunologicznej3,4. Niestety, przerwanie leczenia GKK powoduje nawrót choroby. Jako alternatywna metoda, metotreksat został ponownie wykorzystany w leczeniu GCA, ale pożądane kliniczne punkty końcowe nie były konsekwentnie osiągane, chociaż bardziej czułe biomarkery nie zostały wykorzystane do monitorowania terapeutycznego5,6. W 2017 r. bloker interleukiny 6, tocilizumab, został zatwierdzony do leczenia GCA, ponieważ skutecznie wykazał działanie kontrolujące chorobę i oszczędzające steroidy7,8.

Do tej pory nie ma dobrych biomarkerów dla GCA. W związku z tym trudno jest monitorować aktywność choroby i zwiększać dawki dostępnych leków, aby uniknąć działań niepożądanych i zmniejszyć obciążenie kosztami ponoszonymi przez społeczeństwo. Dlatego konieczne jest poszukiwanie potencjalnego biomarkera, który koreluje z aktywnością choroby, dostarcza nowych informacji na temat patogenezy i pomaga w podejmowaniu decyzji terapeutycznych.

Dysregulacja aktywacji makrofagów jest krytycznym czynnikiem w patogenezie GCA. Tak więc skutecznym sposobem leczenia GCA może być selektywne celowanie w aktywowane makrofagi. Receptor kwasu foliowego beta (FRB) jest glikoproteiną glikozylofosfatydyloinozytolu, która jest zakotwiczona w błonie komórkowej ulegającej ekspresji w normalnych komórkach mielomonocytarnych, komórkach białaczki szpikowej i aktywowanych makrofagach. Jego ligand, kwas foliowy, jest niezbędną witaminą w zredukowanej formie, która umożliwia syntezę DNA, metylację i naprawę DNA komórkowego9. Ekspresja FRB jest indukowana w chorobach autoimmunologicznych i podczas kancerogenezy. Jego ekspresja jest ograniczona do powierzchni monocytów lub prozapalnych makrofagów M1 w reumatoidalnym zapaleniu stawów lub do przeciwzapalnych makrofagów M2 w nowotworach złośliwych narządów litych i szpiku10,11,12,13. Oprócz potencjalnej roli jako biomarker aktywowanych makrofagów, FRB może umożliwić selektywny transport leków przez wieloetapowy proces, który rozpoczyna się od wiązania receptora z kwasem foliowym, antyfolianami lub lekami sprzężonymi z folianami na powierzchni komórki, po czym następuje internalizacja, uwalnianie i ostateczne dostarczenie pożądanego leku do wewnętrznej maszynerii komórkowej12, 14,15,16. W przeciwieństwie do FRB ulegającego ekspresji w komórkach nowotworowych i aktywowanych makrofagach, FRB ulegający ekspresji w normalnych komórkach krwiotwórczych nie jest w stanie wiązać folianów, zapewniając w ten sposób, że dostarczanie leków za pośrednictwem FRB / kwasu foliowego jest ograniczone do komórek zapalnych lub nowotworowych FRB-dodatnich.

W naszym poprzednim badaniu wykazaliśmy po raz pierwszy, że FRB ulega ekspresji w makrofagach GCA, a jego ekspresja jest skorelowana z makrofagami beta receptora CD68+ i endoteliny, które przyczyniają się do patogenezy GCA17. W niniejszym raporcie opisujemy metody histopatologiczne i immunohistochemiczne stosowane do oceny makrofagów FRB oraz analizujemy całkowitą liczbę limfocytów i makrofagów, aby uzyskać wgląd w pozycję FRB w krajobrazie naczyniowym GCA.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wszystkie opisane metody zostały zatwierdzone przez Penn State Institutional Review Board.

1. Przygotowanie histopatologiczne i przetwarzanie po uzyskaniu biopsji tętnicy skroniowej

UWAGA: Biopsja tętnicy skroniowej (TAB) jest wykonywana w znieczuleniu miejscowym i sterylnych warunkach przez certyfikowanego chirurga. Po chirurgicznym uzyskaniu 3-centymetrowego odcinka tętniczego po bardziej dotkniętej stronie, próbkę natychmiast utrwala się w formalinie na 24 godziny, dzieli na odcinki od 3 do 4 mm i zatapia w parafinie, zwracając szczególną uwagę na prawidłowe ułożenie tkanki w bloku, który jest następnie przechowywany w temperaturze pokojowej. Selekcja próbek odbywa się po weryfikacji dokumentacji medycznej. Diagnoza opiera się na kryteriach American College of Rheumatology z 1990 roku, które wymagają, aby badani spełniali 3 z 5 domen: wiek >50 lat, nowy ból głowy, tkliwość tętnicy skroniowej, szybkość sedymentacji erytrocytów >50 mm/godzinę metodą Westergrena i nieprawidłowa TAB. Ze względów bezpieczeństwa podczas pracy z próbkami należy nosić rękawice ochronne, substancje chemiczne i przeciwciała.

  1. Z osadzonych bloków wyciąć odcinki o grubości 4-5 μm za pomocą mikrotomu i wybarwić hematoksyliną i eozyną (H&E). Użyj przekroju kontrolnego wybranej normalnej tkanki w celu zapewnienia jakości.
  2. Na ciepłej kąpieli wodnej podgrzanej do temperatury 40 °C należy wyciąć odcinki pływakiem w celu usunięcia zmarszczek i zebrać za pomocą mikroskopijnego szkiełka z powlekanym szkiełkiem. Umieścić szkiełka podstawowe na ciepłym talerzu w piekarniku o temperaturze 60 °C na 60 minut, aby ułatwić suszenie i przyleganie części do szkiełka.
  3. Umieść szkiełka podstawowe na ciepłym talerzu w piekarniku o temperaturze 60 °C na 60 minut, aby ułatwić suszenie i przyleganie części do szkiełka.
  4. Zamontuj 3 sekcje na szkiełkach mikroskopowych.
  5. Umieść szkiełka w pionowym ruszcie i susz przez noc w temperaturze 37 °C przez 24 godziny.
  6. Umieścić szkiełka w pojemniku i przechowywać w temperaturze 4 °C.

2. Przygotowanie immunohistochemiczne, odparafinowanie, pobieranie antygenu i barwienie15,18,19,20

  1. Załaduj prowadnice do stojaka na prowadnice. Przełóż ruszt przez naczynia w następujący sposób: dwa razy w 100% ksylenie przez 5 minut z 10 sekundami delikatnego mieszania co 30 sekund, raz w 100% etanolu po 10 sekundowym mieszaniu, raz w 90% etanolu po 10 sekundowym mieszaniu, raz w 70% etanolu po 10 sekundowym mieszaniu i dwa razy w podwójnie destylowanym H2O po 10 sekundowym mieszaniu.
    Uwaga: Obchodzenie się z ksylenem i acetonem powinno odbywać się w wentylowanych okapach, aby uniknąć wdychania i toksyczności dla dróg oddechowych.
  2. Pobrać antygen, przenosząc stojak do szklanego pojemnika z 200 ml buforu cytrynianowego o pH 10 mmol/l i pH 6,0 podgrzanym do 95 °C. Ustaw minutnik na 30 minut w łaźni wodnej, następnie schładzaj w temperaturze pokojowej przez 20 minut, a następnie płucz bieżącą wodą przez 5 minut.
  3. Usuń endogenną aktywność peroksydazy, inkubując w 200 ml 3% nadtlenku wodoru przez 10 minut. Przemyć szkiełka 3 razy w 200 μl roztworu soli fizjologicznej buforowanego Tris (TBSS).
  4. Wyjmij szkiełka ze stojaka i delikatnie przetrzyj każdą z nich, aby wytrzeć nadmiar bufora. Do barwienia dodać 200 μl następujących przeciwciał pierwszorzędowych, dodać szkiełka nakrywkowe na szkiełkach i inkubować w wilgotnej komorze przez 1 godzinę w temperaturze pokojowej:
    Przeciwciało anty-FRB rozcieńczone 1:800
    Monoklonalny mysi anty-ludzki CD68, rozcieńczenie 1:200
    Poliklonalny królik anty-CD3 rozcieńczenie 1:100
    Uwaga: Utrwalone w formalinie odcinki łożyska zatopione w parafinie również przetworzono zgodnie z opisem w krokach 2.1 do 2.9 i inkubowano z anty-FRB18 i zastosowano jako kontrolę pozytywną. Wyniki barwienia uzyskano poprzez znalezienie optymalnego stężenia przeciwciał i przeprowadzono je poprzez miareczkowanie przeciwciała w podwójnych rozcieńczeniach (np. 1:50, 1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1600).
  5. Po inkubacji usunąć szkiełko nakrywkowe i wyrzucić. Opłucz szkiełka 3 razy po 2 minuty za pomocą TBSS, odcedź i wytrzyj nadmiar buforu.
  6. Dodać 200 μl roztworu przeciwciała drugorzędowego zawierającego biotynylowane przeciwciało drugorzędowe anty-królika/myszy, aby zareagować z niesprzężonym przeciwciałem pierwszorzędowym związanym z antygenem tkankowym. Umieść szkiełka nakrywkowe na szkiełkach i inkubuj w wilgotnej komorze przez 45 minut w temperaturze pokojowej.
  7. Po inkubacji usunąć szkiełko nakrywkowe i wyrzucić. Opłucz szkiełka 3 razy po 2 minuty za pomocą TBS, odcedź i wytrzyj nadmiar bufora.
  8. Dodać 200 μl systemu chromogenowego diaminobenzydyny (DAB) + buforu substratowego (Imidazol HCl) i inkubować przez 10 minut, aby uwidocznić wzór barwienia. Myć TBSS, a następnie pod bieżącą wodą z kranu przez 10 minut.
  9. Przeciwbarwić hematoksyliną przez 3 minuty.
  10. Zamontuj szkiełka, nakładając 70 μL medium montażowego na powierzchnię szkiełka. Powoli przechylaj szkiełko nakrywkowe na podłoże montażowe i unikaj tworzenia pęcherzyków podczas opuszczania go na miejsce. Odczekaj 24 godziny do wyschnięcia.

3. Analiza histopatologiczna i immunohistochemiczna (IHC)

Zbadaj wycinki zabarwione H&E i IHC od osób z pozytywnym wynikiem GCA i osób normalnych za pomocą mikroskopu świetlnego.

  1. Dla sekcji barwionych H&E:
    1. Oceń architekturę naczyniową i zidentyfikuj komórki śródbłonka w osłonce wewnętrznej, komórki mięśni gładkich w osłonce środkowej oraz fibroblasty i naczynia krwionośne w osłonce przydankowej21,22.
    2. Zidentyfikuj cechy GCA, które obejmują infiltrację limfocytów i makrofagów/histiocytów, przerost komórkowy i degradację wewnętrznej blaszki elastycznej.
    3. Przeanalizuj naciek limfohistiocytarny, identyfikując i określając ilościowo liczbę makrofagów w stosunku do limfocytów. Oceń zakres rozerwania wewnętrznej blaszki elastycznej i zmian hiperplastycznych w komórkach rezydentnych i porównaj z kontrolnymi.
  2. Dla sekcji barwionych IHC:
    1. Zbadaj wzór barwienia FRB, zwracając uwagę na jego ekspresję przez określony typ lub typy komórek oraz jego rozmieszczenie w warstwach naczyniowych i jego związek z całkowitym naciekiem immunologicznym, całkowitym markerem makrofagów, anty-CD68 i markerem limfocytów panowych anty CD3.
    2. Określ ilościowo ekspresję komórek FRB, CD68 i CD3, licząc dodatnio wybarwione komórki na 10 wielu losowo wybranych polach dużej mocy (hpf) i zapisz średnie.
      nuta: Identyfikacja tych normalnych i patologicznych komórek i struktur została przeprowadzona przez certyfikowanego patologa sercowo-naczyniowego (J.M.) i reumatologa (S.A.A.), a wyniki zostały zarejestrowane dla wszystkich przypadków.
    3. Przechwytywanie reprezentatywnych obrazów za pomocą aparatu cyfrowego.
      nuta: Po wykonaniu tych czynności pozostałe podwielokrotności mogą być przechowywane w temperaturze -80 °C.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wyniki histopatologiczne

Plamy H&E w normalnych próbkach wykazały normalną anatomię tętnic z komórkami śródbłonka w osłonce wewnętrznej, komórkami mięśni gładkich w osłonce środkowej i heterogeniczną macierzą kolagenową, która obejmuje fibroblasty i naczynia zasilające zwane vasa vasorum w osłonce lekarskiej. Nie stwierdzono nacieku zapalnego. Tętnice skroniowe GCA dodatnie wykazywały umiarkowany lub ciężki ...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

GCA jest najczęstszym zapaleniem naczyń u dorosłych, a jego patologiczny znak rozpoznawczy jest przykładem silnej kombinacji limfocytów T pomocniczych i aktywowanych makrofagów, które można również znaleźć w innych chorobach ziarniniakowych lub waskulopatiach, takich jak sarkoidoza i ziarniniakowe zapalenie naczyń 2,3. W GCA tętnica skroniowa zapewnia dobrą reprezentację tętnicy średniej lub dużej wielkości, a biopsja TA daje sporą próbkę, która może być przechow...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ta praca była możliwa dzięki wsparciu dr Douglasa Stairsa, Marianne Klinger, Ann Benko, Wydziału Reumatologii/Wydziału Medycyny oraz Molekularnego i Histopatologicznego Laboratorium Podstawowego, Penn State University College of Medicine, Hershey PA.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
MicrotomeReichert-Jung
Fisher Scientific 
Regał pionowyFisher Scientific 
Mikroskop świetlnyOlympus BX60  mikroskop
Ksylen
Aceton w stężeniach wody100%, 90%, 70%
Roztwor soli fizjologicznej buforowany trisem (TBS) Dako Wash BufferS3006
3% nadtlenek wodoru w TBS
Diaminobenzydyna (DAB)Sigma Fast Tablet
zestaw Chemical Permount  Średni montażFisher Scientific SP-15-100
Harleco Gill's III HematoxylinFiisher Scientific 23-750-019
Harleco Eozyna Y 1% alkoholowy roztwór podstawowyFisher Scientific 23-749-977
10 mM monohydrat kwasu cytrynowego (pH 6,0)
Poliklonalny receptor antyfolianowy królika beta Manohar Ratnamzoptymalizowany w 1:800
Monoklonalna mysz anty-ludzka CD68Dako M071801zoptymalizowany w skali 1:200
Poliklonalny królik anty-CD3Agilent DakoA0452zoptymalizowany w 1:100
Polimerowe kozie przeciwciało wtórne przeciwko królikowi/myszyDako
Tkanka  do kontroli pozytywnej FRB
Szkiełka mikroskopowe gładkie i matowe destylowanej łożyskowa

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Klippel, J. H., Stone, J. H., White, P. H. Primer on the rheumatic diseases. , Springer Science & Business Media. (2008).
  2. Weyand, C. M., Goronzy, J. J. Immune mechanisms in medium and large-vessel vasculitis. Nature Reviews Rheumatol. 9 (12), 731-740 (2013).
  3. Weyand, C. M., Liao, Y. J., Goronzy, J. J. The immunopathology of giant cell arteritis: diagnostic and therapeutic implications. Journal of Neuro-ophthalmology. 32 (3), 259-265 (2012).
  4. Deng, J., Younge, B., Olshen, R., Goronzy, J., Weyand, C. Th17 and Th1 T-cell responses in giant cell arteritis. Circulation. 121, 906-915 (2010).
  5. Mahr, A. D., et al. Adjunctive methotrexate for treatment of giant cell arteritis: an individual patient data meta-analysis. Arthritis & Rheumatology. 56 (8), 2789-2797 (2007).
  6. Hoffman, G. S., et al. A multicenter, randomized, double-blind, placebo-controlled trial of adjuvant methotrexate treatment for giant cell arteritis. Arthritis & Rheumatology. 46 (5), 1309-1318 (2002).
  7. Stone, J. H., Klearman, M., Collinson, N. Trial of Tocilizumab in Giant-Cell Arteritis. New England Journal of Medicine. 377 (15), 1494-1495 (2017).
  8. Milman, N. Tocilizumab increased sustained glucocorticoid-free remission from giant cell arteritis. Annals of Internal Medicine. 167 (12), JC63(2017).
  9. Xia, W., et al. A functional folate receptor is induced during macrophage activation and can be used to target drugs to activated macrophages. Blood. 113 (2), 438-446 (2009).
  10. Shen, J., et al. Folate receptor-beta constitutes a marker for human proinflammatory monocytes. Journal of Leukocyte Biology. 96 (4), 563-570 (2014).
  11. Salazar, M. D., Ratnam, M. The folate receptor: what does it promise in tissue-targeted therapeutics. Cancer and Metastasis Reviews. 26 (1), 141-152 (2007).
  12. Low, P. S., Henne, W. A., Doorneweerd, D. D. Discovery and development of folic-acid-based receptor targeting for imaging and therapy of cancer and inflammatory diseases. Accounts of Chemical Research. 41 (1), 120-129 (2008).
  13. Puig-Kroger, A., et al. Folate receptor beta is expressed by tumor-associated macrophages and constitutes a marker for M2 anti-inflammatory/regulatory macrophages. Cancer Research. 69 (24), 9395-9403 (2009).
  14. Nakashima-Matsushita, N., et al. Selective expression of folate receptor beta and its possible role in methotrexate transport in synovial macrophages from patients with rheumatoid arthritis. Arthritis & Rheumatology. 42 (8), 1609-1616 (1999).
  15. vander Heijden, J. W., et al. Folate receptor beta as a potential delivery route for novel folate antagonists to macrophages in the synovial tissue of rheumatoid arthritis patients. Arthritis & Rheumatology. 60 (1), 12-21 (2009).
  16. Jansen, G., Peters, G. J. Novel insights in folate receptors and transporters: implications for disease and treatment of immune diseases and cancer. Pteridines. 26 (2), 41-53 (2015).
  17. Albano-Aluquin, S., Malysz, J., Aluquin, V. R., Ratnam, M., Olsen, N. An immunohistochemical analysis of folate receptor beta expression and distribution in giant cell arteritis - a pilot study. American Journal of Clinical and Experimental Immunology. 6 (6), 107-114 (2017).
  18. Ross, J. F., Chaudhuri, P. K., Ratnam, M. Differential regulation of folate receptor isoforms in normal and malignant tissues in vivo and in established cell lines. Physiologic and clinical implications. Cancer. 73 (9), 2432-2443 (1994).
  19. Reiner, N. E. Methods in molecular biology. Macrophages and dendritic cells. Methods and protocols. Preface. Methods in Molecular Biology. 531, v-vi (2009).
  20. Robertson, D., Savage, K., Reis-Filho, J. S., Isacke, C. M. Multiple immunofluorescence labelling of formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) tissue. BMC Cell Biology. 9, 13(2008).
  21. Pawlina, W. Histology: A text and atlas with correlated cell and molecular biology. , Walters Kluwer. (2016).
  22. Kumar, V., Abbas, A., Robbins Aster, J. Robbins and Cotran pathologic basis of disease. , Elsevier Saunders. (2015).
  23. Dabbs, D. J. Diagnostic immunohistochemistry. , Elsevier, Inc. (2019).
  24. Ross, J. F., et al. Folate receptor type beta is a neutrophilic lineage marker and is differentially expressed in myeloid leukemia. Cancer. 85 (2), 348-357 (1999).
  25. Holzapfel, G. A. Collagen in arterial walls: biomechanical aspects. Collagen. Structure and Mechanics. Fratzl, P. , Springer-Verlag. Heidelberg. 285-324 (2008).
  26. Sultan, H., Smith, S. V., Lee, A. G., Chevez-Barrios, P. Pathologic Markers Determining Prognosis in Patients with Treated or Healing Giant Cell Arteritis. American Journal of Ophthalmology. , (2018).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Immunohistochemiabiopsja t tnicy skroniowejmakrofagi CD68limfocyty CD3hematoksylina i eozynaodzyskiwanie antygenusubstrat DABmikroskopia wietlna

Powiązane artykuły