Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Ocena zjadliwości i patogenezy zakażenia Aeromonas w modelu Caenorhabditis elegans

7.4K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/58768

⸱

20 grudnia 2018

 ,  ,  , 
1Institute of Basic Medical Sciences, College of Medicine, National Cheng Kung University, 2Department of Internal Medicine, National Cheng Kung University Hospital, College of Medicine, National Cheng Kung University, 3Department of Biochemistry and Molecular Biology, College of Medicine, National Cheng Kung University, 4Department of Microbiology and Immunology, College of Medicine, National Cheng Kung University

W tym artykule

Podsumowanie

Tutaj przedstawiamy trzy różne eksperymenty do badania infekcji Aeromonas u C. elegans. Korzystając z tych wygodnych metod, łatwo jest ocenić toksyczność wśród i w obrębie gatunków Aeromonas.

Streszczenie

Klinicznie wykazano, że ludzki patogen Aeromonas powoduje zapalenie żołądka i jelit, infekcje ran, posocznicę i infekcje dróg moczowych. Stwierdzono, że większość chorób u ludzi jest związana z czterema gatunkami bakterii: Aeromonas dhakensis, Aeromonas hydrophila, Aeromonas veronii i Aeromonas caviae. Organizm modelowy Caenorhabditis elegans jest bakteriożercą, który stanowi doskonały model infekcji do badania patogenezy bakteryjnej Aeromonas. W tym miejscu przedstawiamy trzy różne eksperymenty w celu zbadania infekcji Aeromonas przy użyciu modelu C. elegans, w tym testy przeżycia, toksyczności płynów i martwicy mięśni. Wyniki trzech metod określających zjadliwość Aeromonas były spójne. Wykazano, że A. dhakensis jest najbardziej toksyczny spośród 4 głównych gatunków Aeromonas powodujących infekcje kliniczne. Wykazano, że metody te są wygodnym sposobem oceny toksyczności wśród i w obrębie gatunków Aeromonas i przyczyniają się do lepszego zrozumienia patogenezy zakażenia Aeromonas.

Wprowadzenie

Wykazano, że ludzki patogen, Aeromonas, powoduje klinicznie zapalenie żołądka i jelit, infekcje ran, posocznicę i infekcje dróg moczowych1,2. Stwierdzono, że większość chorób związanych z chorobami ludzkimi jest związana z czterema gatunkami bakterii: Aeromonas dhakensis, Aeromonas hydrophila, Aeromonas veronii i Aeromonas caviae 2,3,4,5. Wśród chorób zakaźnych Aeromonas infekcje tkanek miękkich mogą powodować ciężką zachorowalność i śmiertelność u ludzi. Warto zauważyć, że martwica mięśni jest najcięższą formą infekcji tkanek miękkich6. Obserwacja przeżywalności i martwicy mięśni Caenorhabditis elegans po zakażeniu jest wygodną metodą spekulacji na temat toksyczności Aeromonas.

Naukowcy już opracowali liczne organizmy modelowe do badania infekcji bakteryjnych. W poprzednich badaniach myszy, danio pręgowane i nicienie wykorzystano jako modele zwierzęce do badania patogenezy i zjadliwości Aeromonas6,7,8. Każdy model zwierzęcy ma swoje zalety i zastosowania. Organizm modelowy, Caenorhabditis elegans, jest bakteriożernym nicieniem, który w naturalny sposób przyjmuje bakterie jako pokarm. C. elegansrozwinął skomplikowany wrodzony układ odpornościowy chroniący przed infekcjami bakteryjnymi w trakcie swojej ewolucji. Udowodniono, że pod wpływem stresu związanego z infekcją bakteryjną C. elegans jest doskonałym modelem infekcji do badania patogenezy bakteryjnej Aeromonas6,7,9 i innych patogenów, takich jak grzyb10 i enterokrwotoczny Escherichia coli O157:H711. Jednak nadal nie ma publikacji, która skupiałaby się na metodologii wykorzystania C. elegans jako modelu do badania zjadliwości Aeromonas.

Tutaj wprowadzamy trzy różne eksperymenty do badania infekcji Aeromonas przy użyciu C. elegans jako modelu zwierzęcego: testy na przeżycie, toksyczność płynów i martwicę mięśni. Metody te są wygodnym sposobem oceny toksyczności wśród gatunków Aeromonas i w ich obrębie oraz poprawy zrozumienia patogenezy Aeromonas.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

1. Przygotowanie pożywki hodowlanej

UWAGA: Zobacz Tabelę 1, aby dowiedzieć się, jak przygotować rozwiązanie.

  1. Aby przygotować M9 medium12, rozpuść 1,5 g KH2PO4, 5,66 g Na2HPO4 i 2,5 g NaCl w 500 ml wody dejonizowanej. Autoklaw w temperaturze 121 °C przez 20 min. Poczekaj, aż ostygnie do temperatury pokojowej, a następnie dodaj 0,5 ml 1 MMgSO4 przed pierwszym użyciem.
  2. Aby przygotować pożywkę dla nicieni (NGM)12, rozpuść 3 g NaCl, 2,5 g peptonu bakteryjnego i 20 g agaru w 1 l wody dejonizowanej. Autoklaw w temperaturze 121 °C przez 20 min. Poczekaj, aż sstygnie do 55 °C w łaźni wodnej, a następnie dodaj 1 ml 1 M CaCl2, 1 ml 1 M MgSO4, 1 ml 5% cholesterolu w etanolu i 25 ml buforu fosforanowego. Zamieszaj, aby dobrze wymieszać.
  3. Wlej około 5 ml NGM do każdej 6 cm szalki Petriego. Unikaj powstawania pęcherzyków na powierzchni płyty. Pozostaw talerze w temperaturze pokojowej na 1 noc i zapakuj w temperaturze 4 °C. Przed użyciem przywróć do temperatury pokojowej.
  4. Aby przygotować wzbogacony NGM (ENGM), rozpuść 3 g NaCl, 5 g peptonu bakteryjnego, 1 g ekstraktu drożdżowego i 30 g agaru w 1 l wody dejonizowanej. Autoklaw w temperaturze 121 °C przez 20 min. Poczekaj, aż ostygnie do 55 °C w łaźni wodnej i dodaj 1 ml 1 M CaCl2, 1 ml 1 M MgSO4, 1 ml 5% cholesterolu w etanolu i 25 ml buforu fosforanowego. Zamieszaj, aby dobrze wymieszać.
  5. Wlej około 10 ml ENGM do każdej szalki Petriego o średnicy 9 cm. Unikaj powstawania pęcherzyków na powierzchni płyty. Pozostaw talerze w temperaturze pokojowej na 1 noc i zapakuj w temperaturze 4 °C. Przed użyciem doprowadź do temperatury pokojowej.
  6. Aby przygotować S medium12, przed użyciem wymieszaj 40 ml S Basal, 0,4 ml 1 M cytrynianu potasu, 0,4 ml roztworu metali śladowych, 0,12 ml 1 M CaCl2, 0,12 ml 1 M MgSO4, 40 μL 5% cholesterolu w etanolu i 1 ml 8 mM FudR.

2. Synchronizacja C. elegans6,9,12

  1. Umyj około 2,000 robaków w stadium ciężarnym dorosłym 10 ml sterylnej wody dejonizowanej w probówce o pojemności 15 ml. Wypłucz bakterie 3x, trzymając robaki na dnie tuby.
  2. Odwirować próbkę przez 1 minutę przy 500 x g, aby ściągnąć robaki. Usuń supernatant i trzymaj robaki w 3,5 ml dejonizowanej wody.
  3. Do probówki dodać 1 ml NaOCl (10–15%) i 0,5 ml 5 M KOH. Wymieszaj równomiernie, wstrząsając przez <6 minut, aby zlizować ciała robaków.
  4. Po uwolnieniu jaj z robaków dodaj 10 ml wody dejonizowanej, aby zatrzymać lizę. Wirować przez 1 minutę przy 1 200 x g, aby ściągnąć jaja i usunąć supernatant w jak największym stopniu. Umyć 15 ml pożywki M9 co najmniej 3x,
    UWAGA: Patrz krok 1.1, aby zapoznać się ze składem podłoża M9.
  5. Jaja należy przechowywać w 1 ml pożywki M9. Jaja należy transportować do naczynia o średnicy 3,5 cm do inkubacji w temperaturze 20 °C przez jedną noc (około 12–18 godzin).
    UWAGA: Po inkubacji z jaj wykluwają się larwy robaka, która nazywa się pierwszym stadium larwy (L1).
  6. Odpipetować 10 μl robaków L1 w pożywce M9. Policz liczbę robaków i oblicz stężenie robaków L1 w pożywce M9.
  7. Wysiewaj co najwyżej 10 000 inkubowanych robaków w stadium L1 za pomocą pipety na 9 cm płytce ENGM rozsmarowanej Escherichia coli OP50.
    1. Na tym etapie rozprowadź 0,5 ml wyhodowanej przez noc kultury E. coli OP50 z bulionem Luria-Bertani (LB) na 9 cm płytce ENGM. Inkubować płytkę w temperaturze 37 °C przez 16–18 h
      UWAGA: Aby uniknąć zanieczyszczenia, etap rozsiewania należy wykonać w okapie z przepływem laminarnym.
    2. Schłodzić do temperatury pokojowej przed wysiewem robaków L1. Wysiew co najwyżej 10 000 inkubowanych robaków w stadium L1 na płytce ENGM z E. coli OP50.
  8. Inkubować robaki w temperaturze 20 °C przez 44 godziny lub do momentu, gdy osiągną 4. stadium larwy (L4).
    nuta: Zobacz krok 1.3, aby zapoznać się ze składem podłoża ENGM. Robak ma białą kropkę w kształcie półksiężyca na środku boku ciała w stadium L4.
  9. Użyj zsynchronizowanych robaków etapu L4 w następujących testach. Użyć dzikich robaków typu N2 w teście przeżywalności C. elegans z Aeromonas dhakensis i teście toksyczności płynnej C. elegans z Aeromonas dhakensis. Użyj robaków RW1596 (myo-3(st386);stEx30[myo-3p::GFP::myo-3 + rol-6(su1006)]) w teście martwicy mięśni C. elegans z Aeromonas dhakensis.

3. Test przetrwania C. elegans z Aeromonas6,9

  1. W dniu wysiewu robaków L1 na ENGM rozprzestrzeniających się z E. coli OP50, należy wybrać pojedynczą kolonię każdego z czterech szczepów Aeromonas lub E. coli OP50 i wyhodować odpowiednio 2 ml bulionu LB w temperaturze 37 °C przez 16 h.
    nuta: Aby uniknąć zanieczyszczenia, ten krok należy wykonać w okapie z przepływem laminarnym. Wykorzystano tu następujące szczepy bakterii: E. coli OP50, normalne źródło pożywienia C. elegans. A. dhakensis AAK1, pierwszy w pełni zsekwencjonowany patogenny kliniczny izolat A. dhakensis. A. hydrophila (A) hydrophila A2-066, A. veronii A2-007 i A. caviae A2-9307121 są reprezentatywnymi izolatami klinicznymi z Narodowego Szpitala Uniwersyteckiego Cheng Kung.
  2. Zmierz absorbancję OD600 bulionu bakteryjnego i dostosuj bulion bakteryjny do OD600 = 2.0 z bulionem LB.
  3. Umieść i rozprowadź 30 μl bulionu bakteryjnego na każdej 6 cm płytce NGM. Hoduj płytki w temperaturze pokojowej przez noc.
    nuta: Patrz krok 1.2, aby zapoznać się ze składem pożywki NGM.
  4. W dniu, w którym robaki L1 osiągną stadium L4, losowo wybierz i przenieś 50 robaków na płytkę NGM z każdym z czterech szczepów Aeromonas lub E. coli OP50.
  5. Inkubować płytki NGM w temperaturze 20 °C aż do zakończenia testu.
  6. Przenieś wszystkie żywe robaki na nowo przygotowaną płytkę NGM z bakteriami i licz liczbę żywych, martwych i czujnikowych robaków każdego dnia, aż ostatni robak będzie martwy.
    nuta: Codziennie przenoś robaki na świeżo przygotowaną płytkę NGM w celu podtrzymania infekcji, nawet jeśli używasz sterylnych robaków (np. glp-4 lub z FudR).
  7. Wykreśl krzywe przeżycia na podstawie obliczeń danych dziennych.

4. Test toksyczności cieczy C. elegans za pomocą Aeromonas7

UWAGA: Aby uniknąć zanieczyszczenia, kroki powinny być wykonywane w okapie z przepływem laminarnym.

  1. Dzień po wysianiu robaków L1 na płytce ENGM rozsmarowanej E. coli OP50, wybierz pojedynczą kolonię każdego z czterech szczepów Aeromonas i E. coli OP50 i posaz z 5 ml bulionu LB każdy w temperaturze 37 °C przez 16 h.
    UWAGA: W protokole użyto następujących szczepów bakterii: E. coli OP50, normalne źródło pożywienia C. elegans. A. dhakensis AAK1, pierwszy w pełni zsekwencjonowany patogenny kliniczny izolat A. dhakensis. A. hydrophila (A) hydrophila A2-066, A. veronii A2-007 i A. caviae A2-9307121 są reprezentatywnymi izolatami klinicznymi z Narodowego Szpitala Uniwersyteckiego Cheng Kung.
  2. Zmierzyć absorbancję OD600 bulionu bakteryjnego.
  3. Odwirować bulion bakteryjny o sile 3,500 x g przez 15 minut, aby usunąć bulion LB. Ponownie zawiesić bakterie i dostosować bulion bakteryjny do OD600 = 3,0 z pożywką S. Dodaj 195 μl bulionu bakteryjnego w pożywce S do co najmniej 8 dołków 96-dołkowej płytki.
    nuta: Patrz krok 1.6, aby zapoznać się ze składem podłoża S.
  4. Zmyj robaki L4 na płytce ENGM za pomocą E. coli OP5 przy użyciu pożywki M9. Dostosuj roztwór robaka do stężenia 5 robaków na μl i dodaj 5 μl roztworu robaka do każdego dołka na 96-dołkowej płytce. Upewnij się, że w studzience jest około 25 robaków.
  5. Inkubować 96-dołkową płytkę na wytrząsarce z prędkością 200 obr./min w temperaturze 25 °C.
  6. Policz liczbę żywych robaków i martwych robaków po 24, 48 i 72 godzinach. Oblicz wskaźniki przeżywalności każdego dołka za pomocą następującego wzoru: (Żywe robaki/Całkowita liczba robaków) × 100%.
  7. Narysuj wykres punktowy z dziennym obliczeniem danych.

5. C. elegans Test martwicy mięśni za pomocą Aeromonas6

UWAGA: Aby uniknąć zanieczyszczenia, te kroki powinny być wykonywane w okapie z przepływem laminarnym.

  1. W dniu, w którym robaki L1 zostaną wysiane na rozsiewaczu ENGM z E. coli OP50, należy wybrać pojedynczą kolonię każdego z czterech szczepów Aeromonas i E. coli OP50 i wyhodować je z 2 ml bulionu LB każdy w temperaturze 37 °C przez 16 h.
    nuta: Wykorzystano tu następujące szczepy bakterii: E. coli OP50, normalne źródło pożywienia C. elegans. A. dhakensis AAK1, pierwszy w pełni zsekwencjonowany patogenny kliniczny izolat A. dhakensis. A. hydrophila (A) hydrophila A2-066, A. veronii A2-007 i A. caviae A2-9307121 są reprezentatywnymi izolatami klinicznymi z Narodowego Szpitala Uniwersyteckiego Cheng Kung.
  2. Zmierz absorbancję OD600 bulionu bakteryjnego i dostosuj bulion bakteryjny do OD600 = 2,0 za pomocą bulionu LB. Odczipuj i rozprowadź 30 μl bulionu bakteryjnego na 6 cm płytkach NGM. Hoduj płytki w temperaturze pokojowej przez noc.
  3. W dniu, w którym robaki L1 osiągną stadium L4, przenieś 50 robaków na każdą płytkę NGM z każdym z czterech szczepów Aeromonas lub E. coli OP50. Inkubować płytki NGM w temperaturze 20 °C. Robaki przenosić co 24 godziny na nowo przygotowane płytki NGM z bakteriami.
  4. Rób zdjęcia mięśni za pomocą mikroskopu fluorescencyjnego.
    1. Losowo wybierz 10 robaków na 2% żelu agarozowym w pożywce M9 na szkiełku. Sparaliżuj robaki za pomocą 2 μl 1% azydku sodu w pożywce M9 na agarozie przez mniej niż 5 minut przed zrobieniem zdjęć.
    2. Umieść szkiełko nakrywkowe i uchwyć obrazy mięśni za pomocą filtra białka fluorescencyjnego (GFP) na mikroskopie fluorescencyjnym z kamerą urządzenia sprzężonego z ładunkiem. Uchwyć obrazy mięśni po 24, 48 i 72 godzinach od etapu L4.
  5. Przeprowadzanie analizy obrazu i przygotowanie rysunku za pomocą oprogramowania do przetwarzania obrazu.
    nuta: Definicje wyników i poziomów uszkodzeń mięśni są pokazane w Rysunek 3, dla którego kryteria są wymienione w następujący sposób: 3 punkty za brakujące włókna mięśniowe; 2 punkty za pęknięte lub uszkodzone włókna mięśniowe; 1 punkt dla zgiętych włókien mięśniowych; 0 punktów dla zdrowych włókien mięśniowych.

6. Analizy statystyczne

  1. Wykonaj wszystkie eksperymenty co najmniej trzy razy niezależnie.
  2. Metodę Kaplana-Meiera można wykorzystać do oceny testów przeżycia C. elegans i zastosować test log-rank do analizy różnic w przeżywalności. Ustaw istotność statystyczną na poziomie 0,05.
  3. Użyj testu t Studenta, aby przeanalizować wyniki statystyczne testów toksyczności cieczy C. elegans dla dwóch różnych grup. Użyj jednoczynnikowego testu ANOVA do analizy różnic między trzema lub więcej wartościami dla jednej zmiennej niezależnej. Ustaw istotność statystyczną na poziomie 0,05.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Postępując zgodnie z opisanymi powyżej protokołami, można łatwo odróżnić toksyczność czterech szczepów Aeromonas. Test przeżywalności C. elegans przedstawiono na Ryc. 1. Wskaźniki przeżywalności C. elegans zakażonych gatunkami Aeromonas, przedstawione w kolejności malejącej, wynosiły odpowiednio dla: A. caviae, A. veronii, A. hydrophila oraz A. dhakensis. Pomimo zróżnicowania toksyczności pomiędzy gatunkam...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

C. elegans jest bakteriożernym nicieniem, który naturalnie przyjmuje bakterie jako pokarm i rozwinął skomplikowaną wrodzoną odporność na bakterie podczas procesu ewolucji. Dwa z głównych narządów utrzymujących i wspierających odporność to naskórek i jelita 9,13. Naskórek i pasma mięśni C. elegans przypominają struktury tkanek miękkich u ssaków i ludzi6. Ze względu na te cechy, C. elegans ma zastosowanie jako orga...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

Jesteśmy wdzięczni za pomoc ze strony głównego ośrodka C. elegans na Tajwanie oraz Laboratorium Diagnostyki Mikrobiologicznej i Oporności na Środki Przeciwdrobnoustrojowe Narodowego Szpitala Uniwersyteckiego Cheng Kung za dostarczenie izolatów Aeromonas. Uznajemy również Centrum Genetyki Caenorhabditis (CGC) oraz WormBase. Dziękujemy również Savanze Moore za redakcję rękopisu.

To badanie było częściowo wspierane przez granty z Ministerstwa Nauki i Technologii Tajwanu (MOST 105-2628-B-006-017-MY3) oraz Narodowego Szpitala Uniwersyteckiego Cheng Kung (NCKUH-10705001) dla P.L. Chen.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Inkubator z wytrząsarkąYIH DERLM-570RInkubacja bakterii
K2HPO4J.T.BakerMP021519455Przygotowanie podłoża hodowlanego 
KH2PO4J.T.Baker3246-05Przygotowanie podłoża hodowlanego 
Na2HPO4J.T.BakerMP021914405Przygotowanie pożywki hodowlanej 
NaClSIGMA31434Pożywka hodowlana preparat 
MgSO4SIGMAM7506Przygotowanie podłoża hodowlanego 
agarDifco214530Pożywka hodowlana przygotowanie 
CaCl2SIGMAC1016Przygotowanie podłoża hodowlanego 
cholesterolSIGMAC8503Pożywka hodowlana 
etanolSIGMA32205Przygotowanie podłoża hodowlanego 
KOHSIGMAP5958Przygotowanie podłoża hodowlanego 
Płytka Petriego 6 cmALPHA PLUS46płytki agarowe
Płytka 96-dołkowaFALCON353072płynny test
peptonowy bakteryjnyAffymetrix/USBAAJ20048P2Przygotowanie podłoża hodowlanego 
ekstrakt drożdżowySIGMA92144Pożywka hodowlana 
kwas cytrynowy i byk; H2OSIGMAC1909Przygotowanie podłoża hodowlanego 
cytrynian tri-potasu i byk; H2OSIGMA104956Przygotowanie podłoża hodowlanego 
FudR SIGMA1271008Przygotowanie podłoża hodowlanego 
disodowe EDTASIGMAE1644Pożywka hodowlana preparat 
FeSO4• 7 H2OSIGMA215422Przygotowanie podłoża hodowlanego 
MnCl2• 4 H2OSIGMA221279Przygotowanie podłoża hodowlanego 
ZnSO4• 7 H2OSIGMA204986Przygotowanie podłoża hodowlanego 
CuSO4• 5 H2OSIGMAC8027Przygotowanie podłoża hodowlanego 
tryptonSIGMA16922Przygotowanie podłoża hodowlanego 
System mikroskopowyNikon Eclipase Ti odwrócone obrazowanie mikroskopowe
Naukowa kamera CCDQImaging Retiga-2000R Szybki 1394 obrazowanie mikroskopowe

Bibliografia

  1. Parker, J. L., Shaw, J. G. Aeromonas spp. clinical microbiology and disease. Journal of Infection. 62 (2), 109-118 (2011).
  2. Chao, C. M., Lai, C. C., Tang, H. J., Ko, W. C., Hsueh, P. R. Skin and soft-tissue infections caused by Aeromonas species. European Journal of Clinical Microbiology & Infectious Diseases. 32 (4), 543-547 (2013).
  3. Chao, C. M., Lai, C. C., Tang, H. J., Ko, W. C., Hsueh, P. R. Biliary tract infections caused by Aeromonas species. European Journal of Clinical Microbiology & Infectious Diseases. 32 (2), 245-251 (2013).
  4. Chuang, H. C., et al. Different clinical characteristics among Aeromonas hydrophila, Aeromonas veronii biovar sobria and Aeromonas caviae monomicrobial bacteremia. Journal of Korean Medical Science. 26 (11), 1415-1420 (2011).
  5. Chao, C. M., Lai, C. C., Gau, S. J., Hsueh, P. R. Skin and soft tissue infection caused by Aeromonas species in cancer patients. Journal of Microbiology, Immunology and Infection. 46 (2), 144-146 (2013).
  6. Chen, P. L., et al. A Disease Model of Muscle necrosis caused by Aeromonas dhakensis infection in Caenorhabditis elegans. Frontiers in Microbiology. 7, 2058(2016).
  7. Chen, P. L., et al. Virulence diversity among bacteremic Aeromonas isolates: ex vivo, animal, and clinical evidences. PLoS One. 9 (11), 111213(2014).
  8. Saraceni, P. R., Romero, A., Figueras, A., Novoa, B. Establishment of infection models in zebrafish larvae (Danio rerio) to study the pathogenesis of Aeromonas hydrophila. Frontiers in Microbiology. 7, 1219(2016).
  9. Chen, Y. W., Ko, W. C., Chen, C. S., Chen, P. L. RIOK-1 Is a Suppressor of the p38 MAPK Innate Immune Pathway in Caenorhabditis elegans. Frontiers in Immunology. 9, 774(2018).
  10. Powell, J. R., Ausubel, F. M. Models of Caenorhabditis elegans infection by bacterial and fungal pathogens. Methods in Molecular Biology. 415, 403-427 (2008).
  11. Chou, T. C., et al. Enterohaemorrhagic Escherichia coli O157:H7 Shiga-like toxin 1 is required for full pathogenicity and activation of the p38 mitogen-activated protein kinase pathway in Caenorhabditis elegans. Cellular Microbiology. 15 (1), 82-97 (2013).
  12. Stiernagle, T. Maintenance of C. elegans. WormBook. , 1-11 (2006).
  13. Engelmann, I., Pujol, N. Innate immunity in C. elegans. Advances in Experimental Medicine and Biology. 708, 105-121 (2010).
  14. Feinbaum, R. L., et al. Genome-wide identification of Pseudomonas aeruginosa virulence-related genes using a Caenorhabditis elegans infection model. PLoS Pathogens. 8 (7), 1002813(2012).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Model C eleganstest prze ywalno citest toksyczno ci w rodowisku ciek ymtest martwicy mi nipatogeneza bakteryjnaocena wirulencjip ytki NGMmikroskopia fluorescencyjnagatunki Aeromonas
Ocena zjadliwości i patogenezy zakażenia Aeromonas w modelu Caenorhabditis elegans
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki Korzystania

Zasady

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.