Ten protokół opisuje proces barwienia immunologicznego biopsji odbytniczej pod kątem kalretyniny, białka S100 i produktu genu białka 9.5. Ta nowatorska metoda diagnostyki uzupełniającej choroby Hirschsprunga charakteryzuje się preferowanymi wskaźnikami czułości i swoistości.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Diagnostyka choroby Hirschsprunga na podstawie biopsji odbytniczej z barwieniem immunologicznym w kierunku kalretyniny, białka S100 i produktu genu białka 9.5
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Choroba Hirschsprunga (HD) jest wrodzoną chorobą jelit, która klinicznie objawia się jako niezdolność do oddawania smółki u niemowląt lub jako długotrwałe zaparcia u dzieci. Biopsja ssąca odbytnicy (RSB) mająca na celu określenie braku komórek zwojowych i przerostu neuronów jest obecnie najdokładniejszym testem do diagnozy HD. Tradycyjne barwienie hematoksyliną-eozyną nie ma czułości i swoistości. Barwienie acetylocholinoesterazy nie może być szeroko stosowane ze względu na złożony proces. Nasz nowatorski protokół barwienia immunologicznego kalretyniny, białka S100 i produktu genu białka 9.5 (PGP9.5), który przeprowadziliśmy na RSB, wykazuje wysokie wskaźniki czułości i swoistości wynoszące odpowiednio 96,49% (95% przedział ufności, 0,88-0,99) i 100% (95% przedział ufności, 0,97-1,00). Segmenty dotknięte chorobą Huntingtona często objawiają się brakiem ekspresji kalretyniny, białka S100 i PGP9.5, które są markerami przerostu neuronów w tkance podśluzówkowej. Protokół ten opisuje szczegółowy proces działania tej nowej metody diagnostycznej.
Wprowadzenie
Choroba Hirschsprunga (HD) jest powszechną wrodzoną chorobą jelit charakteryzującą się brakiem komórek zwojowych w różnych segmentach dystalnego przewodu pokarmowego1. Ludzki jelitowy układ nerwowy powstaje, gdy inwazja embrionalnych komórek nerwowych zostaje zakończona. Jeśli dojdzie do zaburzenia procesu i inwazja nie zakończy się, dystalne jelito noworodka staje się aganglioniczne2. Ten potencjalnie śmiertelny stan nazywa się chorobą Hirschsprunga. Proliferacja, ruchliwość i wzrost jelit to trzy główne elementy udanej kolonizacji.
Tradycyjne barwienie hematoksyliną i eozyną (H&E) w ogranicz....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Ten protokół został zatwierdzony przez Radę ds. Etyki Badań Szpitala Związkowego Uniwersytetu Nauki i Technologii w Huazhong.
1. Biopsja ssania doodbytnicy
- Wykonaj biopsję ssania odbytnicy przez dobrze wyszkolonego chirurga dziecięcego i asystenta przy użyciu systemu do biopsji odbytnicy Rbi2 po uzyskaniu świadomej zgody opiekuna.
- Wykonać RSB u pacjentów, którzy mają następujące wskazania: niezdolność do wydalania smółki u niemowląt lub długotrwałe wzdęcia z zaparciami lub bez zaparć u dzieci; dzieci z długotrwałymi zaparciami, które potrzebują oleju parafinowego do całkowitego wypróżnienia; niedrożność jelit lub per....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
W badaniu wzięło udział łącznie 318 pacjentów. Wszyscy pacjenci przeszli zabieg RSB, a tkanki poddano barwieniu na calretyninę, S100 oraz PGP9.5. Rozpoznanie postawione na podstawie naszego nowego protokołu obejmowało HD w 97 przypadkach, brak HD w 213 przypadkach oraz podejrzenie HD w 8 przypadkach. spośród 132 pacjentów operowanych u 99 zdiagnozowano HD na podstawie immunostynowania preparatów pełnościennych pobranych po operacji. Barwienie na S100 i PGP9.5 wykazało, że odpowiednio u 92.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Tutaj opisaliśmy procedurę wykorzystującą trzy różne immunohistochemiczne przeciwciała do barwienia skrawków RBS w celu rozpoznania HD. Czułość naszego protokołu diagnostycznego wynosiła 96,49% (95% CI, 0,88-0,99), a swoistość wynosiła 100% (95% CI, 0,97-1,00).
Najbardziej krytycznymi etapami protokołu są RSB i reakcja antygen-przeciwciało. Wielkość biopsji decyduje o dokładności barwienia. Mała biopsja nie zapewni wystarczającej ilości tkanki, aby postawić precyzyjną diagnozę, podczas gdy duż.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Podziękowania
Autorzy dziękują Weibing Tangowi za jego wielką pomoc w udostępnieniu laboratorium filmowego. Ten artykuł jest wspierany przez Public Welfare Research, a specjalne fundusze zostały otrzymane z National Health and Family Planning of China (Grant No.201402007).
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| przeciwciało kalretyniny | MXB Biotechnologies | MAB-0716 170416405c | przeciwciało: przeciwciało pierwszorzędowe |
| Przeciwciało S-100 | Przeciwciało MXB Biotechnologies | Kit-0007 | : przeciwciało pierwszorzędowe |
| Przeciwciało PGP9.5 | Przeciwciało Shanghai Long Island Co. Ltd | Przeciwciało R-0457-03 | : odczynnik wzmacniający przeciwciało pierwszorzędowe |
| MXB Biotechnologies | KIT-9902-A 170416405a | przeciwciało: przeciwciało drugorzędowe A | |
| Kozioł anty-królik / mysz IgG Przeciwciało drugorzędowe | MXB Biotechnologies | KIT-9902-B | przeciwciało: przeciwciało wtórne B |
| Zestaw do barwienia DAB (zawierający odczynnik A, B i C) | Zestaw do barwienia | MXB Biotechnologies | DAB-0031 |
| Inkubator ciepła | Shanghai yiheng instrument Co. Ltd | DHP-9082 | instrument |
| Rbi2 ssąca biopsja odbytnicy system | Aus Systems Pty Ltd, Australia Południowa, Australia | CP1200 HP1000 SS1000 | instrument |
| mikrotom | Leica | leica RM2016 | instrument |
| cytrynianu sodu kwasu cytrynowego (100X) | MXB Biotechnologies | MVS-0101 | bufor do odzyskiwania antygenu |
| patologiczny dehydrat tkanek | wuhan junjie electronic Co. Ltd | JT-12F | instrument |
Bibliografia
- Tam, P. K. Hirschsprung's disease: A bridge for science and surgery. Journal of Pediatric Surgery. 51 (1), 18-22 (2016).
- Heanue, T. A., Pachnis, V. Enteric nervous system development and Hirschsprung's disease: advance....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
Przeglądaj więcej artykułów
Diagnostyka choroby Hirschsprungabiopsja aspiracyjna odbytnicybarwienie immunohistochemiczne kalretininąbarwienie białkiem S100barwienie immunohistochemiczne PGP9.5protokół immunohistochemicznymetoda odzyskiwania antygenuanaliza pod mikroskopem świetlnymwykrywanie hipertrofii nerwówbrak komórek zwojowych
