Trójwymiarowy model macierzy zewnątrzkomórkowej kości dla kostniakomięsaka

Summary

Model kostnoszkieletowego mięsaka (BEM) dla kostniakomięsaka (OS) jest dobrze znany i pokazany tutaj. Może być używany jako odpowiednie rusztowanie do naśladowania wzrostu guza pierwotnego in vitro i stanowi idealny model do badania histologicznej i cytogennej heterogeniczności OS.

Abstract

Kostniakomięsak (OS) jest najczęstszym i bardzo agresywnym pierwotnym guzem kości. Charakteryzuje się zmiennościami anatomicznymi i histologicznymi oraz trudnościami diagnostycznymi lub prognostycznymi. OS składa się z genotypowo i fenotypowo heterogennych komórek nowotworowych. Udowodniono, że elementy mikrośrodowiska kości odpowiadają za niejednorodność guza i postęp choroby. Macierz zewnątrzkomórkowa kości (BEM) zachowuje matryce mikrostrukturalne i składniki biochemiczne natywnej macierzy zewnątrzkomórkowej. Ta specyficzna tkankowo nisza stanowi korzystne i długoterminowe rusztowanie do wysiewu i proliferacji komórek OS. W artykule przedstawiono protokół przygotowania modelu BEM i jego dalszego eksperymentalnego zastosowania. Komórki OS mogą rosnąć i różnicować się w wiele fenotypów zgodnych ze złożonością histopatologiczną próbek klinicznych OS. Model umożliwia również wizualizację różnych morfologii i ich związku ze zmianami genetycznymi i leżącymi u ich podstaw mechanizmami regulacyjnymi. Jako homologiczny do ludzkiego systemu operacyjnego, ten model BEM-OS może być opracowywany i stosowany w patologii i badaniach klinicznych systemu operacyjnego.

Introduction

Kostniakomięsak (OS) zwykle występuje w aktywnie rosnących obszarach, metaprzynadzie kości długich, w okresie dojrzewania. Ponad 80% miejsc dotkniętych systemem operacyjnym preferuje metaprzynasadę bliższej części kości piszczelowej i bliższej kości ramiennej, a także zarówno dystalnej, jak i bliższej kości udowej, co odpowiada lokalizacji płytki wzrostu¹. OS składa się z wielu podtypów komórek o właściwościach mezenchymalnych i znacznej różnorodności cech histologicznych i stopnia. Dowody potwierdzają, że mezenchymalne komórki macierzyste (MSC), prekursory i perycyty są komórkami pochodzenia^2,

Protocol

Opieka nad zwierzętami i ich użytkowanie są prowadzone zgodnie z Przewodnikiem National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (publikacja NIH nr 80-23, poprawiona w 1996 roku) po zatwierdzeniu przez Komitet Etyki Zwierząt Uniwersytetu Sun Yat-sen.

1. Przygotowanie kości

1. Uzyskaj od 4 do 6 tygodniowych myszy BALB/c (bez wymagań dotyczących płci). Poddaj mysz eutanazji aseptycznie przez zwichnięcie szyjki macicy i odetnij świeżą kość strzałkową, piszczelową i kość udową od tylnej kończyny sterylnymi nożyczkami chirurgicznymi. Oderwij tkankę nabłonkową, a następnie usuń jak najwięcej tkanki miękkiej z....

Results

Po demineralizacji i decelularyzacji, BEM wydaje się być przezroczysty z większą odpornością i wytrzymałością w porównaniu do rodzimej kości myszy. Wyraźnie można zaobserwować niewielką pozostałość mięśniową i przestrzeń jamy szpikowej (Rysunek 1A, B). Aby określić skuteczną decelularyzację BEM, BEM jest zatapiany w parafinie po utrwaleniu, a następnie krojony na odcinki 3–5 μm w celu barwienia hematoksylino-eozyny (H&E). Dokładne usunięcie jąder komórkowych pokazuje obrazowanie w.......

Discussion

Ogólnie rzecz biorąc, OS można podzielić na podtypy osteoblastyczne, chondroblastyczne i fibroblastyczne w zależności od dominującego komponentu histologicznego. Jego rokowanie zależy nie tylko od parametrów histologicznych, ale także od jego anatomicznego położenia. Może wystąpić wewnątrz kości (w przedziale śródszpikowym lub śródkorowym), na powierzchni kości oraz w miejscach pozakostnych¹⁹. Pojawienie się i niejednorodność OS można wyjaśnić jako koniugację zdarzeń onkogennych i odpowiedniego bo.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Probówka wirówkowa 15 ml	Greiner	188271
Probówka wirówkowa 50 ml	Greiner	227270
Naczynie do hodowli komórkowych 6 cm	Greiner	628160
Płytka 6-dołkowa	Greiner	657160
Ampicillin	Sigma-Aldrich	A9393
C57-BL/6J mysz	Laboratorium Uniwersyteckie Sun Yat-sen Inkubator
	SHEL LAB	SCO5A
	odczynników chemicznych	BE14-GR-500G
DMEM/F12	Sigma-Aldrich	D0547
Płodowa surowica bydlęca	Hyklon	SH30084.03
Hemocytometr	BLAU	717805
Kanamycyna	Sigma-Aldrich	PHR1487
MG-63 Chińska	Akademia Nauk, Bank Komórek w Szanghaju Linia	komórkowa ludzkiego kostniakomięsaka
			Roztwór czerwieni fenolowej jest używany jako wskaźnik pH: jego kolor wykazuje stopniowe przejście od żółtego do czerwonego w zakresie pH od 6,6 do 8,0.
Chlorek potasu	Sangon Biotech	A100395
Fosforan potasu Monobasic	Sangon Biotech A501211
Chlorek sodu	Sangon Biotech	A501218