Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Ortotopowy model raka endometrium z limfadenopatią zaotrzewnową wykonany z rozmnożonych i hodowanych in vivo komórek VX2

8K wyświetleń

DOI:

10.3791/59340

12 września 2019

W tym artykule

Podsumowanie

Ten protokół przedstawia ustandaryzowaną metodę hodowli komórek VX2 w hodowli i stworzenia ortotopowego modelu VX2 raka endometrium z przerzutami do węzłów chłonnych zaotrzewnowych u królików. Ortotopowe modele raka endometrium są ważne dla badań przedklinicznych nad nowymi metodami obrazowania w diagnostyce przerzutów do węzłów chłonnych.

Streszczenie

Rak endometrium jest najczęstszym nowotworem ginekologicznym w Ameryce Północnej, a częstość jego występowania rośnie na całym świecie. Leczenie polega na zabiegu chirurgicznym z terapią uzupełniającą lub bez niej, w zależności od zajęcia węzłów chłonnych określonego przez limfadenektomię. Limfadenektomia jest zabiegiem chorobowym, który nie wykazał korzyści terapeutycznych u wielu pacjentów, dlatego konieczna jest nowa metoda diagnozowania przerzutów do węzłów chłonnych. Aby przetestować nowe środki do obrazowania, potrzebny jest wiarygodny model raka endometrium z przerzutami do węzłów chłonnych zaotrzewnowych. Model raka endometrium VX2 był często opisywany w literaturze; Istnieją jednak znaczne różnice w odniesieniu do metody ustanawiania modeli. Co więcej, żadne badania nie wykazały wykorzystania hodowanych komórek VX2 do stworzenia tego modelu, ponieważ wcześniej używano tylko komórek rozmnażanych in vivo. W niniejszym artykule przedstawiamy standaryzowaną metodę chirurgiczną i metodę monitorowania pooperacyjnego w celu ustalenia modelu raka endometrium VX2 oraz informujemy o pierwszym zastosowaniu hodowanych komórek VX2 do stworzenia tego modelu.

Wprowadzenie

Rak endometrium, czyli rak błony śluzowej macicy, jest drugim najczęstszym nowotworem ginekologicznym na świecie i najczęściej występującym nowotworem złośliwym w krajach rozwiniętych1. Częstość występowania raka endometrium stale rosła, zwiększając się o 2,3% rocznie w latach 2005-2013, co odpowiada wzrostowi śmiertelności o 2,2%1,2,3. Rozpoznanie przerzutów do węzłów chłonnych jest najważniejsze, ponieważ obecność dodatnich węzłów chłonnych jest silnym negatywnym predyktorem przeżycia4,5....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Głębokie zamknięcie ściany brzucha: Zidentyfikuj wierzchołek nacięcia otrzewnej i chwyć otrzewną, mięsień prosty i powięź za pomocą kleszczyków tkankowych. Wszystkie badania na zwierzętach zostały przeprowadzone w zatwierdzonych przez Animal Resource Center (ARC) obiektach University Health Network i zgodnie z zatwierdzonymi protokołami użytkowania i opieki nad zwierzętami (AUP #3994/#4299). Linia komórkowa VX2 została uzyskana z laboratorium dr Akena w University Health Network.

1. Stworzenie linii komórkowej VX2 in vitro

  1. Zbierz guz VX2 z mięśnia czworogłowego kości udowej królika i wzrostu w boku myszy.
    1. Rozmrozić z....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Do stworzenia modelu raka endometrium wykorzystano dwudziestu ośmiu królików. Średnia masa królików w momencie rozpoczęcia eksperymentu wynosiła 2,83 kg (2,71-3,58 kg). Guzy macicy wyrosły pomyślnie u 21 królików, co dało całkowitą skuteczność modelu na poziomie 75%. Przed wprowadzeniem do protokołu szycia macicy skuteczność wynosiła 57%, w porównaniu do 81% po dodaniu szycia macicy. Szycie macicy wprowadzono do protokołu po 7th króliku w odpowiedzi na początkowo niską skuteczn.......

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

W niniejszym artykule opisaliśmy standaryzowaną metodę chirurgiczną służącą do ustanowienia modelu raka endometrium VX2 i informowaliśmy o pierwszym zastosowaniu hodowanych komórek VX2 do stworzenia tego modelu. Wskaźnik przyjmowania guza wynoszący 75% jest niższy niż 100% wskaźnik procentowy wcześniej opisany w literaturze 35,37,53,56; Jednak 90% wskaźnik patologicznie potwierdzonych przerzutó.......

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

To badanie zostało sfinansowane przez Terry Fox Research Institute (PPG#1075), Canadian Institute of Health Research (Foundation Grant #154326), Canadian Cancer Society Research Institute (704718), Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada, Christiana Foundation for Innovation oraz Princess Margaret Cancer Foundation.

Chciałbym podziękować dr Marguerite Akens za dostarczenie początkowych komórek VX2 do stworzenia początkowego modelu VX2 i zamrożonych bloków nowotworowych VX2. Chciałbym podziękować Marco DiGrappie za pomoc w przeprowadzeniu wstępnych eksperymentów z hodowlą komórkową VX2 oraz Lili Ding za pomoc w hodowli ko....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Skalpel z 11 ostrzami, sterylny, jednorazowyAspen Surgical (VWR)80094-086
Cewnik do żył usznych 22-gagueCDMV14332
3-0 wchłanialny szew z poliwłókien (Polysorb)Covidien356718
3-0 pleciony szew wchłanialny (Polysorb)Sitko do komórek Covidien356718
70uM, Indywidualnie pakowane, NylonFalcon352350
Acepromazyna (Atravet)CDMV1047
Mydło Betadine (Jod Poviodone 7,5%)CDMV4363
Roztwór betadyny (Jod Poviodone 10%)UHN Sklepy457955
BuprenorfinaUniwersytet
CefazolinUHN apteka stacjonarnaNie Kot # Potrzebny
Roztwór chlorheksydynyCDMV119872
Corning BioCoatCellware, Kolagen typu I, półka 100 mmMarka Corning354450nieważna
Corning BioCoatCellware, Kolagen typu I, płytki 24-dołkoweMarka Corning354408nieważna
Corning BioCoatCellware, Kolagen typu I, płytki 6-dołkoweMarka Corning354400nie ważne
Corning Matrigel Basement Membrane Matrix, *bez LDEV, 10 mLCorning354234
DMEM/HAM F12 1:1Life Technologies11320marka nieważna
DMSOCaledon Lab Chem1/10/4100
Enrofloksacyna (Baytril do wstrzykiwań)CDMV11242
Falcon TubeCorning Centri-Star430828
Płodowa surowica bydlęca, kwalifikowana, pochodzenia kanadyjskiego, 500 mlLife Technologies12483020Marka/źródło nieważne
IzofluranUHN w aptece stacjonarnejNie kot # Potrzebny
kontrast izoheksoluGE Healthcare407141210
Meloksykam (Metacam 0,5%)CDMV104674
Normalna marka soli fizjologicznej(UofT Medstore)1011
PBSMulticell lub Sigma331-010-CL lub D8537-500mL
Penicylina/Streptomycyna (100mL; 10000U Penicylina, 10000ug Streptomycyna)Corning-CellgroCA45000-652
Sterylny Hanks Zrównoważony roztwór soli (-Ca++, -Mg++, -Czerwień fenolowa)T.C.M.F (Dr Bristow)28-Jan-11
Klej chirurgiczny (klej tkankowy)3M Vetbond14695B
Trypsyna (0,25%), Klasa proteomicznaSigmaT-6567-5X20UG
Trypsin-EDTA, 0,05%, 100mlBisent Inc325-542-ELMarka nie ma znaczenia
McGill

Bibliografia

  1. Ferlay, J., et al. Cancer incidence and mortality worldwide: Sources, methods and major patterns in GLOBOCAN 2012. International Journal of Cancer. 136, E359-E386 (2015).
  2. Canada, S. Canadian Cancer Statistics Special topic: Pancreatic canc....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Rak endometrium VX2kom rki propagowane in vivoiniekcja do rogu macicyustanowienie modelu chirurgicznegoprzerzuty do w z w ch onnychprzygotowanie hodowli kom rkowejanaliza histologicznasterylna technika chirurgiczna