Celuloza to polisacharyd składający się z liniowych łańcuchów β (1-4) połączonych jednostek D-glukozy. Jest to najobficiej występujący naturalny polimer na Ziemi i jest pozyskiwany z różnych źródeł, w tym ze zwierząt morskich (np. osłonic), roślin (np. drewna, bawełny, słomy pszennej) i źródeł bakteryjnych, takich jak glony (np. Valonia), grzyby, a nawet ameby (pierwotniaki)1,2. Nanowłókna celulozy (CNF) i nanokryształy celulozy (CNC) o co najmniej jednym wymiarze w nanoskali otrzymywane są w wyniku obróbki mechanicznej i hydrolizy kwasowej z celulozy. Posiadają nie tylko właściwości celulozy, takie jak potencjał modyfikacji chemicznej, niska toksyczność, biokompatybilność, biodegradowalność i odnawialność, ale mają również cechy w nanoskali, takie jak wysoka powierzchnia właściwa, wysokie właściwości mechaniczne, właściwości reologiczne i optyczne. Te atrakcyjne właściwości sprawiły, że CNF i CNC nadają się do zastosowań biomedycznych, głównie w postaci trójwymiarowych (3D) rusztowań hydrożelowych3. Rusztowania te wymagają niestandardowych wymiarów z kontrolowaną strukturą porów i porowatością połączeń. Nasza grupa i inni zgłosili 3D porowate nanokompozyty celulozowe przygotowane metodą odlewania, elektroprzędzenia i liofilizacji4,5,6,7,8. Jednak kontrola nad strukturą porów i wytwarzanie złożonej geometrii nie jest osiągana za pomocą tych tradycyjnych technik.
Druk 3D to technika wytwarzania przyrostowego, w której obiekty 3D są tworzone warstwa po warstwie poprzez sterowane komputerowo osadzanie tuszu9. Zalety druku 3D w porównaniu z tradycyjnymi technikami obejmują swobodę projektowania, kontrolowane wymiary makro i mikro, wytwarzanie złożonych architektur, dostosowywanie i powtarzalność. Ponadto drukowanie 3D CNF i CNC oferuje również indukowane ścinaniem wyrównania nanocząstek, preferowaną kierunkowość, porowatość gradientu i można je łatwo rozszerzyć do biodruku 3D10,11,12,13,14,15. Ostatnio zgłoszono dynamikę wyrównania CNC podczas drukowania 3D16,17. Postępy w dziedzinie biodruku umożliwiły drukowanie tkanek i narządów w 3D pomimo związanych z tym wyzwań, takich jak wybór i stężenie żywych komórek i czynników wzrostu, skład tuszu nośnego, ciśnienia drukowania i średnice dysz18,19,20.
Porowatość i wytrzymałość na ściskanie rusztowań regeneracyjnych chrząstek są ważnymi właściwościami, które decydują o ich skuteczności i wydajności. Wielkość porów odgrywa ważną rolę w adhezji, różnicowaniu i proliferacji komórek, a także w wymianie składników odżywczych i odpadów metabolicznych21. Nie ma jednak określonej wielkości porów, którą można uznać za wartość idealną, niektóre badania wykazały wyższą bioaktywność przy mniejszych porach, podczas gdy inne wykazały lepszą regenerację chrząstki przy większych porach. Makropory (<500 μm) ułatwiają mineralizację tkanek, dostarczanie składników odżywczych i usuwanie odpadów, podczas gdy mikropory (150-250 μm) ułatwiają przyczepianie komórek i poprawiają właściwości mechaniczne22,23. Wszczepione rusztowanie musi mieć wystarczającą integralność mechaniczną od momentu przenoszenia, implantacji aż do zakończenia zamierzonego celu. Łączny moduł ściskania dla naturalnej chrząstki stawowej mieści się w zakresie 0,1-2 MPa w zależności od wieku, płci i badanej lokalizacji4,24,25,26,27,28,29.
W naszej poprzedniej pracy11, druk 3D został wykorzystany do wytworzenia porowatych biorusztowań z podwójnie usieciowanej sieci polimerowej (IPN) z hydrożelowego tuszu zawierającego wzmocnione CNC w matrycy alginianu sodu i żelatyny. Ścieżka druku 3D została zoptymalizowana w celu uzyskania rusztowań 3D o jednolitych i gradientowych strukturach porów (80-2,125 μm), w których nanokryształy orientują się korzystnie w kierunku drukowania (stopień orientacji między 61-76%). Tutaj prezentujemy kontynuację tej pracy i pokazujemy wpływ porowatości na właściwości mechaniczne rusztowań hydrożelowych drukowanych w 3D w symulowanych warunkach ciała. Użyte tutaj CNC, zostały wcześniej zgłoszone przez nas jako cytokompatybilne i nietoksyczne (tj. wzrost komórek po 15 dniach inkubacji został potwierdzony30). Co więcej, rusztowania przygotowane metodą liofilizacji przy użyciu tych samych CNC, alginianu sodu i żelatyny, wykazały wysoką porowatość, wysoki pobór soli fizjologicznej buforu fosforanowego i cytokompatybilność w stosunku do mezenchymalnych komórek macierzystych5. Celem tej pracy jest zademonstrowanie przetwarzania atramentem hydrożelowym, drukowania 3D porowatych rusztowań oraz testowania kompresji. Schemat trasy przetwarzania jest pokazany w Rysunek 1.