Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Hierarchiczna i programowalna jednoetapowa synteza oligosacharydów

6.6K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/59987

⸱

6 września 2019

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Genomics Research Center, Academia Sinica, 2Institute of Biomedical Sciences, Academia Sinica, 3Department of Chemistry, Scripps Research Institute, 4Institute of Information Science, Academia Sinica

W tym artykule

Podsumowanie

Ten protokół pokazuje, jak używać oprogramowania Auto-CHO do hierarchicznej i programowalnej jednogarnkowej syntezy oligosacharydów. Opisano w nim również ogólną procedurę eksperymentów z oznaczaniem RRV i jednogarnkową glikozylacją SSEA-4.

Streszczenie

Ten artykuł przedstawia ogólny protokół eksperymentalny dla programowalnej jednogarnkowej syntezy oligosacharydów i pokazuje, jak używać oprogramowania Auto-CHO do generowania potencjalnych syntetycznych rozwiązań. Programowalna jednogarnkowa synteza oligosacharydów została zaprojektowana w celu umożliwienia szybkiej syntezy oligosacharydów w dużych ilościach przy użyciu tioglikozydowych bloków budulcowych (BBL) o odpowiedniej kolejności sekwencyjnej względnych wartości reaktywności (RRV). Auto-CHO to wieloplatformowe oprogramowanie z graficznym interfejsem użytkownika, które zapewnia możliwe syntetyczne rozwiązania dla programowalnej jednogarnkowej syntezy oligosacharydów poprzez przeszukiwanie biblioteki BBL (zawierającej około 150 zwalidowanych i >50 000 wirtualnych BBL) z dokładnie przewidywanymi RRV za pomocą regresji wektora nośnego. Algorytm hierarchicznej syntezy jednodoniczkowej został zaimplementowany w Auto-CHO i wykorzystuje fragmenty generowane w reakcjach jednodoniczkowych jako nowe BBL. Ponadto Auto-CHO umożliwia użytkownikom przekazywanie informacji zwrotnych na temat wirtualnych BBL, aby zachować cenne wartości do dalszego wykorzystania. W pracy zademonstrowano jednoetapową syntezę specyficznego dla stadium antygenu embrionalnego 4 (SSEA-4), który jest pluripotencjalnym markerem ludzkich embrionalnych komórek macierzystych.

Wprowadzenie

Węglowodany są wszechobecne w przyrodzie1,2, ale ich obecność i sposób działania pozostają niezbadanym terytorium, głównie ze względu na trudny dostęp do tej klasy molekuł3. W przeciwieństwie do zautomatyzowanej syntezy oligopeptydów i oligonukleotydów, rozwój automatycznej syntezy oligosacharydów pozostaje ogromnym zadaniem, a postęp jest stosunkowo powolny.

Aby rozwiązać ten problem, Wong i in. opracowali pierwszą zautomatyzowaną metodę syntezy oligosacharydów za pomocą programowalnego programu o nazwie Optimer4, który kieruje wyborem BBL z biblioteki ~50 BBL dla sekwencyjnych reakcji jednogarnkowych. Każdy BBL został zaprojektowany i zsyntetyzowany z dobrze zdefiniowaną reaktywnością dostrojoną przez różne grupy ochronne. Dzięki takiemu podejściu można zminimalizować złożoność ochrony manipulacji i oczyszczania pośredniego podczas syntezy, które zostały uznane za najtrudniejsze do pokonania kwestie w rozwoju syntezy automatycznej. Pomimo tego postępu, metoda jest nadal dość ograniczona, ponieważ liczba BBL jest zbyt mała, a program Optimer może obsługiwać tylko niektóre małe oligosacharydy. Dla bardziej złożonych oligosacharydów, które wymagają większej liczby BBL i wielu przejść reakcji jednogarnkowych i kondensacji fragmentów, opracowano ulepszoną wersję oprogramowania, Auto-CHO5.

W Auto-CHO dodano ponad 50 000 BBL ze zdefiniowaną reaktywnością do biblioteki BBL, w tym 154 syntetyczne i 50 000 wirtualnych. Te BBL zostały zaprojektowane przez uczenie maszynowe w oparciu o podstawowe właściwości, obliczone przesunięcia chemiczne NMR6, 7 i deskryptory molekularne8, które wpływają na strukturę i reaktywność BBL. Dzięki temu ulepszonemu programowi i nowemu zestawowi dostępnych BBL, zdolność syntezy zostaje rozszerzona i, jak wykazano, można szybko przygotować kilka interesujących oligosacharydów. Uważa się, że to nowe osiągnięcie ułatwi syntezę oligosacharydów w celu badania ich roli w różnych procesach biologicznych oraz ich wpływu na struktury i funkcje glikoprotein i glikolipidów. Uważa się również, że prace te przyniosą znaczne korzyści społeczności glikologicznej, biorąc pod uwagę, że metoda ta jest dostępna dla społeczności badawczej bezpłatnie. W pracy zademonstrowano syntezę niezbędnego markera ludzkich embrionalnych komórek macierzystych, SSEA-45.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

1. Manipulacja oprogramowaniem Auto-CHO

  1. Instalacja środowiska Java Runtime Environment: upewnij się, że w urządzeniu zostało zainstalowane środowisko Java Runtime Environment (JRE). Jeśli środowisko JRE zostało zainstalowane, przejdź do następnego kroku, "inicjalizacja oprogramowania"; W przeciwnym razie należy pobrać i zainstalować środowisko JRE zgodnie z systemem operacyjnym użytkownika, który można znaleźć pod adresem: .
  2. Inicjalizacja oprogramowania: wejdź na stronę Auto-CHO pod adresem i pobierz oprogramowanie zgodnie z systemem operacyjnym. Obecnie Auto-CHO obsługuje systemy Windows, macOS i Ubuntu. Najnowsza instrukcja obsługi w formacie PDF jest dostępna na stronie internetowej Auto-CHO.
    1. W przypadku użytkowników systemu Windows rozpakuj Auto-CHO_Windows.zip i kliknij dwukrotnie Auto-CHO.jar w folderze Auto-CHO_Windows, aby uruchomić program.
      UWAGA: Aby rozpakować plik zip, użytkownik musi zainstalować oprogramowanie do rozpakowywania plików, takie jak 7-Zip, które można znaleźć na stronie . Użytkownik może również użyć polecenia java -jar Auto-CHO.jar, aby uruchomić program za pomocą wiersza polecenia systemu Windows.
    2. W przypadku użytkowników systemu macOS kliknij prawym przyciskiem myszy Auto-CHO.jar i wybierz Otwórz, aby uruchomić program.
    3. Dla użytkowników Ubuntu:
      1. Zainstaluj libcanberra-gtk za pomocą następującego polecenia:
        $ sudo apt-get install libcanberra-gtk*
      2. Zmień uprawnienia dostępu do Auto-CHO_Ubuntu.sh:
        $ chmod 755 Auto-CHO_Ubuntu.sh
      3. Uruchom program Auto-CHO:
        $ ./Auto-CHO_Ubuntu.sh
  3. Wprowadź żądaną strukturę glikanów. Wybierz, czy chcesz narysować strukturę glikanu, czy odczytać istniejący plik struktury.
    1. Wprowadzanie przez rysunek:
      1. Kliknij na Edit Glycan by GlycanBuilder9,10 (Rysunek 1, btn1; Rysunek 2A) lub obszar Kliknij tutaj, aby edytować syntetyczny element docelowy, aby narysować i edytować strukturę zapytania przez GlycanBuilder. Nie należy ignorować informacji o powiązaniach i chiralności. Kliknij na przyciski Globo-H, SSEA-4 lub OligoLacNAc (Rysunek 1, przykłady), aby wyświetlić przykłady.
      2. Wybierz punkt menu Plik | Eksport do formatów sekwencji | Eksport do GlycoCT skondensowany, aby zapisać edytowaną strukturę (opcjonalnie).
      3. Zamknij okno dialogowe GlycanBuilder, aby zakończyć edycję.
    2. Dane wejściowe poprzez odczyt pliku:
      1. Kliknij na Edit Glycan by GlycanBuilder (Rysunek 1, btn1; Rysunek 2A) lub obszar Kliknij tutaj, aby edytować syntetyczny element docelowy, aby edytować strukturę zapytania.
      2. Wybierz punkt menu Plik | Importuj z formatów sekwencji, aby wybrać plik struktury zapytania z odpowiednim formatem.
  4. Ustawienia parametrów wyszukiwania (opcjonalnie).
    1. Zdefiniuj parametry wyszukiwania w zakładce "Ustawienia parametrów" (Rysunek 1, zakładka2), aby uzyskać rozsądne wyniki wyszukiwania.
      UWAGA:
      Próg wysokiej klasy RRV musi być liczbą rzeczywistą i ≥0,
      Próg RRV klasy średniej musi być liczbą rzeczywistą i ≥0,
      Próg RRV klasy wysokiej powinien wynosić >próg klasy średniej RRV.
      >Maksymalna liczba fragmentów powinna być liczbą całkowitą i ≥1.
      Minimalna liczba BBL we fragmencie musi być liczbą całkowitą i należeć do zakresu od 1 do 3,
      Maksymalna liczba BBL we fragmencie musi być liczbą całkowitą i należeć do zakresu od 1 do 3,
      Maksymalna liczba BBL we fragmencie musi wynosić ≥Min BBL Number in a Fragment.
      Minimalna różnica RRV dawcy/akceptora musi być dodatnią liczbą rzeczywistą.
      Minimalny stosunek RRV donora/akceptora musi być dodatnią liczbą rzeczywistą.
      Maksymalny stosunek RRV dawcy do akceptora musi być dodatnią liczbą rzeczywistą.
      Maksymalny stosunek RRV dawcy/akceptora musi wynosić > min stosunek RRV dawcy/akceptora.
    2. Kliknij przycisk OK, aby włączyć nowe ustawienia.
  5. Wybierz bibliotekę bloków konstrukcyjnych (Rysunek 1, tab5). Ustawieniem domyślnym jest przeszukiwanie tylko biblioteki eksperymentalnej. Jeśli chcesz przeszukać zarówno biblioteki eksperymentalne, jak i wirtualne, sprawdź następujące kroki.
    1. Wybierz kartę Virtual Building Block Library (Biblioteka wirtualnych bloków konstrukcyjnych) (Rysunek 2C, karta 5). Eksperymentalne i wirtualne bloki konstrukcyjne mogą współpracować ze sobą w celu zwiększenia możliwości wyszukiwania Auto-CHO. Obecnie Auto-CHO zapewnia ponad 50 000 wirtualnych bloków konstrukcyjnych z przewidywanymi RRV w bibliotece.
    2. Wybierz opcję Użyj bibliotek eksperymentalnych i wirtualnych, a następnie zastosuj filtrowanie, aby wyświetlić wirtualne bloki konstrukcyjne z określonymi kryteriami. Kliknij przycisk Pokaż wybrane wirtualne BBL(s) (Rysunek 2C, btn5), aby wyświetlić tylko wybrane wirtualne bloki konstrukcyjne.
    3. Kliknij przycisk Pokaż filtrowane wirtualne BBL(s) (Rysunek 2C, btn6), aby wyświetlić tylko wirtualne bloki konstrukcyjne z określonymi kryteriami zdefiniowanymi przez użytkownika.
    4. Kliknij przycisk Pokaż wszystkie wirtualne BBL(s) (Rysunek 2C, btn7), aby wyświetlić wszystkie dostępne wirtualne bloki konstrukcyjne i zresetować filtr.
    5. Zaznacz jeden lub wiele żądanych wirtualnych bloków konstrukcyjnych, których użytkownik chciałby użyć do wyszukiwania.
  6. Wybierz kartę Struktura zapytania (Rysunek 1, tab1) i kliknij przycisk Przeszukaj bibliotekę bloków konstrukcyjnych (Rysunek 1, btn2), aby znaleźć jednogarnkowe rozwiązania syntetyczne dla struktury zapytania. Następnie potwierdź ustawienia parametrów.
  7. Wyszukaj w przeglądarce wyników.
    UWAGA: Wynik wyszukiwania jest wyświetlany w zakładce Wizualizacja wyników (Rysunek 1, zakładka 6). Akceptory końcowe redukcyjne o różnych numerach reszt są wyświetlane w kolumnie Akceptor końca redukcyjnego (Rysunek 1, przeglądarka 1).
    1. Wybierz akceptor końca redukcyjnego, a rozwiązania zostaną wyświetlone na liście rozwiązań syntetycznych (Rysunek 1, przeglądarka 2). Fragmenty są pokazane na Liście Fragmentów (Rysunek 1, przeglądarka 3), aby zasugerować, ile fragmentów powinno być użytych w syntezie.
      UWAGA: System dostarcza szczegółowych informacji o każdym fragmencie, w tym RRV fragmentu, wydajności obliczeniowej, a także o tym, która grupa ochronna powinna zostać zdezaktywowana w celu późniejszego wykorzystania fragmentu w reakcji jednodoniczkowej. Elementy składowe użyte do złożenia wybranego fragmentu są pokazane w przeglądarce4 Rysunek 1. Przeglądarka 5 Rysunek 1 również wyświetla informacje o połączeniu fragmentu.
    2. Przeglądaj i sprawdzaj struktury chemiczne oraz szczegółowe informacje o wybranych blokach składowych w regionach Struktura chemiczna bloku konstrukcyjnego i Przeglądarka bloków konstrukcyjnych, odpowiednio, dla eksperymentalnych bloków konstrukcyjnych (Rysunek 1, tab4).
  8. Wyprowadzanie wyniku wyszukiwania na tekst (opcjonalnie).
    1. Wybierz zakładkę Tekst wynikowy (Rysunek 1, tab7).
    2. Kliknij Zapisz tekst wyniku (Rysunek 2B, btn4) i wybierz miejsce docelowe pliku tekstowego.
  9. Informacje zwrotne dotyczące wirtualnych bloków konstrukcyjnych (opcjonalnie).
    UWAGA: Informacje zwrotne na temat wirtualnych bloków konstrukcyjnych można przekazywać za pośrednictwem kwestionariusza online. Informacje zwrotne mogą pomóc społeczności w utrzymaniu użytecznych wirtualnych bloków konstrukcyjnych i usunięciu nieskutecznych.
    1. Wybierz zakładkę Virtual Building Block (Wirtualny blok konstrukcyjny) (Rysunek 1, zakładka5).
    2. Kliknij link Oceniać wirtualny blok konstrukcyjny, którego chcesz ocenić lub skomentować w kolumnie Opinie.
    3. Wypełnij formularz opinii po otwarciu strony internetowej przez system i prześlij go.
      UWAGA: Nie zmieniaj wirtualnego identyfikatora BBL.

2. Eksperymenty z wyznaczaniem RRV

  1. W kolbie okrągłodennej o pojemności 10 ml połączyć dwa donory tioglikozydów (po 0,02 mmol z każdego: Dr4 jest donorem odniesienia ze znanym RRV; Dx1 jest cząsteczką donorową nieznanego RRV), metanolu absolutnego (0,10 mmol) i drierytu w dichlorometanie (DCM, 1,0 ml), a następnie mieszać w temperaturze pokojowej (RT) przez 1 godzinę.
  2. Pobrać podwielokrotność tej mieszaniny (30 μl) i wstrzyknąć mieszaninę do wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC) w trzech oddzielnych wstrzyknięciach (10 μl na każde wstrzyknięcie). Zmierzyć współczynnik (a) między absorpcją (A) a stężeniem cząsteczki donorowej [D] w podstawowych warunkach separacji (octan eteru/n-heksan = 20/80).
  3. Dodać roztwór 0,5 M N-jodosukcynimidu (NIS) w acetonitrylu (40 μl, 0,02 mmol) do mieszaniny reakcyjnej, a następnie dodać 0,1 M roztwór kwasu trifluorometanosulfonowego (TfOH) (20 μl, 0,002 mmol) i mieszać mieszaninę w temperaturze pokojowej przez 2 godziny.
  4. Rozcieńczyć mieszaninę reakcyjną DCM (4,0 ml), przefiltrować i przemyć nasyconym wodnym roztworem tiosiarczanu sodu zawierającym 10% wodorowęglanu sodu (2x po 5 ml objętości). Ekstrahować warstwę wodną za pomocą DCM (3x z 5 ml). Połącz wszystkie warstwy organiczne, umyj je 5 ml solanki i osusz około 200 mg bezwodnego siarczanu magnezu.
  5. Potrząsać mieszaniną delikatnie przez 30 s, przefiltrować ją przez lejek z karbowaną bibułą filtracyjną w celu usunięcia siarczanu magnezu, a następnie zebrać filtrat do kolby okrągłodennej o pojemności 25 ml. Usunąć rozpuszczalnik za pomocą wyparki obrotowej.
  6. Rozpuścić pozostałość w DCM (1,0 ml). Pobrać porcję tej mieszaniny (30 μl) i wstrzyknąć ją do HPLC w trzech oddzielnych wstrzyknięciach (10 μl na każde wstrzyknięcie). Zmierzyć stężenia pozostałych donorów ([Dx] i [Dref]) za pomocą HPLC w tych samych warunkach separacji (octan eteru/n-heksan = 20/80) (Aref) t = 24417,0, (Ax) t = 23546,3.
  7. Zmierz względną reaktywność między Dx1 a Dr4, kx1/kr4 = 0,0932. W oparciu o względną wartość reaktywności Dr4, względna wartość reaktywności Dx1 wynosi 3.
    UWAGA: A = A/[D], (Aref)0 = 74530.1, (Ax)0 = 26143.0. kx/kref = (ln[Dx]t - ln[Dx]0)/(ln[Dref]t - ln[Dref]0) = (ln[Ax]t - ln[Ax]0)/(ln[Aref]t - ln[Aref]0) = 0,0932.

3. Jednogarnkowa glikozylacja SSEA-4

  1. Umieścić kolbę okrągłodenną o pojemności 10 ml pod próżnią, wysuszyć na płomieniu i pozostawić kolbę do ostygnięcia do temperatury RT, nadal będąc w próżni. Usunąć gumową przegrodę, aby dodać do kolby mieszaninę donora disacharydu 1 (38 mg, 1,1 eq., 0,057 mmol), pierwszego akceptora 2 (40 mg, 1,0 eq., 0,053 mmol) i mieszadła magnetycznego pokrytego teflonem.
  2. Przenieść 100 mg sproszkowanych sit molekularnych 4 A do kolby okrągłodennej o pojemności 5 ml. Trzymaj tę kolbę w próżni, wysusz ją na płomieniu i pozwól kolbie ostygnąć do temperatury rzeczywistej, nadal będąc w próżni. Przenieść świeżo wysuszone sita molekularne 4 A do pierwszej kolby zawierającej materiał wyjściowy.
  3. Przenieść 1 ml świeżo suszonego DCM do kolby. Mieszać mieszaninę reakcyjną przez 1 godzinę w temperaturze pokojowej, a następnie umieścić ją w temperaturze -40 °C. Przenieść NIS (13 mg, 1,1 eq, 0,057 mmol) do kolby.
  4. Wstrzyknąć TfOH (34 μl, 0,3 eq., 0,017 mmol, 0,5 M w eterze) do kolby przez przegrodę za pomocą strzykawki o małej objętości w temperaturze -40 °C. Mieszać w temperaturze -40 °C przez 3 godziny.
  5. Po prawie całkowitym zużyciu pierwszego akceptora 2 wstrzyknąć roztwór akceptora 3 w DCM do kolby przez przegrodę.
  6. Podgrzać mieszaninę reakcyjną do temperatury -20 °C i przenieść NIS (19 mg, 1,6 eq., 0,083 mmol) do kolby. Wstrzyknąć TfOH (34 μl, 0,3 eq, 0,017 mmol, 0,5 M w eterze) do kolby przez przegrodę w temperaturze -20 °C. Mieszać w temperaturze -20 °C przez 3 godziny.
  7. Po spożyciu produktu reakcji pierwszego etapu należy wygasić reakcję poprzez wstrzyknięcie dwóch odpowiedników trietyloaminy. Wyjąć sita molekularne przez lejek filtracyjny wypełniony Celite, zebrać filtrat do kolby okrągłodennej o pojemności 25 ml i dalej przemyć filtr 10 ml DCM.
  8. Przenieść filtrat do rozdzielacza rozdzielającego i przemyć go nasyconym wodnym roztworem tiosiarczanu sodu zawierającym 10%NaHCO3 (2x po 10 ml każdy). Ekstrahować warstwę wodną za pomocą DCM (3x z 10 ml). Połącz warstwy organiczne i przemyj mieszaninę solanką (10 ml) i wysusz ją, dodając bezwodnyMgSO4. Przefiltrować go i zebrać filtrat do kolby okrągłodennej o pojemności 100 ml.
  9. Usunąć rozpuszczalnik za pomocą wyparki obrotowej. Rozpuść surową mieszaninę w około 1 ml DCM i załaduj ją na wierzch złoża krzemionki. Eluować produkt mieszaniną octanu etylu i toluenu (EtOAc/toluen, 1/4 do 1/2) i zebrać frakcje.
  10. Usunąć rozpuszczalnik za pomocą wyparki obrotowej. Wysuszyć pozostałość pod zmniejszonym ciśnieniem, aby uzyskać w pełni chronioną pochodną SSEA-4 4 (74 mg, 50% w oparciu o akceptor 2) w postaci białej piany.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Wynik wyszukiwania w programie Auto-CHO przy domyślnych ustawieniach parametrów wskazuje, że SSEA-4 może zostać zsyntetyzowany w reakcji typu one-pot [2 + 1 + 3]. Rysunek 3 przedstawia zrzut ekranu z oprogramowania z wynikiem wyszukiwania SSEA-4. Po wybraniu akceptora redukującego końca trisacharydu (Rysunek 3, etykieta 1), program wyświetla cztery potencjalne rozwiązania dla zapytania. Pierwsze rozwiązanie zawiera jeden fragment...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Oprogramowanie Auto-CHO zostało opracowane w celu wspomagania chemików w przeprowadzaniu hierarchicznej i programowalnej jednoetapowej syntezy oligosacharydów5. Auto-CHO został zbudowany przez język programowania Java. Jest to oprogramowanie z graficznym interfejsem użytkownika i wieloplatformowe, które obecnie obsługuje systemy Windows, macOS i Ubuntu. Oprogramowanie można pobrać bezpłatnie ze strony Auto-CHO pod adresem , a jego kod źródłowy z licencj...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

Ta praca była wspierana przez Academia Sinica, w tym Summit Program, Ministerstwo Nauki i Technologii [MOST 104-0210-01-09-02, MOST 105-0210-01-13-01, MOST 106-0210-01-15-02] i NSF (1664283).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
AcetonitrylSigma-Aldrich75-05-8
Bezwodny siarczan magnezuSigma-Aldrich7487-88-9
Molibdenian ceru amonowegoTCIC1794
DichlorometanSigma-Aldrich75-09-2
DrieriteSigma-Aldrich7778-18-9
OctanetyluSigma-Aldrich141-78-6
MetanolSigma-Aldrich67-56-1
Sita molekularne 4 i Aring;Sigma-Aldrich
n-HexaneSigma-Aldrich110-54-3
N-JodosukcynimidSigma-Aldrich516-12-1
Wodorowęglan soduSigma-Aldrich144-55-8
Tiosiarczan soduSigma-Aldrich10102-17-7
ToluenSigma-Aldrich108-88-3
Kwas trifluorometanosulfonowySigma-Aldrich1493-13-6

Bibliografia

  1. Apweiler, R., Hermjakob, H., Sharon, N. On the frequency of protein glycosylation, as deduced from analysis of the SWISS-PROT database. Biochimica Et Biophysica Acta. 1473 (1), 4-8 (1999).
  2. Sears, P., Wong, C. -H. Toward Automated Synthesis of Oligosaccharides and Glycoproteins. Science. 291 (5512), 2344-2350 (2001).
  3. Kulkarni, S. S., et al. “One-Pot” Protection, Glycosylation, and Protection-Glycosylation Strategies of Carbohydrates. Chemical Reviews. 118 (17), 8025-8104 (2018).
  4. Zhang, Z., et al. Programmable One-Pot Oligosaccharide Synthesis. Journal of the American Chemical Society. 121 (4), 734-753 (1999).
  5. Cheng, C. -W., et al. Hierarchical and programmable one-pot synthesis of oligosaccharides. Nature Communications. 9 (1), 5202(2018).
  6. ChemDraw. , PerkinElmer Informatics. (2019).
  7. Cheeseman, J. R., Frisch, Æ Predicting magnetic properties with chemdraw and gaussian. , (2000).
  8. Yap, C. W. PaDEL-descriptor: An open source software to calculate molecular descriptors and fingerprints. Journal of Computational Chemistry. 32 (7), 1466-1474 (2011).
  9. Ceroni, A., Dell, A., Haslam, S. M. The GlycanBuilder: a fast, intuitive and flexible software tool for building and displaying glycan structures. Source Code for Biology and Medicine. 2, 3(2007).
  10. Damerell, D., et al. The GlycanBuilder and GlycoWorkbench glycoinformatics tools: updates and new developments. Biological Chemistry. 393 (11), 1357-1362 (2012).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Oprogramowanie Auto CHOwzgl dne warto ci reaktywno cibloki budulcowe tioglikozyd wsynteza hierarchicznastruktura glikanuwysokosprawna chromatografia cieczowamarker SSEA 4terapeutyki oparte na w glowodanachJava Runtime Environment
Hierarchiczna i programowalna jednoetapowa synteza oligosacharydów
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki korzystania z usługi

Zasady

Prawa autorskie © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.