Immunoglobulina G (IgG) N-glikan jest scharakteryzowany za pomocą hydrofilowej chromatografii oddziaływań UPLC. Ponadto struktura N-glikanu IgG jest wyraźnie oddzielona. Przedstawiono tutaj wprowadzenie do tej metody eksperymentalnej, tak aby mogła być szeroko stosowana w warunkach badawczych.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Analiza N-glikanu immunoglobuliny G metodą ultrasprawnej chromatografii cieczowej
* These authors contributed equally
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Glycomics to nowa podspecjalizacja w badaniach nad systemami omicznymi, która oferuje znaczny potencjał w odkrywaniu biomarkerów nowej generacji dla podatności na choroby, odkrywania celów leków i medycyny precyzyjnej. Alternatywne N-glikany IgG zostały zgłoszone w kilku powszechnych chorobach przewlekłych i sugeruje się, że mają ogromny potencjał w zastosowaniach klinicznych (tj. biomarkery do diagnozowania i przewidywania chorób). N-glikany IgG są szeroko charakteryzowane przy użyciu metody chromatografii oddziaływań hydrofilowych (HILIC) i ultrasprawnej chromatografii cieczowej (UPLC). UPLC to stabilna technologia wykrywania o dobrej odtwarzalności i wysokiej względnej dokładności ilościowej. Ponadto struktura N-glikanu IgG jest wyraźnie oddzielona, a także scharakteryzowany jest skład glikanów i względna obfitość w osoczu.
Wprowadzenie
N-glikozylacja ludzkich białek jest powszechną i istotną modyfikacją potranslacyjną1 i może pomóc w stosunkowo dokładnym przewidywaniu występowania i rozwoju chorób. Ze względu na złożoność jego struktury, oczekuje się, że istnieje ponad 5 000 struktur glikanowych, co zapewnia ogromny potencjał jako biomarkery diagnostyczne i predykcyjne chorób2. Wykazano, że N-glikany przyłączone do immunoglobuliny G (IgG) są niezbędne dla funkcji IgG, a N-glikozylacja IgG uczestniczy w równowadze między układami pro- i przeciwzapalnymi3. Różnicowa N-glikozylacja IgG bierze udział w rozwoju i progresji choroby, stanowiąc zarówno predyspozycję, jak i mechanizm funkcjonalny związany z patologią choroby. Zapalna rola N-glikozylacji IgG jest związana ze starzeniem się, chorobami zapalnymi, chorobami autoimmunologicznymi i rakiem4.
Wraz z rozwojem technologii detekcji, następujące metody są najczęściej stosowane w glikomikach o wysokiej przepustowości: chromatografia hydrofilowa (HILIC), ultra-sprawna chromatografia cieczowa z detekcją fluorescencji (UPLC-FLR), multipleksowa kapilarna elektroforeza żelowa z detekcją fluorescencji indukowanej laserem (xCGE-LIF), spektrometria mas czasu przelotu wspomagana matrycą/jonizacją laserową (MALDI-TOF-MS) oraz chromatografia cieczowa elektrorozpylanie masy spektrometria (LC-ESI-MS). Metody te przezwyciężyły wcześniejsze niedociągnięcia związane z niskim strumieniem, niestabilnymi wynikami i słabą swoistością czułości5,6.
UPLC jest powszechnie używany do badania związku między N-glikozylacją IgG a niektórymi chorobami (np. starzeniem się7, otyłość8, dyslipidemia9, cukrzyca typu II10, nadciśnienie11, udar niedokrwienny12, oraz choroba Parkinsona13). W porównaniu z pozostałymi trzema wyżej wymienionymi metodami, UPLC ma następujące zalety5,14. Po pierwsze, zapewnia względną metodę analizy ilościowej, a analiza danych, która obejmuje normalizację całkowitego obszaru, poprawia porównywalność każdej próbki. Po drugie, koszt sprzętu i wymaganej wiedzy specjalistycznej jest stosunkowo niski, co ułatwia wdrażanie i przekształcanie biomarkerów glikozylacji w zastosowania kliniczne. Przedstawiono tutaj wprowadzenie do UPLC, dzięki czemu można go szerzej stosować.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Wszystkie przedmioty zawarte w protokole zostały zatwierdzone przez Komitet Etyki Stołecznego Uniwersytetu Medycznego, Pekin, Chiny12. Na początku badania uzyskano pisemną świadomą zgodę od każdego uczestnika.
1. Izolacja IgG
- Przygotować substancje chemiczne, w tym bufor wiążący (sól fizjologiczna buforowana fosforanami, PBS): 1x PBS (pH = 7,4), bufor neutralizujący: 10x PBS (pH = 6,6-6,8), eluent: 0,1 M kwas mrówkowy (pH = 2,5), roztwór neutralizujący dla eluentu: 1 M wodorowęglan amonu, bufor magazynowany: 20% etanolu + 20 mM Tris + 0,1 M NaCl (pH = 7,4), roztwór czyszczący do białka G: 0,1 M NaOH + 30% propan-2-ol.
UWAGA: Poziom pH ma kluczowe znaczenie w tym protokole. Elucja IgG wymaga bardzo niskiego pH i istnieje ryzyko utraty kwasów sjalowych w wyniku hydrolizy kwasów. Dlatego elucja następuje w ciągu kilku sekund, a pH jest szybko przywracane do neutralności, zachowując integralność IgG i kwasów sjalowych. - Przygotować próbki: rozmrozić zamrożoną próbkę osocza, następnie odwirować przy 80 x g przez 10 minut i pozostawić monolityczną płytkę białka G i wyżej wymienione substancje chemiczne na 30 minut w temperaturze pokojowej (RT).
- Przenieś próbkę o pojemności 100 μl (którą można użyć do wykrycia 2x, aby zapobiec pierwszemu niepowodzeniu) do płytki zbiorczej o pojemności 2 ml (tutaj w sumie sześć próbek wzorcowych, jedna próbka kontrolna [woda ultraczysta] i 89 próbek osocza zaprojektowano dla płytek 96-dołkowych i losowo przypisano do płytki).
- Rozcieńczyć próbki 1 PBS w stosunku 1:7 (v/v).
- Wyczyść płytkę filtracyjną z hydrofilowego polipropylenu (GHP) o grubości 0,45 μm 200 μl ultraczystej wody (powtórz 2x).
- Przenieść rozcieńczone próbki na płytkę filtracyjną i przefiltrować próbki do płytki zbiorczej za pomocą pompy próżniowej (kontrolować podciśnienie na poziomie 266,6-399,9 Pa).
- Przygotowanie monolitycznych płytek z białkiem G
- Wyrzuć bufor magazynu.
- Oczyść monolityczne płytki 2 ml ultraczystej wody, 2 ml 1x PBS, 1 ml 0,1 M kwasu mrówkowego, 2 ml 10x PBS, 2 ml 1x PBS (sekwencyjnie) i usuń przepływającą ciecz za pomocą pompy próżniowej.
- Przefiltrowane próbki przenieść na monolityczną płytkę białka G w celu związania IgG i oczyszczenia, a następnie oczyścić monolityczne płytki 2 ml 1x PBS (powtórzyć czyszczenie 2x).
- Elutować IgG za pomocą 1 ml 0,1 M kwasu mrówkowego i przefiltrować próbki do płytki zbiorczej za pomocą pompy próżniowej, a następnie dodać 170 μl 1 M wodorowęglanu amonu do płytki zbiorczej.
- Wykryć stężenie IgG za pomocą spektrofotometru absorpcyjnego (optymalna długość fali = 280 nm).
- Otwórz oprogramowanie i wybierz tryb białka-CY3.
- Pobierz 2 μl ultraczystej wody i załaduj ją na ekran, a następnie kliknij Puste w oprogramowaniu, aby wyczyścić ekran (powtórz 1x).
- Pobierz 2 μl ultraczystej wody i załaduj ją na ekran, a następnie kliknij Próbka w oprogramowaniu, aby wykryć ultraczystą wodę.
- Pobrać 2 μl próbki IgG i załadować ją na ekran, a następnie kliknąć Próbka w oprogramowaniu, aby wykryć próbkę.
- Pobierz 2 μl ultraczystej wody i załaduj ją na ekran, a następnie kliknij Puste w oprogramowaniu, aby wyczyścić ekran.
- Zamknij oprogramowanie.
UWAGA: Wzór na obliczenie stężenia IgG jest następujący:
CIgG = absorbancja x współczynnik ekstynkcji (13,7) x 1 000 μg/ml
- Wyekstrahowaną IgG umieścić do wyschnięcia w suszarce w temperaturze 60 °C i przechowywać wyekstrahowaną IgG (300 μl wyekstrahowanej IgG przez 4 godziny).
- Usunąć 300 μl wyekstrahowanej IgG, jeśli stężenie jest większe niż 1 000 μg/ml.
- Usunąć 350 μl wyekstrahowanej IgG, jeśli stężenie wynosi od 500 do 1 000 μg/ml.
- Usunąć 400 μl wyekstrahowanej IgG, jeśli stężenie mieści się w przedziale 200-500 μg/ml.
- Usunąć 600 μl wyekstrahowanej IgG, jeśli stężenie jest mniejsze niż 200 μg/ml.
UWAGA: Stężenie IgG powinno wynosić korzystnie >200 μg/ml w celu późniejszego wykrycia. Średnia ilość IgG powinna wynosić korzystnie >1 200 μg, którą można przebadać 2x w przypadku, gdy pierwszy test zakończy się niepowodzeniem.
- Czyszczenie monolitycznej płytki białkowej G do ponownego użycia
- Umyj płytkę 2 ml ultraczystej wody, 1 ml 0,1 M NaOH (do usuwania wytrąconych białek), 4 ml ultraczystej wody i 4 ml 1x PBS (sekwencyjnie), a następnie usuń płynącą ciecz za pomocą pompy próżniowej.
- Umyj płytkę 2 ml ultraczystej wody, 2 ml 30% propan-2-olu (do usuwania związanych białek hydrofobowych), 2 ml ultraczystej wody i 4 ml 1x PBS (sekwencyjnie), a następnie usuń płynącą ciecz za pomocą pompy próżniowej.
- Przemyć płytkę 1 ml buforu (20% etanolu + 20 Mm Tris + 0,1 M NaCl) i dodać 1 ml buforu (20% etanolu + 20 Mm Tris + 0,1 M NaCl) do płytki, a następnie pozostawić płytkę w temperaturze 4 °C.
2. Uwalnianie glikanów
- Przygotuj wysuszoną IgG i przechowuj chemikalia, w tym 1,33% SDS, 4% Igepal (przechowywać z dala od światła) i 5x PBS w temperaturze pokojowej.
- Przygotuj enzym PNGazy F, rozcieńczając enzym 250 U 250 μl ultraczystej wody.
- Denaturacja IgG
- Dodać 30 μl 1,33% SDS i wymieszać przez wirowanie, przenieść próbkę do pieca o temperaturze 65 °C na 10 minut, następnie wyjąć ją z suszarki i odstawić na 15 minut.
- Dodać 10 μl 4% Igepal i umieścić go w inkubatorze do wytrząsania na 5 minut.
- Usuwanie i uwalnianie glikanów
- Dodaj 20 μl 5x PBS i 30-35 μl 0,1 mol/L NaOH, aby wyregulować pH 8,0 i wymieszaj przez wirowanie. Dodać 4 μl enzymu PNGazy F i wymieszać przez wirowanie. Następnie inkubować przez 18-20 godzin w łaźni wodnej o temperaturze 37 °C.
- Uwolnione glikany pozostawić do wyschnięcia w piekarniku w temperaturze 60 °C na 2,5-3,0 h.
- Uwolnione glikany należy zachować w temperaturze -80 °C do czasu dalszego pomiaru.
UWAGA: Ten krok ma kluczowe znaczenie. Kluczem do uwalniania glikanów jest poprawa aktywności enzymu PNGazy F w celu maksymalizacji jego wydajności.
3. Etykietowanie i oczyszczanie glikanów
- Przygotować odczynnik do znakowania 2-aminobenzamidu (2-AB) z 0,70 mg 2-AB, 10,50 μl kwasu octowego, 6 mg cyjanoborowodorku sodu (NaBH3CN) i 24,50 μl dimetylosulfotlenku (DMSO) (całkowita objętość = 35 μL). Następnie dodaj kwas octowy, 2-AB i NaBH3CN do DMSO w kolejności.
- Oznaczyć glikany za pomocą 35 μl odczynnika do znakowania 2-AB, przenieść znakowane glikany do oscylatora na 5 minut, przenieść do pieca na 3 godziny w temperaturze 65 °C, a następnie przenieść do RT na 30 min.
UWAGA: Cały etap etykietowania glikanów musi być wykonany w warunkach ochrony przed światłem. - Na płycie filtracyjnej o GHP 0,2 μm należy wstępnie potraktować 200 μl 70% etanolu, 200 μl ultraczystej wody i 200 μl 96% acetonitrylu (4 °C), a następnie usunąć odpady za pomocą pompy próżniowej.
- Oczyszczanie glikanu znakowanego 2-AB
- Dodać 700 μl 100% acetonitrylu do glikanu znakowanego 2-AB i przenieść do inkubatora z wytrząsaniem na 5 minut.
- Wirować przy 134 x g przez 5 minut (4 °C).
- Przenieść próbkę na płytkę filtracyjną o GHP 0,2 μm na 2 minuty i usunąć filtrat (płynącą ciecz) za pomocą pompy próżniowej.
- Przemyć glikan znakowany 2-AB 200 μl 96% acetonitrylu (4 °C) i usunąć filtrat (płynącą ciecz) za pomocą pompy próżniowej 5x-6x.
- Elute glikan znakowany 2-AB 100 μL ultraczystej wody 3x.
- Przenieś glikan oznaczony 2-AB do piekarnika do wyschnięcia w temperaturze 60 °C przez 3,5 godziny.
- Zachowaj oznakowane N-glikany w temperaturze -80 °C do czasu dalszego pomiaru.
4. Chromatografia oddziaływań hydrofilowych i analiza glikanów
- Kondycjonowanie instrumentów UPLC i przygotowanie faz ruchomych
- Przygotuj fazy ruchome, w tym rozpuszczalnik A: 100 mM mrówczanu amonu (pH = 4,4), rozpuszczalnik B: 100% acetonitryl, rozpuszczalnik C: 90% ultraczysta woda (10% metanol) i rozpuszczalnik D: 50% metanolu (ultraczysta woda).
- Otwórz oprogramowanie, aby sterować fazami ruchomymi.
- Myć instrumenty UPLC przy natężeniu przepływu 0,2 ml/min (50% rozpuszczalnika B i 50% rozpuszczalnika C) równoważąc przez 30 minut, następnie przy natężeniu przepływu 0,2 ml/min (25% rozpuszczalnika A i 75% rozpuszczalnika B) równoważąc przez 20 minut, a następnie równoważąc natężenie przepływu 0,4 ml/min.
- Rozpuść znakowane N-glikany w 25 μl mieszaniny 100% acetonitrylu i ultraczystej wody w stosunku 2:1 (v/v). Następnie odwirować przy 134 × g przez 5 minut (4 °C) i załadować 10 μl znakowanych N-glikanów do przyrządów UPLC.
- Oddzielić znakowane N-glikany przy natężeniu przepływu 0,4 ml/min z gradientem liniowym od 75% do 62% acetonitrylu przez 25 minut. Następnie należy przeprowadzić analizę za pomocą drabinki kalibracyjnej dekstranu/kolumny glikopeptydowej na UPLC w temperaturze 60 °C (w tym przypadku próbki przechowywano w temperaturze 4 °C przed wstrzyknięciem).
- Wykrywanie fluorescencji N-glikanów przy długościach fal wzbudzenia i emisji odpowiednio 330 nm i 420 nm.
- Zintegruj glikany w oparciu o pozycję piku i czas retencji.
- Oblicz względną wartość każdego piku glikanu (GP) / wszystkich pików glikanu (GP) (procent, %) w następujący sposób: GP1: GP1 / GPs * 100, GP2: GP2 / GPs * 100, GP3: GP3 / GPs * 100 itd.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Jak pokazano w Rycina 1, IgG Nglikany przeanalizowano, wyodrębniając 24 początkowe piki glikanów IgG (GP) na podstawie położenia piku i czasu retencji. Nstruktury glikanów są dostępne dzięki detekcji metodą spektrometrii mas zgodnie z poprzednim badaniem (Tabela 1)15Aby zapewnić porównywalność wyników, zastosowano normalizację do całkowitej powierzchni, w której ilość glikanów w każdym piku wyrażono j...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
UPLC służy jako względna metoda analizy ilościowej 5,15. Wyniki wskazują, że UPLC jest stabilną technologią detekcji o dobrej odtwarzalności i względnej dokładności ilościowej. Ilość glikanów w każdym piku jest wyrażona jako procent całkowitej powierzchni zintegrowanej za pomocą UPLC, który jest wartością względną. Względna kwantyfikacja poprawia porównywalność badanych próbek. Ponadto 96-dołkowe płytki białkowe G są używane do oczyszczania IgG za pomocą 96 próbe...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Podziękowania
Ta praca była wspierana przez granty z National Natural Science Foundation of China (81673247 & 81872682) oraz Australian-China Collaborative Grant (NH & MRC - APP1112767 -NSFC 81561128020).
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| 2-aminobenzamid, 2-AB | Sigma, Chiny | ||
| 96-dołkowa płytka zbiorcza | AXYGEN | ||
| 96-dołkowa płytka filtracyjna | Pol | 0,45 um GHP | |
| 96-dołkowa płytka monolityczna | BIA Separacje | ||
| Rotor płytkowy 96-dołkowy | Eppendorf Co., Ltd, Niemcy | T_1087461900 | |
| Kwas octowy | Sigma, Chiny | ||
| Acetonitryl | Huihai Keyi Technology Co., Ltd, Chiny | ||
| Wodorowęglan amonu | Shenggong Biological Engineering Co., Ltd, Chiny | ||
| Mrówczan amonu | Beijing Minruida Technology Co., Ltd. | ||
| Inkubator / wahacz ze stałym wytrząsaniem | Zhicheng analytical instrument manufacturing co., Ltd, Chiny | ZWY-10313 | |
| Drabinka kalibracyjna dekstranu / kolumna glikopeptydowa | Watts technology Co., Ltd, Chiny | Kolumna | |
| Dimetylosulfotlenek (DMSO) | Sigma, Chiny | ||
| Fosforan disodowy | Shenggong Biological Engineering Co., Ltd, Chiny | ||
| Piekarniki elektryczne | Przyrządy do testowania Co., Ltd | 202-2AB | |
| Empower 3.0 | Waters technology Co., Ltd, Ameryka | ||
| Etanol | Huihai Keyi Technology Co., Ltd, Chiny | ||
| Kwas mrówkowy | Sigma, Chiny | ||
| GlycoProfile 2-AB Zestaw do etykietowania | Sigma, Chiny | ||
| HCl | Junrui Biotechnology Co., Ltd, Chiny | ||
| Wirówka szybkoobrotowa | Eppendorf Co., Ltd, Niemcy | 5430 | |
| Igepal | Sigma, Chiny | ||
| Wirówka niskotemperaturowa | Eppendorf Co., Ltd, Niemcy | ||
| Lodówka niskotemperaturowa | Qingdao Haier Co., Ltd | ||
| Kolektor 96-dołkowa | Technologia Watts Co., Ltd, Chiny | 186001831 | |
| Metanol | Huihai Keyi Technology Co., Ltd, Chiny | ||
| Miernik czystej wody Milli-Q | Millipore Co., Ltd, Ameryka | Przewaga A10 | |
| NaOH | Shenggong Biological Engineering Co., Ltd, Chiny | ||
| Tester pH | Sartorius Co., Ltd, Niemcy | PB-10 | |
| Sól fizjologiczna buforowana fosforanami, PBS | Shenggong Biological Engineering Co., Ltd, Chiny | ||
| Pipeta | Eppendorf Co., Ltd, Niemcy | 4672100, 0,5-10μ l & 10-100μ l & 20-200μ l & 1000μ l | |
| Enzym PNGazy F | Sigma, Chiny | ||
| Diwodorofosforan potasu | Shenggong Biological Engineering Co., Ltd, Chiny | ||
| Propan-2-ol | Huihai Keyi Technology Co., Ltd, Chiny | ||
| SDS | Sigma, Chiny | ||
| Chlorek | sodu Shenggong Biological Engineering Co., Ltd, Chiny | ||
| Cyjanoborowodorek sodu (NaBH3CN) | Sigma, Chiny | ||
| Spektrofotometr | Shanghai Yuanxi instrument Co., Ltd | B-500 | |
| Transfer płynny pistolet | Smer Fell Science and Technology Co., Ltd, Chiny | 4672100 | |
| Tris | Amresco, Ameryka | ||
| Lodówka niskotemperaturowa | Thermo Co., Ltd, Ameryka | MLT-1386-3-V; MDF-382E | |
| Ultra-sprawna chromatografia cieczowa | Watts technology Co., Ltd, Chiny | Acquity MLtraPerformance LC | |
| Pompa | próżniowa Watts technology Co., Ltd, Chiny | 725000604 | |
| Maszyna do ulatniania/suszarka | Eppendorf Co., Ltd, Niemcy | T_1087461900 | |
| Vortex | Changzhou Enpei instrument Co., Ltd, Chiny | NP-30S | |
| testowania kąpieli wodnej | Co., Ltd | DK-98-IIA | |
| Waga ważąca | Shanghai Jingke Scientific Instrument Co., Ltd. | Zobacz materiał MP200B |
Bibliografia
- Kolarich, D., Lepenies, B., Seeberger, P. H. Glycomics, glycoproteomics and the immune system. Current Opinion in Chemical Biology. 16, 214(2012).
- Cummings, R., Pierce, J. M. The Challenge and Promise of Glycomics. Chemistry Biology. 21 (1), (2014).
- Shade, K. T. C., Anthony, R. M. Antibody Glycosylation and Inflammation. Antibodies. 2, 392(2013).
- Gudelj, I., Lauc, G., Pezer, M. Immunoglobulin G glycosylation in aging and diseases. Cellular Immunology. 333, 65(2018).
- Huffman, J. E., et al. Comparative performance of four methods for high-throughput glycosylation analysis of immunoglobulin G in genetic and epidemiological research. Molecular Cellular Proteomics. 13, 1598(2014).
- Stockmann, H., Adamczyk, B., Hayes, J., Rudd, P. M. Automated, high-throughput IgG-antibody glycoprofiling platform. Analytical Chemistry. 85, 8841(2013).
- Kristic, J., et al. Glycans are a novel biomarker of chronological and biological ages. Journals of Gerontology. Series A, Biological Sciences Medical Sciences. 69, 779(2014).
- Nikolac, P. M., et al. The association between galactosylation of immunoglobulin G and body mass index. Progress in Neuropsychopharmacology Biological Psychiatry. 48, 20(2014).
- Liu, D., et al. The changes of immunoglobulin G N-glycosylation in blood lipids and dyslipidaemia. Journal of Translational Medicine. 16, 235(2018).
- Lemmers, R., et al. IgG glycan patterns are associated with type 2 diabetes in independent European populations. Biochimica Biophysica Acta General Subjects. 1861, 2240(2017).
- Wang, Y., et al. The Association Between Glycosylation of Immunoglobulin G and Hypertension: A Multiple Ethnic Cross-Sectional Study. Medicine (Baltimore). 95, e3379(2016).
- Liu, D., et al. Ischemic stroke is associated with the pro-inflammatory potential of N-glycosylated immunoglobulin G. Journal of Neuroinflammation. 15, 123(2018).
- Russell, A. C., et al. The N-glycosylation of immunoglobulin G as a novel biomarker of Parkinson's disease. GLYCOBIOLOGY. 27, 501(2017).
- Bones, J., Mittermayr, S., O'Donoghue, N., Guttman, A., Rudd, P. M. Ultra performance liquid chromatographic profiling of serum N-glycans for fast and efficient identification of cancer associated alterations in glycosylation. Analytical Chemistry. 82, 10208(2010).
- Pucic, M., et al. High throughput isolation and glycosylation analysis of IgG-variability and heritability of the IgG glycome in three isolated human populations. Molecular Cellular Proteomics. 10, M111(2011).
- Berruex, L. G., Freitag, R., Tennikova, T. B. Comparison of antibody binding to immobilized group specific affinity ligands in high performance monolith affinity chromatography. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 24, 95(2000).
- Ren, S., et al. Distribution of IgG galactosylation as a promising biomarker for cancer screening in multiple cancer types. Cell Research. 26, 963(2016).
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
