Tutaj opisujemy nową metodę wykrywania udanego ustanowienia wspólnego krążenia krwi dwóch parabiontów poprzez wstrzyknięcie glukozy do żyły ogonowej, która powoduje minimalne szkody i nie jest śmiertelna dla parabiontów.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Wykrywanie ustalenia wspólnego dopływu krwi u myszy parabiotycznych przez wstrzyknięcie glukozy do żyły ogonowej
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Parabioza to eksperymentalna metoda chirurgicznego łączenia dwóch równoległych zwierząt wzdłuż osi podłużnej ciała. Przedstawiamy protokół wykrywania pomyślnego ustalenia chimeryzmu krwi u parabiontów poprzez wstrzyknięcie glukozy do żyły ogonowej. Skonstruowano myszy parabiotyczne. Glukozę wstrzyknięto mysz-dawcy przez żyłę ogonową, a wahania poziomu glukozy we krwi mierzono u obu myszy za pomocą glukometru krwi w różnych punktach czasowych. Nasze wyniki wykazały, że po wstrzyknięciu glukozy poziom glukozy we krwi u myszy dawców gwałtownie wzrósł po 1 minucie, a następnie powoli spadał. Tymczasem poziom glukozy we krwi myszy biorców osiągnął szczyt 15 minut po wstrzyknięciu. Podobne wyniki uzyskano w przypadku błękitu Evansa, stosowanego jako kontrola pozytywna dla glukozy. Synchroniczne wahania poziomu glukozy we krwi wskazują, że przepływ krwi między dwiema myszami został pomyślnie ustalony.
Wprowadzenie
Parabioza to metoda modelowania, w której dwa żywe organizmy są łączone ze sobą chirurgicznie i rozwijają się jako jeden system fizjologiczny ze wspólnym układem krążenia1. Takie modele są szeroko stosowane do badania fizjologii ze względu na zaletę, że substancje wytwarzane przez jednego osobnika mogą działać na oba zwierzęta w tym samym czasie za pośrednictwem wspólnego układu krążenia. Od połowy XIX wieku, kiedy eksperymenty parabiotyczne zostały zapoczątkowane przez Paula2, metody konstruowania modeli parabiotycznych stały się ustandaryzowane. Brakowało jednak prostej i wygodnej metody weryfikacji pomyślnego ustaleni....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Wszystkie procedury dotyczące zwierząt i opieki nad nimi zostały zatwierdzone przez Instytucjonalną Komisję ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt Uniwersytetu Medycznego w Harbinie.
UWAGA: Narzędzia i sprzęt wymagane do tej metody są wymienione w Tabeli Materiałów.
1. Przygotowanie materiałów i zwierząt
- Zamów samce myszy C57BL/6 o wadze od 20 g do 25 g od standardowego dostawcy zwierząt laboratoryjnych.
- Trzymaj myszy w cyklu 12 godzin światła: 12 godzin ciemności w temperaturze 24−26 °C z dostępem ad libitum do wody i pożywienia.
2. Parabioza
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
U sześciu myszy dawców poziom glukozy we krwi gwałtownie wzrósł do 26,5 µmol/L (wzrost o 173%) średnio 1 min po wstrzyknięciu 100 µL glukozy (1,2 g/kg) do żyły ogonowej, a następnie stopniowo spadał do 13,3 µmol/L w 60 min. U myszy biorców poziom glukozy we krwi rósł powoli po wstrzyknięciu i osiągnął pierwszy poziom szczytowy w 15 min (wzrost o 47%, 12,2 µmol/L). Na podstawie powyższych wyników standard chimeryzmu krążenia ustalono następująco: 1) gwałtowny wzrost poziomu glukozy we krwi.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Parabioza odnosi się do techniki chirurgicznej polegającej na połączeniu dwóch żywych zwierząt w celu ustanowienia wspólnego układu naczyniowegoza pomocą środków eksperymentalnych 6,7,8. Zaletą tego modelu jest to, że substancje wytwarzane przez jednego osobnika mogą działać na oba zwierzęta w tym samym czasie. W ten sposób model parabiozy może być wykorzystany do zbadania roli substancji lub czynnika w powiązanej chorobie, prow.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Podziękowania
Ta praca była wspierana przez Narodową Fundację Nauk o Przyrodzie Chin (81570399 i 81773735), Narodowy Kluczowy Program Badawczo-Rozwojowy Chin - Projekt Badawczy Modernizacji Tradycyjnej Medycyny Chińskiej (2017YFC1702003) oraz Hei Long Jiang Outstanding Youth Science Fund (JC2017020).
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| zakrzywione kleszcze | Instrumenty chirurgiczne JZ, Chiny | J31340 | |
| Instrumenty chirurgiczne JZ, Chiny | WA1030 | ||
| Instrumenty chirurgiczne JZ, Chiny | 60017961 | ||
| strzykawki 2,5 ml | Agilent, USA | 5182-9642 | |
| Tribromoethano | Sigma-Aldrich, USA | T48402-5G | |
| penicylina | Solarbio, Chiny | IP0150 | |
| tramadol | Yijishiye, Chiny | YJT712520 | |
| glukometr | Roche Diabetes Care, Indiana | Paski testowe Accu-Chek Active Niebieski | |
| Counterstain Evan's | Solarbio, Chiny | G1810 | |
| Nair, USA | LL9161 | ||
| Koc rozgrzewający ( Poduszka grzewcza) | Kent Scientific Corp, USA | TP-22G | |
| Golarka elektryczna | Codos, Chiny | CP-5000 | |
| 3-0,5-0 szew chirurgiczny | Fabryka igieł do szwów medycznych w Szanghaju, Chiny | SYZ 3-0 #, SYZ 5-0 # |
Bibliografia
- Baruch, K., et al. Aging-induced type I interferon response at the choroid plexus negatively affects brain function. Science. 346 (6205), 89-93 (2014).
- Zhang, Y., et al. Positional cloning of the mouse obese gene and its human homologue. Na....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
