W tym artykule przedstawiono szczegółowy protokół eksperymentalny do oceny neurobehawioralnej toksyczności zanieczyszczeń środowiska przy użyciu modelu larw danio pręgowanego, w tym procesu ekspozycji i testów wskaźników neurobehawioralnych.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Badanie neurobehawioralnych skutków zanieczyszczeń środowiska na larwy danio pręgowanego
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
W ostatnich latach coraz więcej zanieczyszczeń środowiska okazało się neurotoksycznych, zwłaszcza we wczesnych stadiach rozwoju organizmów. Larwy danio pręgowanego są wybitnym modelem do neurobehawioralnych badań zanieczyszczeń środowiska. W tym miejscu przedstawiono szczegółowy protokół eksperymentalny do oceny neurotoksyczności zanieczyszczeń środowiska przy użyciu larw danio pręgowanego, w tym pobierania zarodków, procesu ekspozycji, wskaźników neurobehawioralnych, procesu testowego i analizy danych. Omówiono również środowisko hodowli, proces ekspozycji i warunki eksperymentalne, aby zapewnić powodzenie testu. Protokół został wykorzystany w rozwoju leków psychopatycznych, badaniach nad neurotoksycznymi zanieczyszczeniami środowiskowymi i może być zoptymalizowany w celu przeprowadzenia odpowiednich badań lub być pomocny w badaniach mechanistycznych. Protokół przedstawia jasny proces operacyjny do badania skutków neurobehawioralnych na larwy danio pręgowanego i może ujawnić skutki różnych substancji neurotoksycznych lub zanieczyszczeń.
Wprowadzenie
W ostatnich latach udowodniono, że coraz więcej zanieczyszczeń środowiska jest neurotoksycznych1,2,3,4. Jednak ocena neurotoksyczności in vivo po narażeniu na zanieczyszczenia środowiska nie jest tak łatwa, jak w przypadku zaburzeń endokrynologicznych lub toksyczności rozwojowej. Ponadto wczesne narażenie na zanieczyszczenia, zwłaszcza w dawkach istotnych dla środowiska, przyciąga coraz większą uwagę w badaniach toksyczności5,6,7,
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Protokół jest zgodny z wytycznymi zatwierdzonymi przez Komisję Etyki Zwierząt Uniwersytetu Tongji.
1. Kolekcja zarodków danio pręgowanego
- Umieść dwie pary zdrowych, dorosłych zebry z Tybingi w tarlisku w noc poprzedzającą ekspozycję, utrzymując stosunek płci na poziomie 1:1.
- Wyjmij dorosłe ryby z powrotem do systemu 30-60 minut po świetle dziennym następnego ranka.
- Wyjmij zarodki z tarła.
- Opłucz zarodki wodą systemową.
- Przenieś zarodki na szklaną szalkę Petriego (o średnicy 9 cm) z wystarczającą ilością wody systemowej.
- Obserwuj zarodki pod mikroskopem i wybierz zdrowe zarodki do....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
W niniejszym materiale opisujemy protokół badania efektów neurobehawioralnych zanieczyszczeń środowiskowych z wykorzystaniem larw rybek danio (*zebrafish*) poddanych stymulacji światłem. Testy lokomocji, kąta ścieżki oraz aktywności społecznej zostały zdefiniowane we wstępie. Poniżej przedstawiono konfigurację mikropłytek w testach lokomocji i kąta ścieżki oraz zrzuty ekranu z oprogramowania. Dodatkowo, jako przykłady, zaprezentowano wyniki naszych własnych badań. Dwie analizy przedstawia.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Praca ta dostarcza szczegółowego protokołu eksperymentalnego do oceny neurotoksyczności zanieczyszczeń środowiska z wykorzystaniem larw danio pręgowanego. Danio pręgowany przechodzi przez proces od zarodków do larw w okresie ekspozycji, co oznacza, że niezbędna jest dobra pielęgnacja zarodków i larw. Wszystko, co wpływa na rozwój zarodków i larw, może wpłynąć na efekt końcowy. Tutaj omówiono środowisko hodowli, proces ekspozycji i warunki eksperymentalne, aby zapewnić powodzenie całego testu.
.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Podziękowania
Autorzy są wdzięczni za wsparcie finansowe ze strony Narodowej Fundacji Nauk Przyrodniczych Chin (21876135 i 21876136), Narodowego Głównego Projektu Naukowo-Technologicznego Chin (2017ZX07502003-03, 2018ZX07701001-22), Fundacji MOE-Shanghai Key Laboratory of Children's Environmental Health (CEH201807-5) oraz Szwedzkiej Rady ds. Badań (nr 639-2013-6913).
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| 48-dołkowa mikropłytka | Corning | 3548 | Obudowa Embyros |
| 6-dołkowa mikropłytka | Corning | 3471 | Obudowa Embyros |
| BDE-47 | AccuStandard | 5436-43-1 | Zanieczyszczenie |
| DMSO | Sigma | 67-68-5 | kosolowy |
| Olympus | SZX 16 | Przyrząd obserwacyjny | |
| Pipeta | Eppendorf | 3120000267 | Rozwiązanie transferowe |
| Zebrabox | Viewpoint | ZebraBox | Instrument behawioralny |
| Zebrafish | Shanghai FishBio Co., Ltd. | Dostawca danio pręgowanego | z Tybingi |
| ZebraLab | Viewpoint | Oprogramowanie ZebraLab | Behavior |
Bibliografia
- Sun, L., et al. Developmental neurotoxicity of organophosphate flame retardants in early life stages of Japanese medaka (Oryzias latipes). Environmental Toxicology and Chemistry. 35 (12), 2931-2940 (2016).
- Tian, L., et al.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
