Ten artykuł opisuje metodę pomiaru reaktywności naczyń krwionośnych siatkówki in vivo u ludzi przy użyciu techniki prowokacji oddechowej gazem w celu dostarczania bodźców wazoaktywnych podczas pozyskiwania obrazów siatkówki.
Artykuł metodologiczny
Ten artykuł opisuje metodę pomiaru reaktywności naczyń krwionośnych siatkówki in vivo u ludzi przy użyciu techniki prowokacji oddechowej gazem w celu dostarczania bodźców wazoaktywnych podczas pozyskiwania obrazów siatkówki.
Wykazano, że zaopatrzenie naczyń krwionośnych w siatkówkę dynamicznie dostosowuje się poprzez zwężenie i rozszerzenie naczyń krwionośnych, aby dostosować się do metabolicznych potrzeb siatkówki. W procesie tym, określanym jako reaktywność naczyniowa siatkówki (RVR), pośredniczy sprzężenie nerwowo-naczyniowe, które jest upośledzone bardzo wcześnie w chorobach naczyniowych siatkówki, takich jak retinopatia cukrzycowa. W związku z tym klinicznie wykonalna metoda oceny funkcji naczyń krwionośnych może być przedmiotem dużego zainteresowania zarówno w warunkach badawczych, jak i klinicznych. Ostatnio obrazowanie in vivo unaczynienia siatkówki na poziomie naczyń włosowatych stało się możliwe dzięki zatwierdzeniu przez FDA angiografii optycznej koherentnej tomografii (OCTA), nieinwazyjnej, bezbarwnej metody angiografii o minimalnym ryzyku z rozdzielczością na poziomie naczyń włosowatych. Jednocześnie kilku badaczy wykazało fizjologiczne i patologiczne zmiany w RVR. Metoda przedstawiona w tym manuskrypcie jest przeznaczona do badania RVR za pomocą OCTA bez konieczności wprowadzania zmian w procedurach obrazowania klinicznego lub urządzeniu. Demonstruje obrazowanie w czasie rzeczywistym siatkówki i naczyń siatkówki podczas ekspozycji na warunki hiperkapniczne lub hiperoksjalne. Egzamin można łatwo przeprowadzić z udziałem dwóch pracowników w czasie krótszym niż 30 minut, przy minimalnym dyskomforcie lub ryzyku. Metodę tę można dostosować do innych urządzeń do obrazowania okulistycznego, a zastosowania mogą się różnić w zależności od składu mieszaniny gazów i populacji pacjentów. Mocną stroną tej metody jest to, że pozwala ona na badanie funkcji naczyń krwionośnych siatkówki na poziomie naczyń włosowatych u ludzi in vivo. Ograniczenia tej metody są w dużej mierze związane z OCTA i innymi metodami obrazowania siatkówki, w tym artefaktami obrazowania i ograniczonym zakresem dynamiki. Uzyskanymi wynikami metody są obrazy OCT i OCTA siatkówki. Obrazy te można poddać dowolnej analizie, która jest możliwa na dostępnych na rynku urządzeniach OCT lub OCTA. Ogólna metoda może być jednak dostosowana do każdej formy obrazowania okulistycznego.
Zapotrzebowanie metaboliczne siatkówki zależy od odpowiedniego i stałego dostarczania tlenu przez dobrze regulowany system tętniczek, naczyń włosowatych i żyłek1. Kilka badań wykazało, że funkcja naczyń siatkówki ludzkiego większego kalibru może być oceniana in vivo za pomocą różnych metod fizjologicznych2,3,4,5 and pharmacologic6,7 bodziec. Ponadto nieprawidłowa funkcja tego układu naczyniowego jest powszechna w chorobach naczyniowych siatkówki, takich jak retinopatia cukrzycowa, gdzie wykazano, że reaktywność naczyniowa siatkówki (RVR) jest osłabiona nawet w najwcześniejszych stadiach8,9 zarówno poprzez prowokację gazową9 jak i eksperymenty z migotaniem światła5,10,11. Czynniki ryzyka naczyniowego siatkówki, takie jak palenie tytoniu, zostały również skorelowane z upośledzeniem RVR12 i przepływem krwi w siatkówce13. Wyniki te są ważne, ponieważ objawy kliniczne choroby naczyniowej siatkówki występują stosunkowo późno w procesie chorobowym i brakuje udowodnionych wczesnych klinicznych markerów choroby14. W związku z tym ocena RVR może dostarczyć użytecznych miar integralności naczyń krwionośnych do wczesnej oceny nieprawidłowości, które mogą inicjować lub nasilać choroby zwyrodnieniowe siatkówki.
Poprzednie eksperymenty z RVR zazwyczaj opierały się na urządzeniach takich jak laserowy przepływomierz krwi9 lub kamery do badania dna oka wyposażone w specjalne filtry15 do akwizycji obrazu siatkówki. Technologie te są jednak zoptymalizowane pod kątem naczyń o większej średnicy, takich jak arterioles16 i venules15, które nie są miejscami, w których zachodzi wymiana gazów, mikroelementów i molekularnych. Nowsze badanie było w stanie określić ilościowo RVR naczyń włosowatych za pomocą obrazowania optyki adaptatywnej17, ale pomimo lepszej rozdzielczości przestrzennej, obrazy te mają mniejszy rozmiar pola i nie są zatwierdzone przez FDA do użytku klinicznego18.
Niedawne pojawienie się angiografii optycznej koherentnej tomografii (OCTA) dostarczyło zatwierdzonej przez FDA, nieinwazyjnej i bezbarwnikowej metody angiograficznej oceny zmian poziomu naczyń włosowatych u pacjentów i osób in vivo. OCTA jest powszechnie akceptowane w praktyce klinicznej jako skuteczne narzędzie do oceny upośledzenia perfuzji naczyń włosowatych w chorobach naczyniowych siatkówki, takich jak retinopatia cukrzycowa19, niedrożność żył siatkówki20, vasculitis21 i wiele innych22. OCTA stanowi zatem doskonałą okazję do oceny zmian na poziomie naczyń włosowatych, które mogą mieć znaczną niejednorodność przestrzenną i czasową23, a także zmiany patologiczne w warunkach klinicznych. Nasza grupa wykazała niedawno, że OCTA może być wykorzystana do ilościowego określenia reakcji naczyń siatkówki na poziomie naczyń włosowatych2 na fizjologiczne zmiany we wdychanym tlenie, który jest bodźcem zwężającym naczynia krwionośne siatkówki16,24, oraz dwutlenek węgla, który jest bodźcem rozszerzającym naczynia krwionośne siatkówki3,5.
Celem tego artykułu jest opisanie protokołu, który pozwoli czytelnikowi ocenić reaktywność naczyniową siatkówki mniejszych tętniczek i łożyska kapilarnego za pomocą OCTA. Metody te są zaadaptowane z tych przedstawionych w Lu et al.25, którzy opisali pomiar reaktywności naczyń mózgowych za pomocą rezonansu magnetycznego. Chociaż obecne metody zostały opracowane i wykorzystane podczas obrazowania OCTA2, mają one zastosowanie do innych urządzeń do obrazowania siatkówki ze stosunkowo prostymi i oczywistymi modyfikacjami.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Badanie to zostało zatwierdzone przez Instytucjonalną Komisję Rewizyjną Uniwersytetu Południowej Kalifornii i było zgodne z zasadami Deklaracji Helsińskiej.
1. Konfiguracja aparatury do gazowej wymiany bez ponownego wdychania

Rysunek 1: Schemat aparatury do oddychania bez ponownego wdychania. Pełny układ został podzielony na trzy oddzielne moduły zgodnie z ich funkcją i częstotliwością niezależnej obsługi. Obejmują one: moduł kontroli powietrza (Air-Control Unit), moduł oddychania bez ponownego wdychania (Non-rebreathing Unit) oraz moduł obiektu/urządzenia obrazującego (Subject/Imaging Device Unit) Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.
2. Przygotowanie obiektu do obrazowania
3. Eksperyment z prowokacją gazową i akwizycja obrazów
4. Porządkowanie po eksperymencie
5. Eksport i analiza danych OCTA

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wynikiem tego eksperymentu są odczyty manualne z pulsoksymetru, czasy ekspozycji na gaz lub skanowania OCTA oraz surowe dane obrazowe OCTA. Obraz OCTA składa się ze skanów B OCT oraz sygnału dekorrelacji powiązanego z każdym skanem B. Parametry danych są określone przez specyfikację urządzenia. Wykorzystano aparat OCTA z platformą laserową typu swept source o długości fali centralnej 1040–1060 nm. Obrazy zapewniają rozdzielczość poprzeczną 20 µm i optyczną rozdzielczość osiową 6,3 µm. Najczęściej dane OCTA są prezentowan...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Właśnie opisana metodologia jest kompletnym protokołem eksperymentu z prowokacją do oddychania gazem, który pozwala na pomiar RVR osoby badanej w kontrolowanym środowisku w określonych punktach czasowych bez modyfikacji urządzenia do obrazowania OCTA i przy minimalnym dyskomforcie lub ryzyku dla pacjenta. Konfiguracja ta jest opisana w sposób, który pozwala na łatwe modyfikacje w celu dopasowania do potrzeb badacza. Może pomieścić dodatkowe rurki, aby pasowały do różnych pomieszczeń klinicznych, a niektóre elementy, taki...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Firma Carl Zeiss Meditec zapewniła AHK dotacje, sprzęt i wsparcie finansowe związane z tematem tego artykułu.
Ta praca była wspierana przez NIH K08EY027006, R01EY030564, UH3NS100614, Research Grants from Carl Zeiss Meditec Inc (Dublin, CA) oraz Unrestricted Department Funding from Research to Prevent Blindness (Nowy Jork, NY).
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| 5% CO2 gazu [5% CO2, 21% O2, 74% N2] (Sprężony) | Zależny od instytucji (Praxair) | ||
| Detergent dezynfekujący Bacdown | Decon Labs | 8001 | https://deconlabs.com/products/disinfectant-bdd/ |
| Rurki Clean-Bor (średnica wewnętrzna 35 mm) | Vacumed | 1011-108 | http://www.vacumed.com/zcom/product/Product.do?compid=27&skuid=1197 |
| Adapter mankietu do napełniania worka Douglas | Vacumed | 22254 | http://www.vacumed.com/zcom/product/Product.do?compid=27&prodid=343 |
| Torba Douglas (pojemność 200 L) | Aparat Harvard | 500942 | |
| https://www.harvardapparatus.com/douglas-bag.html staw łokciowy (średnica wewnętrzna 19 mm / średnica zewnętrzna 22 mm), Zmodyfikowany w domu | |||
| pulsoksymetr palcowy (seria Pro) | CMS | CMS 500DL | https://www.walmart.com/ip/Pro-Series-CMS-500DL-Fingertip-Pulse-Oximeter-Blood-Oxygen-Saturation-Monitor-with-silicon-cover-batteries-and-lanyard/479049154 |
| Rurka doprowadzająca gaz (średnica wewnętrzna 22 mm) Zmodyfikowana w domu | |||
| Rurka do napełniania gazem (1/8" dla sprężonego gazu) | |||
| Środek czyszczący z nadtlenkiem wodoru Chusteczki dezynfekujące | Clorox Healthcare | 30824 | |
| https://www.cloroxpro.com/products/clorox-healthcare/hydrogen-peroxide-cleaner-disinfectants/?gclid=EAIaIQobChMIk-KG4vi15QIVcRh9Ch0NNwLPEAAYASAAEgJIa_D_BwE&gclsrc=aw.ds Nawilżające krople do oczu | Refresh | Refresh Plus | https://www.refreshbrand.com/Products/refresh-plus |
| Ręczne kierunkowe zawory sterujące: Trójdrogowy zawór odcinający w kształcie litery T (średnica wewnętrzna 28,6 mm, średnica zewnętrzna 35 mm) | Hans Rudolph | 2100C Series | www.rudolphkc.com |
| Medical O2 (skompresowany) | Ustnik zależny od | ||
| (silikon, model #9061) | Hans Rudolph | 602076 www.rudolphkc.com | |
| OCTA (PLEX Elite 9000) | Carl Zeiss Meditec, Dublin, CA, USA | https://www.zeiss.com/meditec/int/product-portfolio/optical-coherence-tomography-devices/plex-elite-9000-swept-source-oct.html | |
| Roztwór okulistyczny chlorowodorku fenylefryny, USP 2,5% | Paragon Bioteck, Inc | NDC 42702-102-15 | https://paragonbioteck.com/products/diagnostics/phenylephrine-hydrochloride-ophthalmic-solution-usp-2-5/ |
| Plastikowy klips na nos sterylny Pianka CS100 | Sklar Sterylna | 96-2951 | https://www.sklarcorp.com/disposables/plastic/plastic-nose-clip-sterile-foam-box-of-100.html |
| Roztwór okulistyczny chlorowodorku proparakainy, USP .5% | Bausch + Lomb | NDC 24208-730-06 | |
| Reduktor https://www.bausch.com/ecp/our-products/rx-pharmaceuticals/generics (zależny od zbiornika - 5% CO2: Reduktory butli z gazem wielostopniowym Fisherbrand) | Genstar Technologies Company | 10575150 | |
| https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-multistage-cylinder-regulators-22/10575150?keyword=true Regulator (zależny od zbiornika - tlen: wielostopniowe regulatory butli gazowych Fisherbrand) | Genstar Technologies Company | 10575145 | https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-multistage-cylinder-regulators-22/10575145?keyword=true |
| Rurki gumowe (średnica wewnętrzna 19 mm, średnica zewnętrzna 27 mm), taśma uszczelniająca made in house | |||
| - Parafilm Wrap (szerokość 2") | Cole Parmer | PM992 | https://www.coleparmer.com/i/parafilm-pm992-wrap-2-wide-250-ft-roll/0672050?PubID=VV&persist=True&ip=no&gclid=EAIaIQobChMInY3vqomz5QIVfyCtBh1VSg64EAAYASAAEgJ9n_D_BwE |
| Sterylne podkładki nasączone alkoholem | Medline | MDS090670 | https://www.medline.com/product/Sterile-Alcohol-Prep-Pads/Swab-Pads/Z05-PF03816 |
| Roztwór okulistyczny tropicamidu, adapter rurki http://www.akorn.com/prod_detail.php?ndc=17478-102-12 USP 1% | Akorn | NDC 17478-102-12 | |
| , wyprodukowany w domu | |||
| Dwukierunkowy zawór bez ponownego oddychania (seria 2600 - średnica wewnętrzna 28,6 mm, średnica zewnętrzna 35 mm) | Rudolph | 2600 Series, UM-112078 | www.rudolphkc.com |
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE
Poproś o pozwolenie