Artykuł metodologiczny

Ocena różnicy kolorów w łożysku z sekwencją czerwienicy niedokrwistości bliźniaczej

DOI:

10.3791/61312

⸱

17 czerwca 2020

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Reproductive Medicine, Affiliated Shenzhen Maternity and Child Healthcare Hospital, Southern Medical University, 2Division of Fetal Medicine, Department of Obstetrics, Leiden University Medical Center, 3Fetal Medicine Unit & Prenatal Diagnosis Center, Department of Obstetrics, Shanghai First Maternity and Infant Hospital, Tongji University School of Medicine, 4Division of Neonatology, Department of Pediatrics, Leiden University Medical Center

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

U bliźniąt jednokosmówkowych z sekwencją czerwienicy niedokrwistości bliźniaczej (TAPS), bliźniak dawcy i odpowiadający mu udział łożyska są blade, podczas gdy bliźniak biorca i jego udział łożyskowy mają aspekt obfity. Przedstawiono tutaj protokół ilościowego określania różnicy kolorów po matczynej stronie łożyska TAPS po urodzeniu.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Sekwencja czerwienicy niedokrwistości bliźniaczej (TAPS) występuje u 5% bliźniąt jednokosmówkowych i charakteryzuje się dużymi różnicami między bliźniętami. Poporodowe kryteria diagnostyczne TAPS opierają się na parametrach hematologicznych i charakterystyce łożyska. Badanie łożyska po urodzeniu pokazuje, że kolor strony matczynej między obszarami łożyskowymi bliźniąt anemicznych i czerwienicowych jest znacznie różny. Różnica w kolorze łożysk TAPS jest większa w porównaniu z łożyskami jednokosmówkowymi z ostrą transfuzją płodu i płodu w okresie okołoporodowym; w związku z tym jest to wykorzystywane jako dodatkowe kryterium diagnostyczne dla TAPS. Oprogramowanie takie jak ImageJ umożliwia komputerowy pomiar intensywności koloru w łożyskach TAPS. Nie opisano jednak dotychczas szczegółowej metody obliczania różnic kolorystycznych między anemicznymi i policytemicznymi składnikami łożysk TAPS. Przedstawiony tutaj protokół zapewnia krok po kroku metodę analizy różnic kolorystycznych po matczynej stronie łożysk TAPS przy użyciu oprogramowania ImageJ.

Wprowadzenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

TAPS jest przewlekłą formą zespołu transfuzji płodu i charakteryzuje się dużą różnicą między bliźniaczymi hemoglobinami (Hb) bez oznak sekwencji oligo-wielowodzie1. Główna patogeneza TAPS jest związana z unikalną angioarchitekturą łożyska, z zaledwie kilkoma maleńkimi zespoleniami pozwalającymi na przewlekłą i niską prędkość transfuzji od dawcy (bliźniaka anemicznego) do biorcy (bliźniak wielocytowy)2,3,4. Diagnostyka poporodowa TAPS opiera się na badaniach hematologicznych wykazujących dużą różnicę Hb i dużą różnicę w liczbie retikulocytów i/lub iniekcji łożyskowej barwnikiem wykazującym tylko drobne zespolenia5. Jednak liczba retikulocytów nie zawsze jest mierzona po urodzeniu, a wstrzyknięcie łożyska nie jest rutynowo wykonywane w większości ośrodków medycyny płodu. Dodatkowe kryterium diagnostyczne może być przydatne w diagnozowaniu przypadków bez pomiarów liczby retikulocytów i bez wstrzyknięcia barwnika łożyskowego. Uderzająca różnica kolorystyczna między bladą skórą bliźniaka-dawcy a obfitą skórą bliźniaka biorcy jest stale obecna u bliźniąt TAPS po urodzeniu. Podobna różnica kolorów po stronie matki między obszarami łożyskowymi bliźniąt anemicznych i wielocytemowych jest również wykrywana podczas badania ogólnego.

Ostatnio wysunięto hipotezę, że ta różnica w kolorze łożyska może być wykorzystana jako prosta i dokładna metoda potwierdzenia diagnozy TAPS po urodzeniu6. Kwantyfikacja różnicy kolorów w łożyskach TAPS pozwala zaoszczędzić czas w porównaniu z iniekcją łożyskową. Ponadto kwantyfikacja różnicy kolorów w łożyskach TAPS jest bardziej opłacalna w porównaniu z liczbą retikulocytów. Materiały stosowane w tej metodzie są łatwo dostępne w warunkach klinicznych, dlatego metoda ta zapewnia proste i dokładne kryteria diagnozy TAPS. W protokole opisano szczegółową metodę ilościowego oznaczania różnic kolorystycznych od strony matczynej łożysk jednokosmówkowych za pomocą TAPS.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ten protokół został zatwierdzony przez komisję etyki Centrum Medycznego Uniwersytetu w Lejdzie, a badanie poporodowe ludzkich łożysk bliźniaczych jednokosmówkowych jest częścią standardowej opieki w Centrum Medycznym Uniwersytetu w Lejdzie. W Centrum Medycznym Uniwersytetu w Lejdzie odstąpiono od uzyskania zgody na badanie poporodowe ludzkich łożysk bliźniaczych jednokosmówkowych.

1. Pobranie łożyska metodą TAPS i badanie brutto

  1. Należy stosować wszystkie ludzkie łożyska podwójne jednokosmówkowe z TAPS dostarczane w każdym wieku ciążowym. Utrzymuj ludzkie łożysko jednokosmówkowe bliźniacze w jak najbardziej nienaruszonym stanie. Łożysko jednokosmówkowe należy dostarczyć tak delikatnie, jak to możliwe, jeśli konieczne jest ręczne usunięcie.
    UWAGA: Po porodzie położne lub neonatolodzy powinni przenieść łożysko TAPS do plastikowego pudełka, a następnie do laboratorium.
  2. Kiedy urodzi się pierwsze dziecko, użyj jednego zacisku, aby zacisnąć pępowinę, aby oznaczyć kolejność urodzenia jako pierwszą. Kiedy drugie dziecko zostanie urodzone, użyj dwóch zacisków, aby zacisnąć pępowinę, aby oznaczyć kolejność urodzenia jako drugą.
  3. Zbadaj łożysko makroskopowo, w tym nienaruszoność łożyska, rodzaje przyczepów pępowiny, liczbę naczyń pępowinowych i ogólne badanie błony dzielącej w celu potwierdzenia kosmówki. Zbierz błonę międzybłonową w celu patologicznej diagnozy jednopasmówkowości. Średnica łożysk TAPS zależy od wieku ciążowego.
    UWAGA: Badanie należy wykonać w ciągu 1 tygodnia po porodzie, aby uniknąć tworzenia się adhezyjnych skrzepów krwi po stronie matki.
  4. Łożysko należy przechowywać w lodówce (1–4 °C) w suchym, plastikowym pudełku do czasu badania, jeśli to konieczne.

2. Przygotowanie łożyska od strony matki

  1. Przytnij błonę owodniową wzdłuż krawędzi łożyska za pomocą nożyczek. Zwróć uwagę na naczynia na błonie i czy występuje wkłucie rdzenia moczowego, aby zapobiec wypływaniu krwi z masy łożyskowej.
    UWAGA: W przypadku wprowadzania pępowiny naczynia z pępowiny przemieszczają się na powierzchnię błony owodniowej na pewną odległość, zanim przyczepią się do masy łożyskowej. Jeśli "nagie" naczynia zostaną przecięte, krew z masy łożyskowej może wypłynąć i zrobić bałagan.
  2. Ostrożnie usuń skrzepy krwi, aby zapobiec uszkodzeniu płatów łożyska.
  3. Uporządkuj płaty łożyska po stronie matki, aby wyeliminować przerwę między płatami. Łożyska mają zwykle około 15 płatów i można je zidentyfikować po stronie matki.

3. Przygotowanie do dokumentacji

  1. Umieść łożysko na plastikowym panelu stroną matczyną skierowaną do góry.
  2. Wystaw matczyną stronę łożyska na działanie światła (równomierne rozprowadzenie za pomocą dwóch identycznych lamp po lewej i prawej stronie). Używaj lamps, które mają funkcję regulacji natężenia światła.
  3. Aby zmniejszyć odbicia, rób zdjęcia cyfrowe aparatem (tabela materiałów) w łagodnych warunkach oświetleniowych i unikaj bezpośredniej ekspozycji na źródło światła.
  4. Rób zdjęcia prostopadłe do matczynej strony łożyska.

4. Pomiar komputerowy za pomocą ImageJ

  1. Otwórz ImageJ na komputerze, klikając ikonę oprogramowania.
  2. Kliknij "Plik", a następnie "Otwórz", aby otworzyć zdjęcie łożyska. Po otwarciu żądanego obrazu kliknij "Obraz" | "Kolor", a następnie "Narzędzie kanałów", aby wybrać "Kolor" z listy rozwijanej.
    UWAGA: Oprogramowanie może automatycznie zidentyfikować kolor mierzonego obiektu. Łożysko jest czerwone. W oprogramowaniu po kliknięciu "Kolor" obraz łożyska zostanie automatycznie przekształcony w czerwony kanał widma.
  3. Kliknij "Selekcje odręczne", aby odpowiednio obrysować obfity i blady udział łożyskowy bliźniąt wielocytemowych i anemicznych poprzez oględziny różnej intensywności koloru matczynej strony łożyska.
  4. Kliknij "Analizuj" | "Histogram". Uzyskaj histogram intensywności koloru po wybraniu odpowiednio obszaru pletorycznego lub bladego obszaru. Tryb wyświetlany na histogramie intensywności reprezentuje kolor, który jest najbardziej obecny w wybranym obszarze łożyska.
  5. Oblicz stosunek różnicy kolorów, dzieląc tryb intensywności koloru anemicznego bliźniaka przez tryb intensywności koloru bliźniaka policytemicznego.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Badanie łożyskowe dostarcza cennych informacji do diagnozy TAPS. Łożyska TAPS charakteryzują się obecnością kilku małych zespoleń naczyniowych1 (Rysunek 1, Rysunek 2). Ta cecha łożysk TAPS jest związana z patogenezą TAPS i stanowi poporodowe kryterium diagnostyczne. Podobnie jak w przypadku koloru noworodków po urodzeniu, udział łożyska bliźniaka biorcy w TAPS jest zazwyczaj ciemny i obfity, a udział łożyska bliźniaka dawcy jest blady i anemiczny (...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kluczowe punkty do osiągnięcia optymalnego badania w oparciu o nasze doświadczenie obejmują: 1) dostarczenie łożyska tak delikatnie, jak to możliwe, aby uniknąć uszkodzenia, zwłaszcza gdy wskazane jest ręczne usunięcie; 2) badanie łożysk MC tuż po urodzeniu, aby uniknąć tworzenia się skrzepów adhezyjnych (najlepiej w ciągu kilku dni); 3) delikatne usuwanie wszystkich skrzepów krwi, unikając uszkodzenia płatów łożyska; 4) narażenie matczynej strony łożysk MC na jednolite warunki oświetleniowe i minimalizacja odbicia świat...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

To badanie zostało sfinansowane przez Narodową Fundację Nauk Przyrodniczych Chin (numer grantu: 81801465), Sanming Project of Medicine w Shenzhen (numer grantu: SZSM201512012) oraz National Key Research and Development Program of China (numer grantu: 2018YFC1002900).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Strzykawki 20 mlBD Plastipak300613
Barwnik kolorowyRoyal Talens Schoolverf36716010 (niebieski); 36715010 (zielony); 36712350 (żółty); 36713570 (różowy)
Aparat cyfrowyCanon Inc.ixus 125 hs
ImageJNational Institute of Healthdla systemu Windows ImageJ w zestawie z 64-bitowymi cewnikami pępowinowymi Java 1.8.0_112
Vygon1270.08 (8 plików)
1270.08 (5 plików)
1270.04 (4 pliki)
1270.03 (3.5 plików)
1270.02 (2.5 plików)

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Lopriore, E., et al. Twin anemia-polycythemia sequence in two monochorionic twin pairs without oligo-polyhydramnios sequence. Placenta. 28 (1), 47-51 (2007).
  2. Zhao, D., et al. Placental share and hemoglobin level in relation to birth weight in twin anemia-polycythemia sequence. Placenta. 35 (12), 1070-1074 (2014).
  3. Lopriore, E., et al. Assessment of feto-fetal transfusion flow through placental arterio-venous anastomoses in a unique case of twin-to-twin transfusion syndrome. Placenta. 28 (2-3), 209-211 (2007).
  4. Lopriore, E., et al. Quantification of feto-fetal transfusion rate through a single placental arterio-venous anastomosis in a monochorionic twin pregnancy. Placenta. 30 (3), 223-225 (2009).
  5. Tollenaar, L. S. A., et al. Improved prediction of twin anemia-polycythemia sequence by delta middle cerebral artery peak systolic velocity: new antenatal classification system. Ultrasound in Obstetrics and Gynecology. 53 (6), 788-793 (2019).
  6. Tollenaar, L. S., et al. Color Difference in Placentas with Twin Anemia-Polycythemia Sequence: An Additional Diagnostic Criterion. Fetal Diagnosis and Therapy. 40 (2), 123-127 (2016).
  7. Zhao, D. P., et al. Prevalence, size, number and localization of vascular anastomoses in monochorionic placentas. Placenta. 34 (7), 589-593 (2013).
  8. De Paepe, M. E., Burke, S., Luks, F. I., Pinar, H., Singer, D. B. Demonstration of placental vascular anatomy in monochorionic twin gestations. Pediatric and Developmental Pathology. 5 (1), 37-44 (2002).
  9. Lewi, L., et al. Placental sharing, birthweight discordance, and vascular anastomoses in monochorionic diamniotic twin placentas. American Journal of Obstetrics and Gynecology. 197 (6), 581-588 (2007).
  10. Robertson, E. G., Neer, K. J. Placental injection studies in twin gestation. American Journal of Obstetrics and Gynecology. 147 (2), 170-174 (1983).
  11. Lewi, L., et al. The outcome of monochorionic diamniotic twin gestations in the era of invasive fetal therapy: a prospective cohort study. American Journal of Obstetrics and Gynecology. 199 (5), (2008).
  12. Slaghekke, F., et al. Fetoscopic laser coagulation of the vascular equator versus selective coagulation for twin-to-twin transfusion syndrome: an open-label randomised controlled trial. Lancet. 383 (9935), 2144-2151 (2014).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Analiza koloru o yskaoprogramowanie ImageJpomiar r nicy kolor wstrona maciczna o yskadiagnoza TAPSbadanie o yskapomiar komputerowyanaliza intensywno ci koloruobszary o yska
Film wkrótce dostępny

Powiązane artykuły