W tym badaniu, system żywienia dla nimfalnych i larwalnych stadiów kleszcza twardego został opracowany za pomocą kapsułki dołączonej do myszy laboratoryjnej. Kapsuła do karmienia jest wykonana z elastycznych materiałów i pozostaje mocno przymocowana do myszy przez co najmniej tydzień i umożliwia wygodne monitorowanie żerowania kleszczy.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Oparty na kapsułkach model do infestacji niedojrzałych stadiów kleszczy twardych na myszach laboratoryjnych
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Kleszcze są obowiązkowymi pasożytami odżywiającymi krew na wszystkich etapach rozwoju (z wyjątkiem jaj) i są rozpoznawane jako wektory różnych patogenów. Wykorzystanie modeli mysich w badaniach nad kleszczami ma kluczowe znaczenie dla zrozumienia ich biologii i interakcji kleszcz-gospodarz-patogen. Tutaj demonstrujemy niepracochłonną technikę karmienia niedojrzałych stadiów twardych kleszczy na myszach laboratoryjnych. Zaletą tej metody jest jej prostota, krótki czas trwania oraz możliwość monitorowania lub zbierania kleszczy w różnych punktach czasowych eksperymentu. Ponadto technika ta umożliwia przyczepienie dwóch pojedynczych kapsułek do tej samej myszy, co jest korzystne dla różnych eksperymentów, w których dwie różne grupy kleszczy są wymagane do żerowania na tym samym zwierzęciu. Niedrażniąca i elastyczna kapsułka wykonana jest z łatwo dostępnych materiałów i minimalizuje dyskomfort zwierząt doświadczalnych. Co więcej, eutanazja nie jest konieczna, myszy całkowicie wracają do zdrowia po eksperymencie i są dostępne do ponownego użycia.
Wprowadzenie
Kleszcze są ważnymi wektorami wielu patogenów i stanowią poważne zagrożenie dla zdrowia zwierząt i ludzi1. Ustanowienie skutecznego systemu żywienia ma kluczowe znaczenie podczas badania ich biologii, interakcji kleszcz-gospodarz-patogen lub ustanawiania skutecznych środków kontroli. Obecnie dostępnych jest kilka systemów sztucznego żywienia, które unikają wykorzystywania żywych zwierząt, dla kleszczy2,3,4 i powinny być one wykorzystywane, gdy pozwalają na to warunki eksperymentalne. Jednak w różnych warunkach eksperymentalnych systemy te nie są w stan....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Proszę zauważyć, że ten protokół może być stosowany tylko wtedy, gdy wszystkie środki bezpieczeństwa i dobrostanu są spełnione w laboratorium. Protokół ten otrzymał pozwolenie na wykorzystanie myszy do karmienia kleszczy od Komitetu Etyki ds. Doświadczeń na Zwierzętach ComEth Anses/ENVA/UPEC, numery zezwoleń E 94 046 08. Jako punkt końcowy zwierzęta były narażone na działanie CO2 przez 9 minut w dwóch fazach po 4 i 5 minut każda.
1. Przygotowanie kapsułki
- Sklej ze sobą piankę EVA o grubości 2 mm i podwójnie lepką piankę samoprzylepną (Rysunek 1A).
- Za pomocą skórzanego dziurkacz....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Proponujemy szczegółową metodę krok po kroku karmienia niedojrzałych stadiów kleszczy twardych w kapsułkach z pianki EVA przymocowanych do grzbietu myszy (Rysunek 2). Ten niewymagający dużego nakładu pracy protokół nadaje się do różnych rodzajów eksperymentów, w których wymagane jest precyzyjne monitorowanie i zbieranie kleszczy. Głównymi zaletami tej metody są jej prostota, łatwo dostępne i tanie materiały oraz krótki czas trwania. Ponadto udało nam się przymocować dwie kapsułki do jednego .......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Najważniejszym krokiem w protokole jest mocne przyklejenie kapsułki do skóry myszy. Dlatego klej lateksowy należy równomiernie nakładać na całą powierzchnię pianki EVA kapsułki i stosować stały nacisk przez 3 minuty, szczególnie po lewej i prawej stronie kapsułki. Zalecamy również umieszczenie kapsułki jak najdalej do przodu na grzbiecie, aby uniknąć jej wyjęcia przez mysz za pomocą tylnych łap. W naszych eksperymentach potwierdzono tylko przyczepność pianki EVA i kleju lateksowego do skóry myszy i nie możemy zagwarantow.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Podziękowania
Dziękujemy za pomoc techniczną Alaina Berniera, Francuskiego Narodowego Instytutu Badań Rolniczych (INRAE) oraz Océane Le Bidel (ANSES). Badanie było wspierane przez DIM One Health - Région Île-de-France (akronim projektu: NeuroPaTick). Myszy zostały zakupione przez ANSES. Dr Jeffrey L. Blair jest znany z recenzji wcześniejszej wersji manuskryptu.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Pianka EVA o grubości 2 mm (niska gęstość) | Sklep Cosplay | EVA-45kg (950/450/2 mm) | Można go również zamówić za pośrednictwem Amazon (nr ref. B07BLMJDXD) |
| Rurka termokurczliwa Elektryczna osłona drutowa 31 mm / 1,22 cala | Amazon | B0848S3S6T | Różne średnice rurek termokurczliwych są dostępne za pośrednictwem Amazon. |
| Myszy BALB/cByJ | Charles River Kod szczepu 627 | ||
| Myszy C57BL/6 | Charles River | Kod szczepu 664 | |
| Nietoksyczny klej lateksowy | Tear mender | Tkanina i Klej do skóry | Dostępny również za pośrednictwem Amazon (nr ref. B001RQCTUU) |
| Narzędzie do dziurkowania Narzędzie do sztuki ręcznej | Amazon | B07QPWNGBF | Sprzedawane przez amazon jako skórzane narzędzia robocze 1-25mm Okrągły stalowy skórzany nóż rzemieślniczy pracujący do paska |
| Osłony wiązań PVC Przezroczyste | Amazon | B078BNLSNP | Odpowiedni jest dowolny przezroczysty arkusz PVC o grubości od 0,150 mm do 0,180 mm |
| Samoprzylepna gąbka Podwójnie powlekana taśma piankowa | Amazon | B07RHDZ35J | Sprzedawane przez amazon jako 2 rolki dwustronnej taśmy piankowej, super mocna biała taśma montażowa Pianka |
| Przezroczyste naklejki uszczelniające (koła o średnicy 20 mm) | Amazonka | B01DAA6X66 |
Bibliografia
- Sonenshine, D. E., Roe, M. Biology of Ticks. , Oxford University Press. (2014).
- Kröber, T., Guerin, P. M. In vitro feeding assays for hard ticks. Trends in Parasitology. 23 (9), 445-449 (2007).
- Bonnet, S., et al.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
