Test ex vivo opisany w tym badaniu z wykorzystaniem ekstraktów homogenatu jelitowego i barwienia immunofluorescencyjnego stanowi nowatorską metodę badania morfogenezy strzępek Candida albicans w przewodzie pokarmowym. Metoda ta może być wykorzystana do badania sygnałów środowiskowych regulujących przemianę morfogenetyczną w jelitach.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Test ex vivo do badania morfogenezy strzępek Candida albicans w przewodzie pokarmowym
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Morfogeneza strzępek Candida albicans w przewodzie pokarmowym (GI) jest ściśle kontrolowana przez różne sygnały środowiskowe i odgrywa ważną rolę w rozprzestrzenianiu się i patogenezie tego oportunistycznego patogenu grzybowego. Jednak metody wizualizacji strzępek grzybów w przewodzie pokarmowym in vivo są trudne, co ogranicza zrozumienie sygnałów środowiskowych w kontrolowaniu tego procesu morfogenezy. Opisany tutaj protokół demonstruje nowatorską metodę ex vivo do wizualizacji morfogenezy strzępek w ekstraktach homogenatów jelitowych. Wykorzystując test ex vivo, badanie to pokazuje, że treść jelita ślepego u myszy leczonych antybiotykami, ale nie od nieleczonych myszy kontrolnych, sprzyja morfogenezie strzępek C. albicans w treści jelitowej. Co więcej, dodanie z powrotem określonych grup metabolitów jelitowych do treści jelita ślepego myszy leczonych antybiotykami w różny sposób reguluje morfogenezę strzępek ex vivo. Podsumowując, protokół ten stanowi nowatorską metodę identyfikacji i badania sygnałów środowiskowych, które kontrolują morfogenezę strzępek C. albicans w przewodzie pokarmowym.
Wprowadzenie
Candida albicans jest oportunistycznym, polimorficznym patogenem grzybiczym, który zwykle jest komensalny, ale może ulec zmianie morfologicznej do postaci zjadliwej, zdolnej do wywoływania zagrażających życiu infekcji u osób z obniżoną odpornością1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Wszystkie protokoły dotyczące zwierząt zostały zatwierdzone przez Midwestern University Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC), jak opisano wcześniej57. Instytucjonalny Komitet ds. Opieki i Wykorzystania Zwierząt na Uniwersytecie Środkowo-Zachodnim zatwierdził to badanie zgodnie z protokołem MWU IACUC #2894. Polityka MWU w zakresie opieki nad zwierzętami jest zgodna z Polityką Publicznej Służby Zdrowia (PHS) dotyczącą humanitarnej opieki i wykorzystywania zwierząt laboratoryjnych oraz zasadami określonymi w ustawie o dobrostanie zwierząt (AWA).
1. Standardowy protokół badania na myszach
- Użyj ....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Wyniki te, wraz z wcześniejszymi ustaleniami laboratorium Thangamaniego60, wskazują, że gdy C. albicans jest hodowany ex vivo w ekstraktach z homogenatów jelit pobranych z żołądka, jelita cienkiego i jelita grubego myszy z grupy kontrolnej oraz myszy leczonych antybiotykami, C. albicans zazwyczaj rozwija się w morfologii drożżakowej (Ryc. 1B). Jednakże, w przypadku hodowli w ekstrakcie z kątnicy myszy leczonych antybiotykami, C. albicans łat.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Opisana metoda przedstawia nowatorski sposób badania wpływu wpływu antybiotyków, diety, ksenobiotyków i terapii na morfogenezę strzępek C. albicans w przewodzie pokarmowym. Ponieważ większość zakażeń ogólnoustrojowych pochodzi z przewodu pokarmowego 21,22,23,24,25,26,27,28,29,30,31,32,33,34, a tworzenie strzępek jest krytycznym czynnikiem wirulencji, który sprzyja
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie mają konkurencyjnych interesów finansowych ani innych konfliktów interesów.
Podziękowania
Autorzy dziękują za zasoby i wsparcie ze strony ośrodka badawczego Midwestern University Cellular and Molecular Core Research.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| 1 - 10 &mikro; L Końcówki do pipet | Fisher Scientific | 02-707-454 | Misc |
| 100 - 1000 µ L Końcówki do pipet | Fisher Scientific | 02-707-400 | Różne |
| 20 - 200 &mikro; L Końcówki do pipet | Fisher Scientific | 02-707-451 | |
| Różne Kwas 2-metylomasłowy | Sigma | 193070-25G | związek hamujący działanie hipalne |
| 488 kozi anty-królik IgG | Invitrogen (Fisher) | A11008 | IF Barwienie wtórne ab |
| Agar | Fisher | BP1423-500 | Składnik agarowy YPD |
| Automatyczny mikroskop obrazowania | Keyence | BZX700 | |
| Candida Albicans Przeciwciało | Invitrogen (Fisher) | PA1-27158 | IF Barwienie pierwotne ab |
| cefoperazon | Kajman | 16113 | antybiotyk |
| kwas dezoksycholowy | Sigma | 30960 | związek hamujący działanie układu nasennego |
| D-Glukoza Fisher | D16-500 | złożone promujące działanie układu pokarmowego | |
| Fisher | 08-885 | ||
| Kwas mlekowy | Alfa Aesar | AAAL13242-06 | związek hamujący działanie kwasu |
| hipochalowego kwas litocholowy | Sigma | L6250-10G | związek hamujący działanie kwasu hifalicznego |
| kwas palmitynowy | Sigma | P5585-10G | związek hamujący działanie układu hifalicznego |
| Paraformaldehyd | Alfa Aesar | A11313 | IF Utrwalacz barwiący |
| Sól fizjologiczna buforowana fosforanami (PBS), 10x | Alfa Aesar | J62692 | PBS składnik |
| kwas p-tolilooctowy | SCBT | sc-257959 | związek hamujący działanie układu nasennego |
| kwas sebacynowy | Sigma | 283258-250G | związek hamujący działanie nasenne |
| nożyczki z ostrymi końcami | Fisher | 28301 | |
| sterylna woda Milli-Q | nie | nie dotyczy | Różne |
| YPD Bulion | BD Biosciences | 242810 | Składnik agarowy YPD |
Bibliografia
- Huffnagle, G. B., Noverr, M. C. The emerging world of the fungal microbiome. Trends in Microbiology. 21 (7), 334-341 (2013).
- Wisplinghoff, H., et al. Nosocomial bloodstream infections in US hospitals: analysis o....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
