Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Test ex vivo do badania morfogenezy strzępek Candida albicans w przewodzie pokarmowym

4.7K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/61488

⸱

1 lipca 2020

 ,  , 
1College of Veterinary Medicine, Midwestern University, 2Masters in Biomedical Science Program, College of Graduate Studies, Midwestern University, 3Department of Pathology and Population Medicine, College of Veterinary Medicine, Midwestern University

W tym artykule

Podsumowanie

Test ex vivo opisany w tym badaniu z wykorzystaniem ekstraktów homogenatu jelitowego i barwienia immunofluorescencyjnego stanowi nowatorską metodę badania morfogenezy strzępek Candida albicans w przewodzie pokarmowym. Metoda ta może być wykorzystana do badania sygnałów środowiskowych regulujących przemianę morfogenetyczną w jelitach.

Streszczenie

Morfogeneza strzępek Candida albicans w przewodzie pokarmowym (GI) jest ściśle kontrolowana przez różne sygnały środowiskowe i odgrywa ważną rolę w rozprzestrzenianiu się i patogenezie tego oportunistycznego patogenu grzybowego. Jednak metody wizualizacji strzępek grzybów w przewodzie pokarmowym in vivo są trudne, co ogranicza zrozumienie sygnałów środowiskowych w kontrolowaniu tego procesu morfogenezy. Opisany tutaj protokół demonstruje nowatorską metodę ex vivo do wizualizacji morfogenezy strzępek w ekstraktach homogenatów jelitowych. Wykorzystując test ex vivo, badanie to pokazuje, że treść jelita ślepego u myszy leczonych antybiotykami, ale nie od nieleczonych myszy kontrolnych, sprzyja morfogenezie strzępek C. albicans w treści jelitowej. Co więcej, dodanie z powrotem określonych grup metabolitów jelitowych do treści jelita ślepego myszy leczonych antybiotykami w różny sposób reguluje morfogenezę strzępek ex vivo. Podsumowując, protokół ten stanowi nowatorską metodę identyfikacji i badania sygnałów środowiskowych, które kontrolują morfogenezę strzępek C. albicans w przewodzie pokarmowym.

Wprowadzenie

Candida albicans jest oportunistycznym, polimorficznym patogenem grzybiczym, który zwykle jest komensalny, ale może ulec zmianie morfologicznej do postaci zjadliwej, zdolnej do wywoływania zagrażających życiu infekcji u osób z obniżoną odpornością1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13. C. albicans jest główną przyczyną ogólnoustrojowych zakażeń szpitalnych, ze śmiertelnością 40-60% nawet przy leczeniu przeciwgrzybiczym2,14,15. Chociaż C. albicans zamieszkuje różne nisze żywicielskie, w tym żeński układ rozrodczy16,17, jama ustna zdrowych osobników18 i przewód pokarmowy (GI)19,20, większość zakażeń ogólnoustrojowych pochodzi z przewodu pokarmowego, a ponadto często potwierdza się, że źródłem infekcji ogólnoustrojowej jest przewód pokarmowy21,22,23,24,25,26,27,28,29,30,31,32, 33,34. Na patogenność C. albicans w przewodzie pokarmowym wpływa wiele czynników; Jednak główną cechą niezbędną do zjadliwości jest przejście od morfologii komórek drożdży do morfologii zjadliwych komórek strzępkowych35,36,37,38,39,40,41,42,43,44. Przyczepianie się i rozprzestrzenianie C. albicans z przewodu pokarmowego podczas infekcji jest silnie związane z jego zdolnością do przekształcania się z drożdży komensalnych w zjadliwe strzępki, co pozwala grzybom na wywołanie choroby inwazyjnej44,45,46,47,48,49,50,51,52,53.

Różne czynniki w jelitach, w tym n-acetyloglukozamina, regulują tworzenie strzępek przez C. albicans. Dlatego tak ważne jest zawężenie luki w wiedzy na temat morfogenezy strzępek tego patogenu grzybowego w przewodzie pokarmowym 54,55,56. Najnowsze dowody wskazują, że różne metabolity jelitowe w różny sposób kontrolują morfogenezę strzępek C. albicans in vitro57,58,59,60. Jednak ograniczenia techniczne stwarzają problemy przy próbie zbadania tworzenia strzępek C. albicans w próbkach jelit in vivo, zwłaszcza barwienia komórek drożdży i strzępek oraz ilościowej analizy rozwoju strzępek. Aby zrozumieć morfogenezę strzępek C. albicans w przewodzie pokarmowym, opracowano metodę ex vivo z wykorzystaniem rozpuszczalnych ekstraktów o homogenizowanej zawartości jelitowej od myszy w celu zbadania wpływu metabolitów na morfogenezę strzępek grzybów. Wykorzystując próbki jelit od myszy, które są oporne i podatne na zakażenie C. albicans, metoda ta pomoże zidentyfikować i zbadać wpływ metabolitów, antybiotyków i ksenobiotyków na morfogenezę strzępek grzybów w przewodzie pokarmowym.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Wszystkie protokoły dotyczące zwierząt zostały zatwierdzone przez Midwestern University Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC), jak opisano wcześniej57. Instytucjonalny Komitet ds. Opieki i Wykorzystania Zwierząt na Uniwersytecie Środkowo-Zachodnim zatwierdził to badanie zgodnie z protokołem MWU IACUC #2894. Polityka MWU w zakresie opieki nad zwierzętami jest zgodna z Polityką Publicznej Służby Zdrowia (PHS) dotyczącą humanitarnej opieki i wykorzystywania zwierząt laboratoryjnych oraz zasadami określonymi w ustawie o dobrostanie zwierząt (AWA).

1. Standardowy protokół badania na myszach

  1. Użyj samców i samic myszy C57BL/6J w wieku co najmniej sześciu tygodni. Uzupełnij je sterylną wodą z cefoperazonem lub bez niego (0,5 mg/ml).
    1. Myszy trzymane razem w grupach po 5 sztuk, przy czym każda klatka zawiera wszystkie samce lub samice myszy. Przez cały czas dostarczaj myszom standardową karmę dla myszy i wodę (w butelce o pojemności 400 ml).
    2. Codziennie sprawdzaj klatki, aby upewnić się, że poziom pożywienia i wody jest wystarczający, a także badaj myszy pod kątem oznak niepokoju.
  2. Wodę z cefoperazonem należy wymieniać co 48 godzin, aby zapewnić dopływ świeżego antybiotyku niezależnie od pozostałej wody w butelkach do karmienia w klatce.
  3. Po 5-7 dniach leczenia cefoperazonem, należy poddać myszy eutanazji przez uduszenie CO2 zgodnie z ustalonym protokołem IACUC. Potwierdź zgon przez zwichnięcie szyjki macicy.
  4. Wypreparuj myszy za pomocą wysterylizowanych w autoklawie nożyczek z ostrymi końcami i kleszczy sterylizowanych w autoklawie.
    1. Po eutanazji przymocuj zwierzę do powierzchni preparacji, przypinając wszystkie kończyny tak, aby brzuch był odsłonięty.
    2. Spryskaj okolice brzucha 70% etanolem, aby zapobiec przywieraniu futra do kleszczy, nożyczek lub skrawków jelit podczas sekcji.
    3. Użyj kleszczy, aby uszczypnąć i podnieść fragment skóry u podstawy brzucha i wykonaj małe nacięcie przez skórę i leżącą pod nią powięź za pomocą nożyczek. Zachowaj szczególną ostrożność podczas wykonywania tego nacięcia, aby uniknąć przebicia jelita ślepego lub ściany jelita.
    4. Przedłuż to cięcie do klatki piersiowej, częściowo odsłaniając jamę otrzewnej. Wykonaj cięcie zaczynając od punktu początkowego nacięcia po obu stronach, rozciągając się w górę i na boki.
    5. Pociągnij te płaty na boki i przypnij do powierzchni preparucyjnej, aby całkowicie odsłonić jamę otrzewnej.
  5. Usuń przewód pokarmowy za pomocą kleszczy, jednocześnie używając nożyczek do wykonania nacięć nad żołądkiem i w dystalnym obszarze jelita grubego, aby zapewnić pobranie jak największej ilości treści jelitowej z każdej sekcji.
  6. Podczas usuwania przewodu pokarmowego należy uważać, aby nie doszło do pęknięcia poszczególnych elementów. Oddziel żołądek, jelito cienkie, jelito ślepe i jelito grube indywidualnie za pomocą nożyczek na ich bliższych i dalszych końcach.
  7. Aby pobrać każdą zawartość jelita z każdej sekcji, wykonaj pojedyncze nacięcie na dystalnym końcu każdej sekcji za pomocą nożyczek, a następnie ręcznie wyrzuć zawartość jelita do probówki mikrowirówkowej o pojemności 1,5 ml za pomocą kleszczy.
  8. Zawartość jelit należy przechowywać w temperaturze -80 °C do testów ex vivo.

2. Przygotowanie płytek agarowych z ekstraktem drożdżowym, peptonem i dekstrozą (YPD)

  1. Do szklanej butelki o pojemności 1 l dodaj 25 g ekstraktu drożdżowego w postaci bulionu peptonowo-dekstrozowego w proszku, 10 g agaru i ultraczystą wodę do końcowej objętości 500 ml.
  2. Autoklaw w temperaturze 121 °C przez 30 minut w cyklu płynnym w celu sterylizacji pożywki.
  3. Pod okapem z przepływem laminarnym wlej około 20 ml podłoża agarowego do sterylnej płytki Petriego. 500 ml podłoża agarowego powinno dać około 25 płytek.
  4. Przechowywać płytki w temperaturze 4 °C do momentu przygotowania do użycia.

3. Przygotowanie ex vivo do testu morfogenezy strzępek

  1. Świeżą kulturę C. albicans SC5314 rozmieścić na płytce agarowej YPD i inkubować przez noc w temperaturze 30 °C.
  2. Wybierz dwie do trzech średniej wielkości indywidualnych kolonii z wyhodowanej przez noc kultury C. albicans SC5314 i ponownie zawiesić w 1 ml soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (PBS).
  3. Wyjmij zamrożoną zawartość jelit z zamrażarki w temperaturze -80 °C i rozmroź w temperaturze 25 °C.
  4. Zważ około 150 mg treści jelitowej do nowej probówki o pojemności 1,5 ml.
  5. Ponownie zawiesić zawartość jelitową w 150 μl PBS (zawartość jelit i PBS w stosunku wagowym 1:1 do objętości).
  6. Wiruj z dużą prędkością przez 30 sekund, aby ujednorodnić zawartość jelit i pozostaw w temperaturze pokojowej na około minutę.
  7. Odwirować homogenaty przy 1000 x g przez 3 min.
  8. Przenieść supernatant do nowej probówki o pojemności 1,5 ml.
  9. Powtórzyć kroki 3.7 i 3.8, aby usunąć wszystkie zanieczyszczenia z supernatantu.
  10. Dodać 10 μl inokulum C. albicans SC5314 przygotowanego powyżej do tego supernatantu
  11. Dobrze wymieszać i inkubować w temperaturze 37 °C przez 4-5 godzin.

4. Egzogenne dodawanie metabolitów do ekstraktów homogenatu jelitowego do badania morfogenezy strzępek

  1. Pobrać zamrożoną zawartość jelit z zamrażarki o temperaturze -80 °C i ponownie zawiesić w PBS w stosunku 1:1 (waga: objętość).
  2. Dodaj pożądane stężenie metabolitów jelitowych do treści jelitowej i mieszaniny PBS.
  3. Wirować z dużą prędkością przez 30 s w celu homogenizacji treści jelitowej zawierającej metabolity i pozostawić w temperaturze pokojowej na około 10 minut.
  4. Odwirować homogenaty przy 1000 x g przez 3 min.
  5. Przenieść supernatant do nowej probówki o pojemności 1,5 ml. Powtórzyć kroki 4.4 i 4.5, aby usunąć wszystkie zanieczyszczenia z supernatantu.
  6. Dodać 10 μl inokulum C. albicans SC5314 przygotowanego powyżej do tego supernatantu. Dobrze wymieszać i inkubować w temperaturze 37 °C przez 4-5 godzin.

5. Test morfogenezy C. albicans (barwienie immunologiczne i obrazowanie)

  1. Odwirować próbki o masie 1000 x g przez 2 minuty i odrzucić supernatant przez pipetowanie.
  2. Utrwalić próbki w 100 μl 2% paraformaldehydu (PFA) przez 15 minut.
  3. Odwirować przy 1000 x g przez 2 minuty i odrzucić supernatant przez pipetowanie.
  4. Próbki należy przemyć dwukrotnie 1 ml PBS. Aby umyć próbki, należy ponownie zawiesić osad w PBS, delikatnie pipetując. Nie należy wirować próbki, ponieważ może to uszkodzić struktury strzępek. Po ponownym zawieszeniu odwirować przy 1000 x g przez 2 minuty i odrzucić supernatant przez pipetowanie.
  5. Próbki inkubować w temperaturze pokojowej w 100 μl PBS zawierającego poliklonalne przeciwciało C. albicans (rozcieńczenie 1:100) przez 30 minut.
  6. Przemyć próbki trzykrotnie 1 ml PBS.
    UWAGA: W przypadku stosowania przeciwciała fluorescencyjnego zaleca się, aby wszystkie etapy rozcieńczania i mycia były wykonywane w słabym świetle, aby uniknąć wybielania fotograficznego i wydłużyć żywotność próbki.
  7. Próbki inkubować w temperaturze pokojowej przez 15 minut w 100 μl PBS zawierającego przeciwciało anty-IgG IgG Alexafluor 488 w rozcieńczeniu 1:500. Wykonaj inkubację w ciemnej szufladzie lub pokoju, aby uniknąć wybielania zdjęć.
  8. Umyć próbki trzykrotnie 1 ml PBS.
  9. Ponownie zawiesić próbki w 100 μl PBS i przenieść na 96-dołkową płytkę w celu obrazowania.
    UWAGA: Gdy nie jest obrazowana, zaleca się, aby 96-dołkowa płytka była owinięta folią aluminiową, aby uniknąć wybielania fotograficznego.
  10. Obrazuj komórki grzybów za pomocą soczewek obiektywowych 20x i 40x za pomocą mikroskopu obrazowania fluorescencyjnego. Użyj filtra z zielonym białkiem fluorescencyjnym (GFP) (długość fali wzbudzenia 470/40 i długość fali emisji 525/50) do wykrywania fluorescencji.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Wyniki te, wraz z wcześniejszymi ustaleniami laboratorium Thangamaniego60, wskazują, że gdy C. albicans jest hodowany ex vivo w ekstraktach z homogenatów jelit pobranych z żołądka, jelita cienkiego i jelita grubego myszy z grupy kontrolnej oraz myszy leczonych antybiotykami, C. albicans zazwyczaj rozwija się w morfologii drożżakowej (Ryc. 1B). Jednakże, w przypadku hodowli w ekstrakcie z kątnicy myszy leczonych antybiotykami, C. albicans łat...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Opisana metoda przedstawia nowatorski sposób badania wpływu wpływu antybiotyków, diety, ksenobiotyków i terapii na morfogenezę strzępek C. albicans w przewodzie pokarmowym. Ponieważ większość zakażeń ogólnoustrojowych pochodzi z przewodu pokarmowego 21,22,23,24,25,26,27,28,29,30,31,32,33,34, a tworzenie strzępek jest krytycznym czynnikiem wirulencji, który sprzyja

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy nie mają konkurencyjnych interesów finansowych ani innych konfliktów interesów.

Podziękowania

Autorzy dziękują za zasoby i wsparcie ze strony ośrodka badawczego Midwestern University Cellular and Molecular Core Research.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
1 - 10 &mikro; L Końcówki do pipetFisher Scientific02-707-454Misc
100 - 1000 µ L Końcówki do pipetFisher Scientific02-707-400Różne
20 - 200 &mikro; L Końcówki do pipetFisher Scientific02-707-451
Różne Kwas 2-metylomasłowySigma193070-25Gzwiązek hamujący działanie hipalne
488 kozi anty-królik IgGInvitrogen (Fisher)A11008IF Barwienie wtórne ab
AgarFisherBP1423-500Składnik agarowy YPD
Automatyczny mikroskop obrazowaniaKeyenceBZX700
Candida Albicans PrzeciwciałoInvitrogen (Fisher)PA1-27158IF Barwienie pierwotne ab
cefoperazonKajman16113antybiotyk
kwas dezoksycholowySigma30960związek hamujący działanie układu nasennego
D-Glukoza FisherD16-500złożone promujące działanie układu pokarmowego
Fisher08-885
Kwas mlekowyAlfa AesarAAAL13242-06związek hamujący działanie kwasu
hipochalowego kwas litocholowySigmaL6250-10Gzwiązek hamujący działanie kwasu hifalicznego
kwas palmitynowySigmaP5585-10Gzwiązek hamujący działanie układu hifalicznego
ParaformaldehydAlfa AesarA11313IF Utrwalacz barwiący
Sól fizjologiczna buforowana fosforanami (PBS), 10xAlfa AesarJ62692PBS składnik
kwas p-tolilooctowySCBTsc-257959związek hamujący działanie układu nasennego
kwas sebacynowySigma283258-250Gzwiązek hamujący działanie nasenne
nożyczki z ostrymi końcamiFisher28301
sterylna woda Milli-Qnienie dotyczyRóżne
YPD BulionBD Biosciences242810Składnik agarowy YPD
kleszcze dotyczy

Bibliografia

  1. Huffnagle, G. B., Noverr, M. C. The emerging world of the fungal microbiome. Trends in Microbiology. 21 (7), 334-341 (2013).
  2. Wisplinghoff, H., et al. Nosocomial bloodstream infections in US hospitals: analysis of 24,179 cases from a prospective nationwide surveillance study. Clinical Infectious Diseases. 39 (3), 309-317 (2004).
  3. Hajjeh, R. A., et al. Incidence of Bloodstream Infections Due to Candida Species and In Vitro Susceptibilities of Isolates Collected from 1998 to 2000 in a Population-based Active Surveillance Program. Journal of Clinical Microbiology. 42 (4), 1519-1527 (2004).
  4. Lockhart, S. R., et al. Species Identification and Antifungal Susceptibility Testing of Candida Bloodstream Isolates from Population-Based Surveillance Studies in Two U.S. Cities from 2008 to 2011. Journal of Clinical Microbiology. 50 (11), 3435-3442 (2012).
  5. Pfaller, M., et al. Epidemiology and outcomes of candidemia in 3648 patients: data from the Prospective Antifungal Therapy (PATH Alliance(R)) registry, 2004-2008. Diagnostic Microbiology and Infectious Disease. 74 (4), 323-331 (2012).
  6. Angarone, M. Fungal infections in cancer patients. Cancer Treatment and Research. 161, 129-155 (2014).
  7. Brown, G. D., et al. Hidden killers: human fungal infections. Science Translational Medicine. 4 (165), 113(2012).
  8. Calton, E. A., et al. Invasive bacterial and fungal infections in paediatric patients with cancer: incidence, risk factors, aetiology and outcomes in a UK regional cohort 2009-2011. Pediatric Blood & Cancer. 61 (7), 1239-1245 (2014).
  9. Carter, J. H., et al. Medical management of invasive fungal infections of the central nervous system in pediatric cancer patients. Pediatric Blood & Cancer. 62 (6), 1095-1098 (2015).
  10. Low, C. Y., Rotstein, C. Emerging fungal infections in immunocompromised patients. F1000 Medicine Reports. 3, 14(2011).
  11. Mousset, S., et al. Treatment of invasive fungal infections in cancer patients-updated recommendations of the Infectious Diseases Working Party (AGIHO) of the German Society of Hematology and Oncology (DGHO). Annals of Hematology. 93 (1), 13-32 (2014).
  12. Perfect, J. R., Hachem, R., Wingard, J. R. Update on epidemiology of and preventive strategies for invasive fungal infections in cancer patients. Clinical Infectious Diseases. 59, Suppl 5 352-355 (2014).
  13. Sipsas, N. V., Kontoyiannis, D. P. Invasive fungal infections in patients with cancer in the Intensive Care Unit. International Journal of Antimicrobial Agents. 39 (6), 464-471 (2012).
  14. Falagas, M. E., Apostolou, K. E., Pappas, V. D. Attributable mortality of candidemia: a systematic review of matched cohort and case-control studies. European Journal of Clinical Microbiology and Infectious Diseases. 25 (7), 419-425 (2006).
  15. Chi, H. W., et al. Candida albicans versus non-albicans bloodstream infections: the comparison of risk factors and outcome. Journal of Microbiology, Immunology and Infection. 44 (5), 369-375 (2011).
  16. Drell, T., et al. Characterization of the vaginal micro- and mycobiome in asymptomatic reproductive-age Estonian women. PLoS One. 8 (1), 54379(2013).
  17. Merenstein, D., et al. Colonization by Candida species of the oral and vaginal mucosa in HIV-infected and noninfected women. AIDS Research and Human Retroviruses. 29 (1), 30-34 (2013).
  18. Ghannoum, M. A., et al. Characterization of the oral fungal microbiome (mycobiome) in healthy individuals. PLoS Pathogens. 6 (1), 1000713(2010).
  19. Hoffmann, C., et al. Archaea and fungi of the human gut microbiome: correlations with diet and bacterial residents. PLoS One. 8 (6), 66019(2013).
  20. Noble, S. M., Gianetti, B. A., Witchley, J. N. Candida albicans cell-type switching and functional plasticity in the mammalian host. Nature Reviews Microbiology. 15 (2), 96-108 (2017).
  21. Samonis, G., et al. Prospective evaluation of effects of broad-spectrum antibiotics on gastrointestinal yeast colonization of humans. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 37 (1), 51-53 (1993).
  22. Sahni, V., et al. Candidemia--an under-recognized nosocomial infection in Indian hospitals. The Journal of the Association of Physicians of India. 53, 607-611 (2005).
  23. Meijer-Severs, G. J., Joshi, J. H. The effect of new broad-spectrum antibiotics on faecal flora of cancer patients. Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 24 (4), 605-613 (1989).
  24. Kennedy, M. J., Volz, P. A., Edwards, C. A., Yancey, R. J. Mechanisms of association of Candida albicans with intestinal mucosa. Journal of Medical Microbiology. 24 (4), 333-341 (1987).
  25. Miranda, L. N., et al. Candida colonisation as a source for candidaemia. Journal of Hospital Infections. 72 (1), 9-16 (2009).
  26. Nucci, M., Anaissie, E. Revisiting the source of candidemia: skin or gut. Clinical Infectious Diseases. 33 (12), 1959-1967 (2001).
  27. Raponi, G., Visconti, V., Brunetti, G., Ghezzi, M. C. Clostridium difficile infection and Candida colonization of the gut: is there a correlation. Clinical Infectious Diseases. 59 (11), 1648-1649 (2014).
  28. Guastalegname, M., Russo, A., Falcone, M., Giuliano, S., Venditti, M. Candidemia subsequent to severe infection due to Clostridium difficile: is there a link. Clinical Infectious Diseases. 57 (5), 772-774 (2013).
  29. Nerandzic, M. M., Mullane, K., Miller, M. A., Babakhani, F., Donskey, C. J. Reduced acquisition and overgrowth of vancomycin-resistant enterococci and Candida species in patients treated with fidaxomicin versus vancomycin for Clostridium difficile infection. Clinical Infectious Diseases. 55, Suppl 2 121-126 (2012).
  30. Krause, R., Krejs, G. J., Wenisch, C., Reisinger, E. C. Elevated fecal Candida counts in patients with antibiotic-associated diarrhea: role of soluble fecal substances. Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 10 (1), 167-168 (2003).
  31. Krause, R., et al. Role of Candida in antibiotic-associated diarrhea. The Journal of Infectious Diseases. 184 (8), 1065-1069 (2001).
  32. Zuo, T., et al. Gut fungal dysbiosis correlates with reduced efficacy of fecal microbiota transplantation in Clostridium difficile infection. Nature Communications. 9 (1), 3663(2018).
  33. Delaloye, J., Calandra, T. Invasive candidiasis as a cause of sepsis in the critically ill patient. Virulence. 5 (1), 161-169 (2014).
  34. Cole, G. T., Halawa, A. A., Anaissie, E. J. The role of the gastrointestinal tract in hematogenous candidiasis: from the laboratory to the bedside. Clinical Infectious Diseases. 22, Suppl 2 73-88 (1996).
  35. Lo, H. J., et al. Nonfilamentous C. albicans mutants are avirulent. Cell. 90 (5), 939-949 (1997).
  36. Gale, C. A., et al. Linkage of adhesion, filamentous growth, and virulence in Candida albicans to a single gene, INT1. Science. 279 (5355), 1355-1358 (1998).
  37. Bendel, C. M., et al. Systemic infection following intravenous inoculation of mice with Candida albicans int1 mutant strains. Molecular genetics and metabolism. 67 (4), 343-351 (1999).
  38. Toenjes, K. A., et al. Small-molecule inhibitors of the budded-to-hyphal-form transition in the pathogenic yeast Candida albicans. Antimicrobial agents and chemotherapy. 49 (3), 963-972 (2005).
  39. Carlisle, P. L., et al. Expression levels of a filament-specific transcriptional regulator are sufficient to determine Candida albicans morphology and virulence. Proceedings of the National Academy of Sciences. 106 (2), 599-604 (2009).
  40. Fazly, A., et al. Chemical screening identifies filastatin, a small molecule inhibitor of Candida albicans adhesion, morphogenesis, and pathogenesis. Proceedings of the National Academy of Sciences. 110 (33), 13594-13599 (2013).
  41. Pande, K., Chen, C., Noble, S. M. Passage through the mammalian gut triggers a phenotypic switch that promotes Candida albicans commensalism. Nature genetics. 45 (9), 1088(2013).
  42. Bar-Yosef, H., Gonzalez, N. V., Ben-Aroya, S., Kron, S. J., Kornitzer, D. Chemical inhibitors of Candida albicans hyphal morphogenesis target endocytosis. Scientific reports. 7 (1), 5692(2017).
  43. Mendelsohn, S., Pinsky, M., Weissman, Z., Kornitzer, D. Regulation of the Candida albicans hypha-inducing transcription factor Ume6 by the CDK1 cyclins Cln3 and Hgc1. mSphere. 2 (2), 00248(2017).
  44. Vila, T., et al. Targeting Candida albicans filamentation for antifungal drug development. Virulence. 8 (2), 150-158 (2017).
  45. Pande, K., Chen, C., Noble, S. M. Passage through the mammalian gut triggers a phenotypic switch that promotes Candida albicans commensalism. Nature Genetics. 45 (9), 1088-1091 (2013).
  46. Lo, H. J., et al. Nonfilamentous C. albicans mutants are avirulent. Cell. 90 (5), 939-949 (1997).
  47. Bar-Yosef, H., Vivanco Gonzalez, N., Ben-Aroya, S., Kron, S. J., Kornitzer, D. Chemical inhibitors of Candida albicans hyphal morphogenesis target endocytosis. Scientific Reports. 7 (1), 5692(2017).
  48. Carlisle, P. L., et al. Expression levels of a filament-specific transcriptional regulator are sufficient to determine Candida albicans morphology and virulence. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (2), 599-604 (2009).
  49. Mendelsohn, S., Pinsky, M., Weissman, Z., Kornitzer, D. Regulation of the Candida albicans Hypha-Inducing Transcription Factor Ume6 by the CDK1 Cyclins Cln3 and Hgc1. mSphere. 2 (2), (2017).
  50. Bendel, C. M., et al. Effects of Alteration of the Candida albicans Gene INT1 on Cecal Colonization in Orally Innoculated Mice. Pediatric Research. 45, 156(1999).
  51. Gale, C. A., et al. Linkage of adhesion, filamentous growth, and virulence in Candida albicans to a single gene, INT1. Science. 279 (5355), 1355-1358 (1998).
  52. Toenjes, K. A., et al. Small-molecule inhibitors of the budded-to-hyphal-form transition in the pathogenic yeast Candida albicans. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 49 (3), 963-972 (2005).
  53. Fazly, A., et al. Chemical screening identifies filastatin, a small molecule inhibitor of Candida albicans adhesion, morphogenesis, and pathogenesis. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (33), 13594-13599 (2013).
  54. Naseem, S., Gunasekera, A., Araya, E., Konopka, J. B. N-acetylglucosamine (GlcNAc) induction of hyphal morphogenesis and transcriptional responses in Candida albicans are not dependent on its metabolism. Journal of Biological Chemistry. 286 (33), 28671-28680 (2011).
  55. Piispanen, A. E., Hogan, D. A. PEPped up: induction of Candida albicans virulence by bacterial cell wall fragments. Cell Host & Microbe. 4 (1), 1-2 (2008).
  56. Xu, X. L., et al. Bacterial peptidoglycan triggers Candida albicans hyphal growth by directly activating the adenylyl cyclase Cyr1p. Cell Host & Microbe. 4 (1), 28-39 (2008).
  57. Guinan, J., Thangamani, S. Antibiotic-induced alterations in taurocholic acid levels promote gastrointestinal colonization of Candida albicans. FEMS microbiology letters. 365 (18), (2018).
  58. Guinan, J., Villa, P., Thangamani, S. Secondary bile acids inhibit Candida albicans growth and morphogenesis. Pathogens and disease. 76 (3), (2018).
  59. Guinan, J., Wang, S., Hazbun, T. R., Yadav, H., Thangamani, S. Antibiotic-induced decreases in the levels of microbial-derived short-chain fatty acids correlate with increased gastrointestinal colonization of Candida albicans. Scientific Reports. 9 (1), 1-11 (2019).
  60. Gutierrez, D., et al. Antibiotic-induced gut metabolome and microbiome alterations increase the susceptibility to Candida albicans colonization in the gastrointestinal tract. FEMS microbiology ecology. 96 (1), 187(2020).
  61. Witchley, J. N., et al. Candida albicans morphogenesis programs control the balance between gut commensalism and invasive infection. Cell Host & Microbe. 25 (3), 432-443 (2019).
  62. Witchley, J. N., Penumetcha, P. M., Noble, S. M. Visualization of Candida albicans in the Murine Gastrointestinal Tract Using Fluorescent In Situ Hybridization. JoVE (Journal of Visualized Experiments). (153), e60283(2019).
  63. Johansson, M. E., Hansson, G. C. Preservation of mucus in histological sections, immunostaining of mucins in fixed tissue, and localization of bacteria with FISH. Mucins. , Springer. 229-235 (2012).
  64. Lossinsky, A. S., et al. The histopathology of Candida albicans invasion in neonatal rat tissues and in the human blood-brain barrier in culture revealed by light, scanning, transmission and immunoelectron microscopy scanning. Histology and histopathology. , (2006).
  65. Rosenbach, A., Dignard, D., Pierce, J. V., Whiteway, M., Kumamoto, C. A. Adaptations of Candida albicans for growth in the mammalian intestinal tract. Eukaryotic Cell. 9, 1075-1086 (2010).
  66. Vautier, S., et al. C andida albicans colonization and dissemination from the murine gastrointestinal tract: the influence of morphology and T h17 immunity. Cellular Microbiology. 17, 445-450 (2015).
  67. Lyman, C., Navarro, E., Garrett, K., Roberts, D., Pizzo, P., Walsh, T. Adherence of Candida albicans to bladder mucosa: development and application of a tissue explant assay. Mycoses. 42, 255-259 (1999).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Metabolity jelitowezawarto k tnicymyszy leczone antybiotykamimikroskopia fluorescencyjnahodowla kom rek grzybiczychekstrakty z homogenat w jelitowych
Test ex vivo do badania morfogenezy strzępek Candida albicans w przewodzie pokarmowym
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki korzystania z usługi

Zasady

Prawa autorskie © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.