Przewidywanie amputacji przy użyciu miejscowo krążących jednojądrzastych komórek progenitorowych u pacjentów leczonych angioplastyką z krytycznym niedokrwieniem kończyn

Summary

Amputacja kończyny dolnej może wystąpić nawet po angioplastyce niedrożnych naczyń w krytycznym niedokrwieniu kończyn (CLI). Jednojądrzaste komórki progenitorowe (MPC) odzwierciedlają naprawę naczyń krwionośnych. Niniejszy protokół opisuje kwantyfikację MPC z krążenia zbliżonego do angioplastyki oraz jej związek z dysfunkcją śródbłonka i przewidywaniem amputacji kończyny dolnej.

Abstract

Krytyczne niedokrwienie kończyn (CLI) reprezentuje zaawansowane stadium choroby tętnic obwodowych. Angioplastyka poprawia przepływ krwi do kończyny dolnej; Jednak u niektórych pacjentów nieodwracalnie dochodzi do amputacji kończyny. Stopień uszkodzenia naczyń krwionośnych i mechanizmy naprawy naczyń są czynnikami wpływającymi na wynik po angioplastyce. Jednojądrzaste komórki progenitorowe (MPC) reagują na uszkodzenia i naprawę naczyń krwionośnych, ze zdolnością do odzwierciedlania chorób naczyniowych. Niniejszy protokół opisuje ilościowe określenie MPC uzyskane z krążenia krwi z naczynia w pobliżu miejsca angioplastyki, a także jego związek z dysfunkcją śródbłonka i jego zdolność predykcyjną do amputacji kończyny w ciągu najbliższych 30 dni po angioplastyce u pacjentów z CLI.

Introduction

Choroba tętnic obwodowych (PAD) charakteryzuje się przewlekłą i postępującą niedrożnością naczyń krwionośnych z ograniczeniem dopływu krwi¹. W skali globalnej PAD kończyn dolnych dotyka około 10% populacji osób starszych, podczas gdy do 7% takich przypadków jest zgłaszanych do amputacji kończyn^2,3.

Krytyczne niedokrwienie kończyn (CLI) reprezentuje najpoważniejszą prezentację PAD¹. Pacjenci zwykle odczuwają ból w spoczynku, owrzodzenia lub zgorzel związane z niedrożnymi tętnicami; Podczas gdy rokowanie kliniczne jest niekorzystne i cha....

Protocol

Instytucjonalna komisja etyki badań z Centro Médico Nacional "20 de Noviembre" ISSSTE zatwierdziła ten prospektywny protokół, wszyscy zapisani pacjenci wyrazili pisemną świadomą zgodę.

1. Ocena bloku naczyniowego kończyny dolnej, pobieranie krwi i angioplastyka balonowa

UWAGA: Próba badawcza użyta do tego eksperymentu składała się z 20 pacjentów z cukrzycą, w wieku 68 lat, a 10 z 20 było mężczyznami. Połowę próby stanowili palacze, a najczęstszymi chorobami współistniejącymi była cukrzyca typu 2, układowe nadciśnienie tętnicze i/lub dyslipidemia. Próbka miała być standaryzowana pod kątem wieku, płci i chorób współi....

Results

Próbki krwi z zablokowanych tętnic, w miejscu przeznaczonym do angioplastyki, pobrano od 20 pacjentów z cukrzycą, w wieku 68 lat, z czego 10 z 20 to mężczyźni. Połowę badanej populacji stanowili palacze. Zmiany naczyniowe oceniano głównie jako VI klasę Rutherforda; natomiast pacjenci wykazywali większą częstość występowania cukrzycy typu 2 (100%), nadciśnienia tętniczego (70%) i dyslipidemii (55%).

30-dniowa obserwacja kliniczna po przeprowadzeniu angioplastyki kończyn dolnych. Odsetek subpopu.......

Discussion

Pobranie krwi w dokładnym miejscu bloku naczyniowego może wykazywać trudności techniczne; W związku z tym przeprowadziliśmy pobranie krwi w pobliżu bloku naczyniowego. Podobnie, ilość MPC w pobliżu blaszki naczyniowej wydaje się być bardzo dynamiczna i może powodować zmiany przed i po angioplastyce. Zgodnie z naszymi obserwacjami zaleca się ocenę zmian liczby MPC po angioplastyce w okresie wyjściowym i 30 minut po angioplastyce, ponieważ mogą one odzwierciedlać kilka procesów patofizjologicznych zachodzących w obrębie us.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
BSA	Roche	10735086001	albuminę surowicy bydlęcej (BSA) jako środek buforujący, stabilizator, wzorzec i do mieszania.
Kulki kalibracyjne	Miltenyi Biotec / MACS	#130-093-607	Kulki kalibracyjne MACQuant są dostarczane w roztworze wodnym zawierającym 0,05% azydku sodu. 3,5 ml na maksymalnie 100 testów
CD133/1 (AC133)-PE	Milteny Biotec / MACS#	130-080-801	Przeciwciało sprzężone z R-fikoerytryną w buforze PBS/EDTA
(CXCR4)-PE-VIO770	Miltenyi Biotec / MACS#	130-103-798	Monoklonalne, rekombinowane izotypowo ludzkie IgG1, sprzężone
CD309 (VEGFR-2/KDR)-APC	Miltenyi Biotec / MACS#	130-093-601	Przeciwciało sprzężone z R-fikoerytryną w buforze PBS/
EDTA CD34-FITC	Miltenyi Biotec / MACS#	130-081-001	Klon przeciwciała monoklonalnego AC136 wykrywa epitop klasy III CD34
CD45- VioBlue	Miltenyi Biotec / MACS#	130-092-880	Przeciwciało monoklonalne CD45, ludzkie sprzężone
Probówki stożkowe	Thermo SCIENTIFIC	#339651	15ml stożkowe probówki wirówkowe
Probówki cytometryczne	FALCON Corning Marka	#352052	5 ml probówka z okrągłym dnem z polistyrenu. Styl 12x75. Sterylny.
EDTA	BIO-RAD	#161-0729	Metale ciężkie, (jako Pb) < 10ppm, Fe< 0,01%, As< 1ppm, Nierozpuszczalne< 0,005%
Ulepszony Neubauer	Bez marki	Bez numeru katalogowego	Hemocytometr do zliczania komórek. (zakres 0,1000mm, 0,0025mm2)
Probówki do pobierania krwi K2 EDTA	BD Vacutainer	#367863	Liliowa plastikowa rurka próżniowa (K2E) 10,8 mg, 6 mL.
Lymphoprep	Stemcell Technologies	01-63-12-002-A	Sterylne i sprawdzone na obecność endotoksyn. Gęstość: 1,077 plusmn; 0,001 g / ml
Paraformaldehyd	SIGMA-ALDRICH		Utrwalanie próbek biologicznych, (proszek, 95%)
Transfer pipetą 1,3mL	CRM Globe	PF1016, PF1015	Pipeta transferowa to narzędzie, które ułatwia przenoszenie cieczy z większą dokładnością.
Probówki	KIMBLE CHASE	45060 13100	Probówki żaroodporne. ROZMIAR/NAKRĘTKA 13 x 100 mm