Artykuł metodologiczny

Wszechstronny zestaw oparty na cyfrowym uruchamianiu kropelkowym mikrofluidyki do nauczania przedmiotów ścisłych

DOI:

10.3791/61978

26 kwietnia 2021

W tym artykule

Podsumowanie

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Opisujemy zestaw edukacyjny, który pozwala użytkownikom przeprowadzać wiele eksperymentów i zdobywać praktyczne doświadczenie w zakresie cyfrowej mikrofluidyki.

Streszczenie

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ten artykuł opisuje zestaw edukacyjny oparty na cyfrowej mikrofluidyce. Jako konkretny przykład podano protokół eksperymentu chemiluminescencji na bazie luminolu. Posiada również możliwość obrazowania fluorescencyjnego i zamkniętą wilgotną obudowę opartą na rozpylacza ultradźwiękowym, aby zapobiec parowaniu. Zestaw można zmontować w krótkim czasie i przy minimalnym przeszkoleniu w zakresie elektroniki i. Zestaw pozwala zarówno studentom studiów licencjackich/magisterskich, jak i entuzjastom w intuicyjny sposób zdobyć praktyczne doświadczenie w mikrofluidyce i zostać przeszkolonym w zakresie zapoznania się z cyfrową mikrofluidyką.

Wprowadzenie

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Mikrofluidyka to wysoce interdyscyplinarna dziedzina łącząca fizykę, chemię, biologię i inżynierię do manipulowania małymi objętościami płynów, od femtolitrów do mikrolitrów1. Mikrofluidyka jest również bardzo szeroką i aktywną dziedziną; Wyszukiwanie w Web of Science zwraca prawie 20 000 publikacji, ale nie ma wystarczającej ilości literatury i prac przeglądowych na temat wykorzystania mikrofluidyki jako narzędzia edukacyjnego2. Istnieją dwa wnikliwe, choć przestarzałe artykuły przeglądowe autorstwa Legge i Fintschenko3,4. Legge zapoznaje nauczycieli z ideą laboratorium na chipie3. Fintschenko zwrócił uwagę na rolę laboratorium nauczania mikrofluidyki w nauczaniu nauk ścisłych, technologii, inżynierii, matematyki (STEM) i uprościł filozofie do "nauczaj mikrofluidyki" i "używaj mikrofluidyki"4. Nowsza recenzja przeprowadzona przez Rackusa, Ridela-Kruse'a i Pamme'a w 2019 roku wskazuje, że mikrofluidyka jest nie tylko interdyscyplinarna z natury, ale także bardzo praktycznym tematem2. Praktyczna aktywność związana z praktyką mikrofluidyki umożliwia uczniom uczenie się oparte na dociekaniu i sprawia, że jest to angażujące narzędzie do komunikacji naukowej i popularyzacji. Mikrofluidyka rzeczywiście oferuje duży potencjał w nauczaniu przedmiotów ścisłych zarówno w środowisku formalnym, jak i nieformalnym, a także jest idealnym "narzędziem" do zachwycenia i edukowania ogółu społeczeństwa na temat interdyscyplinarnego aspektu nowoczesnych nauk.

Przykłady takie jak tanie urządzenia mikrokanałowe, mikrofluidyka papierowa i mikrofluidyka cyfrowa są idealnymi narzędziami do celów edukacyjnych. Wśród tych platform, cyfrowa mikrofluidyka pozostaje ezoteryczna, a recenzowane raporty oparte na cyfrowej mikrofluidyce nie są dostępne2. W tym miejscu proponujemy wykorzystanie mikrofluidyki cyfrowej jako narzędzia edukacyjnego z kilku powodów. Po pierwsze, mikrofluidyka cyfrowa bardzo różni się od paradygmatu opartego na mikrokanałach, ponieważ opiera się na manipulacji kropelkami i wykorzystaniu kropel jako dyskretnych mikronaczyń. Po drugie, kropelkami manipuluje się na stosunkowo ogólnych platformach elektrodowych, dzięki czemu cyfrowa mikrofluidyka może być ściśle powiązana z mikroelektroniką. Użytkownicy mogą korzystać z rozszerzonego zestawu komponentów elektronicznych, które są teraz łatwo dostępne dla aplikacji typu "zrób to sam" w celu elektronicznego łączenia się z kropelkami. W związku z tym twierdzimy, że cyfrowa mikrofluidyka może pozwolić uczniom doświadczyć tych unikalnych aspektów i być otwartymi, aby nie trzymać się mikrofluidyki opartej na mikrokanałach o niskiej liczbie Reynolda1.

Krótko mówiąc, dziedzina mikrofluidyki cyfrowej opiera się głównie na zjawisku elektrozwilżania, które po raz pierwszy opisał Gabriel Lippmann5,6. Ostatnie zmiany zostały zainicjowane przez Berge na początku lat 907. Jego kluczowym wkładem jest pomysł wprowadzenia cienkiego izolatora do oddzielania cieczy przewodzącej od metalowych elektrod w celu wyeliminowania problemu elektrolizy. Idea ta została określona jako elektrozwilżanie na dielektryku (EWOD). Następnie cyfrowa mikrofluidyka została spopularyzowana przez kilku pionierskich badaczy8,9. Teraz obszerna lista zastosowań, na przykład w diagnostyce klinicznej, chemii i biologii, została sprawdzona w cyfrowej mikrofluidyce10,11,12, a zatem dostępnych jest wiele przykładów dla środowiska edukacyjnego. W szczególności, zgodnie z linią tanich cyfrowych mikrofluidyków typu "zrób to sam", Abdelgawad i Wheeler wcześniej informowali o tanim, szybkim prototypowaniu cyfrowej mikrofluidyki13,14. Fobel i in. opisali również DropBot jako cyfrowy system sterowania mikroprzepływami o otwartym kodzie źródłowym15. Yafia i wsp., również opisali przenośną cyfrową mikrofluidykę opartą na częściach drukowanych w 3D i mniejszych phone16. Alistar i Gaudenz opracowali również zasilaną bateryjnie platformę OpenDrop, która jest oparta na matrycy tranzystorów polowych i aktywacji prądu stałego17.

Tutaj prezentujemy cyfrowy zestaw edukacyjny mikrofluidyki oparty na komercyjnie pozyskanej płytce drukowanej (PCB), który pozwala użytkownikowi złożyć i zdobyć praktyczne doświadczenie z cyfrową mikrofluidyką (Rysunek 1). Opłata za usługę tworzenia PCB z cyfrowych plików projektowych jest powszechnie dostępna, dlatego uważamy, że jest to opłacalne tanie rozwiązanie dla edukacji, pod warunkiem, że cyfrowe pliki projektowe mogą być udostępniane. Staranny dobór komponentów i projekt systemu ma na celu uproszczenie procesu montażu i sprawienie, że interfejs będzie intuicyjny dla użytkownika. W związku z tym zamiast konfiguracji dwupłytowej stosuje się konfigurację jednopłytkową, aby uniknąć konieczności stosowania płyty górnej. Zarówno składniki, jak i badane substancje chemiczne muszą być łatwo dostępne. Na przykład folia spożywcza z supermarketu jest używana jako izolator w naszym zestawie.

Aby udowodnić wykonalność naszego zestawu, proponujemy konkretny eksperyment chemiczny oparty na chemiluminescencji luminolu i udostępniamy protokół. Jest nadzieja, że wizualna obserwacja chemiluminescencji może zachwycić i zafascynować studentów. Luminol to substancja chemiczna, która wykazuje niebieską poświatę po zmieszaniu ze środkiem utleniającym, takim jakH2O2i jest zwykle używana w kryminalistyce do wykrywania krwi18. W naszych warunkach laboratoryjnych żelazocyjanek potasu służy jako katalizator. Luminol reaguje z jonem wodorotlenkowym i tworzy dianion. Dianion następnie reaguje z tlenem z nadtlenku wodoru, tworząc kwas 5-aminoftalowy z elektronami w stanie wzbudzonym, a relaksacja elektronów ze stanu wzbudzonego do stanu podstawowego powoduje, że fotony są widoczne jako rozbłysk niebieskiego światła.

Informujemy również o eksperymencie z obrazowaniem fluorescencyjnym za pomocą smartfona, aby zademonstrować integrację diody elektroluminescencyjnej (LED) jako źródła światła wzbudzającego. Wreszcie, parowanie kropelek jest problemem w mikrofluidyce, ale rzadko jest rozwiązywane. (1 μl kropli wody jest tracony w ciągu 1 godziny z otwartego podłoża3.) Używamy atomizera opartego na przetworniku piezoelektrycznym wysokiej częstotliwości do przekształcania wody w delikatną mgiełkę. Tworzy to nawilżone środowisko, aby zapobiec parowaniu kropel i demonstruje długotrwałe (~1 h) uruchamianie kropel.

figure-introduction-1
Rysunek 1: Schematy konfiguracji EBUD. (a) Mikrokontroler służy do dostarczania sekwencji sterującej do elektrody EWOD. Wilgotność jest również kontrolowana. (b) Schematy układu PCB. Elektrody, diody LED do obrazowania fluorescencyjnego, rezystory i tranzystory polowe (FET) są oznaczone. Pokazana jest również skala o długości 1 cm. Kliknij tutaj, aby zobaczyć większą wersję tego rysunku.

figure-introduction-2
Rysunek 2: Widok zestawu z góry. Płytka mikrokontrolera, płytka zasilająca wysokiego napięcia, płytka PCB EWOD, czujnik wilgotności i atomizer są oznaczone. Kliknij tutaj, aby zobaczyć większą wersję tego rysunku.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1) Składanie zestawu do cyfrowej mikrofluidyki

  1. rezystory do montażu powierzchniowego, tranzystory i diody elektroluminescencyjne na płytce PCB zgodnie ze schematami w Rysunek 1b.
  2. Podłącz wyjście płytki zasilacza wysokonapięciowego do płytki PCB z przylutowanymi elementami ( Rysunek 2 i Rysunek uzupełniający 1).
  3. Podłącz akumulator do płytki wzmacniacza napięcia, aby zwiększyć napięcie z 6 V do 12 V (Rysunek 2 i Rysunek uzupełniający 1).
  4. Podłącz płytkę zasilania wysokiego napięcia do płytki wzmacniacza napięcia, aby zwiększyć napięcie z 12 V do ~230 V (Rysunek 2 i Rysunek uzupełniający 1).
  5. Podłącz czujnik wilgotności do płytki mikrokontrolera. Podłącz ultradźwiękowy rozpylacz piezoelektryczny i płytkę sterownika atomizera do płytki mikrokontrolera (Rysunek 2 i rysunek uzupełniający 1).
  6. Umieść cały zestaw w akrylowej obudowie o wymiarach 23 cm x 20,5 cm x 6 cm.
  7. Włącz mikrokontroler za pomocą kodu (kod dodatkowy) i użyj multimetru cyfrowego do pomiaru napięcia elektrody EBUD, aby upewnić się, że napięcie wyjściowe wynosi ~230 V. Wyreguluj rezystor zmienny płytki zasilania wysokiego napięcia tak, aby napięcie wyjściowe wynosiło ~230 V (rysunek uzupełniający 2).

2) Przygotowanie izolatora na tablicy elektrod

  1. Nosić czyste rękawice nitrylowe. Za pomocą mikropipety nałóż ~10 μL oleju silikonowego o pojemności 5 cSt na obszar elektrody i palcem równomiernie rozprowadź olej silikonowy na obszarze elektrody. Należy pamiętać, że olej silikonowy służy jako wypełnienie między elektrodą a izolatorem folii spożywczej oraz w celu uniknięcia szczeliny powietrznej.
  2. Wytnij kawałek folii spożywczej o wymiarach około 2,5 cm x 4 cm i umieść go na elektrodzie. Za pomocą mikropipety nałóż ~10 μl oleju silikonowego o pojemności 5 cSt na obszar elektrody i palcem równomiernie rozprowadź olej silikonowy. Należy pamiętać, że olej silikonowy służy jako warstwa hydrofobowa na wierzchu izolatora.

3) Eksperyment chemiluminescencyjny oparty na luminolu

  1. Wymieszać 0,25 g luminolu i 1,6 g NaOH w 25 ml wody dejonizowanej w zlewce ze szklanym mieszadłem, aby uzyskać roztwór.
  2. Wymieszać 20 ml roztworu z poprzedniego etapu z 20 ml 3% nadtlenku wodoru.
  3. Za pomocą mikropipety umieść 2-5 μl roztworu luminolu z poprzedniego kroku na elektrodzie docelowej.
  4. Za pomocą mikropipety umieść 10 μl 0,1% w/w żelazocyjanku potasu na elektrodzie. Należy pamiętać, że jest to kropla, która ma być przenoszona w celu elektrozwilżania.
  5. Włącz mikrokontroler, aby przesunąć 10 μl kropli żelazocyjanku potasu w celu połączenia się z luminolem.

4) Eksperyment z obrazowaniem fluorescencyjnym

  1. Wytnij kawałek taśmy półprzezroczystej o wymiarach ~1 cm x 1 cm. Umieść taśmę półprzezroczystą pomiędzy diodą wzbudzającą elektrodę elektrodową a elektrodami EBUD.
  2. Przymocuj filtr z kolorowego szkła emisyjnego do aparatu smartfona za pomocą taśmy.
  3. Zmieszać 2,5 mg izotiocyjanianu fluoresceiny w wodnym roztworze etanolu (3% m/m).
  4. Odpipetować ~10 μL roztworu z poprzedniego kroku na jedną z elektrod.
  5. Włącz mikrokontroler.
  6. Użyj smartfona, aby nagrać film z aktywacji kropli.

5) Długoterminowy eksperyment z uruchamianiem kropelek za pomocą ultradźwiękowego atomizera

  1. Umieść 1 ml wody na rozpylacza ultradźwiękowym. Należy pamiętać, że kod został napisany tak, aby używał algorytmu progowego sprzężenia zwrotnego w celu utrzymania poziomu wilgotności powyżej 90%.
  2. Umieścić kroplę o pojemności 10 μl za pomocą mikropipety. Włącz mikrokontroler i natychmiast zamknij pokrywę obudowy.
  3. Poczekaj ~1 h. Sprawdź wzrokowo działanie kropli.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Aktywacja kropli jest rejestrowana za pomocą smartfona. Reprezentatywne wyniki dla chemiluminescencji i obrazowania fluorescencyjnego są wyświetlane na Rysunek 3 i Rysunek 4. W eksperymencie chemiluminescencji kropla 10 μl żelazocyjanku jest uruchamiana tak, aby poruszała się i mieszała ze wstępnie osadzoną kroplą 2 μl na elektrodzie docelowej, jak pokazano na Rysunek 3. Odstęp czasu między kolejnymi ruchami jest ustawi...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Opisana tutaj procedura pozwala czytelnikowi na złożenie i przetestowanie działającego systemu EWOD do uruchamiania kropel oraz zdobycie praktycznego doświadczenia z mikrofluidyką. Celowo unikamy drogich komponentów i próbek chemicznych. Obecnie jeden zestaw można skonstruować za ~ 130 USD, a najdroższym komponentem jest kolorowe szkło optyczne do obrazowania fluorescencyjnego i mikrokontroler z wyłączeniem niestandardowej obudowy akrylowej (tabela uzupełniająca 1). Za taką cenę dołączona jest również mo...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Y. T. Y. pragnie podziękować za wsparcie finansowe ze strony Ministerstwa Nauki i Technologii w ramach grantu numer MOST 107-2621-M-007-001-MY3 oraz Narodowego Uniwersytetu Tsing Hua w ramach grantu numer 109Q2702E1. Mark Kurban z Edanz Group (https://en-author-services.edanzgroup.com/ac) zredagował szkic tego rękopisu.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Obudowa akrylowaLOKALNY sprzedawca23cm x 20,5 cm x 6cm
Ardunion UnoPłytka mikrokontroleraArduinoUNO
kwas octowySigma Alrich695092-100ML
Płytka stykowaMCIGICM400tie4 cm x 7 cm, 400 punktów Płytka stykowa bez, zestaw 4
BSP89 H6327 Infineon MOSFET Mouser726-BSP89H6327przebicia źródła odpływu 240 V, rezystancja 4,2 oma
kwas cytrynowysigma Alrich251275-100G
Filtr ze szkła kolorowego kolorowego ThorlabsFGL 530do obrazowania fluorescencyjnego
Czujnik temperatury i wilgotności DHT11adafruit
Multimetr cyfrowy Fluke17B
Izomer izotiocyjanianu fluoresceiny Isigma AlrichF7250-50MG50 mg cena, obrazowanie fluorescencyjne
GlycerolSigma AlrichG9012-500ML
Zasilacz wysokonapięciowy do rurki NixeVaorwneNCH6100HVMoc wysokiego napięcia max dc 235V
LM2596 napięcie doładowania obwoduod 5V do 12 V
LuminolSigma Alrich123072-5G5 g za 110 USD
PippetThermal Fisher1-10 ul
Płytka drukowana Lokalny sprzedawca10 sztuk za 60 USD
Plastikowa folia spożywczaKirklandStretch-tite folia spożywcza Plastikowa folia spożywcza
Żelazicynek potasuMerck1049821 kg
1N Wodorotlenek potasu, roztwór (1 mol/l) Scharlau 1-litrowa
przezroczysta taśma biurowa 3 mm3M Scotchpółprzezroczysta, używana jako dyfuzor do
soliSól6 uncji za 7 USD soli z supermarketu
Olej silikonowy (5Cst)Sigma Alrich317667-250MLgórna warstwa hydrofobowa i warstwa wypełniająca między elektrodą a
sacharoząizolatoraCukier stołowy  z dowolnego supermarketu, 6 dolarów za funt
Niebieska dioda LED do montażu powierzchniowegooznium3528Oznium 20 sztuk diod LED do montażu powierzchniowego PLCC-2, 3528 Rozmiar SMD SMT LED - Niebieski
Rezystor do montażu powierzchniowego 180k OhmBalance World Inc3mm x 6 mm 1watt
Rezystor do montażu powierzchniowego 510OhmBalance World Incdo LED, 3mmx6mm 1watt
Atomizer wodyGrove częstotliwość pracy 100 kHz  zasilanie 5V max 2W  W zestawie znajduje się przetwornik
tranzystor wysokiego napięcia
napięcie Filtr ze szkła wzmacniacza napięcia oświetleniowej jodowana o doskonałej wartości Rezystor polaryzacyjny ultradźwiękowy

Bibliografia

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Convery, N., Gadegaard, N. 30 years of microfluidics. Micro and Nano Engineering. 2, 76-91 (2019).
  2. Rackus, D. G., Ridel-Kruse, I. H., Pamme, N. Learning on a chip: Microfluidics for formal and informal science education. Biomicrofluidics. 13, 041501(2019).
  3. Legge, C. H. Chemistry under the microscope-Lab on a chip technologies. Journal of Chemical Education. 79, 173(2002).
  4. Fintschenko, Y. Education: a modular approach to microfluidics in the teaching laboratory. Lab On A Chip. 11, 3394(2011).
  5. Mugele, F., Baret, J. -C. Electrowetting: from basics to applications. Journal of Physics: Condensed Matter. 17, 705-774 (2005).
  6. Lippmann, G. Relations entre les phenomenes electriques et capillary. Ann. Chim. Phys. 6, 494(1875).
  7. Berge, B. Electrocapillarite et mouillge de films isolant par l'eau. C. R. Acad. Sci. II. 317, 157(1993).
  8. Pollack, M. G., Fair, R. B., Shenderov, A. D. Electrowetting-based actuation of liquid droplets for microfluidics applications. Applied Physics Letters. 77, 1725(2000).
  9. Lee, J., Kim, C. J. Surface-tension-driven microactuation based on continuous electrowetting. Journal of Microelectromechanical Systems. 9 (2), 171(2000).
  10. Choi, K., Ng, A. H. C., Fobel, R., Wheeler, A. R. Digital Microfluidics. Annual Review of Analalytical Chemistry. 5, 413-440 (2012).
  11. Jebrail, M. J., Wheeler, A. R. Let's get digital: digitizing chemical biology with microfluidics. Current Opinion in Chemical Biology. 14, 574-581 (2000).
  12. Pollack, M. G., Pamula, V. K., Srinivasan, V., Eckhardt, A. E. 2011. Applications of electrowetting-based digital microfluidics in clinical diagnostics. Expert Review of Molecular Diagnostics. 11, 393-407 (2011).
  13. Abdelgawad, M., Wheeler, A. R. Rapid prototyping in copper substrates for digital microfluidics. Advanced Materials. 19 (1), 133-137 (2007).
  14. Abdelgawad, M., Wheeler, A. R. Low-cost, rapid-prototyping of digital microfluidics devices. Microfluidics and Nanofluidics. 4, 349-355 (2008).
  15. Fobel, R., Fobel, C., Wheeler, A. R. DropBot: an open-source digital microfluidic control system with precise control of electrostatic driving force and instantaneous drop velocity measurement. Applied Physics Letters. 102, 193513(2013).
  16. Yafia, M., Ahmadi, A., Hoorfar, M., Najjaran, H. Ultra-portable smartphone controlled integrated digital microfluidic system in a 3D-printed modular assembly. Micromachines. 6 (9), 1289-1305 (2015).
  17. Alistar, M., Gaudenz, U. OpenDrop: an integrated do-it-yourself platform for personal use of biochips. Bioengineering. 4 (2), 45(2017).
  18. Khan, P., et al. Luminol-based chemiluminescent signals: clinical and non-clinical application and future uses. Applied Biochemistry and Biotechnology. 173 (2), 333-355 (2014).
  19. Agresti, J. J., et al. Ultrahigh-throughput screening in drop-based microfluidics for directed evolution. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (9), 4004-4009 (2010).
  20. Microfluidics. , Available from: https://microfluidics.utoronto.ca/dropbot/ (2020).
  21. Busnel, J. M., et al. Evaluation of capillary isoelectric focusing in glycerol-water media with a view to hydrophobic protein applications. Electrophoresis. 26, 3369-3379 (2005).
  22. Chatterjee, D., Shepherd, H., Garrell, R. L. Electromechanical model for actuating liquids in a two plate droplet microfluidic device. Lab On A Chip. 9, 1219-1229 (2009).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Luminol ChemiluminescenceFluorescent ImagingUltrasonic AtomizerElectrowetting On DielectricMicrocontroller ProgrammingSurface Mount SolderingHumidity ControlSmartphone Imaging

Powiązane artykuły