Do pierwszej części badania zakwalifikowano łącznie 65 męskich graczy rugby (wiek 20,9 ± 2,3 lat), z których wszyscy przeszli wyjściową ocenę SSVEP (Rycina 1). W trakcie sezonu rugby 12 uczestników doznało potencjalnego urazu wstrząśninowego na boisku i zostało ponownie ocenionych za pomocą systemu SSVEP w celu przeprowadzenia analizy po urazie. Lekarz drużynowy ocenił tych graczy zgodnie z klinicznym protokołem oceny wstrząśnienia mózgu i zdiagnozował u tych 12 uczestników wstrząśnienie. Wszyscy dwunastu został uznany przez lekarza za ozdrowieńców w ciągu 12-dniowego okresu GRTP30. Po stwierdzeniu przez lekarza powrotu graczy do zdrowia, 8 z nich było dostępnych na dodatkowe badanie SSVEP, zaklasyfikowane jako ocena rekonwalescencji. Dwudziestu dwóch graczy, którzy nie doznali wstrząśnienia mózgu, zostało przebadanych ponownie w celu oceny niezawodności badania w trakcie sezonu. Pozostali uczestnicy, którzy nie zostali przebadani ponownie, zostali utraceni w obserwacji. W czasie trwania badania nie zgłoszono żadnych działań niepożądanych po stymulacji SSVEP. Niezawodność systemu SSVEP zastosowanego u graczy rugby została potwierdzona wysokim współczynnikiem korelacji wewnątrzklasowej (ICC) z 95% przedziałem ufności, wynoszącym 0,91 (0,79-0,96) dla ponownie przebadanych graczy niekontuzjowanych (n = 22) oraz 0,96 (0,74-0,99) dla ponownie przebadanych graczy ozdrowieńców33. Do obliczeń wzięto zestawy danych, w których uzyskano dobrą jakość kontaktu. Wynikało to z kilku przypadków, w których włosy uczestników lub potencjał skóry wpłynęły na zdolność systemów EEG do uzyskania czystego sygnału SSVEP (Rycina 4).
Aby określić, czy SSVEP generowany za pomocą tego systemu badawczego może służyć jako biomarker wstrząśnienia mózgu, wartości SNR z przetworzonych wyników pogrupowano w oceny bazowe (kontrolne), oceny po wstrząśnieniu oraz oceny po regeneracji w celu porównania (Rysunek 1). Ogólnie mediana SNR dla wszystkich zawodników z grupy kontrolnej (n = 65) wyniosła 4,80 [IQR: 4,07-5,68], a średnie przetworzone EEG grupy kontrolnej wykazało wyraźny sygnał szczytowy 15 Hz w odpowiednim widmie częstotliwości33. Podobną odpowiedź zaobserwowano, gdy średnie wartości SSVEP oddzielnej grupy kontrolnej (n = 20; zdrowa populacja ogólna), wywołane tym samym bodźcem wzrokowym, ale zarejestrowane innym systemem EEG, przedstawiono jako gęstość widmową mocy (Rysunek 5). Taki rozkład mediany i gęstość widmowa mocy pozwoliły na ustanowienie wyraźnej kontroli dla odpowiedzi SSVEP nieurazowanego (bez wstrząśnienia mózgu) zawodnika w układzie badawczym (Rysunek 2, Rysunek 3). Mediana SNR wszystkich zawodników po wstrząśnieniu (n = 12) oraz zawodników po regeneracji z dostępnymi ocenami SSVEP (n = 8) wyniosła odpowiednio 2,00 [IQR: 1,40-2,32] i 4,82 [IQR: 4,13-5,18]33. W badaniu pilotażowym zaobserwowano istotne różnice w medianach wartości SNR (+4,03; p < 0,0001) pomiędzy zawodnikami z grupy kontrolnej (bazowej) a zawodnikami po wstrząśnieniu. Wstrząśnienie mózgu miało duży wpływ na sygnał SSVEP (Cohens, d = 4,03). Co ciekawe, w grupie zawodników po regeneracji zaobserwowano minimalną wariancję SNR (+0,02; p = 0,0495) na granicy istotności (α < 0,05), przy trywialnym efekcie w porównaniu z grupą kontrolną (Cohens, d = 0,17)33. Wskazuje to, że po pełnym powrocie do zdrowia, zgodnie z wytycznymi GRTP30, wartości SSVEP są równoważne dla zawodnika po wstrząśnieniu i zawodnika nieurazowanego. Ponadto mediana SNR była istotnie różna (+2,80; p = 0,0002) pomiędzy grupą zawodników po wstrząśnieniu a grupą po regeneracji, co dowodzi, że okres regeneracji miał duży wpływ na sygnał SSVEP zawodnika po wstrząśnieniu mózgu (Cohens, d = 3,60)33.
Podobna reakcja w zakresie mediany wariancji SNR została zaobserwowana przy porównaniu wyłącznie zawodników, którzy przeszli wszystkie trzy etapy testów (n = 8; pomiary bazowe, po wstrząśnieniu i w fazie rekonwalescencji). Odnotowano istotną zmianę między pomiarami bazowymi a stanem po wstrząśnieniu (-2,34; p = 0,0001) oraz między stanem po wstrząśnieniu a rekonwalescencją (-2,72; p = 0,0002), natomiast niewielką wariancję zaobserwowano między pomiarami bazowymi a rekonwalescencją (+ 0,28; p = 0,0495), przy trywialnym efekcie między tymi grupami (Cohens d = 0,17). Wyniki te zostały potwierdzone po wyciągnięciu średnich wartości SNR dla zawodników, którzy przeszli wszystkie trzy etapy testów. Średnie wartości SNR dla pomiarów bazowych, po wstrząśnieniu i w fazie rekonwalescencji u tych zawodników wynosiły odpowiednio 4,45, 2,20 i 4,33. Istotna różnica wystąpiła między grupą bazową a grupą po wstrząśnieniu (p = 0,0001) oraz między grupą po wstrząśnieniu a grupą w fazie rekonwalescencji (p = 0,0002). Zmienność średnich wartości SNR między grupą rekonwalescencji a grupą bazową była niewielka, ale znajdowała się na granicy istotności (p = 0,0495). Ogólnie rzecz biorąc, odpowiedź na bodziec była niższa u zawodników po wstrząśnieniu w porównaniu z ich oceną bazową. Po monitorowanym okresie rekonwalescencji zawodnicy ci byli ostatecznie w stanie wygenerować odpowiedź równoważną ich wstępnej ocenie (bazowej)33. Dowodzi to, że wstrząśnienie mózgu związane ze sportem wpływa na zdolność jednostki do generowania SSVEP przez okres co najmniej 12 dni. Gdyby odpowiedź SSVEP u danej osoby była rutynowo mierzona w sposób analogiczny do niniejszego protokołu (Rycina 1): pomiar bazowy, po urazie, rekonwalescencja, pracownik służby zdrowia mógłby potencjalnie wykorzystać SSVEP jako biomarker wstrząśnienia mózgu.
Zintegrowany przenośny system SSVEP (Rysunek 7A) został zastosowany u (n = 20) zdrowych osób z grupy kontrolnej z populacji ogólnej, niepowiązanych ze sportem, jakim jest rugby. Ponieważ jest to urządzenie badawcze z innym systemem elektrod (Rysunek 7B) i nieco zmienionymi bodźcami w stosunku do pierwotnej konfiguracji SSVEP, wartości mediany i średniej SNR nie nadawały się do porównania (Tabela 1). Podobnie, ponieważ uczestnicy nie uprawiali sportów z wysoką częstotliwością występowania wstrząśnięć mózgu, system SSVEP nie był oceniany jako marker SSVEP dla wstrząśnięcia mózgu. Zamiast tego przeprowadzono badanie niezawodności test-retest w celu walidacji systemu do przyszłego zastosowania w badaniach na szeroką skalę (Rysunek 6). System SSVEP wykazał wysoką korelację na poziomie 0,81 (CI: 0,59-0,92), co wskazuje, że urządzenie jest niezawodne w uzyskiwaniu SSVEP (Tabela 2). Ponadto dokładność technologii EEG systemu została zweryfikowana w badaniu zgodności z tradycyjnym systemem EEG klasy klinicznej (Rysunek 7C), który zwrócił podobną wartość ICC wynoszącą 0,83 (CI: 0,63-0,93) (Tabela 2). W pierwszej powtórce testów (wstępnej) u 18/20 uczestników stwierdzono zgodność obu systemów przy prawdopodobieństwie dwumianowym 95%. U jednego uczestnika urządzenia nie były zgodne, ponieważ system SSVEP wykrył bardziej wyraźny rytm alfa niż pożądany sygnał odpowiedzi o częstotliwości 15 Hz (Rysunek 8). U drugiego uczestnika w klinicznym systemie EEG nie zidentyfikowano SSVEP (Rysunek 9). Jednak w drugiej powtórce (głównej) u wszystkich 20 uczestników stwierdzono zgodność obu systemów przy prawdopodobieństwie dwumianowym 100%. Ogólna dokładność obu systemów w generowaniu SSVEP została przedstawiona na Rysunku 10, który obrazuje, że oba systemy wykazują wyraźny SNR wyłącznie przy częstotliwości stymulacji: 15 Hz. Potwierdza to, że system przenośny jest funkcjonalnie równoważny z urządzeniami klasy klinicznej wykorzystywanymi do rejestracji sygnałów EEG. W połączeniu z przenośnością i łatwością obsługi systemu SSVEP, otwiera to szereg możliwości zastosowań w celu pozyskiwania SSVEP o jakości badawczej poza warunkami klinicznymi, na przykład w wielkoskalowym studium przypadku SRC.

Rysunek 1: Schemat metodologii udziału sportowców w badaniu SRC-SSVEP. Schemat szczegółowo przedstawia weryfikację kwalifikowalności uczestników oraz przydział do grup w trakcie trwania badania SRC-SSVEP przeprowadzonego wśród amatorskich graczy rugby union. SRC; wstrząśnienie mózgu związane z uprawianiem sportu. SSVEP; potencjały wzbudzone stanu stacjonarnego. Kliknij tutaj, aby wyświetlić większą wersję tego rysunku.

Rysunek 2: Komponent bodźca wzrokowego przenośnego systemu SSVEP. (A) Smartfon z ekranem LCD z wczytanym i wyświetlanym materiałem wideo, umieszczony w tekturowej oprawie VR. Uczestnik musi przyłożyć oprawę VR ściśle do twarzy i grzbietu nosa, tak aby oba oczy były całkowicie osłonięte przez oprawę. (B) Ilustracja bodźca wzrokowego; pętla wideo stworzona z naprzemiennych ekranów białych (górny rząd) i czarnych (dolny rząd) o częstotliwości 15 Hz. Każdy ekran zawierał dwie klatki rozdzielone pionową linią podziału, dopasowaną do lewego i prawego pola widzenia oczu w oprawie VR. Każda klatka zawierała w centrum punkt skupienia w formie cyfry, która zmieniała się w zakresie 1-9 w odstępach 5 s. SSVEP; potencjały wywołane wzrokowo w stanie stacjonarnym. LCD; wyświetlacz ciekłokrystaliczny. VR; wirtualna rzeczywistość. Kliknij tutaj, aby zobaczyć większą wersję tego rysunku.

Rycina 3: Bezprzewodowy komponent EEG przenośnego systemu SSVEP. (A) 14-kanałowy komplet EEG zdolny do bezprzewodowego przesyłania danych do znajdującego się w pobliżu odbiornika podłączonego do komputera. (B) Mapa wizualna 14 pozycji elektrod w odniesieniu do międzynarodowego systemu 10-20 EEG dla rozmieszczenia elektrod w badaniach EEG u ludzi. W badaniu SRC-SSVEP dwie elektrody potyliczne (O1 i O2) zostały wykorzystane jako elektrody rejestrujące, natomiast dwie elektrody ciemieniowe posłużyły jako odejmowanie trybu wspólnego i masa (odpowiednio P3 i P4). EEG; elektroencefalografia. SSVEP; potencjały wzbudzone wizualnie w stanie ustalonym. SRC; wstrząśnienie mózgu związane ze sportem. Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.

Rysunek 4: Ilustracja znaczenia jakości kontaktu w pomiarach SSVEP. Odpowiedzi SSVEP pojedynczego badanego z grupy kontrolnej (zdrowa populacja ogólna) zmierzone za pomocą systemu SSVEP, przy ustawionej częstotliwości bodźca 15 Hz i częstotliwości próbkowania 250 Hz, gdy: (A) na elektrodach zastosowano nietypowy roztwór soli fizjologicznej, (B) elektrody nie zostały odpowiednio przesunięte przez włosy badanego w celu uzyskania kontaktu ze skórą głowy, (C) elektrody zostały nasycone solą fizjologiczną i przesunięte przez włosy. Sól fizjologiczna jest niezbędna do zapewnienia przewodnictwa elektrycznego między głową pacjenta a elektrodami; bez niej obserwuje się artefakty potencjału skórnego o dużej amplitudzie w sposób harmoniczny. Włosy działają jak rezystor minimalizujący przewodnictwo elektryczne między skórą głowy pacjenta a elektrodami, co skutkuje zwiększonym poziomem szumów. Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.

Rycina 5: Średnia odpowiedź SSVEP 20 osób z grupy kontrolnej w badaniu walidacyjnym EEG. Odpowiedzi SSVEP osób z grupy kontrolnej (zdrowa populacja ogólna) (n = 20) zmierzone za pomocą systemu SSVEP, przy ustawionej częstotliwości bodźca 15 Hz i częstotliwości próbkowania 250 Hz. Indywidualne wartości SSVEP zostały przefiltrowane w zakresie 5-40 Hz przed zastosowaniem szybkiej transformaty Fouriera i normalizacji. Średnie wartości SSVEP dla populacji przedstawiono jako gęstość widmową mocy, gdzie oś y reprezentuje amplitudę sygnału w mikrowoltach (uV). SSVEP; potencjały wzbudzone wizualne w stanie stacjonarnym. Kliknij tutaj, aby zobaczyć powiększoną wersję tej ryciny.

Rysunek 6: Schemat metodologii badania walidacji EEG pomiędzy dwoma systemami. Schemat przedstawia metodologię walidacji przenośnego systemu EEG względem uznanego referencyjnego systemu EEG: odpowiednio systemów SSVEP i klinicznego EEG. Uczestnicy z grupy kontrolnej (zdrowa populacja ogólna) zostali poddani przesiewowi i losowo przydzielono im kolejność testów, a następnie przeprowadzono dwa testy na każdym systemie w trybie test-retest. EEG; elektroencefalografia. Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.

Rysunek 7: Przegląd elektrod dla badania walidacyjnego EEG między dwoma systemami. (A) Udoskonalony przenośny system SSVEP. (B) Międzynarodowy standard 10-20 zmodyfikowanego kombinatorycznego systemu nomenklatury EEG. (C) Ustanowiony kliniczny system referencyjny EEG. System SSVEP mierzy sygnały EEG za pomocą trzech kanałów elektrod potylicznych (O1, O2 i Oz), wykorzystując przy tym dwa kanały elektrod ciemieniowych (P1 i P2) odpowiednio jako referencyjny i bias. Kliniczny system EEG umożliwia pomiar sygnałów EEG za pomocą wzmacniacza 40-kanałowego, który w celu porównania może zostać ręcznie ustawiony w takim samym układzie O1, O2, Oz, P1, P2 jak w systemie SSVEP. EEG; elektroencefalografia. Prosimy kliknąć tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.

Rysunek 8: Gęstość widma mocy odpowiedzi SSVEP jednego uczestnika kontrolnego (uczestnik 09) zmierzonej za pomocą dwóch systemów EEG. (A) System SSVEP. (B) Kliniczny system EEG. Oba pomiary uzyskano przy użyciu tego samego bodźca wizualnego (z systemu SSVEP): migającego bodźca 15 Hz z białych diod LED w zamkniętej obudowie. Zauważmy, że pomimo wyraźnej odpowiedzi 15 Hz widocznej w obu systemach, najwyższy absolutny szczyt dla systemu SSVEP znajdował się przy 10,5 Hz, a nie przy stymulowanych 15 Hz. Zgodnie z kryteriami badania zgodności, w którym systemy muszą wykryć stymulowaną częstotliwość jako szczytową (główną) amplitudę, stanowi to niepowodzenie. SSVEP; potencjały wzbudzone wizualnie w stanie ustalonym. LED; diody emitujące światło. Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.

Rycina 9: Gęstość widmowa mocy odpowiedzi SSVEP pojedynczego uczestnika z grupy kontrolnej (zdrowa populacja ogólna, uczestnik 19), zmierzona za pomocą dwóch systemów EEG. (A) System SSVEP. (B) Kliniczny system EEG. Oba pomiary uzyskano przy użyciu tego samego bodźca wizualnego (z systemu SSVEP); bodźca migającego z częstotliwością 15 Hz białych diod LED w zamkniętej obudowie. Zwróć uwagę na brak wyraźnej odpowiedzi przy 15 Hz w przypadku klinicznego systemu EEG, ponieważ jest ona otoczona szumem o podobnej amplitudzie. Zgodnie z kryteriami badania zgodności, w którym systemy muszą wygenerować odpowiedź z wynikiem Z-score większym niż 5, stanowi to wynik negatywny. SSVEP; stacjonarne potencjały wzbudzone wizualnie. LED; diody emitujące światło. Kliknij tutaj, aby zobaczyć powiększoną wersję tej ryciny.

Rysunek 10: Wizualna ilustracja zgodności między dwoma systemami EEG mierzącymi SSVEP u uczestników z grupy kontrolnej. Średnią odpowiedź SSVEP (n = 20) osób z grupy kontrolnej (zdrowa populacja ogólna) przedstawiono jako SNR w funkcji interesującego zakresu częstotliwości: 5-25 Hz dla pomiarów wykonanych systemem SSVEP (zielony) oraz klinicznym EEG (czerwony). Każdy uczestnik z grupy kontrolnej dostarczył dwa zestawy danych dla każdego systemu w badaniu walidacji EEG, co dało łącznie 40 zestawów danych SSVEP dla każdego systemu. Odpowiedzi obu systemów zostały nałożone na siebie, aby zwizualizować stopień ich zgodności w pomiarze SSVEP podczas stymulacji tym samym bodźcem wizualnym: białymi diodami LED migającymi z częstotliwością 15 Hz przez 30 s. Zakres częstotliwości został przefiltrowany poniżej przewidywanej harmonicznej 30 Hz, aby skupić się wyłącznie na odpowiedzi na główny bodziec. EEG; elektroencefalografia. SSVEP; potencjały wywołane wizualnie w stanie stacjonarnym. SNR; stosunek sygnału do szumu. Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.
| System EEG | Minimum | IQR 25 | Mediana | IQR 75 | Maksimum | Średnia | Odchylenie std. |
| NC 1 | 4.402 | 8.187 | 9.829 | 13.667 | 20.703 | 11.148 | 4.577 |
| NC 2 | 4.509 | 9.123 | 11.055 | 12.586 | 23.225 | 11.615 | 4.213 |
| Grael 1 | 4.335 | 7.99 | 10.171 | 13.238 | 21.758 | 11.36 | 4.897 |
| Grael 2 | 4.979 | 9.002 | 10.619 | 12.667 | 20.177 | 11.22 | 3.865 |
Tabela 1: Podsumowanie statystyczne SSVEP u uczestników z grupy kontrolnej, zmierzone za pomocą dwóch systemów EEG. Przeprowadzono dwa pomiary SSVEP u (n = 20) osób z grupy kontrolnej (zdrowa populacja ogólna) przy użyciu przenośnego systemu EEG oraz uznanego klinicznego systemu EEG; wartości SNR obliczono na podstawie SSVEP (przyjmując 15 Hz jako sygnał główny). Dla każdego zestawu danych pomiarowych obliczono statystyki, w tym minimum, maksimum, 25.th i 75.th percentyl rozstępu międzykwartylnego (IQR), medianę, średnią oraz odchylenie standardowe (std dev). EEG; elektroencefalografia. SSVEP; potencjały wywołane wizualnie w stanie stacjonarnym.
| System EEG | Grupa | N | ICC (95% CI) | Średni czas między testami (min) |
| Nurochek | Kontrolna | 20 | 0.81 (0.59-0.92) | 0.5 |
| Grael | Kontrolna | 20 | 0.83 (0.63-0.93) | 0.5 |
Tabela 2: Wiarygodność test-retest przenośnego systemu SSVEP oraz klinicznych systemów EEG. Wiarygodność zintegrowanego systemu SSVEP i klinicznego systemu EEG obliczono na podstawie współczynnika korelacji wewnątrzklasowej (ICC) z 95% przedziałem ufności (CI) z dwóch testów przeprowadzonych w odstępie 30 s, z wykorzystaniem tej samej grupy osób kontrolnych (zdrowa populacja ogólna) (n = 20); ICC (2,1). Jako parametr do obliczenia ICC wykorzystano wartości SNR (przyjęto 15 Hz jako sygnał podstawowy) z testów SSVEP. EEG; elektroencefalografia. SSVEP; potencjały wzbudzone wywołane bodźcem wzrokowym o stałej częstotliwości.