Artykuł metodologiczny

Zachowanie płodności u pacjentek z ciężką dysfunkcją jajników

DOI:

10.3791/62098

⸱

25 marca 2021

 , 
1Advanced Reproduction Medicine Research Center, Department of Obstetrics and Gynecology, International University of Health and Welfare School of Medicine

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Prezentujemy szczegóły procedur laboratoryjnych dla bezlekowej aktywacji in vitro (IVA) pęcherzyków jajnikowych u pacjentek z ciężką dysfunkcją jajników. Metoda ta może zwiększyć liczbę możliwych do pobrania oocytów na hiperstymulację jajników i korzystnie wpłynąć na zachowanie płodności u tych pacjentek.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Funkcja jajników stopniowo pogarsza się wraz z wiekiem i w niektórych stanach patofizjologicznych, takich jak nieprawidłowości kariotypu, choroby autoimmunologiczne, chemioterapie i radioterapie, a także operacje jajników. U niezamężnych kobiet z ciężką dysfunkcją jajników zachowanie płodności jest ważne dla przyszłych ciąż. Chociaż kriokonserwacja oocytów jest uznaną metodą zachowania płodności, pacjentki te mogły zachować tylko ograniczoną liczbę oocytów nawet po hiperstymulacji jajników, co prowadziło do powtarzających się stymulacji w celu zapewnienia wystarczającej liczby oocytów, aby zagwarantować przyszłą ciążę. Aby rozwiązać ten problem, opracowaliśmy niedawno bezlekową procedurę aktywacji in vitro (IVA), która umożliwia nam stymulację wczesnych stadiów pęcherzyków jajnikowych do rozwoju do stadium pęcherzyka przedantralnego. Te pęcherzyki przedantralne mogą reagować na unikalny protokół stymulacji gonadotropin, co skutkuje zwiększoną liczbą pobranych oocytów na stymulację jajników w celu kriokonserwacji. Bezlekowy IVA składał się z dostępu chirurgicznego i stymulacji jajników. Usunęliśmy część kory mózgowej z jednego lub obu jajników od pacjentek poddanych operacji laparoskopowej. Tkanki kory jajnikowej zostały pocięte na małe kostki, aby zakłócić szlak sygnałowy hipopotama i stymulować rozwój pęcherzyków we wczesnym stadium. Kostki te zostały przeszczepione ortotropowo do pozostałych jajników, a także pod błoną surowiczą obu jajowodów. Opublikowaliśmy już procedurę chirurgiczną bezlekowego IVA oraz protokół późniejszej stymulacji jajników, ale w niniejszym artykule przedstawiamy szczegóły metod laboratoryjnych wymaganych do uzyskania bezlekowego IVA.

Wprowadzenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Funkcja jajników stopniowo pogarsza się wraz ze starzeniem się i niektórymi stanami patofizjologicznymi, w tym nieprawidłowościami kariotypu, chorobami autoimmunologicznymi, chemioterapią i radioterapią oraz operacjami jajników. Zachowanie płodności jest jedną z najlepszych opcji dla niezamężnych kobiet z poważną dysfunkcją jajników, aby zachować ich potencjał do zajścia w ciążę w przyszłości. W celu zachowania płodności obecnie dostępne są dwie metody, głównie w dziedzinie onkopłodności. Kriokonserwacja oocytów jest dobrze ugruntowaną procedurą zachowania płodności i zgłoszono wiele udanych przypadków1,2. Z drugiej strony, kriokonserwacja tkanki jajnika została również opracowana w celu zachowania płodności u pacjentek z rakiem, ale nadal jest to strategia eksperymentalna3,4. W obu metodach do zajścia w ciążę potrzeba wielu dojrzałych oocytów. Ogólnie rzecz biorąc, pacjentki z przedwczesną niewydolnością jajników (POI), u których brak miesiączki pojawia się przed 40 rokiem życia, oraz kobiety w średnim wieku z niską rezerwą jajnikową wykazywały słabą odpowiedź jajników (POR) na stymulację jajników w celu uzyskania dojrzałych oocytów5,6,7. Co więcej, młode pacjentki z małą liczbą pęcherzyków antralnych wykazywały również POR w stosunku do stymulacji jajników7. Pacjentki te mają bardzo ograniczoną liczbę możliwych do pobrania komórek jajowych nawet po prawidłowej hiperstymulacji jajników, co wymaga wielu kosztownych zabiegów, aby zapewnić wystarczającą liczbę oocytów do zajścia w ciążę.

Dawstwo oocytów, a następnie zapłodnienie in vitro (IVF) z nasieniem męża i transferem zarodków (ET) jest jedyną opcją dla tych pacjentów POI i POR, którzy mają trudności z uzyskaniem własnych oocytów8,9,10. Jednak dawstwo oocytów jest skomplikowane ze względu na kwestie etyczne, a także powikłania autoimmunologiczne i ciążowe11,12,13,14. Aby rozwiązać te problemy, pożądane jest rozpoczęcie leczenia niepłodności przy użyciu własnych oocytów pacjentek. Dla pacjentek z POI opracowaliśmy metodę aktywacji in vitro (IVA), aby umożliwić pomyślny wzrost pęcherzyków jajnikowych i wytworzenie dojrzałych oocytów, co prowadzi do wielu ciąż i porodów15. W IVA podzieliliśmy korę jajników po usunięciu jajników pod chirurgią laparoskopową i hodowaliśmy je przez dwa dni, aby aktywować pęcherzyki za pomocą leków stymulujących Akt, a następnie przeprowadziliśmy heterotopowe przeszczepienie z powrotem do sztucznych woreczków wykonanych pod surowicą jajowodów pod drugą operacją laparoskopową15. Procedura ta promowała wzrost pierwotnych, pierwotnych i wtórnych pęcherzyków po fragmentacji kory jajnikowej, aby promować zakłócenie sygnalizacji Hippotam16, a następnie dwudniowa hodowla stymulatorami sygnalizacji Akt17.

W przeciwieństwie do ciężkich przypadków POI, pacjentki POR z obniżoną rezerwą jajnikową mają wiele pęcherzyków wtórnych. Ponieważ samo zakłócenie sygnalizacji Hippo jest skuteczne w promowaniu wtórnego wzrostu pęcherzyków16, niedawno wykazaliśmy udane ciąże i porody u pacjentek z POR przy użyciu bezlekowej procedury IVA obejmującej fragmentację kory mózgowej i przeszczep ortotopowy bez leczenia lekami stymulującymi Akt. Niefarmakologiczna IVA stymuluje wczesne stadium pęcherzyków jajnikowych do rozwoju do stadium pęcherzyka przedantralnego już po jednej operacji i zwiększa liczbę pobranych komórek jajowych do transferu zarodków IVF15,18. Bezlekowe podejście IVA ma kilka zalet w porównaniu z naszym oryginalnym IVA: 1) unikanie potencjalnej utraty pęcherzyków podczas posiewu, 2) minimalizacja inwazyjności i kosztów drugiej operacji, 3) polegające tylko na krótkotrwałym leżeniu w łóżku po operacji oraz 4) możliwość spontanicznej ciąży z powodu przeszczepu ortotopowego. Niedawno opublikowaliśmy artykuł wideo pokazujący procedury chirurgiczne w bezlekowym IVA19 oraz szczegółowe protokoły stymulacji jajników po operacji20. W tym miejscu przedstawiamy szczegółowe informacje na temat metod laboratoryjnych wymaganych do uzyskania IVA bez leków.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Pisemna świadoma zgoda została uzyskana od każdej pacjentki POR z malejącą rezerwą jajnikową, która zapisała się do leczenia IVA bez leków. Badanie to zostało zatwierdzone przez komisję etyczną Międzynarodowego Uniwersytetu Zdrowia i Opieki Społecznej (nr 17-S-21). Badanie kliniczne zostało zarejestrowane pod numerem UMIN000034464 i przeprowadzone zgodnie z Kodeksem Etycznym Światowego Stowarzyszenia Lekarzy (Deklaracja Helsińska).

1. Ekstrakcja kory jajnikowej

  1. Usuń część kory jajnika (10 x 10 mm, grubość 2-3 mm) z jednego lub obu jajników w znieczuleniu ogólnym poprzez operację laparoskopową, jak opisano wcześniej19,20.
  2. Umieścić pobrane kory jajników w sterylnym pojemniku zawierającym 10 ml zmodyfikowanego HTF (mHTF) w temperaturze 37 °C.

2. Fragmentacja kory jajnikowej

UWAGA: Przed sekcją kory jajnikowej rozgrzej mHTF do 37 °C. Utrzymuj sterylne warunki przez cały czas trwania zabiegu. Wszystkie narzędzia do tej procedury są wymienione w Tabeli materiałów.

  1. Umieść pobrane kory jajników w plastikowym naczyniu zawierającym 5-10 ml mHTF w temperaturze 37 °C i umieść je na płytce grzewczej, aby utrzymać tkankę w temperaturze 37 °C (Rysunek 2A).
  2. Zrób zdjęcie każdej kory za pomocą aparatu cyfrowego z imieniem i nazwiskiem pacjenta przed rozpoczęciem następnego zabiegu, aby połączyć dane pacjenta.
  3. Umieść pojedynczą korę na sterylnej gazie zwilżonej mHTF (Rysunek 2B).
    UWAGA: Nałóż dodatkowy mHTF za pomocą jednorazowej pipety na gazę, aby zapobiec wysuszeniu powierzchni kory podczas tej procedury.
  4. Usuń resztki tkanki rdzenia w miejscu, w którym wygląda różowo, za pomocą mikronożyczek, tak aby grubość tkanki osiągnęła 1-2 mm (Rysunek 2C i D).
    UWAGA: Aby uniknąć utraty pęcherzyków we wczesnym stadium, nie należy przygotowywać pasków korowych o grubości mniejszej niż 1 mm, ponieważ pęcherzyki we wczesnym stadium znajdują się w odległości 1-2 mm od powierzchni kory jajnikowej21.
  5. Wyciąć fragment tkanki o wymiarach 1 mm x 1 mm x 5 mm z każdego paska kory jajnika za pomocą cienkiego skalpela i poddać go analizie histologicznej w celu określenia obecności pęcherzyków resztkowych, jak opisano wcześniej18 (Rysunek 2E).
    UWAGA: Wypreparowane tkanki do histologii zanurza się w mHTF i utrzymuje w temperaturze 4 °C aż do utrwalenia (Rysunek 2F, patrz Krok 4).
  6. Przetnij korę na paski o wymiarach 1 mm x 1 mm x 10 mm za pomocą cienkiego skalpela (Rysunek 2G).
    UWAGA: Łatwiej jest ciąć, naciskając skalpel niż ciągnąc go.
  7. Pokrój te paski tkanek w małe kostki o wymiarach 1 mm x 1 mm x 1 mm (Rysunek 2H).
    UWAGA: Aby uniknąć zmian ciśnienia osmotycznego w pożywce, dodaj mHTF z umiarem przed autoprzeszczepem tkanki.

3. Autoprzeszczepienie fragmentów kory jajnikowej

  1. Otwórz opakowanie kaniuli IVA i połóż ją na sterylnym serwecie.
  2. Przepłukać wnętrze kaniuli IVA za pomocą mHTF, kilkakrotnie zasysając i rozładowując mHTF.
  3. Odessać 100-200 μl mHTF, aby napełnić końcówkę kaniuli IVA, aby uniknąć wysychania kostek korowych podczas ładowania (Rysunek 3A).
  4. Załaduj kostki korowe do końcówki kaniuli IVA za pomocą cienkiej pęsety (Rysunek 3B-E).
    UWAGA: Liczba kostek korowych do obciążenia zależy od miejsca szczepienia. Ogólnie rzecz biorąc, 20-30 kostek można przesadzić do ortotropowego pozostałego jajnika, podczas gdy 10-15 kostek można przesadzić do woreczka pod błoną surowiczą jajowodu.
  5. Po załadowaniu kostek korowych przytrzymaj palcami końcówkę kaniuli zawierającej kostki korowe, aż do przekazania kaniuli IVA chirurgowi. Pozwoli to uniknąć spadku temperatury kostki.
    UWAGA: Szczegóły procedury autoprzeszczepu w ramach chirurgii laparoskopowej zostały zgłoszone wcześniej19. Do przeszczepiania kostek kory jajnikowej urządzenie w kształcie kaniuli (kaniula IVA) zostało opracowane przez naszego współpracownika, firmę Kitazato Corporation.

4. Analiza histologiczna kory jajnika

UWAGA: Aby policzyć liczbę pozostałych pęcherzyków, przeprowadź analizę histologiczną zgodnie z poprzednim opisem15.

  1. Oznacz powierzchnię paska korowego barwnikiem do znakowania tkanek przed utrwaleniem próbki. To wskaże stronę kory w pasku do histologii.
  2. Utrwalić paski tkanki na noc w temperaturze 4 °C za pomocą roztworu Bouina.
    UWAGA: Aby wykryć pęcherzyki atretyczne, nie zalecamy stosowania paraformaldehydu do utrwalania, aby uniknąć kurczenia się cytoplazmy oocytów.
  3. Odwodnić i zanurzyć paski tkanek w parafinie.
  4. Wykonać szeregowe cięcie bloku parafiny zawierającego próbkę tkanki.
  5. Wybarwić każdą sekcję za pomocą hematoksyliny i eozyny, aby uwidocznić mieszki włosowe.
  6. Policz mieszki włosowe zgodnie z wcześniejszym opisem17.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

W pierwszej publikacji podejścia IVA15, przeszczepiliśmy kostki korowe jajnika jeden po drugim do miejsc przeszczepu pod chirurgią laparoskopową (Rysunek 1A). Ponieważ użyto 100-150 kostek jajnikowych, przeszczepienie tkanek pod chirurgią laparoskopową trwało 3-4 godziny. Ponadto niektóre kostki jajników zostały utracone przed przeszczepem. Ponieważ kaniula IVA może jednorazowo przenieść 20-30 kostek do miejsca szczepienia (Rysunek 1B), mogliśmy skrócić czas...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

W tym manuskrypcie pokazaliśmy szczegółowy protokół laboratoryjny dla IVA wolnego od leków. Lekowolne IVA to nowe podejście do leczenia niepłodności u pacjentki z POR ze zmniejszającą się rezerwą jajnikową w celu pobudzenia wzrostu pęcherzyków wtórnych, co skutkuje uzyskaniem bardziej dojrzałych oocytów po stymulacji jajników i zwiększeniem w udanej ciąży20. U 15 pacjentek z POR ze zmniejszającą się rezerwą jajnikową w ten sposób uzyskano jedną ciążę spontaniczną, zapłodnienie in vitro – transfer ...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy potwierdzają, że nie ma dla nich konfliktu interesów.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dziękujemy Tatsuji Ihanie, Sachiyo Kurimoto, Kazuko Takahasihowi, Yuki Yoshizawie, Maho Arashi, Kentaro Fujicie, Erinie Kudo, Yuka Kurimoto i Mayuko Wakatsuki za wsparcie procedury IVA bez leków oraz Prof. Aaronowi J.W. Hsueh (Stanford University School of Medicine, Stanford, CA) za krytyczną lekturę i redakcję manuskryptu. Dziękujemy również Rebecce Truman i Gregory'emu Trumanowi za wstawienie narracji w języku angielskim. Badanie to było wspierane przez Japońskie Towarzystwo Promocji Nauki (JSPS), Scientific Research B (19H03801) i Challenging Exploratory Research (18K19624).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
4.5 Pojemnik na próbki ONZFALCON354013Inne produkty mogą być również odpowiednie
Naczynie 60 mmFALCON351007Inne produkty również mogą być odpowiednie
Sterylna serweta 50 x 50 cmHOGY MedicalSR-823Odpowiedni może być również każdy rodzaj sterylnych produktów
Pipeta jednorazowaFALCON357575Inne produkty również mogą być odpowiednie
Cienkie nożyczki, zakrzywioneWPI#14224-GChociaż inne produkty mogą być również odpowiednie, zdecydowanie zalecamy stosowanie tych produktów
Płyta grzewczaTOKAI HITTPiE-SPStosować na sali operacyjnej w celu utrzymania temperatury naczyń zawierających tkankę jajnikową przed przeszczepem Roztwór
albuminy surowicy ludzkiejIrvine Scientific9988Pożywka do obsługi
kaniuliIVA z tkanką jajnikaKITAZATO446030 IVA-6030ESpecyficzna kaniula do autoprzeszczepu tkanek
KAI medical Skalpel jednorazowyWPI#5 10-AChociaż inne produkty mogą być również odpowiednie, zdecydowanie zalecamy stosowanie tych produktów
Mikronożyczki, zakrzywioneWPI#503364Chociaż inne produkty mogą być również odpowiednie, zdecydowanie zalecamy stosowanie tych produktów
Zmodyfikowany HTF Medium-HEPESIrvine Scientific90126Podłoże do pracy z tkanką jajnikową
Sterylna gazaOsaki Medical15004Każdy rodzaj sterylnych produktów może być również odpowiedni
Pęseta szwajcarska, zakrzywione końcówkiKAI#504505Chociaż inne produkty mogą być również odpowiednie, zdecydowanie zalecamy stosowanie tych produktów

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Liang, T., Motan, T. Mature Oocyte Cryopreservation for Fertility Preservation. Advances in Experimental Medicine and Biology. 951, 155-161 (2016).
  2. Yoon, T. K., et al. Live births after vitrification of oocytes in a stimulated in vitro fertilization-embryo transfer program. Fertility and Sterility. 79 (6), 1323-1326 (2003).
  3. Donnez, J., et al. Livebirth after orthotopic transplantation of cryopreserved ovarian tissue. Lancet. 364 (9443), 1405-1410 (2004).
  4. Meirow, D., et al. Pregnancy after transplantation of cryopreserved ovarian tissue in a patient with ovarian failure after chemotherapy. New England Journal of Medicine. 353 (3), 318-321 (2005).
  5. De Vos, M., Devroey, P., Fauser, B. C. Primary ovarian insufficiency. Lancet. 376 (9744), 911-921 (2010).
  6. Scott, R. T., et al. Follicle-stimulating hormone levels on cycle day 3 are predictive of in vitro fertilization outcome. Fertility and Sterility. 51 (4), 651-654 (1989).
  7. Ferraretti, A. P., et al. ESHRE consensus on the definition of 'poor response' to ovarian stimulation for in vitro fertilization: the Bologna criteria. Human Reproduction. 26 (7), 1616-1624 (2011).
  8. Huhtaniemi, I., et al. Advances in the Molecular Pathophysiology, Genetics, and Treatment of Primary Ovarian Insufficiency. Trends in Endocrinology and Metabolism. 29 (6), 400-419 (2018).
  9. Męczekalski, B., Maciejewska-Jeske, M., Podfigurna, A. Reproduction in premature ovarian insufficiency patients - from latest studies to therapeutic approach. Prz Menopauzalny. 17 (3), 117-119 (2018).
  10. Baker, V. Life plans and family-building options for women with primary ovarian insufficiency. Seminars in Reproductive Medicine. 29 (4), 362-372 (2011).
  11. Englert, Y., Govaerts, I. Oocyte donation: particular technical and ethical aspects. Human Reproduction. 13, Suppl 2 90-97 (1998).
  12. Englert, Y., Rodesch, C., Laruelle, C., Govoerts, I. Oocyte donation: ethical aspects related to the donor. Contraception, Fertilite, Sexualite. 25 (3), 251-257 (1997).
  13. Storgaard, M., et al. Obstetric and neonatal complications in pregnancies conceived after oocyte donation: a systematic review and meta-analysis. BJOG: An International Journal of Obstetrics and Gynaecology. 124 (4), 561-572 (2017).
  14. Storgaard, M., Malchau, S., Loft, A., Larsen, E., Pinborg, A. Oocyte donation is associated with an increased risk of complications in the pregnant woman and the fetus. Ugeskrift for Laeger. 179 (11), (2017).
  15. Kawamura, K., et al. Hippo signaling disruption and Akt stimulation of ovarian follicles for infertility treatment. Proceedings of the National Academy of Sciences. 110 (43), 17474-17479 (2013).
  16. Hsueh, A. J., Kawamura, K., Cheng, Y., Fauser, B. C. Intraovarian control of early folliculogenesis. Endocrine Reviews. 36 (1), 1-24 (2015).
  17. Li, J., et al. Activation of dormant ovarian follicles to generate mature eggs. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (22), 10280-10284 (2010).
  18. Suzuki, N., et al. Successful fertility preservation following ovarian tissue vitrification in patients with primary ovarian insufficiency. Human Reproduction. 30 (3), 608-615 (2015).
  19. Tanaka, Y., Hsueh, A. J., Kawamura, K. Surgical approaches of drug-free in activation and laparoscopic ovarian incision to treat patients with ovarian infertility. Fertility and Sterility. , (2020).
  20. Kawamura, K., Ishizuka, B., Hsueh, A. J. W. Drug-free in-vitro activation of follicles for infertility treatment in poor ovarian response patients with decreased ovarian reserve. Reproductive Biomedicine Online. 40 (2), 245-253 (2020).
  21. Haino, T., et al. Determination of Follicular Localization in Human Ovarian Cortex for Vitrification. Journal of Adolescent and Young Adult Oncology. 7 (1), 46-53 (2018).
  22. Baird, D. T., Webb, R., Campbell, B. K., Harkness, L. M., Gosden, R. G. Long-term ovarian function in sheep after ovariectomy and transplantation of autografts stored at -196 C. Endocrinology. 140 (1), 462-471 (1999).
  23. Qin, Y., Jiao, X., Simpson, J. L., Chen, Z. J. Genetics of primary ovarian insufficiency: new developments and opportunities. Human Reproduction Update. 21 (6), 787-808 (2015).
  24. Domniz, N., Meirow, D. Premature ovarian insufficiency and autoimmune diseases. Best Practice & Research: Clinical Obstetrics & Gynaecology. 60, 42-55 (2019).
  25. Laven, J. S. Primary Ovarian Insufficiency. Seminars in Reproductive Medicine. 34 (4), 230-234 (2016).
  26. Grynberg, M., et al. Fertility preservation in Turner syndrome. Fertility and Sterility. 105 (1), 13-19 (2016).
  27. Tomao, F., Spinelli, G. P., Panici, P. B., Frati, L., Tomao, S. Ovarian function, reproduction and strategies for fertility preservation after breast cancer. Critical Reviews in Oncology/Hematology. 76 (1), 1-12 (2010).
  28. Kim, S., Lee, Y., Lee, S., Kim, T. Ovarian tissue cryopreservation and transplantation in patients with cancer. Obstetrics & Gynecology Science. 61 (4), 431-442 (2018).
  29. Donnez, J., Dolmans, M. M. Ovarian tissue freezing: current status. Current Opinion in Obstetrics and Gynecology. 27 (3), 222-230 (2015).
  30. Wu, R. C., Kuo, P. L., Lin, S. J., Liu, C. H., Tzeng, C. C. X chromosome mosaicism in patients with recurrent abortion or premature ovarian failure. Journal of the Formosan Medical Association. 92 (11), 953-956 (1993).
  31. De Munck, N., Vajta, G. Safety and efficiency of oocyte vitrification. Cryobiology. 78, 119-127 (2017).
  32. Argyle, C. E., Harper, J. C., Davies, M. C. Oocyte cryopreservation: where are we now. Human Reproduction Update. 22 (4), 440-449 (2016).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Kriokonserwacja oocyt waktywacja in vitroaktywacja IVA bez u ycia lek wfragmentacja kory jajnikazaburzenie szlaku sygna owego Hippoautoprzeszczep jajnikawzrost mieszyk w wt rnychhodowla tkanki jajnika

Powiązane artykuły