Artykuł metodologiczny

Systematyczna analiza punktacji zapalenia jelit w modelu zapalenia jelita grubego wywołanego mysim dekstranem sodu

DOI:

10.3791/62135

⸱

14 lutego 2021

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pathology, University of Michigan, 2Department of Surgery, Klinikum Rechts der Isar, Technische Universität München, 3Wallenberg Centre for Molecular Medicine, Linköping University, 4Department of Biomedical and Clinical Sciences (BKV), Linköping University

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Systematyczne ocenianie stanu zapalnego jelit za pomocą darmowego systemu wspomaganego komputerowo jest potężnym narzędziem do ilościowego porównywania zmian histopatologicznych w modelach zapalenia jelita grubego charakteryzujących się obecnością wrzodów i zmian zapalnych. Ocena wyniku histologicznego zapalenia jelita grubego wzmacnia obserwacje kliniczne i ułatwia interpretację danych.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Modele mysiego zapalenia jelita grubego są narzędziami, które są szeroko stosowane w badaniach skoncentrowanych na zrozumieniu patobiologii zaburzeń zapalnych jelit. Nadal jednak nie określono solidnych norm obiektywnej i powtarzalnej kwantyfikacji ciężkości choroby. Większość metod analizy zapalenia jelita grubego opiera się na ograniczonej ocenie histologicznej małych odcinków jelita, co prowadzi do częściowych lub stronniczych analiz. Tutaj łączymy akwizycję obrazu o wysokiej rozdzielczości i analizę podłużną całej okrężnicy w celu ilościowego określenia uszkodzenia jelit i owrzodzenia w modelu mysiego zapalenia jelita grubego wywołanym siarczanem sodu (DSS). Protokół ten pozwala na generowanie obiektywnych i powtarzalnych wyników bez intensywnego szkolenia użytkowników. W tym miejscu podajemy wyczerpujące informacje na temat przygotowania próbki i analizy obrazu na przykładach danych z zapalenia jelita grubego wywołanego przez DSS. Metodę tę można łatwo dostosować do innych modeli mysiego zapalenia jelita grubego, które mają znaczny stan zapalny związany z uszkodzeniem błony śluzowej. Wykazujemy, że frakcja błony śluzowej objętej stanem zapalnym / uszkodzonym i zerodowaną / owrzodzoną w stosunku do całkowitej długości okrężnicy jest ściśle zbieżna z wynikami klinicznymi, takimi jak utrata masy ciała w trakcie progresji choroby wywołanej przez DSS. Ten protokół histologiczny zapewnia niezawodną, efektywną czasowo i kosztowo pomoc w standaryzacji analiz aktywności choroby w bezstronny sposób w eksperymentach z zapaleniem jelita grubego DSS.

Wprowadzenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bariera nabłonkowa przewodu pokarmowego odgrywa kluczową rolę w oddzielaniu antygenów luminalnych i patogenów od leżących pod nimi przedziałów tkankowych1. Uszkodzenie nabłonka i rany błony śluzowej obserwowane w stanach patologicznych, takich jak nieswoiste zapalenie jelit (IBD), niedokrwienie lub uraz chirurgiczny, są związane z objawami klinicznymi, które obejmują biegunkę, utratę masy ciała, krew w stolcu i ból brzucha. W odpowiedzi na uraz komórki nabłonkowe migrują i namnażają się, aby ponownie nabłonkować i naprawić ubytki bariery śluzówkowej. Ustąpienie stanu zapalnego i przywrócenie integralności błony śluzowej ma kluczowe znaczenie dla przywrócenia homeostazy i funkcji błony śluzowej jelit2,3,4.

Różne modele zwierzęce zostały wykorzystane do zbadania podstawowych mechanizmów molekularnych, które są związane z uszkodzeniem bariery nabłonkowej jelit. Dobrze ugruntowane i łatwe do zastosowania modele chemicznie indukowanego zapalenia jelita grubego są szeroko stosowane, szczególnie w badaniach związanych z uszkodzeniami zapalnymi, takimi jak IBD. Powszechny, powtarzalny i niezawodny model mysiego zapalenia jelita grubego wykorzystuje uszkodzenie okrężnicy i stan zapalny za pośrednictwem siarczanu sodu dekstranu (DSS). Nasilenie choroby różni się w zależności od szczepu myszy, dawki DSS, czasu podawania DSS i masy cząsteczkowej DSS5,6,7.

Uszkodzenie błony śluzowej jelit podczas zapalenia jelita grubego DSS jest zwykle oceniane za pomocą Indeksu Aktywności Choroby (DAI), złożonego wyniku określanego na podstawie utraty wagi, zawartości krwi w kale i konsystencji stolca. Zawartość krwi w kale może być mikroskopijna (wykrywana za pomocą testu kwasu gwajakowego w kale) lub makroskopowa; Konsystencja kału jest klasyfikowana jako twarda, miękka lub płynna (tj. biegunka)5,8. Ocena tych parametrów klinicznych może być subiektywna i może się różnić w zależności od doświadczenia i uprzedzeń użytkownika, chociaż ogólnie rzecz biorąc, dane dostarczają wiarygodnych informacji i dlatego są szeroko stosowane przez badaczy IBD. Nie ma natomiast ogólnie przyjętej metody histologicznej oceny uszkodzenia błony śluzowej. Najczęściej wybrane obszary jelita grubego są sprawdzane przez przeszkolonego patologa i oceniane na podstawie kilku parametrów, które zwykle obejmują uszkodzenie krypty i infiltrację leukocytów9,10,11. Jednak ze względu na to, że liczba badanych parametrów i ilość analizowanej tkanki różni się znacznie w zależności od poszczególnych raportów, porównywalność wielu opublikowanych badań jest ograniczona. Aby zmniejszyć stronniczość obserwatora i zwiększyć zgodność między badaniami, idealny protokół oceny histologicznej powinien: 1) obejmować całą długość jelita grubego, ponieważ zapalenie błony śluzowej jelit jest najczęściej zmienne i często dochodzi do pominiętych zmian, 2) ograniczać analizę do określonych kluczowych i łatwych do interpretacji parametrów w celu zmniejszenia subiektywności, 3) ułatwiać szybkie, spójne przetwarzanie dużej liczby próbek, oraz 4) korzystać z powszechnie dostępnych i przystępnych cenowo narzędzi do pozyskiwania, analizy i prezentacji danych.

Tutaj opisujemy technikę przetwarzania całego jelita grubego lub długich odcinków jelita cienkiego w konfiguracji "szwajcarskiej bułki" wraz z użyciem darmowego, wspomaganego komputerowo systemu punktacji do analizy zapalenia i uszkodzenia błony śluzowej jelit z powodu zapalenia jelita grubego wywołanego przez DSS.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wszystkie opisane eksperymenty na zwierzętach zostały zatwierdzone przez Komitet ds. Użytkowania i Opieki nad Zwierzętami Uniwersytetu Michigan.

1. Pobieranie tkanek

  1. Eutanazja myszy odbywa się w sposób humanitarny przy użyciu znieczulenia izofluranem, a następnie zwichnięcia szyjki macicy, zgodnie z zatwierdzonymi protokołami. W przypadku wszystkich doświadczeń na zwierzętach uzyskano zgodę certyfikowanej komisji rewizyjnej zgodnie z krajowymi i instytucjonalnymi wytycznymi dotyczącymi postępowania ze zwierzętami.
  2. Umieść mysz na podkładce preparacyjnej w pozycji leżącej. Unieruchom kończyny myszy za pomocą igieł G 20 G x 1 1/2 cala.
  3. Za pomocą kleszczy i nożyczek wykonaj małe nacięcie na skórze brzucha i pociągnij je na bok, aby odsłonić otrzewną.
  4. Otwórz jamę brzuszną z nacięciem w linii środkowej otrzewnej od kości łonowej do boków brzucha.
  5. Ostrożnie usuń tkanki i narządy, aż do uwidocznienia jelita grubego. Przetnij kość miednicy po obu stronach okrężnicy, aby w pełni uwidocznić narząd, rozciągający się od odbytu w kierunku jelita ślepego.
  6. Delikatnie usuń tłuszcz, małe żyły i tętnice przyczepione do okrężnicy, jednocześnie ostrożnie preparując narząd, przecinając go tylko proksymalnie do odbytu i dystalnie do jelita ślepego.
    UWAGA: Wypreparowana okrężnica powinna pozostać w temperaturze pokojowej podczas wykonywania procedury szwajcarskiej rolki.
  7. Ostrożnie przepłucz okrężnicę 1x PBS, używając elastycznej plastikowej igły do głębka wprowadzonej przez odbyt w celu usunięcia zawartości kału.
  8. Ustaw okrężnicę w linii prostej i otwórz ją wzdłużnie wzdłuż tętnicy krezkowej. Przetnij okrężnicę na pół podłużnie od dystalnego do bliższego końca (Rysunek 1A). Jedna połowa tkanki może być wykorzystana do analizy histologicznej, podczas gdy druga może być przetworzona do western blot, PCR lub zwinięta w drugą szwajcarską rolkę do świeżo mrożonej mikroskopii immunofluorescencyjnej12.

2. Przygotowanie bułeczek szwajcarskich

  1. Odetnij dodatkową tkankę z bliższej okrężnicy za pomocą żyletki, aż do uzyskania mniej więcej tej samej szerokości na całej długości okrężnicy.
  2. Wyrównaj okrężnicę, aby odsłonić światło skierowane do góry i całkowicie spłaszcz tkankę za pomocą elastycznej igły do zgłębnika. W razie potrzeby dodaj więcej PBS, aby utrzymać wilgotność tkanki przez cały czas trwania zabiegu.
  3. Usuń nadmiar PBS za pomocą chusteczki papierowej. Za pomocą strzykawki i igły do wbijania w zgłębnik dodaj 10% neutralnego buforowanego roztworu formaliny na tkankę przez 2-3 minuty, aby utrwalić i spłaszczyć tkankę.
  4. Użyj prostych kleszczy, aby chwycić koniec dystalnej okrężnicy i skręć okrężnicę w koncentryczne kręgi od dystalnego do bliższego końca (Rysunek 1B).
    UWAGA: Możliwe jest odepchnięcie wnętrza szwajcarskiej rolki podczas zwijania za pomocą palca wskazującego, aby upewnić się, że tkanka znajduje się wewnątrz rolki.
  5. Włóż igłę 27 G, aby przypiąć dwukropek w środku, aby utrzymać jego szwajcarski kształt rolki (Rysunek 1C).
  6. Umieść szwajcarską bułkę z igłą w kasecie do zatapiania w pojemniku na próbki histologiczne.
    UWAGA: Tkanka musi być zorientowana równolegle w stosunku do kasety przed utrwaleniem ( Rysunek 1D).
  7. Utrwalić tkankę w 10% obojętnym roztworze buforowanej formaliny przez noc w temperaturze 4 °C13.
  8. Po utrwaleniu przez noc przemyj chusteczkę 3x PBS.
  9. Dodaj 70% etanolu do tkanki przed procesem zatapiania parafiny. Wyjmij igłę ze szwajcarskiej rolki przed kontynuowaniem. Tkanka może być przechowywana w etanolu w temperaturze pokojowej do momentu zatopienia parafiny13.
  10. Umieść próbki w procesorze tkankowym, zanurz w parafinie i przygotuj skrawki 4 μm, zamontowane na dodatnio naładowanych szkiełkach mikroskopowych (Rysunek 1E). Może to być opcjonalny punkt zatrzymania.
    UWAGA: Właściwa orientacja tkanki ma kluczowe znaczenie dla uzyskania przekrojów odpowiednich do analizy obrazu. Równoległe zatopienie rolki szwajcarskiej w kasecie parafinowej spowoduje powstanie pełnych sekcji odpowiednich do analizy obrazu (Rysunek 1F-1H). Należy unikać przekrojów ukośnych, aby zapobiec niekompletnym sekcjom (Rysunek 1I-1K). Aby uzyskać więcej informacji, zobacz sekcję Dyskusja.
  11. Wybarwić skrawki hematoksyliną i eozyną (H&E)13.

3. Skanowanie i analiza cyfrowa

UWAGA: Dla dokładnej oceny zmian w błonie śluzowej, wybierz tylko te sekcje, które obejmują co najmniej 90% całkowitej długości jelita grubego.

  1. Zeskanuj poplamione sekcje za pomocą skanera do slajdów lub imagera (patrz Tabela materiałów). Wytwarzane obrazy wymagają rozdzielczości 0,25 mikrona na piksel z 40-krotnym obiektywem i 40-krotnym powiększeniem.
  2. Zainstaluj i pobierz odpowiednie oprogramowanie do cyfrowej analizy zeskanowanych preparatów (patrz Spis materiałów).
  3. Otwórz zeskanowane obrazy w oprogramowaniu do przetwarzania obrazów (Rysunek 2A). Sprawdź, czy cały dwukropek jest widoczny i czy nie brakuje żadnych obszarów próbki.
  4. Aktywuj narzędzia imagera etykiet i paska skali, aby prawidłowo zidentyfikować zeskanowane slajdy, klikając Label imager (Rysunek 2A).
  5. Otwórz narzędzie adnotacji, klikając Adnotacje (Rysunek 2A) i utwórz 3 różne warstwy, klikając Nowa warstwa (Rysunek 2B), aby określić ilościowo całkowitą długość szwajcarskiej rolki, stan zapalny/uraz i erozję/owrzodzenie. Wybierz inny kolor dla każdej warstwy, klikając Kolor warstwy (Rysunek 2B).
  6. Zmierz długość każdej warstwy/kategorii, klikając narzędzie Pióro (Rysunek 2A), używając błony śluzowej mięśni jako odniesienia:
    1. Wyświetl obraz z zoomem 400 μm (lub większym), aby ułatwić odpowiednią wizualizację błony śluzowej mięśni.
      UWAGA: Powiększenie można łatwo kontrolować za pomocą kółka przewijania myszy i w razie potrzeby należy je dostosować podczas poruszania się po sekcji, aby narysować wszystkie linie.
    2. Kliknij narzędzie Pióro, aby narysować linię podążającą za błoną śluzową mięśni (Rysunek 2A). Przesuń wskaźnik zgodnie z potrzebami, aby zwizualizować przyległy obszar do analizy.
      UWAGA: Za każdym razem, gdy pióro zostanie zatrzymane, zostanie wygenerowany mały nowy obszar warstwy. Można go wizualizować i edytować za pomocą zakładki Regiony warstw (wybierz żądany segment i kliknij Usuń warstwę w przypadku błędów lub poprawek, Rysunek 2B).
  7. Po zdefiniowaniu wszystkich warstw (Rysunek 2C) wyeksportuj dane za pomocą przycisku Eksportuj siatkę do pliku tekstowego w opcjach regionów warstw (Rysunek 2B).
    UWAGA: Często zapisuj pliki podczas tworzenia warstw, aby zapewnić prawidłowe przechowywanie danych.
  8. Otwórz pliki tekstowe i skopiuj dane za pomocą arkusza kalkulacyjnego. Zsumuj wszystkie segmenty z każdego regionu i oblicz procent urazów i owrzodzeń w odniesieniu do całkowitej długości.
  9. Aby obliczyć wynik histologicznego zapalenia jelita grubego (HCS) i ocenić ciężkość choroby, należy wziąć pod uwagę trzy główne cechy, jak opisano poniżej.
    1. Sprawdź, czy błona śluzowa jelit jest zdrowa, która charakteryzuje się zorganizowanymi komórkami nabłonka w osi krypta-światło, blaszką właściwą z kilkoma komórkami odpornościowymi i błoną śluzową mięśni podskórnych, która łączy błonę śluzową i błonę podśluzową (Rysunek 3A).
    2. Sprawdź, czy nie ma stanu zapalnego/urazu, który charakteryzuje się osłabionymi lub częściowo brakującymi komórkami nabłonkowymi oraz zapaleniem błony śluzowej z infiltracją neutrofili do krypt (Rysunek 3B).
    3. Sprawdź, czy nie ma erozji/owrzodzenia, które charakteryzuje się obszarami pozbawionymi nabłonka powierzchniowego lub obszarami całkowicie pozbawionymi krypt nabłonkowych z powiązanymi leukocytami lub bez nich (Rysunek 3C).
  10. Obliczać HCS obszarów uszkodzonych i owrzodzonych wyrażonych jako procent całkowitej długości według następującego wzoru:
    figure-protocol-1
    UWAGA: HCS łączy procent stanu zapalnego/urazu i erozji/owrzodzenia, dodając czynnik dwa do tego ostatniego, w oparciu o rozsądne założenie, że całkowita utrata nabłonka powoduje maksymalną utratę integralności bariery, a tym samym pogorszenie choroby. HCS konsekwentnie reprezentuje zmiany morfologiczne spowodowane eksperymentalnym zapaleniem jelita grubego wywołanym przez DSS. Co ciekawe, nie zaobserwowaliśmy wyraźnej korelacji między liczbą agregatów limfoidalnych okrężnicy lub pęcherzyków a nasileniem klinicznym choroby w zapaleniu jelita grubego DSS, dlatego nie uwzględniliśmy kwantyfikacji w tej analizie.
  11. Zrób migawkę reprezentatywnych obrazów (kliknij Migawka, Rysunek 2A) i zapisz. W razie potrzeby dołącz podziałkę skali, klikając Pokaż/Ukryj pasek skali (Rysunek 2A).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Aby zilustrować wiarygodność tej analizy wyników histologicznego zapalenia jelita grubego w kontekście uszkodzenia błony śluzowej po prowokacji DSS i późniejszej rekonwalescencji po zapaleniu jelita grubego, podaliśmy 2,5% DSS w wodzie pitnej ośmiu 10-tygodniowym samcom myszy dzikiego typu C57BL6 przez 5 dni, po czym nastąpił okres rekonwalescencji z regularną wodą przez 5 dni. Nie stwierdzono zmian w masie ciała podczas ostrego podawania DSS, od dnia 0 do 5 (Ryc. 4A)....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nasz system oceny histologicznego zapalenia jelita grubego stanowi niezawodne narzędzie do ilościowego określania stanu zapalnego i uszkodzeń tkanek w jelicie. Takie podejście zapewnia lepsze zrozumienie stanu histopatologicznego całego narządu bez uprzedzeń związanych z wybieraniem małych obszarów lub niekompletnych odcinków. Wśród kluczowych kroków do pomyślnego wykonania tego protokołu jest właściwe przygotowanie szwajcarskich bułek, które pozwalają na analizę co najmniej 90% długości jelita grubego; równoległa orient...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy pragną podziękować za wsparcie ze strony NIH finansujących DK055679, DK089763, DK079392, DK061739, DK072564 oraz University of Michigan Pathology Slide Scanning Services.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Aperio AT2 – Wysokoobjętościowe, cyfrowe skanowanie całych slajdówLeica BiosystemsAperio AT2
Podkłady chłonne z wodoodporną barierą dla wilgociVWR International56616-032
American Line 66-0089 Lemiesz jednoostrzowy, 100 sztuk w opakowaniuGT MidwestTL5837
BD Luer-Lok Jednorazowe strzykawki bez igiełFisher scientific14-823-2A
Nożyczki do zeza z Bonn - Narzędzia ToughCutFine Science11103-09
Nożyczki do zeza z Bonn - Narzędzia do nauki o14084-09
Kleszcze Dumont #5Narzędzia do nauki11251-20
Roztwór formaliny, neutralny buforowany, 10%SigmaHT501640-19L
HistoPrep 70% EaFisherbran70% denaturowany alkohol etylowy
ImageScopeAperioWersja 12.3.3.5039http://www.leicabiosystems.com/pathology-imaging/aperio-epathology/integrate/imagescope/
LeakBuster Pojemniki na próbki: SterylneStarplex ScientificB120210
sól fizjologiczna z buforem fosforanowym, bez wapnia i magnezuCorning21-040-CV
Plastikowe rurki zasilające, 20 GA x 30 mmIgła InstechFTP2030
PrecisionGlide, rozmiar: 20 g x 1 1/2 calaBD (Becton, Dickinson and Company)305176
Igła PrecisionGlide, rozmiar: 27 g x 1/2 calaBD (Becton, Dickinson and Company)305109
Strzykawka, 10 mlBD (Becton, Dickinson and Company)302995
Kasety na chusteczki UnisetteSimportM505-2
zezie z Bonn

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Kagnoff, M. F. The intestinal epithelium is an integral component of a communications network. Journal of Clinical Investigation. 124 (7), 2841-2843 (2014).
  2. Laukoetter, M. G., Nava, P., Nusrat, A. Role of the intestinal barrier in inflammatory bowel disease. World Journal of Gastroenterology. 14 (3), 401-407 (2008).
  3. Baumgart, D. C., Sandborn, W. J. Crohn's disease. Lancet. 380 (9853), 1590-1605 (2012).
  4. Ordas, I., Eckmann, L., Talamini, M., Baumgart, D. C., Sandborn, W. J. Ulcerative colitis. Lancet. 380 (9853), 1606-1619 (2012).
  5. Vowinkel, T., Kalogeris, T. J., Mori, M., Krieglstein, C. F., Granger, D. N. Impact of dextran sulfate sodium load on the severity of inflammation in experimental colitis. Digestive Diseases and Sciences. 49 (4), 556-564 (2004).
  6. Kitajima, S., Takuma, S., Morimoto, M. Histological analysis of murine colitis induced by dextran sulfate sodium of different molecular weights. Experimental Animals. 49 (1), 9-15 (2000).
  7. Mahler, M., et al. Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis. American Journal of Physiology. 274 (3), 544-551 (1998).
  8. Wirtz, S., Neufert, C., Weigmann, B., Neurath, M. F. Chemically induced mouse models of intestinal inflammation. Nature Protocols. 2 (3), 541-546 (2007).
  9. Kozlowski, C., et al. An entirely automated method to score DSS-induced colitis in mice by digital image analysis of pathology slides. Disease Models & Mechanisms. 6 (3), 855-865 (2013).
  10. Perse, M., Cerar, A. Dextran sodium sulphate colitis mouse model: traps and tricks. Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2012, 718617(2012).
  11. Mizoguchi, A. Animal models of inflammatory bowel disease. Progress in Molecular Biology and Translational Science. 105, 263-320 (2012).
  12. Flemming, S., et al. Desmocollin-2 promotes intestinal mucosal repair by controlling integrin-dependent cell adhesion and migration. Molecular Biology of the Cell. 31 (6), 407-418 (2020).
  13. Luna, L. G. Armed Forces Institute of Pathology (U.S) & Armed Forces Institute of Pathology (U.S.). Manual of Histologic Staining Methods of the Armed Forces Institute of Pathology. 3d edn. , Blakiston Division. (1968).
  14. Kelm, M., et al. Targeting epithelium-expressed sialyl Lewis glycans improves colonic mucosal wound healing and protects against colitis. The Journal of Clinical Investigation Insight. 5 (12), (2020).
  15. Reed, M., et al. Epithelial CD47 is critical for mucosal repair in the murine intestine in vivo. Nature Communications. 10 (1), 5004(2019).
  16. Laukoetter, M. G., et al. JAM-A regulates permeability and inflammation in the intestine in vivo. Journal of Experimental Medicine. 204 (13), 3067-3076 (2007).
  17. Khounlotham, M., et al. Compromised intestinal epithelial barrier induces adaptive immune compensation that protects from colitis. Immunity. 37 (3), 563-573 (2012).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Mysi model zapalenia jelita grubegoocena histologicznatechnika szwajcarskiego rulonuprzygotowanie tkanki jelita grubegouszkodzenie b ony luzowejanaliza obrazukwantyfikacja ci ko ci chorobyowrzodzenie nab onka

Powiązane artykuły