Tutaj prezentujemy jako przykład wydajny i stabilny system transformacji do analizy funkcjonalnej genu CcCIPK14, stanowiący techniczną podstawę do badania metabolizmu roślin niemodelowych.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
* These authors contributed equally
Tutaj prezentujemy jako przykład wydajny i stabilny system transformacji do analizy funkcjonalnej genu CcCIPK14, stanowiący techniczną podstawę do badania metabolizmu roślin niemodelowych.
Wydajny i stabilny system transformacji ma fundamentalne znaczenie dla badania funkcji genów i hodowli molekularnej roślin. W tym miejscu opisujemy zastosowanie systemu transformacji, w którym pośredniczy Agrobacterium rhizogenes, na grochu gołębim. Łodyga jest zakażona A. rhizogenes przenoszącym wektor binarny, który wywołał kalus po 7 dniach, a korzenie przybyszowe 14 dni później. Wygenerowany transgeniczny korzeń włochaty zidentyfikowano za pomocą analizy morfologicznej i genu reporterowego GFP. Aby jeszcze bardziej zilustrować zakres zastosowań tego systemu, CcCIPK14 (Calcineurin B-like protein-interacting protein kinases) przekształcono w groch gołębi przy użyciu tej metody transformacji. Rośliny transgeniczne potraktowano odpowiednio kwasem jasmonowym (JA) i kwasem abscysynowym (ABA) w celu zbadania, czy CcCIPK14 reaguje na te hormony. Wyniki wykazały, że (1) hormony egzogenne mogą znacznie zwiększać poziom ekspresjiCcCIPK14, zwłaszcza w roślinach z nadekspresją CcCIPK14 (OE); (2) zawartość genisteiny w liniach CcCIPK14-OE była istotnie wyższa niż w kontroli; (3) poziom ekspresji dwóch dalszych kluczowych genów syntazy flawonoidów, CcHIDH1 i CcHIDH2, był regulowany w górę w liniach CcCIPK14-OE; oraz (4) system transgeniczny owłosionych korzeni może być wykorzystany do badania metabolicznie funkcjonalnych genów w roślinach niemodelowych.
Transformacja to podstawowe narzędzie do oceny ekspresji genów egzogennych1,2. Wiele biologicznych aspektów roślin zasobowych jest wspólnych dla wszystkich roślin; w związku z tym badania funkcjonalne niektórych genów można przeprowadzić w roślinach modelowych (takich jak Arabidopsis)3. Jednak wiele genów w roślinach jest unikalnych pod względem funkcji i wzorców ekspresji, co wymaga badań na ich własnych lub blisko spokrewnionych gatunkach, zwłaszcza w przypadku roślin zasobowych3,4. Komórki roślinne mogą wyczuwać różn....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
UWAGA: Groch gołębi to diploidalna roślina strączkowa należąca do rodziny bobowatych (Fabaceae). Nasiona grochu gołębiego użyte w tym eksperymencie pochodzą z Północno-Wschodniego Uniwersytetu Leśnictwa w Chinach i są oznaczone kodem 87119. Podstawowe kroki tego protokołu są zilustrowane w Rysunek 1A. Inkubację sadzonek przeprowadzono w środowisku o wysokiej wilgotności w temperaturze 25 °C pod lampami fluorescencyjnymi przy 50 μmol fotonów na m-2 s-1 w fotoperiodze trwającym 16 godzin. W laboratorium zachowały się szczepy A. rhizogenes K599 (NCPPB2659). Przechowywano je w pożywce drożdżowo-mannitol....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
A. rhizogenes transformacja w kierunku korzeni włochatych indukowana przez Agrobacterium na grochu szerokolistnym
Niniejsze badanie opisuje szczegółowe protokoły genetycznej transformacji korzeni włóknistych (hairy roots) za pomocą *A. rhizogenes*, co ma znaczenie w dziedzinie cząsteczek roślinnych. Uzyskanie korzeni włochatych z korzeni grochu turbotowego zainfekowanych przez zajęło około 5 tygodni A. rhizogenes. Ryc.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Szybka charakterystyka funkcji genów jest wspólnym celem w badaniu większości gatunków i jest szczególnie ważna dla rozwoju roślin zasobowych. Transformacja, w której pośredniczy A. rhizogenes, jest szeroko stosowana w kulturach owłosionych korzeni. Kultura owłosionych korzeni (HRC), jako unikalne źródło produkcji metabolitów, odgrywa kluczową rolę w inżynierii metabolicznej 18,28. Zastosowanie tej technologii ogranicza się głównie do funkcji genów i.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Autorzy oświadczają, że nie są im znane żadne konkurencyjne interesy finansowe ani powiązania osobiste, które mogłyby mieć wpływ na pracę opisaną w tym artykule.
Autorzy dziękują za wsparcie finansowe ze strony Narodowej Fundacji Nauk Przyrodniczych Chin (31800509, 31922058), Outstanding Young Talent Fund in Beijing Forestry University" (2019JQ03009), Funduszy Badań Podstawowych dla Uniwersytetów Centralnych (2021ZY16), Beijing Municipal Natural Science Foundation (6212023) oraz National Key R&D Program of China (2018YFD1000602,2019YFD1000605-1) oraz Beijing Advanced Innovation Center for Tree Breeding by Projekt molekularny. Pragnę podziękować Zhengyang Hou za jego wskazówki podczas pisania artykułu oraz profesorowi Meng Dong za wskazówki dotyczące idei artykułu.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Probówka qPCR 0,1 ml z 8 paskami (z nasadkami optycznymi) | KIRGEN, Szanghaj, Chiny | KJ2541 | |
| ABA | Solarbio Life Science, Pekin, Chiny | A8060 | |
| Agar w proszku | Solarbio Life Science, Pekin, Chiny | A8190 | |
| Wirówka | Osterode am Harz, Niemcy | d37520 | |
| Moduł optyczny CFX Connect TW | Bio-rad, USA | 1855200 | |
| inkubator stałotemperaturowy | Szanghaj Boxun Przemysł i Commerce Co., Ltd, Szanghaj, Chiny | BPX-82 | |
| Jednorazowa szalka Petriego | Corning, amerykańska | ||
| sucha kąpiel | Gingko Bioscience Company/Coyote bioscience, Chiny | H2H3-100C | |
| Eastep Total RNA Extraction Kit50 | Promega, Pekin, Chiny | LS1030 | |
| Waga elektroniczna | Tianjin, Chiny | TD50020 | |
| Papa | filtracyjnaHangzhou wohua Filter Paper Co., Ltd, Chiny | ||
| FiveEasy Plus | Mettler Toledo, Szanghaj, Chińska Republika Ludowa | 30254105 | |
| Doniczka 9*9 | Chiny | ||
| JA | Solarbio Life Science, Pekin, Chiny | J8070 | |
| Kan | Solarbio Life Science, Pekin, Chiny | K8020 | |
| MagicSYBR Mixture | CWBIO, Pekin, Chiny | ||
| Mini mikrowirówka | Scilogex, Pekin, Chiny | S1010E | |
| NaCl | Solarbio Life Science, Pekin, Chiny | S8210 | |
| NanPhotometer N50 Touch | IMPLEN GMBH, Niemcy | T51082 | |
| Purelab untra | |||
| Rifampicin | Solarbio Life Science, Pekin, Chiny | R8010 | |
| Skrzynka na sadzonki 30*200 | China | ||
| Thermal Rowerzysta PCR | Bio-rad, oscylator | T100 | |
| Donglian Beijing Donglian Har Instrument Manufacture Co., Ltd, Chiny | DLHE-Q200 | ||
| Tomy Autoclave | Tomy, Japonia | SX-500 | |
| Tryptone | Solarbio Life Science, Pekin, Chiny | LP0042 | |
| UEIris II RT-PCR System do syntezy pierwszej nici cDNA (z dsDNazą) | US Everbright INC, Jiangsu, Chiny | R2028 | |
| Ekstrakt drożdżowy w proszku | Solarbio Life Science, Pekin, Chiny | LP0021 |
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Ten artykuł został opublikowany
Film wkrótce dostępny