Tutaj prezentujemy wyrafinowane procedury chirurgiczne dotyczące skutecznego przeprowadzenia przeszczepu wysp trzustkowych wewnątrz portalu, klinicznie istotnej, ale technicznie trudnej procedury chirurgicznej u myszy.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
* These authors contributed equally
Tutaj prezentujemy wyrafinowane procedury chirurgiczne dotyczące skutecznego przeprowadzenia przeszczepu wysp trzustkowych wewnątrz portalu, klinicznie istotnej, ale technicznie trudnej procedury chirurgicznej u myszy.
Chociaż wątroba jest obecnie akceptowana jako główne miejsce przeszczepu ludzkich wysp trzustkowych w warunkach klinicznych, wyspy trzustkowe są przeszczepiane pod torebkę nerkową w większości przedklinicznych badań nad przeszczepem wysp trzustkowych u gryzoni. Model ten jest powszechnie stosowany, ponieważ przeszczep mysich wysp trzustkowych wewnątrz wątroby jest technicznie trudny, a wysoki odsetek myszy może umrzeć z powodu powikłań chirurgicznych, zwłaszcza krwawienia z miejsca wstrzyknięcia po przeszczepie. W tym badaniu przedstawiono dwie procedury, które mogą zminimalizować częstość występowania krwawienia z żyły wrotnej po infuzji. Pierwsza metoda polega na nałożeniu wchłanialnej hemostatycznej gąbki żelatynowej na miejsce wstrzyknięcia, a druga metoda polega na penetracji igły do wstrzykiwania wysp trzustkowych najpierw przez tkankę tłuszczową, a następnie do żyły wrotnej poprzez wykorzystanie tkanki tłuszczowej jako fizycznej bariery zatrzymującej krwawienie. Obie metody mogą skutecznie zapobiegać śmierci myszy wywołanej krwawieniem. Przedstawiono cały wycinek wątroby ukazujący rozmieszczenie wysp trzustkowych oraz objawy zakrzepicy wysp trzustkowych po przeszczepieniu, co jest cechą typową dla przeszczepienia wysp wewnątrzwątrobowych. Te ulepszone protokoły udoskonalają procedury przeszczepiania wysp trzustkowych wewnątrz wątroby i mogą pomóc laboratoriom w przygotowaniu procedury do badania przeżywalności i funkcji wysp trzustkowych w warunkach przedklinicznych.
Przeszczepianie wysp trzustkowych (IIT) przez żyłę wrotną jest najczęściej stosowaną metodą przeszczepu ludzkich wysp trzustkowych w warunkach klinicznych. Mysi model IIT oferuje doskonałą okazję do zbadania transplantacji wysp trzustkowych i przetestowania obiecujących podejść interwencyjnych, które mogą zwiększyć skuteczność przeszczepu wysp trzustkowych1. IIT został po raz pierwszy opisany w latach siedemdziesiątych XX wieku i używany przez kilka grup1,2,3,4,5. Odzyskał popularnoś....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wszystkie procedury zostały przeprowadzone za zgodą Instytucjonalnych Komitetów ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt na Uniwersytecie Medycznym Południowej Karoliny oraz Centrum Medycznego Ralpha H. Johnsona w Charleston.
1. Indukcja cukrzycy za pomocą streptozotocyny (STZ)
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przeprowadziliśmy syngeneiczne i ksenogeneiczne przeszczepy wysepek przez żyłę wrotną. Funkcję przeszczepionych wysepek obserwowano w sposób zależny od dawki w obu modelach transplantacji. W modelu syngeneicznego przeszczepu wysepek z wykorzystaniem myszy C57BL/6, transplantacja 250 wysepek doprowadziła do przejściowej normoglikemii, przed powrotem myszy do stanu hiperglikemii. Myszy, które otrzymały 500 wysepek, osiągnęły i utrzymały normoglikemię powyżej 30 dni po transplantacji (Rycina 2A.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
W tym badaniu wykazano dwie ulepszone procedury, które mogą zapobiegać krwawieniu i mogą zmniejszać śmiertelność myszy podczas IIT u myszy. Badanie to umożliwia naukowcom wizualizację modelu przeszczepu wysp trzustkowych, który jest unikalny w badaniu natychmiastowej reakcji zapalnej za pośrednictwem krwi po przeszczepie. Model IIT jest charakterystycznym modelem do badania przeżywalności komórek wysp trzustkowych i uszkodzeń niedokrwiennych wątroby w odpowiedzi na przeszczep wysp trzustkowych19. .......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wszyscy autorzy oświadczają, że nie pozostają w konflikcie interesów.
To badanie było wspierane przez Departament ds. Weteranów (VA-ORD BLR&D Merit I01BX004536), a Narodowy Instytut Zdrowia przyznaje HW # 1R01DK105183, DK120394, DK118529. Chcielibyśmy podziękować Panu Michaelowi Lee i Pani Lindsay Swaby za redakcję językową
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| 10% neutralna buforowana formalina v/v | Fisher Scientific 23426796 | ||
| 1 ml Strzykawka z igłą | AHS | AH01T | |
| 20 mL Strzykawka | BD | 301031 | |
| 25G x 5/8" igły podskórne | BD | 305122 | |
| Wkładki nasączone alkoholem, sterylne | Fisher Scientific | 22-363-750 | |
| Znieczulenie zwierząt system | VetEquip, Inc. | ||
| Chlorowodorek buprenorfiny, do wstrzykiwań | Par Sterile Products, LLC | NDC 42023-179-05 | |
| Probówki wirówkowe, 15 ml | Fisher Scientific | 0553859A | |
| CMRL-1066 | Corning | 15110CV | |
| DMEM | Corning | 10013CV | |
| Etanol, absolutny (200 dowodów), klasa biologii molekularnej | Fisher Scientific | ||
| Bardzo cienkie nożyczki do mikro preparowania 4 "proste, ostre | narzędzie chirurgiczne Roboz Co. | RS-5882 | |
| Płodowa surowica bydlęca (FBS) | Corning | 35011CV | |
| FreeStyle Glukometr | Paski | Lite | |
| FreeStyle Gelfoam (wchłanialna gąbka żelatynowa, USP) | Pharmacia & Upjohn Company | 34201 | |
| Kleszcze Graefe 4-calowa bardzo delikatna końcówka | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5136 | |
| Podgrzewana podkładka | Amazon | B07HMKMBKM | |
| Uchwyt igły Hegar-Baumgartner 5,25 " | Narzędzie chirurgiczne Roboz Co. | RS-7850 | |
| Strzykawka insulinowa z igłą o rozmiarze 27 BD | 879588 | ||
| Podkładki do przygotowania jodu | Fisher Scientific | 19-027048 | |
| Isoflurane | Piramal Critical Care | NDC 66794-017-25 | |
| Penicylina/streptomycyna (P/S) | HyClone | SV30010 | |
| Szew polipropylenowy 4-0 | Med-Vet International | MV-8683 | |
| Szew polipropylenowy 5-0 | Med-Vet International | MV-8661 | |
| Chlorek sodu, 0,9% roztwór dożylny | VWR | 2B1322Q | |
| Streptozocin (STZ) | Sigma | S0130 | |
| Obłożenie chirurgiczne, sterylne | Med-Vet International | DR1826 | |
| Kaseta na tkanki | Fisher Scientific | 22-272416 |
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.