Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Minimalizacja krwawienia z żyły wrotnej po infuzji podczas przeszczepu wysp trzustkowych wewnątrzwątrobowych u myszy

4.1K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/62530

⸱

10 maja 2021

* These authors contributed equally

W tym artykule

Podsumowanie

Tutaj prezentujemy wyrafinowane procedury chirurgiczne dotyczące skutecznego przeprowadzenia przeszczepu wysp trzustkowych wewnątrz portalu, klinicznie istotnej, ale technicznie trudnej procedury chirurgicznej u myszy.

Streszczenie

Chociaż wątroba jest obecnie akceptowana jako główne miejsce przeszczepu ludzkich wysp trzustkowych w warunkach klinicznych, wyspy trzustkowe są przeszczepiane pod torebkę nerkową w większości przedklinicznych badań nad przeszczepem wysp trzustkowych u gryzoni. Model ten jest powszechnie stosowany, ponieważ przeszczep mysich wysp trzustkowych wewnątrz wątroby jest technicznie trudny, a wysoki odsetek myszy może umrzeć z powodu powikłań chirurgicznych, zwłaszcza krwawienia z miejsca wstrzyknięcia po przeszczepie. W tym badaniu przedstawiono dwie procedury, które mogą zminimalizować częstość występowania krwawienia z żyły wrotnej po infuzji. Pierwsza metoda polega na nałożeniu wchłanialnej hemostatycznej gąbki żelatynowej na miejsce wstrzyknięcia, a druga metoda polega na penetracji igły do wstrzykiwania wysp trzustkowych najpierw przez tkankę tłuszczową, a następnie do żyły wrotnej poprzez wykorzystanie tkanki tłuszczowej jako fizycznej bariery zatrzymującej krwawienie. Obie metody mogą skutecznie zapobiegać śmierci myszy wywołanej krwawieniem. Przedstawiono cały wycinek wątroby ukazujący rozmieszczenie wysp trzustkowych oraz objawy zakrzepicy wysp trzustkowych po przeszczepieniu, co jest cechą typową dla przeszczepienia wysp wewnątrzwątrobowych. Te ulepszone protokoły udoskonalają procedury przeszczepiania wysp trzustkowych wewnątrz wątroby i mogą pomóc laboratoriom w przygotowaniu procedury do badania przeżywalności i funkcji wysp trzustkowych w warunkach przedklinicznych.

Wprowadzenie

Przeszczepianie wysp trzustkowych (IIT) przez żyłę wrotną jest najczęściej stosowaną metodą przeszczepu ludzkich wysp trzustkowych w warunkach klinicznych. Mysi model IIT oferuje doskonałą okazję do zbadania transplantacji wysp trzustkowych i przetestowania obiecujących podejść interwencyjnych, które mogą zwiększyć skuteczność przeszczepu wysp trzustkowych1. IIT został po raz pierwszy opisany w latach siedemdziesiątych XX wieku i używany przez kilka grup1,2,3,4,5. Odzyskał popularnoś....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Wszystkie procedury zostały przeprowadzone za zgodą Instytucjonalnych Komitetów ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt na Uniwersytecie Medycznym Południowej Karoliny oraz Centrum Medycznego Ralpha H. Johnsona w Charleston.

1. Indukcja cukrzycy za pomocą streptozotocyny (STZ)

  1. Preparat myszy biorcy:
    1. Zważ wszystkie myszy indywidualnie.
    2. Sprawdź poziom glukozy we krwi z próbki krwi żyły ogonowej za pomocą glukometru.
  2. Oznaczanie dawki STZ dla trzech różnych scenariuszy:
    1. W przypadku myszy ze stłuszczeniem wątroby należy wstrzyknąć jedną dawkę STZ [40 mg/kg/dobę, wstrzyknięcie dootr....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Przeprowadziliśmy syngeneiczne i ksenogeneiczne przeszczepy wysepek przez żyłę wrotną. Funkcję przeszczepionych wysepek obserwowano w sposób zależny od dawki w obu modelach transplantacji. W modelu syngeneicznego przeszczepu wysepek z wykorzystaniem myszy C57BL/6, transplantacja 250 wysepek doprowadziła do przejściowej normoglikemii, przed powrotem myszy do stanu hiperglikemii. Myszy, które otrzymały 500 wysepek, osiągnęły i utrzymały normoglikemię powyżej 30 dni po transplantacji (Rycina 2A.......

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

W tym badaniu wykazano dwie ulepszone procedury, które mogą zapobiegać krwawieniu i mogą zmniejszać śmiertelność myszy podczas IIT u myszy. Badanie to umożliwia naukowcom wizualizację modelu przeszczepu wysp trzustkowych, który jest unikalny w badaniu natychmiastowej reakcji zapalnej za pośrednictwem krwi po przeszczepie. Model IIT jest charakterystycznym modelem do badania przeżywalności komórek wysp trzustkowych i uszkodzeń niedokrwiennych wątroby w odpowiedzi na przeszczep wysp trzustkowych19. .......

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Wszyscy autorzy oświadczają, że nie pozostają w konflikcie interesów.

Podziękowania

To badanie było wspierane przez Departament ds. Weteranów (VA-ORD BLR&D Merit I01BX004536), a Narodowy Instytut Zdrowia przyznaje HW # 1R01DK105183, DK120394, DK118529. Chcielibyśmy podziękować Panu Michaelowi Lee i Pani Lindsay Swaby za redakcję językową

....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
10% neutralna buforowana formalina v/vFisher Scientific 23426796
1 ml Strzykawka z igłąAHSAH01T
20 mL StrzykawkaBD301031
25G x 5/8" igły podskórneBD305122
Wkładki nasączone alkoholem, sterylneFisher Scientific22-363-750
Znieczulenie zwierząt systemVetEquip, Inc.
Chlorowodorek buprenorfiny, do wstrzykiwańPar Sterile Products, LLCNDC 42023-179-05
Probówki wirówkowe, 15 mlFisher Scientific0553859A
CMRL-1066Corning15110CV
DMEMCorning10013CV
Etanol, absolutny (200 dowodów), klasa biologii molekularnejFisher Scientific
Bardzo cienkie nożyczki do mikro preparowania 4 "proste, ostrenarzędzie chirurgiczne Roboz Co.RS-5882
Płodowa surowica bydlęca (FBS)Corning35011CV
FreeStyle  GlukometrPaskiLite
FreeStyle Gelfoam (wchłanialna gąbka żelatynowa, USP)Pharmacia & Upjohn Company34201
Kleszcze Graefe 4-calowa bardzo delikatna końcówkaRoboz Surgical Instrument Co.RS-5136
Podgrzewana podkładkaAmazonB07HMKMBKM
Uchwyt igły Hegar-Baumgartner 5,25 "Narzędzie chirurgiczne Roboz Co.RS-7850
Strzykawka insulinowa z igłą o rozmiarze 27 BD879588
Podkładki do przygotowania joduFisher Scientific19-027048
IsofluranePiramal Critical CareNDC 66794-017-25
Penicylina/streptomycyna (P/S)HyCloneSV30010
Szew polipropylenowy 4-0Med-Vet InternationalMV-8683
Szew polipropylenowy 5-0Med-Vet InternationalMV-8661
Chlorek sodu, 0,9% roztwór dożylnyVWR2B1322Q
Streptozocin (STZ)SigmaS0130
Obłożenie chirurgiczne, sterylneMed-Vet InternationalDR1826
Kaseta na tkankiFisher Scientific22-272416
901806BP2818500 testowe do pomiaru stężenia glukozy we krwi Abbott

Bibliografia

  1. Pellegrini, S., Cantarelli, E., Sordi, V., Nano, R., Piemonti, L. The state of the art of islet transplantation and cell therapy in type 1 diabetes. Acta Diabetology. 53 (5), 683-691 (2016).
  2. Ballinger, W. F., Lacy, P. E. Transplantation of intact pancreatic islets in rats. Surg....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

myszy z przeszczepionymi wysepkamihemostatyczna gąbka żelatynowatechnika podskórnego przeszczepu w tkankę tłuszczowąwstrzykiwanie do żyły wrotnejprzeżywalność wysepekpowikłania chirurgicznedystrybucja wysepektransplantacja wątroby myszy