Obrazowanie in vivo trzustki w wysokiej rozdzielczości było ułatwione dzięki oknu obrazowania przyżyciowego trzustki.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Stabilizowana podłużna wizualizacja trzustki na poziomie komórkowym in vivo w modelu mysim z oknem obrazowania przyżyciowego trzustki
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Bezpośrednie obrazowanie in vivo trzustki w rozdzielczości komórkowej na żywym modelu małego zwierzęcia było technicznie trudne. Niedawne badanie obrazowania przyżyciowego, z oknem obrazowania jamy brzusznej, umożliwiło wizualizację dynamiki komórkowej w narządach jamy brzusznej in vivo. Jednak ze względu na miękką strukturę trzustki myszy przypominającą arkusz, na którą łatwo wpływają ruchy fizjologiczne (np. perystaltyka i oddychanie), trudno było przeprowadzić ustabilizowane obrazowanie podłużne in vivo przez kilka tygodni na poziomie komórkowym w celu identyfikacji, śledzenia i ilościowego określenia wysp trzustkowych lub komórek rakowych w trzustce myszy. W niniejszym artykule opisujemy metodę wszczepiania nowatorskiej podstawy nośnej, zintegrowanego okna obrazowania przyżyciowego trzustki, które może przestrzennie oddzielić trzustkę od jelita w celu podłużnego obrazowania przyżyciowego poklatkowego mikrostruktury trzustki. Podłużne obrazowanie in vivo z oknem obrazowania umożliwia stabilną wizualizację, pozwalającą na śledzenie wysp trzustkowych przez okres 3 tygodni oraz trójwymiarowe obrazowanie mikrostruktury w wysokiej rozdzielczości, czego dowodem jest tutaj ortotopowy model raka trzustki. Dzięki naszej metodzie dalsze badania obrazowe przyżyciowe mogą wyjaśnić patofizjologię różnych chorób obejmujących trzustkę na poziomie komórkowym.
Wprowadzenie
Trzustka jest organem brzusznym z funkcją zewnątrzwydzielniczą w przewodzie pokarmowym i funkcją endokrynną polegającą na wydzielaniu hormonów do krwiobiegu. Obrazowanie komórkowe trzustki w wysokiej rozdzielczości może ujawnić patofizjologię różnych chorób związanych z trzustką, w tym zapalenia trzustki, raka trzustki i cukrzycy1. Konwencjonalne narzędzia do diagnostyki obrazowej, takie jak tomografia komputerowa, obrazowanie w rozdzielczości magnetycznej i ultrasonografia, są szeroko dostępne w dziedzinie klinicznej1,2. Jednak te metody obrazowania ograniczają się do wizualizacji tylk....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Wszystkie procedury opisane w tym artykule zostały przeprowadzone zgodnie z 8wydaniem Przewodnika po opiece i użytkowaniu zwierząt laboratoryjnych (2011)26 i zatwierdzone przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt w Koreańskim Instytucie Zaawansowanej Nauki i Technologii (KAIST) oraz Narodowym Szpitalu Bundang Uniwersytetu w Seulu (SNUBH).
1. Przygotowanie okna i innych materiałów
- Niestandardowy projekt okna obrazowania przyżyciowego trzustki, aby odizolować trzustkę od jelita w jamie brzusznej18 (Rysunek 1A,B
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Mikroskopia wewnątrzorganizmowa w połączeniu ze zintegrowanym oknem obrazowania wewnątrzorganizmowego trzustki z podstawą wspierającą umożliwia podłużne obrazowanie trzustki myszy na poziomie komórkowym. Niniejszy protokół z wykorzystaniem okna obrazowania wewnątrzorganizmowego trzustki zapewnia długotrwałą stabilność tkanki, co pozwala na uzyskanie obrazów o wysokiej rozdzielczości w celu śledzenia poszczególnych wysepek przez okres do 3 tygodni. W rezultacie możliwe jest uzyskanie obrazowania mozaikowego dla rozszerzon.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Opisany tutaj protokół składa się z obrazowania przyżyciowego trzustki przy użyciu nowatorskiego, zintegrowanego okna obrazowania przyżyciowego trzustki zmodyfikowanego z okna obrazowania jamy brzusznej. Wśród opisanych powyżej protokołów pierwszym krytycznym krokiem jest wszczepienie okienka obrazowania trzustki przyżyciowej u myszy. Do nakładania kleju w oknie ważne jest, aby nałożyć klej między marginesem okna a szkłem nakrywkowym, ale nie na tkankę trzustki, ponieważ może to znacznie przerwać obrazowanie przyżyciowe........
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Podziękowania
To badanie było wspierane przez grant nr 14-2020-002 z Funduszu Badawczego SNUBH oraz przez grant National Research Foundation of Korea (NRF) finansowany przez rząd Korei (MSIT) (NRF-2020R1F1A1058381, NRF-2020R1A2C3005694).
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Estry sukcynimidylowe Alexa Fluor 647 (estry NHS) | Invitrogen | A20006 | Sonda fluorescencyjna do koniugatu z przeciwciałem |
| BALB/C Nude | OrientBio | BALB/C Nude | BALB/C Nude |
| BD Rurka polietylenowa Intramedic Cewnik | BD Biosciences | 427401 | PE10 do połączenia z igłą |
| C57BL/6N | OrientBio | C57BL/6N | C57BL/6N C57BL/6N |
| Okulary nakrywkowe okrągłe | Marienfeld | 0111520 | Szkło nakrywkowe do okienka obrazowania trzustki |
| FITC Dextran 2MDa | Merck (dawniej Sigma Aldrich) | FD200S | Do identyfikacji naczyń Płaszczyzna bitowa |
| IMARIS 8.1 | IMARIS | Przetwarzanie obrazu | |
| Mikroskopia przyżyteczkowa | IVIM tech | IVM-C | Mikroskopia przyżyciowa |
| Nożyczki IRIS | JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD | S-1107-10 | Ten produkt można zastąpić produktem innej firmy |
| Loctite 401 | Henkel | 401 | Klej cyjanoakrylowy N-butylu |
| Uchwyt na mikroigły | JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD | H-1126-10 | Ten produkt można zastąpić produktem innej firmy |
| Mikro ściągacz | JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD | 17004-03 | Ten produkt można zastąpić produktem innej firmy |
| Kleszcze do mikrokleszczyków | JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD | F-1034 | Ten produkt można zastąpić produktem innej firmy |
| MIP-GFP | The Jackson Laboratory | 006864 | B6. Cg-Tg(Ins1-EGFP)1Hara/J |
| Nylon 4-0 | AILEE | NB434 | Niewchłanialny szew |
| Omnican N 100 30G | B BRAUN | Do cewnika naczyniowego, używaj tylko części igły | |
| PANC-1 NucLightRed | Wykonane | zamówienie Wykonane | w laboratorium |
| Okno obrazowania trzustki | Geumto | Engineering Na zamówienie niestandardowe | Okno obrazowania trzustki - zamówienie niestandardowe |
| Physiosuite | Kent Scientific | PS-02 | Homeotermiczny regulator temperatury |
| Oczyszczony NA/LE Szczurzy anty-mysz CD31 | BD Biosciences | 553708 | Przeciwciało do znakowania naczyń in vivo |
| Kleszcze pierścieniowe | JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD | F-1090-3 | Ten produkt można zastąpić produktem innej firmy |
| Rompun | Bayer Rompun | Środek znieczulający | |
| TMR Dextran 65-85kDa | Merck (dawniej Sigma Aldrich) | T1162 | Do identyfikacji statku |
| Uchwyt okienny | Geumto Engineering | Na zamówienie Uchwyt | do okien - na zamówienie |
| Zoletil | Virbac | Zoletil 100 | Środek znieczulający |
Bibliografia
- Dimastromatteo, J., Brentnall, T., Kelly, K. A. Imaging in pancreatic disease. Nature Reviews. Gastroenterology & Hepatology. 14 (2), 97-109 (2017).
- Cote, G. A., Smith, J., Sherman, S., Kelly, K. Technologies for imaging the normal and diseased pancreas. Gastroenterology.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
