Artykuł metodologiczny

Wspomagany programowo pomiar ilościowy grubości kości podchrzęstnej choroby zwyrodnieniowej stawów

DOI:

10.3791/62973

⸱

18 marca 2022

 ,  ,  ,  ,  , 
1Harrington Laboratory for Molecular Orthopedics, Department of Orthopedic Surgery, University of Kansas Medical Center, 2Division of Sports Medicine, Department of Orthopedic Surgery, University of Kansas Medical Center, 3Department of Biochemistry & Molecular Biology, University of Kansas Medical Center

* These authors contributed equally

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ten artykuł metodologiczny przedstawia wspomagany oprogramowaniem protokół pomiaru ilościowego do ilościowego określenia histologicznej grubości kości podchrzęstnej w mysich stawach kolanowych z chorobą zwyrodnieniową stawów kolanowych i normalnych stawach kolanowych jako kontrolnych. Protokół ten jest bardzo wrażliwy na subtelne zgrubienia i nadaje się do wykrywania wczesnych zmian podchrzęstnych w chorobie zwyrodnieniowej stawów.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Podchrzęstne pogrubienie kości i stwardnienie rozsiane są głównymi cechami charakterystycznymi choroby zwyrodnieniowej stawów (OA), zarówno u modeli zwierzęcych, jak i u ludzi. Obecnie nasilenie histologicznego pogrubienia kości podchrzęstnej jest głównie określane przez półilościowe systemy klasyfikacji oparte na ocenie wizualnej. W artykule przedstawiono powtarzalny i łatwy do wykonania protokół ilościowego pomiaru grubości kości podchrzęstnej w mysim modelu choroby zwyrodnieniowej stawu kolanowego wywołanej destabilizacją łąkotki przyśrodkowej (DMM). W protokole tym wykorzystano oprogramowanie ImageJ do ilościowego określenia grubości kości podchrzęstnej na obrazach histologicznych po zdefiniowaniu obszaru zainteresowania w kłykciu przyśrodkowym kości udowej i medycznym płaskowyżu piszczelowym, gdzie zwykle występuje pogrubienie kości podchrzęstnej w chorobie zwyrodnieniowej stawu kolanowego wywołanej DMM. Jako kontrolę wykorzystano obrazy histologiczne stawów kolanowych z procedurą pozorowaną. Analiza statystyczna wykazała, że nowo opracowany ilościowy system pomiaru kości podchrzęstnej jest wysoce odtwarzalny przy niewielkiej zmienności wewnątrz i między obserwatorami. Wyniki sugerują, że nowy protokół jest bardziej wrażliwy na subtelne lub łagodne pogrubienie kości podchrzęstnej niż szeroko stosowane systemy oceny wizualnej. Protokół ten jest odpowiedni do wykrywania zarówno wczesnych, jak i postępujących zmian podchrzęstnych w chorobie zwyrodnieniowej stawów oraz do oceny skuteczności in vivo leczenia choroby zwyrodnieniowej stawów w połączeniu z klasyfikacją chrząstki zwyrodnieniowej stawów.

Wprowadzenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Choroba zwyrodnieniowa stawów (OA), charakteryzująca się radiologicznie zwężeniem przestrzeni stawowej z powodu utraty chrząstki stawowej, osteofitów i stwardnienia podchrzęstnego kości (SCB), jest najczęstszą formą zapalenia stawów1,2. Chociaż rola kości okołostawowej w etiologii choroby zwyrodnieniowej stawów nie jest w pełni poznana, tworzenie osteofitów i stwardnienie SCB są ogólnie uważane za wyniki procesu chorobowego, a nie czynniki sprawcze, ale zmiany w architekturze/kształcie i biologii kości okołostawowej mogą przyczyniać się do rozwoju i progresji OA3,4. Opracowanie dokładnego i łatwego do wdrożenia systemu oceny choroby zwyrodnieniowej stawów, w tym pomiaru SCB, ma kluczowe znaczenie dla badań porównawczych prowadzonych przez laboratoria badawcze oraz dla oceny skuteczności środków terapeutycznych mających na celu zapobieganie lub osłabianie progresji choroby zwyrodnieniowej stawów.

SCB zbudowany jest z cienkiej płytki kostnej przypominającej kopułę i leżącej pod spodem warstwy kości beleczkowej. Płytka SCB to blaszka korowa, leżąca równolegle do zwapniałej chrząstki i bezpośrednio pod nią. Małe gałęzie naczyń tętniczych i żylnych, a także nerwy, przenikają przez kanały w płytce SCB, komunikując się między zwapniałą chrząstką a kością beleczkową. Podchrzęstna kość beleczkowa zawiera naczynia krwionośne, nerwy czuciowe, szpik kostny i jest bardziej porowata i metabolicznie aktywna niż płytka SCB. Dlatego SCB pełni funkcje amortyzujące i wspomagające, a także jest ważny dla dostarczania składników odżywczych chrząstki i metabolizmu w prawidłowych stawach5,6,7,8.

Zgrubienia SCB (w histologii) i stwardnienie rozsiane (w radiografii) są głównymi cechami charakterystycznymi choroby zwyrodnieniowej stawów i kluczowymi obszarami badawczymi patofizjologii choroby zwyrodnieniowej stawów. Pomiar pogrubienia SCB jest ważnym elementem histologicznej oceny nasilenia choroby zwyrodnieniowej stawów. Wcześniej opisana cyfrowa mikroradiografia do pomiaru gęstości mineralnej SCB gryzoni9, a także ilościowy pomiar SCB oparty na mikrotomografii komputerowej (micro-CT) w modelach gryzoni OA10,11,12,13 przyczyniły się do lepszego zrozumienia struktury SCB i roli zmian SCB w patofizjologii choroby zwyrodnieniowej stawów. Obszar i grubość SCB zostały również określone ilościowo za pomocą preparatów histologicznych przy użyciu zaawansowanego systemu komputerowego ze specyficznym i drogim oprogramowaniem do histomorfometrii kości14. Niemniej jednak, oparte na wizualnym oszacowaniu, półilościowe systemy oceny OA, w tym stopniowanie zagęszczające SCB, są obecnie szerzej stosowane niż mikro-CT, ponieważ systemy klasyfikacji są łatwe w użyciu, szczególnie do badań przesiewowych wielu obrazów histologicznych. Jednak większość istniejących systemów klasyfikacji OA skupia się głównie na zmianach w chrząstce15,16,17. Szeroko stosowana metoda oceny grubości SCB w chorobie zwyrodnieniowej stawów, która kategoryzuje pogrubienie SCB jako łagodne, umiarkowane i ciężkie, jest w dużej mierze subiektywna, a jej wiarygodność nie została w pełni zweryfikowana15. Niezawodny i łatwy do wykonania protokół pomiaru grubości SCB w chorobie zwyrodnieniowej stawów krok po kroku nie jest w pełni opracowany lub nieustandaryzowany.

To badanie miało na celu opracowanie powtarzalnego, czułego i łatwego do wykonania protokołu do ilościowego pomiaru grubości SCB w mysim modelu choroby zwyrodnieniowej stawów. Nasze rygorystyczne testy pomiarowe i analiza statystyczna wykazały, że ten wspomagany oprogramowaniem protokół pomiaru ilościowego ImageJ może określić ilościowo grubość SCB zarówno w normalnych, jak i zwyrodnieniowych stawach kolanowych. Nowo opracowany protokół jest powtarzalny i bardziej wrażliwy na łagodne zmiany SCB niż powszechnie stosowane systemy oceny wizualnej. Może być stosowany do wykrywania wczesnych zmian SCB w chorobie zwyrodnieniowej stawów oraz do oceny skuteczności in vivo leczenia choroby zwyrodnieniowej stawów w połączeniu z klasyfikacją chrząstki zwyrodnieniowej stawów.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wszystkie procedury dotyczące zwierząt zawarte w tym protokole zostały zatwierdzone przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt (IACUC) w Centrum Medycznym Uniwersytetu Kansas, zgodnie ze wszystkimi federalnymi i stanowymi prawami i regulacjami.

1. Powstawanie choroby zwyrodnieniowej stawu kolanowego u myszy

  1. Stwórz mysi model choroby zwyrodnieniowej stawu kolanowego poprzez chirurgiczną destabilizację łąkotki przyśrodkowej (DMM), jak opisano przez Glassona i wsp.18 u 22 myszy BALB/c typu dzikiego w wieku 10-11 tygodni. Wykonaj pozorowaną operację jako procedurę kontrolną na ośmiu myszach o tym samym pochodzeniu i wieku.
    UWAGA: Obie płcie zostały wykorzystane w pierwotnym projekcie, aby spełnić wymóg NIH dotyczący uwzględniania płci jako zmiennej biologicznej, chociaż badanie różnic płci nie jest zakresem tego protokołu.
  2. Znieczulać zwierzęta przez inhalację izofluranu. Sprawdź głębokość znieczulenia, monitorując ich częstość/wysiłek oddechowy i brak reakcji na szczypanie palców/ogona. Ułóż zwierzęta w pozycji leżącej.
  3. Ogol skórę w okolicy kolan i oczyść skórę peelingiem Povidone-Jod + alkohol; trzy naprzemienne cykle.
  4. Wykonaj zabieg DMM na prawym kolanie pod mikroskopem operacyjnym. Odsłonić staw kolanowy przez przyśrodkowe nacięcie przyrzepkowe (1,2-1,5 cm długości) i naciąć torebkę stawową. Utrzymuj rzepkę i ścięgno rzepki w stanie nienaruszonym. Po dokładnym odsłonięciu więzadła łąkotki przyśrodkowej (MML), które zakotwicza łąkotkę przyśrodkową w płaskowyżu piszczelowym, przeciąć ją nożyczkami mikrochirurgicznymi, aby zdestabilizować łąkotkę przyśrodkową.
  5. Wykonaj pozorowaną operację na prawym kolanie jako procedurę kontrolną, w której MML został uwidoczniony, ale nie został przecięty.
  6. Zamknij torebkę stawową za pomocą 8-0 wchłanialne szwy poliglaktynowe i nacięcie skóry za pomocą niewchłanialnych szwów 7-0 zarówno do zabiegów DMM, jak i pozorowanych, aby zapewnić prawidłowe użytkowanie kolana po wygojeniu.
  7. Bulprenorfinę SR (0,20-0,5 mg/kg) należy wstrzyknąć podskórnie (SC) bezpośrednio przed zabiegiem chirurgicznym w celu znieczulenia, co zapewnia ulgę w bólu do 72 godzin po pojedynczym wstrzyknięciu. Monitoruj operowane zwierzęta po operacji.
  8. Eutanazja zwierząt za pomocą komory CO2 po 2, 8 i 16 tygodniach od operacji. Po utracie przytomności potwierdzić śmierć zwierząt metodą fizyczną (otwarcie jamy klatki piersiowej). Te metody eutanazji są zgodne z zaleceniami Panelu ds. Eutanazji Amerykańskiego Towarzystwa Lekarzy Weterynarii (AVMA).
  9. Pobrać stawy kolanowe do analiz histologicznych po 2, 8 i 16 tygodniach po operacji DMM oraz po 2 i 16 tygodniach od operacji pozorowanej, aby uzyskać mysie stawy kolanowe o różnym stopniu nasilenia choroby zwyrodnieniowej stawów lub pogrubienia SCB.

2. Przygotowanie wycinków tkanek i obrazów histologicznych

  1. Utrwal próbki tkanki stawu kolanowego myszy w 2% paraformaldehydzie, odwapnić je w 25% kwasie mrówkowym, zanurz w parafinie i przekrój koronalnie, aby zbadać zarówno przedziały przyśrodkowe, jak i boczne.
  2. Wytnij próbki kolana z tylnej strony kolana za pomocą mikrotomu i zbierz skrawki tkanki o grubości 5 μm w odstępach 70-80 μm, aby uzyskać około 40 szkiełków tkankowych w całym stawie kolanowym. Oszacowanie wspomagane mikrometrem sugeruje, że szkiełko o numerach 1-6 pochodzi z dalekiego tyłu, 11-18 ze środkowego tylnego, 23-30 ze środkowej przedniej części i 35-40 z dalszej przedniej części stawu kolanowego. Wyrzuć lub zbierz odcinki pośrednie, aby uzyskać dodatkowe plamy.
  3. Wykonaj Safranin-O i szybkie zielone barwienie zgodnie z instrukcjami producenta, aby dokładnie zidentyfikować komórki chrząstki i matryce na każdych pięciu szkiełkach. Wykonaj barwienie Hematoxylin-Eozyna zgodnie z instrukcjami producenta, aby zbadać stawy kolanowe na poziomie komórkowym i tkankowym, jak opisano wcześniej19,20,21,22.
  4. Uzyskaj obrazy histologiczne za pomocą mikroskopu wyposażonego w kamerę cyfrową. Ogólną analizę histopatologiczną i klasyfikację histologiczną OA przeprowadzono zgodnie z wcześniejszym opisem15,19,20,21,22.

3. Ilościowy pomiar kości podchrzęstnej choroby zwyrodnieniowej stawów za pomocą oprogramowania ImageJ

  1. Pobierz oprogramowanie ImageJ i otwórz interesujące Cię obrazy histologiczne.
    1. Pobierz plik ImageJ dołączony do oprogramowania Java 1.8.0_172 z https://imagej.nih.gov/ij/.
    2. Otwórz program ImageJ. Kliknij kartę Plik na Wstążce i kliknij opcję Otwórz, aby otworzyć obraz histologiczny.
    3. Znajdź adres katalogu plików, wybierz plik obrazu i kliknij przycisk Otwórz.
  2. Skalibruj ImageJ za pomocą mikrometru na obrazach histologicznych.
    1. Użyj narzędzia linii prostej, aby naszkicować jedną jednostkę długości na mikrometrze i kliknij przycisk Analizuj > (następnie) Ustaw skalę. Ustaw Znana odległość i Współczynnik proporcji pikseli na 1, a następnie kliknij przycisk OK. ImageJ może przekonwertować długość piksela na jednostkę długości na mikrometrze.
    2. Ustaw mierzony współczynnik na obszar. Kliknij Analizuj > Ustaw pomiar i zaznacz pole Obszar i Ogranicz do progu w nowym oknie. Ten krok ustawia ImageJ tak, aby mierzył parametr "Obszar" w obrębie wybranego "Threshold".
  3. Zmierz całkowity obszar zainteresowania kości podchrzęstnej (SCB).
    1. Zdefiniuj obszar zainteresowania SCB (ROI), jak pokazano w pomarańczowych polach Rysunek 1A, który obejmuje płytkę korową SCB i część leżącej poniżej kości beleczkowej przylegającej do płytki korowej w kłykciu przyśrodkowym kości udowej (MFC) i płaskowyżu piszczelowym przyśrodkowym (MTP) z określonymi wymiarami dla każdego ROI. W tych obszarach zwykle występuje pogrubienie SCB w chorobie zwyrodnieniowej stawów. Zdefiniuj zwrot z inwestycji SCB o tym samym kształcie i wymiarze w każdym MFC lub MTP dla wszystkich badanych stawów, aby upewnić się, że ten sam rozmiar określonego zwrotu z inwestycji został zmierzony dla wszystkich zwierząt.
    2. Naszkicuj kontur całkowitego obszaru zainteresowania SCB za pomocą narzędzia do zaznaczania wielokątów w głównym oknie ImageJ.
      UWAGA: Narzędzia wyboru wyznaczają systemowi próg ograniczenia mierzonego obszaru.
    3. Zmierz całkowitą powierzchnię SCB: Po wybraniu progu kliknij przycisk Analizuj > Zmierz. Otworzy się okno "Wyniki" z pomiarem powierzchni.
  4. Zmierzyć obszar substancji kostnej zawierający kość litą bez szpiku kostnego.
    1. Kliknij przycisk Edytuj > Wyczyść na zewnątrz, aby wykluczyć obszar znajdujący się poza całkowitym obszarem SCB.
      UWAGA: Po kliknięciu opcji >Wyczyść na zewnątrz widoczny jest tylko całkowity obszar SCB. Obraz poza całym obszarem SCB zmieni kolor na. Ten krok pozwala obserwatorom skupić się na obszarze substancji kostnej w obszarze zainteresowania.
    2. Kliknij Obraz > Dostosuj próg koloru >, aby otworzyć okno "Kolor progu". Kliknij opcję Oryginał u dołu okna "Kolor progu", aby przywrócić obraz do pierwotnego stanu. Użyj narzędzi do zaznaczania w kroku 3.3.2, aby narysować małą ramkę w obszarze substancji kostnej. Kliknij opcję Próbka u dołu okna "Kolor progu", aby zdefiniować obszar substancji kostnej.
      UWAGA: Opcja "Próbka" w oknie "Kolor progu" umożliwia ImageJ wybranie wszystkich tych samych pikseli na całkowitej powierzchni SCB, co obszar próbki substancji kostnej. Wybrany obszar substancji kostnej zmieni kolor na czerwony.
    3. Kliknij przycisk Select (Wybierz) u dołu okna progowego balansu kolorów, aby utworzyć próg pomiaru obszaru. Kliknij Analizuj > Zmierz w menu głównym ImageJ, a wynik pomiaru powierzchni kości pojawi się w oknie "Wyniki".
    4. Zapisz dane dotyczące całkowitej powierzchni SCB i powierzchni substancji kostnej.
  5. Obliczyć stosunek powierzchni substancji kostnej (mm2) do całkowitej powierzchni SCB (mm2) będącej przedmiotem zainteresowania, który reprezentuje grubość substancji kostnej (mm2/1,0 mm2) w obrębie całkowitej powierzchni SCB.
  6. Zmierz grubość SCB przekrojów/obrazów histologicznych (zgodnie z opisem w krokach 3.1-3.5) obszarów dalekiego tylnego, środkowego tylnego, środkowego przedniego i dalekiego przedniego (zgodnie z opisem w kroku 2.2) choroby zwyrodnieniowej stawów wywołanych DMM, aby ocenić specyficzną dla obszaru grubość SCB 6 stawów kolanowych (Rysunek 1B).
    UWAGA: Może to potwierdzić wiarygodność tego protokołu pomiaru ilościowego, ponieważ wiadomo, że zmiany SCB w chorobie zwyrodnieniowej stawów kolokalizują się ze zmianami w chrząstce, a uszkodzenie chrząstki w chorobie zwyrodnieniowej stawów z pogrubieniem SCB jest poważniejsze w obszarach nośnych (środkowa część) stawów kolanowych gryzoni14,15. W związku z tym właściwe jest stosowanie przekrojów środkowych do ilościowego pomiaru pogrubienia SCB choroby zwyrodnieniowej stawów.

4. Statystyki

  1. Wykonuj analizy statystyczne z wykorzystaniem danych z pomiarów ilościowych i wizualnej gradacji grubości SCB. Określ zmienność i odtwarzalność między obserwatorami i wewnątrz obserwatorów za pomocą analiz współczynników korelacji Pearsona.
  2. Określ znaczenie różnic między grupami badawczymi za pomocą testów t-Studenta lub jednoczynnikowej ANOVA, a następnie testu post-hoc (Tukey) przy użyciu arkusza kalkulacyjnego. Załóżmy, że wartość p mniejsza niż 0,05 jest statystycznie istotna.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Porównanie odtwarzalności między wizualnym szacowaniem a pomiarem ilościowym wspomaganym ImageJ:
Grubość SCB w 48 obszarach zainteresowania (ROI) (24 MFC i 24 MTP), zdefiniowana na podstawie środkowej części każdego kolana z 24 kolan/zwierząt, została oceniona przez trzy niezależne osoby przy użyciu istniejącego schematu punktacji wizualnej 0-3, jak opisano w literaturze15,23, gdzie 0 = normalny (brak pogrubienia SCB), 1 = łagodny, 2 = umiark...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Pomiar pogrubienia SCB jest ważnym elementem histologicznej oceny nasilenia choroby zwyrodnieniowej stawów. Większość istniejących systemów klasyfikacji choroby zwyrodnieniowej stawów koncentruje się głównie na zmianach w chrząstce 15,16,17. Szeroko stosowana metoda oceny grubości SCB w chorobie zwyrodnieniowej stawów, która klasyfikuje pogrubienie SCB jako łagodne, umiarkowane i ciężkie, jest w dużej mierze subiektywna, a jej w...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy deklarują brak konkurujących ze sobą konfliktów interesów.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ta praca była wspierana przez National Institute of Arthritis and Musculoskeletal and Skin Diseases of the National Institutes of Health (NIH) pod numerem Award R01 AR059088, Departament Obrony (DoD) pod numerem Research Award Numer W81XWH-12-1-0304, oraz Mary and Paul Harrington Distinguished Professorship Endowment.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Safranin-OSigma-AldrichS8884
Szybka zieleńSigma-AldrichF7252
HematoxylinSigma-AldrichGHS216
EosinSigma-AldrichE4382
ilustratorAdobeNie dotyczy

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Kotlarz, H., Gunnarsson, C. L., Fang, H., Rizzo, J. A. Insurer and out-of-pocket costs of osteoarthritis in the US: evidence from national survey data. Arthritis and Rheumatology. 60 (12), 3546-3553 (2009).
  2. Buckwalter, J. A., Martin, J. A. Osteoarthritis. Advanced Drug Delivery Reviews. 58 (2), 150-167 (2006).
  3. Weinans, H., et al. Pathophysiology of peri-articular bone changes in osteoarthritis. Bone. 51 (2), 190-196 (2012).
  4. Baker-LePain, J. C., Lane, N. E. Role of bone architecture and anatomy in osteoarthritis. Bone. 51 (2), 197-203 (2012).
  5. Li, G., et al. Subchondral bone in osteoarthritis: Insight into risk factors and microstructural changes. Arthritis Research and Therapy. 15 (6), 223(2013).
  6. Madry, H., van Dijk, C. N., Mueller-Gerbl, M. The basic science of the subchondral bone. Knee Surgery, Sports, Traumatology, Arthrosclerosis. 18 (4), 419-433 (2010).
  7. Milz, S., Putz, R. Quantitative morphology of the subchondral plate of the tibial plateau. Journal of Anatomy. 185, Pt 1 103-110 (1994).
  8. Blalock, D., Miller, A., Tilley, M., Wang, J. Joint instability and osteoarthritis. Clinical Medicine Insights: Arthritis and Musculoskeleton Disorders. 8, 15-23 (2015).
  9. Waung, J. A., et al. Quantitative X-ray microradiography for high-throughput phenotyping of osteoarthritis in mice. Osteoarthritis Cartilage. 22 (10), 1396-1400 (2014).
  10. Botter, S. M., et al. Cartilage damage pattern in relation to subchondral plate thickness in a collagenase-induced model of osteoarthritis. Osteoarthritis Cartilage. 16 (4), 506-514 (2008).
  11. Nalesso, G., et al. Calcium calmodulin kinase II activity is required for cartilage homeostasis in osteoarthritis. Science Reports. 11 (1), 5682(2021).
  12. Ding, M., Christian Danielsen, C., Hvid, I. Effects of hyaluronan on three-dimensional microarchitecture of subchondral bone tissues in guinea pig primary osteoarthrosis. Bone. 36 (3), 489-501 (2005).
  13. Kraus, V. B., Huebner, J. L., DeGroot, J., Bendele, A. The OARSI histopathology initiative - recommendations for histological assessments of osteoarthritis in the guinea pig. Osteoarthritis Cartilage. 18, Suppl 3 35-52 (2010).
  14. McNulty, M. A., et al. A comprehensive histological assessment of osteoarthritis lesions in Mice. Cartilage. 2 (4), 354-363 (2011).
  15. Glasson, S. S., Chambers, M. G., Van Den Berg, W. B., Little, C. B. The OARSI histopathology initiative - recommendations for histological assessments of osteoarthritis in the mouse. Osteoarthritis Cartilage. 18, Suppl 3 17-23 (2010).
  16. Pritzker, K. P., et al. Osteoarthritis cartilage histopathology: grading and staging. Osteoarthritis Cartilage. 14 (1), 13-29 (2006).
  17. Mankin, H. J., Dorfman, H., Lippiello, L., Zarins, A. Biochemical and metabolic abnormalities in articular cartilage from osteo-arthritic human hips. II. Correlation of morphology with biochemical and metabolic data. Journal of Bone and Joint Surgery American. 53 (3), 523-537 (1971).
  18. Glasson, S. S., Blanchet, T. J., Morris, E. A. The surgical destabilization of the medial meniscus (DMM) model of osteoarthritis in the 129/SvEv mouse. Osteoarthritis Cartilage. 15 (9), 1061-1069 (2007).
  19. Wang, J., et al. Transcription factor Nfat1 deficiency causes osteoarthritis through dysfunction of adult articular chondrocytes. Journal of Pathology. 219 (2), 163-172 (2009).
  20. Zhang, M., Lu, Q., Budden, T., Wang, J. NFAT1 protects articular cartilage against osteoarthritic degradation by directly regulating transcription of specific anabolic and catabolic genes. Bone Joint Research. 8 (2), 90-100 (2019).
  21. Zhang, M., et al. Epigenetically mediated spontaneous reduction of NFAT1 expression causes imbalanced metabolic activities of articular chondrocytes in aged mice. Osteoarthritis Cartilage. 24 (7), 1274-1283 (2016).
  22. Rodova, M., et al. Nfat1 regulates adult articular chondrocyte function through its age-dependent expression mediated by epigenetic histone methylation. Journal of Bone and Mineral Research. 26 (8), 1974-1986 (2011).
  23. Jackson, M. T., et al. Depletion of protease-activated receptor 2 but not protease-activated receptor 1 may confer protection against osteoarthritis in mice through extracartilaginous mechanisms. Arthritis and Rheumatology. 66 (12), 3337-3348 (2014).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Model mysi choroby zwyrodnieniowej staw wkwantyfikacja w programie ImageJdestabilizacja kotki przy rodkowejobrazowanie histologiczneskleroza ko ciilo ciowy pomiar ko cik ykie przy rodkowy ko ci udowejp askowy przy rodkowy ko ci piszczelowejsystem oceny wizualnej

Powiązane artykuły