Artykuł metodologiczny

Cesarskie cięcie przedklinicznego modelu zwierzęcego zapalenia błony płodowej wywołanego przez paciorkowce grupy B (GBS)

DOI:

10.3791/63221

⸱

29 grudnia 2021

 ,  ,  , 
1Department of Pediatrics, McGill University, 2Department of Pharmacology, McGill University

* These authors contributed equally

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Celem tego protokołu jest opisanie przedklinicznego modelu zwierzęcego zapalenia błony płodowej wywołanego przez Streptococcus (GBS) grupy B. Badanie ma na celu zbadanie procesów mechanistycznych, potencjalnych związków przyczynowych z zaburzeniami rozwojowymi, a także opracowanie translacyjnych leków przeciwzapalnych i neuroprotekcyjnych.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Grupa B Streptococcus (GBS) jest jedną z najpowszechniejszych bakterii izolowanych podczas ciąży u ludzi. Jest to główna przyczyna infekcji/zapalenia łożyska, określanego jako zapalenie błony płodowej. Zapalenie błony płodowej naraża rozwijający się płód na wysokie ryzyko urazów narządów, zachorowalności okołoporodowej i śmiertelności, a także trwających całe życie zaburzeń neurobehawioralnych i innych nieneurologicznych problemów rozwojowych. Dwa najczęstsze podtypy izolatów GBS z tkanek matki i płodu to serotypy Ia (13%-23%) i III (25%-53%). Nasze laboratorium opracowało i scharakteryzowało szczurzy model zapalenia błony płodowej wywołanego przez GBS, aby zbadać późniejszy wpływ rozwijającego się płodu na ośrodkowy układ nerwowy i zrozumieć leżące u jego podstaw aspekty mechanistyczne. W artykule przedstawiono konstrukcję i zastosowania przedklinicznego modelu szczurzego, który ściśle odtwarza cechę charakterystyczną zapalenia błony płodowej wywołanego przez GBS u ludzi. Ten artykuł ma na celu pomóc naukowcom odtworzyć projekt eksperymentalny, a także zapewnić wsparcie poprzez przykłady rozwiązywania problemów. Obecny model może również przyczynić się do potencjalnych odkryć poprzez odkrycie przyczyn, mechanizmów i nowych ścieżek terapeutycznych, które pozostają nierozwiązane w przypadku wielu zaburzeń rozwojowych wynikających z zapalenia błon płodowych. Co więcej, zastosowanie tego modelu może zostać rozszerzone na badania okołoporodowych nieneurologicznych powszechnych i ciężkich chorób dotykających na przykład siatkówki, jelit, płuc i nerek. Głównym zainteresowaniem tych badań są zaburzenia neurorozwojowe płodu wywołane przez GBS, takie jak porażenie mózgowe (CP), zespół nadpobudliwości psychoruchowej z deficytem uwagi (ADHD) i zaburzenie ze spektrum autyzmu (ASD). W niniejszym artykule przedstawiono przesłanki wspierające ten model, a następnie procedury i wyniki.

Wprowadzenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Aktywacja immunologiczna matki (MIA) została opisana jako jeden z najbardziej krytycznych niezależnych czynników ryzyka przedwczesnego porodu, śmierci płodu oraz trwających całe życie zaburzeń poznawczych i behawioralnych u potomstwa1,2,3,4. Wiele z istniejących badań przedklinicznych dotyczących roli zapalenia ciążowego na łożysko i wyniki rozwojowe wykorzystuje składniki patogenu, takie jak lipopolisacharyd (LPS) z E. coli i syntetyczny analog wirusowego dwuniciowego RNA, poliinozynowy: kwas policytydylowy (Poly[I: C]), które naśl....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wszystkie eksperymenty zostały zatwierdzone przez Instytut Badawczy Centrum Zdrowia Uniwersytetu McGill (RI-MUHC). Wszystkie eksperymenty zostały przeprowadzone zgodnie z zaleceniami Canadian Council on Animal Care.

1. Ciężarne szczury Lewisa

  1. Pozyskaj szczury Lewisa ze źródeł komercyjnych w dniu ciąży (G)14. Umieść je w odpowiednim pomieszczeniu dla zwierząt (RI-MUHC animal facility) w kontrolowanym środowisku w temperaturze 20-23 °C z 12-godzinnym cyklem światła/ciemności oraz dostępem do wody i pożywienia ad libitum17.
  2. Waż matki codziennie, aby wykryć wszelkie zachowa....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

IP inokulacja GBS spowodowała infekcję łożyska
Barwienie immunohistochemiczne (IHC) (przy użyciu przeciwciał poliklonalnych skierowanych przeciwko serotypowi Ia GBS) wykazało, że zakażenie GBS dotarło do przedziału dziesiętnego łożyska. Infekcja rozprzestrzeniała się również z decidua do błędnika, płytki kosmówkowej, a w niektórych przypadkach do płodów, prowadząc do śmierci płodu (5,8 ± 0,8 w miotach narażonych na GBS w porównaniu z 9,3 ± 0,6 szczeniąt w miocie kontrolnym (CTL))18<.......

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Krytyczne kroki w protokole
Kilka etapów protokołu jest krytycznych i wymaga pewnych kontroli jakości. Na przykład istnieje ryzyko skażenia stada GBS innymi patogenami. Można to szybko zidentyfikować za pomocą odpowiedniej techniki identyfikacji mikrobiologicznej GBS, takiej jak aspekt kolonii na agarze BHI (np. rozmiar, kształt, kolor), posiew w dwóch egzemplarzach dawki β-hemolitycznego GBS na agarze z krwią Columbia z 5% pożywką z krwi owczej oraz na agarze CHROMID Strepto B, selektywnym pożywce .......

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy nie pozostają w finansowym konflikcie interesów.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

To badanie było wspierane przez Instytut Badawczy Centrum Zdrowia Uniwersytetu McGill (RI-MUHC), Kanadyjski Instytut Badań nad Zdrowiem (CIHR). Badanie to było możliwe dzięki następującym agencjom finansującym, instytucjom i fundacjom: Canadian Institute of Health Research (CIHR), Foundation of Stars, Fonds de Recherche Québec-Sciences (FRQS), McGill University i Sherbrooke University. Serdeczne podziękowania dla dr Claire Poyart z Uniwersytetu Denis Diderot (Paryż VII) we Francji oraz dr Mariela Segura z Uniwersytetu w Montrealu w Kanadzie za hojne dary GBS.

....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Sterylna probówka 5 mlBD Biosciences
50 ml probówki sokołaThermo Fisher339652
Ostrze lub skalpelBD Medical371716
Mózg Serce Infusion BulionKryterium (odporna diagnostyka)C5141
CHROMID Strepto B płytka agarowaBioMerieux, Saint-Laurent43461
Agar z krwią Columbia 5 % z pożywką z krwią owcząThermo ScientificR01215
Starter do przodu5' - TAC AGC CTG AGG ACA TAT TA3'Sigma
Strzykawka insulinowaBecton, Dickinson and Co(BD)324702
Lewis LaboratoriesCharles River Laboratories
MetylobutanSigma AldrichM32631
Probówki do pobierania krwi MicrotainerBecton, Dickinson and Co(BD)365965
Starter odwrócony5' - GCA CTT TAA CCC TTC GAT GA -3'Sigma
Pipety serologiczne 1 MLThermo Fisher170353N
Pipety serologiczne 10 MLThermo Fisher170356N
Pipety serologiczne 25 MLThermo Fisher170357N
Pipety serologiczne 5 mlThermo Fisher170355N
Superfrost Plus Micro Slide, PremiumVWRCA48311-703

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Hui, C. W., et al. Prenatal immune challenge in mice leads to partly sex-dependent behavioral, microglial, and molecular abnormalities associated with schizophrenia. Frontiers in Molecular Neuroscience. 11, 13(2018).
  2. Costa, A., et al.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Model chorioamnionitiszaka enie o yskap odowy rozw j neurologicznymodel szczurzyzachorowalno oko oporodowaGBS serotyp IIIuszkodzenie organ w p oduzaburzenia neurobehawioralne
Film wkrótce dostępny

Powiązane artykuły