Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Ulepszony test chemotaksji do szybkiej identyfikacji chemoatraktantów ryzo bakteryjnych w wysiękach korzeniowych

4.7K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/63249

⸱

25 marca 2022

 ,  ,  ,  ,  , 
1School of Life Science and Agriculture Forestry, Qiqihar University, 2Heilongjiang Provincial Technology Innovation Center of Agromicrobial Preparation Industrialization, 3School of Foreign Languages, Qiqihar University

W tym artykule

Podsumowanie

Tutaj prezentujemy ulepszony protokół testu chemotaksji. Celem tego protokołu jest zmniejszenie liczby etapów i kosztów tradycyjnych metod chemotaksji bakteryjnej oraz służenie jako cenne źródło informacji o interakcjach między roślinami a mikroorganizmami.

Streszczenie

Identyfikacja chemotaksji jest bardzo ważna dla badań i zastosowania bakterii wspomagających wzrost ryzosfery. Opracowaliśmy prostą metodę szybkiej identyfikacji chemoatraktantów, które mogą indukować ruch chemotaktyczny bakterii stymulujących wzrost ryzosfery na sterylnych szkiełkach za pomocą prostych kroków. Roztwór bakterii (OD600 = 0,5) i sterylny roztwór wodny chemoatraktantu dodawano kroplami na szkiełko w odstępie 1 cm. Zastosowano pętlę inokulacyjną do połączenia wodnego roztworu chemoatraktantu z roztworem bakteryjnym. Zjeżdżalnia była przechowywana w temperaturze pokojowej przez 20 minut na czystej ławce. Na koniec pobrano wodny roztwór chemoatraktantu do zliczania bakterii i obserwacji mikroskopowej. W tym badaniu, poprzez wielokrotne porównania wyników eksperymentalnych, metoda przezwyciężyła wiele niedociągnięć tradycyjnych metod chemotaksji bakteryjnej. Metoda ta zmniejszyła błąd liczenia płytek i skróciła cykl doświadczalny. W przypadku identyfikacji substancji chemoatraktantowych ta nowa metoda może zaoszczędzić 2-3 dni w porównaniu z metodą tradycyjną. Dodatkowo metoda ta pozwala każdemu badaczowi na systematyczne przeprowadzanie eksperymentu chemotaksji bakteryjnej w ciągu 1-2 dni. Protokół można uznać za cenne źródło informacji na temat interakcji między roślinami a mikroorganizmami.

Wprowadzenie

Chemotaksja jest ważna dla kolonizacji roślinno-rozwojowej ryzobakteryjnej (PGPR) na korzeniach i dla zrozumienia interakcji roślina-mikroorganizm1. Klasa związków o niskiej masie cząsteczkowej (chemoatraktantów) w wysiękach z korzeni roślin indukuje ruch chemotaktyczny PGPR do ryzosfery2. Kwas jabłkowy, kwas cytrynowy i inne składniki wysięków korzeniowych stymulują chemotaksję szczepów Bacillus 3. Na przykład glukoza, kwas cytrynowy i kwas fumarowy w wysiękach z korzeni kukurydzy rekrutują bakterie na powierzchnię korzenia4. D-galaktoza, która pochodzi z wysięków korzeniowych, indukuje chemotaksję Bacillus velezensis SQR95. Kwasy organiczne, w tym fumaran, kwas jabłkowy i bursztynian, wpływają na chemotaksję i kolonizację różnych PGPR w systemie uprawy międzyplonowej Cajanus cajan - Zea mays6. Kwas oleanolowy w wysiękach z korzenia ryżu działa jako chemoatraktant dla szczepu FP357. Inne wysięki roślinne (w tym histydyna, arginina i asparaginian) mogą odgrywać kluczową rolę w odpowiedzi chemotaktycznej bakterii8. Wysięki roślinne działają jako sygnał do kierowania ruchem bakterii, co jest pierwszym krokiem podczas kolonizacji ryzosfery. Kolonizacja roślin przez PGPR jest procesem o ogromnym znaczeniu, ponieważ PGPR są korzystne dla gospodarza rośliny.

Do analizy bakteryjnej chemotaksji użyto wielu metod. Metoda płyty pływackiej jest jedną z metod opisanych wcześniej9. W tej metodzie płytki wykonywano z półstałym podłożem. Do płytki dodano bufor chemotaktyczny zawierający agar (1,0% m/v). Bufor jest podgrzewany, a następnie mieszany z chemoatraktantem. Następnie kroplami na środek płytki dodano 8 μl zawiesiny bakterii i umieszczono płytkę w inkubatorze w temperaturze 28 °C. Płyta była regularnie obserwowana i fotografowana. Cykl eksperymentalny metody płyty pływackiej był jednak bardzo długi. W metodzie kapilarnej10, końcówka pipety służy jako komora do przechowywania 100 μl zawiesiny bakteryjnej. Jako kapilary użyto igły do strzykawki o pojemności 1 ml. Do końcówki pipety o pojemności 100 μl włożono igłę strzykawki zawierającą chemoatraktanty o różnych gradientach stężeń. Po inkubacji w temperaturze pokojowej przez 3 godziny wyjęto igłę strzykawki, zawartość rozcieńczono i posiano na pożywce. Nagromadzenie bakterii w strzykawce było reprezentowane przez jednostki tworzące kolonie (CFU) w płytkach. Jednak błąd eksperymentalny w powtórzeniach dla metody kapilarnej był duży. Inna metoda wykorzystywała mikroprzepływowe urządzenie SlipChip11. Krótko mówiąc, roztwór albuminy surowicy bydlęcej (BSA) wstrzyknięto do wszystkich kanałów i usunięto za pomocą próżni. Roztwory zawierające różne chemoatraktanty (stężenie 1 mM tylko do wykrywania jakościowego), komórki bakteryjne zawieszone w buforowanym fosforanem soli fizjologicznej i buforowanym fosforanem buforowanym solą fizjologiczną (kontrola ujemna) dodano odpowiednio do górnej, środkowej i dolnej mikrostudzienki. Następnie inkubację prowadzono w ciemnym środowisku w temperaturze pokojowej przez 30 minut. Komórki bakteryjne zostały następnie wykryte w mikrostudzienkach. Mikroprzepływowe urządzenie SlipChip było jednak drogie. Dlatego każda z opisanych powyżej metod miała zalety i wady.

Stworzyliśmy ulepszony test chemotaksji do szybkiej identyfikacji chemoatraktantów ryzo bakteryjnych w wysiękach korzeniowych przy użyciu sterylnych szkiełek bez skomplikowanych kroków. W tym badaniu, poprzez wielokrotne porównania wyników eksperymentalnych, metoda przezwyciężyła wiele niedociągnięć tradycyjnych metod chemotaksji bakteryjnej. Metoda ta zmniejszyła błąd liczenia płytek i skróciła cykl doświadczalny. Dlatego, jeśli ta nowa metoda zostanie zastosowana do identyfikacji substancji chemoatraktantu, może zaoszczędzić 2-3 dni i obniżyć koszty materiałów eksperymentalnych.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

1. Materiały i sprzęt

UWAGA: Bacillus altitudinis LZP02 (CP075052) został wyizolowany na potrzeby niniejszego badania z ryzosfery ryżu w północno-wschodnich Chinach12,13.

  1. Hodować B. altitudinis LZP02 w pożywce Luria-Bertani (LB) (pepton, 10 g L-1; NaCl, 8 g L-1 oraz ekstrakt drożdżowy, 5 g L-1) przez 10 h. Zebrać komórki poprzez wirowanie przy 9,569 x g przez 2 min w 4 °C oraz przechowywać z 15% glicerolem w -80 °C.
    UWAGA: Na potrzeby tego eksperymentu nasiona ryżu (Oryza sativa Longgeng 46) zostały dostarczone przez Rice Research Institute of Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences.

2. Pobieranie wysięków korzeniowych

  1. Rozmieść losowo nasiona ryżu w komorze wzrostowej.
    UWAGA: Nasiona ryżu wysterylizowano 30% H2O2 przez 30 min i namoczono w wodzie przez noc. Warunki były następujące: kontrolowane oświetlenie (cykl 16/8 h światła/ciemności), temperatura (22 ± 2 °C) oraz wilgotność względna (῀70%).
  2. Kultywuj nasiona ryżu przez tydzień, dodając dwukrotnie sterylną wodę.
  3. Wybierz siewki ryżu o podobnej wielkości i posadź je w 50 mL płynnej pożywki Murashige and Skoog (MS). Inkubuj przez 48 h w temperaturze 22 °C w warunkach aseptycznych.
    UWAGA: Wydzieliny korzeni ryżu zostaną uwolnione do pożywki MS14,15,16.

3. Analiza wysięków korzeniowych przy użyciu chromatografii cieczowej sprzężonej z spektrometrią mas

  1. Należy pobrać 100 µL próbki (pożywka MS zawierająca wysięki korzeniowe) do probówki wirówkowej o pojemności 1,5 mL. Dodać 20 µL rozpuszczalnika do ekstrakcji (acetonitryl-metanol-woda, 2:2:1, zawierający standard wewnętrzny). Próbkę homogenizować przy 45 Hz przez 4 min, a następnie poddać sonikacji w łaźni wodnej na lodzie przez 5 min.
  2. Cykl homogenizacji i sonikacji powtórzyć trzykrotnie. Próbkę inkubować w temperaturze -20 °C przez 1 h, a następnie odwirować przy 133 778 x g i 4 °C przez 15 min.
  3. Otrzymany naddatek przenieść do fiolek LC-MS i przechowywać w temperaturze -80 °C do czasu analizy UHPLC-QE. Próbki kontroli jakości (QC) przygotować poprzez zmieszanie równych części naddatku ze wszystkich próbek.
    UWAGA: W prezentowanym doświadczeniu objętość każdej próbki wynosiła 600 µL (sześć powtórzeń na doświadczenie).
  4. Przeprowadzić analizę LC-MS/MS przy użyciu systemu UHPLC, kolumny UPLC HSS T3 (2,1 mm x 100 mm, 1,8 µm) oraz spektrometru Q Exactive12.
    1. Jako fazę ruchomą A zastosować 0,1% wodny roztwór kwasu mrówkowego oraz wodny roztwór octanu amonu 5 mmol/L, a jako fazę ruchomą B acetonitryl. Kwas mrówkowy i octan amonu zastosować odpowiednio w trybach jonizacji dodatniej i ujemnej.
    2. Gradient elucji ustawić w następujący sposób: 0 min, 1% B; 1 min, 1% B; 8 min, 99% B; 10 min, 99% B; 10,1 min, 1% B; 12 min, 1% B. Przepływ ustawić na 0,5 mL/min, a objętość iniekcji na 2 µL.
      UWAGA: Makrocząsteczki (>1 000 Daltonów) nie mogą zostać wykryte.

4. Test chemotaksji

  1. Przygotować wodny roztwór chemoatraktanta. Należy upewnić się, że jest on sterylny. Przefiltrować roztwór chemoatraktanta za pomocą filtra bakteryjnego 0,22 µm.
    UWAGA: Wodny roztwór chemoatraktanta stanowił pojedynczą substancję otrzymaną z badań LC-MS rozpuszczoną w wodzie. Stężenie i objętość można odpowiednio dostosować w zależności od różnych badań. Jako przykład wykorzystano roztwór kwasu cytrynowego. Wszystkie czynności muszą być wykonywane w pobliżu lampy.
  2. Zaznaczyć środkową pozycję na szkiełku przedmiotowym w odstępach 1 cm. Należy upewnić się, że szkiełko przedmiotowe zostało kilka razy wysterylizowane w płomieniu.
  3. Nanieść 30 µL roztworu chemoatraktanta na lewą stronę szkiełka przedmiotowego. Upewnić się, że bakterie zostały wyhodowane do fazy logarytmicznej (2 x 108 CFU/mL) w pożywce LB. Nanieść 30 µL zawiesiny bakteryjnej na prawą stronę szkiełka przedmiotowego.
    UWAGA: Przygotować grupę kontrolną negatywną z równą objętością sterylnej wody. Jako kontrolę pozytywną wykorzystano roztwór soli fizjologicznej (0,9% NaCI), aby wyeliminować wpływ sił międzycząsteczkowych na eksperyment.
  4. Wysterylizować pętlę szczepielniczą kilka razy w płomieniu. Za pomocą pętli szczepielniczej połączyć wodny roztwór chemoatraktanta z zawiesiną bakteryjną i pozostawić w temperaturze pokojowej przez 20 min w komorze z laminarnym przepływem powietrza.
    UWAGA: Eksperyment musi być przeprowadzony w środowisku bez przeciągów. Czas przed przerwaniem linii połączenia należy odpowiednio dostosować dla szczepów o różnej zdolności ruchu.
  5. Po 20 min przerwać linię połączenia za pomocą papieru filtracyjnego.
  6. Upewnić się, że probówka do wirowania 1,5 mL jest sterylna. Zebrać wodny roztwór chemoatraktanta z lewej strony szkiełka przedmiotowego. Przenieść roztwór do sterylnej probówki do wirowania 1,5 mL.
  7. Dodać do probówki do wirowania odpowiednią objętość safraniny. Po 2 min zebrać wymieszane ciecze w celu zliczenia bakterii i obserwacji mikroskopowej przy użyciu komory counting chamber.

5. Analiza wyników

  1. Wyznacz liczbę żywotnych mikroorganizmów, które zostały zwabione, korzystając z następującego równania:
    Wzór obliczeniowy NBC, N/80×400×10^4×czynnik rozcieńczenia, wynik eksperymentu laboratoryjnego.
    gdzie NBC: całkowita liczba komórek bakterii; N: liczba bakterii w 80 polach siatki.
    UWAGA: Do analizy danych wykorzystano oprogramowanie do analizy statystycznej. Błąd oparto na trzech różnych powtórzeniach wartości eksperymentalnych i obliczono go za pomocą jednoczynnikowej analizy wariancji ANOVA, a następnie analizy post-hoc Tukeya. Wartość P ≤ 0.05 uznano za istotną statystycznie.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

W indeksach jonów dodatnich i ujemnych wykryto odpowiednio łącznie 584 i 937 znanych metabolitów. Poprzednie badania wykazały, że chemoatraktanty to zazwyczaj kwasy organiczne, aminokwasy i węglowodany17,18.

W niniejszym badaniu do kolejnych eksperymentów wybrano 16 rodzajów chemoatraktantów zidentyfikowanych w badaniach LC-MS wydzielin ryzosfery ryżu (Tabela 1). Wykorzystując metodę płytki do pływania, przesiewaliśmy ...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Coraz więcej badań wskazuje, że interakcje roślina-bakteria zachodzą głównie w ryzosferze i mają na nie wpływ wysięki korzeniowe 20,21,22,23,24. Wysięki z korzeni roślin obejmują różnorodny wachlarz metabolitów pierwotnych, w tym kwasy fenolowe, kwasy organiczne i aminokwasy, a także bardziej złożone związki drugorzędowe 25,2...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

Ta praca była wspierana przez Narodową Fundację Nauk Przyrodniczych Chin (nr 31870493), Kluczowe Projekty Badawczo-Rozwojowe w Heilongjiang w Chinach (GA21B007), oraz Podstawowe Opłaty Badawcze Uniwersytetów w Prowincji Heilongjiang w Chinach (Nr 135409103).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Kwas 2,5-dihydroksybenzoesowyPekin InnoChem Nauka & Technologia C.,Sp. z o.o.490-79-9
AcetonitrylCNW Technologies75-05-8
Octan amonuCNW Technologies631-61-8
Kwas kawowyBeijing InnoChem Science & Technologia C.,Sp. z o.o.331-39-5
WirówkaThermo Fisher ScientificHeraeus Fresco17
Kwas cytrynowyPekin InnoChem Science & Technologia C.,Sp. z o.o.77-92-9
Czysta ławkaShanghai Boxun Industrial Co., Ltd.BJ-CD
Kwas ferulowyPekin InnoChem Nauka & Technologia C.,Sp. z o.o.1135-24-6
Kwas mrówkowyCNW Technologies64-18-6
FruktozaPekin InnoChem Nauka & Technologia C.,Sp. z o.o.57-48-7
GalactoseBeijing InnoChem Nauka & Technologia C.,Sp. z o.o.59-23-4
GlicynaPekin InnoChem Nauka & Technologia C.,Sp. z o.o.56-40-6
Młyn szlifierskiSzanghaj Jingxin Industrial Development
Co., Ltd.		JXFSTPRP-24
HistydynaPekin InnoChem Nauka & Technologia C.,Sp. z o.o.71-00-1
Standard wewnętrzny: 2-chloro-L-fenyloalaninaShanghai Hengbai Biotech C., Ltd.103616-89-3
LeucynaPekin InnoChem Nauka & Technologia C.,Sp. z o.o.61-90-5
Kwas jabłkowyPekin InnoChem Nauka & Technologia C.,Sp. z o.o.6915-15-7
MannozaPekin InnoChem Nauka & Technologia C.,Sp. z o.o.3458-28-4
Spektrometr masowyThermo Fisher ScientificQ Exactive Focus
MetanolCNW Technologies67-56-1
Mikroskop optycznyOlympusBX43
FenyloalaninaPekin InnoChem Science & Technologia C.,Sp. z o.o.63-91-2
ProlinaPekin InnoChem Nauka & Technologia C.,Sp. z o.o.147-85-3
WagiSartoriusBSA124S-CW
SerineBeijing InnoChem Science & Technologia C.,Sp. z o.o.56-45-1
TreoninaPekin InnoChem Nauka & Technologia C.,Sp. z o.o.72-19-5
UHPLCAgilent1290 UHPLC
Instrument ultradźwiękowyShenzhen Leidebang Electronics
Co., Ltd.		PS-60AL
Walina Pekin InnoChem Nauka & Technologia C.,Sp. z o.o.7004-03-7

Bibliografia

  1. Belas, R. Biofilms, flagella, and mechanosensing of surfaces by bacteria. Trends in Microbiology. 22 (9), 517-527 (2014).
  2. Haichar, Z., Santaella, C., Heulin, T., Achouak, W. Root exudates mediated interactions belowground. Soil Biology and Biochemistry. 77 (7), 69-80 (2014).
  3. Zhang, N., et al. Effects of different plant root exudates and their organic acid components on chemotaxis, biofilm formation and colonization by beneficial rhizosphere-associated bacterial strains. Plant and Soil. 374 (1-2), 689-700 (2014).
  4. Zhang, N., et al. Whole transcriptomic analysis of the plant-beneficial rhizobacterium Bacillus amyloliquefaciens SQR9 during enhanced biofilm formation regulated by maize root exudates. BMC Genomics. 16 (1), 685(2015).
  5. Lui, Y., et al. Induced root-secreted D-galactose functions as a chemoattractant and enhances the biofilm formation of Bacillus velezensis SQR9 in an mcpa-dependent manner. Applied Microbiology and Biotechnology. 104 (17), 785-797 (2020).
  6. Vora, S. M., Joshi, P., Belwalkar, M., Archana, G. Root exudates influence chemotaxis and colonization of diverse plant growth-promoting rhizobacteria in the Cajanus cajan - Zea mays intercropping system. Rhizosphere. 18 (12), 100331(2021).
  7. Sampedro, I., et al. Effects of halophyte root exudates and their components on chemotaxis, biofilm formation and colonization of the halophilic bacterium halomonas anticariensis FP35T. Microorganisms. 8 (4), 575(2020).
  8. Liu, X. L., Raza, W., Ma, J. H., Huang, Q. W., Shen, Q. R. A dual role amino acid from sesbania rostrata seed exudates in the chemotaxis response of Azorhizobium caulinodans ORS571. Molecular Plant-Microbe Interactions. 32 (9), 1134-1147 (2019).
  9. Ling, N., Raza, W., Ma, J. H., Huang, Q. W., Shen, Q. R. Identification and role of organic acids in watermelon root exudates for recruiting Paenibacillus polymyxa SQR-21 in the rhizosphere. European Journal of Soil Biology. 47 (6), 374-379 (2011).
  10. Rudrappa, T., Czymmek, K. J., Pare, P. W., Bais, H. P. Root-secreted malic acid recruits beneficial soil bacteria. Plant Physiology. 148 (3), 1547-1556 (2008).
  11. Shen, C., et al. Bacterial chemotaxis on Slipchip. Lab on a Chip. 14 (16), 3074-3080 (2014).
  12. Liu, H., et al. Bacillus pumilus LZP02 promotes rice root growth by improving carbohydrate metabolism and phenylpropanoid biosynthesis. Molecular Plant-Microbe Interactions. 33 (10), 1222-1231 (2020).
  13. Goswami, M., Deka, S. Isolation of a novel rhizobacteria having multiple plant growth promoting traits and antifungal activity against certain phytopathogens. Microbiological Research. 240, 126516(2020).
  14. Kaiira, M., Chemining'Wa, G., Ayuke, F., Baguma, Y., Nganga, F. Profiles of compounds in root exudates of rice, cymbopogon, desmodium, mucuna and maize. Journal of Agricultural Sciences Belgrade. 64 (4), 399-412 (2019).
  15. Shi, Y., et al. Effect of rice root exudates and strain combination on biofilm formation of Paenibacillus polymyxa and Paenibacillus macerans. African Journal of Microbiology Research. 6 (13), 3343-3347 (2012).
  16. Lee, H. W., Ghimire, S. R., Shin, D. H., Lee, I. J., Kim, K. U. Allelopathic effect of the root exudates of K21, a potent allelopathic rice. Weed Biology and Management. 8 (2), 85-90 (2008).
  17. Belimov, A. A., et al. Rhizobacteria that produce auxins and contain 1-amino-cyclopropane-1-carboxylic acid deaminase decrease amino acid concentrations in the rhizosphere and improve growth and yield of well-watered and water-limited potato (Solanum tuberosum). Annals of Applied Biology. 167 (1), 11-25 (2015).
  18. Ankati, S., Podile, A. R. Metabolites in the root exudates of groundnut change during interaction with plant growth promoting rhizobacteria in a strain-specific manner. Journal of Plant Physiology. 243, 153057(2019).
  19. Gordillo, F., Chavez, F., Jerez, C. A. Motility and chemotaxis of Pseudomonas sp. B4 towards polychlorobiphenyls and chlorobenzoates. FEMS Microbiology Ecology. 60 (2), 322-328 (2007).
  20. Bais, H. P., Weir, T. L., Perry, L. G., Gilroy, S., Vivanco, J. M. The role of root exudates in rhizosphere interactions with plants and other organisms. Annual Review of Plant Biology. 57, 233-266 (2006).
  21. Badri, D. V., Vivanco, J. M. Regulation and function of root exudates. Plant Cell Environment. 32 (6), 666-681 (2009).
  22. Badri, D. V., Weir, T. L., Lelie, D., Vivanco, J. M. Rhizosphere chemical dialogues: plant-microbe interactions. Curr Opin Biotech. Current Opinion in Biotechnology. 20 (6), 642-650 (2009).
  23. Kamilova, F., Kravchenko, L. V., Shaposhnikov, A. I., Makarova, N., Lugtenberg, B. Effects of the tomato pathogen Fusarium oxysporum f. sp. radicis-lycopersici and of the biocontrol bacterium Pseudomonas fluorescens WCS365. Molecular Plant-Microbe Interactions. 19 (10), 1121-1126 (2006).
  24. Kamilova, F., et al. Organic acids, sugars, and L-tryptophane in exudates of vegetables growing on stonewool and their effects on activities of rhizosphere bacteria. Molecular Plant-Microbe Interactions. 19 (3), 250-256 (2006).
  25. Badri, D. V., Vivanco, J. M. Regulation and function of root exudates. Plant Cell Environment. 32 (6), 666-681 (2009).
  26. Hao, W. Y., Ren, L. X., Ran, W., Shen, Q. R. Allelopathic effects of root exudates from watermelon and rice plants on Fusarium oxysporum f.sp. Niveum. Plant and Soil. 336 (1-2), 485-497 (2010).
  27. Hao, Z. P., Wang, Q., Christie, P., Li, X. L. Allelopathic potential of watermelon tissues and root exudates. Scientia Horticulturae. 112 (3), 315-320 (2007).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Interakcje ro linno mikrobowechemotaksja bakteryjnametoda szkie ek przedmiotowychmetoda liczenia kolonii na p ytkachchromatografia cieczowa sprz ona z spektrometri masobserwacje mikroskopowebakterie stymuluj ce wzrost ro lin
Ulepszony test chemotaksji do szybkiej identyfikacji chemoatraktantów ryzo bakteryjnych w wysiękach korzeniowych
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki Korzystania

Zasady

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.